乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用

[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药∕ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺。[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P﹥0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P﹤0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系。[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用。     

HPLC快速测定草乌中毒患者尿液中的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱

目的建立HPLC快速测定乌头类生物碱中毒事件中毒患者尿液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法。方法收集乌头碱中毒患者48 h内尿液,经0.1 mol/L HCl酸化,Waters Oasis MCX固相萃取小柱净化,0.5%氨水的甲醇洗脱,氮气吹干,乙腈-10 mmol/L乙酸铵(50∶50,V/V)定容,经Agilent XDB C_8(4.6 mm×250 mm,5.0μm)分离,用紫外检测器,235 nm波长定性定量分析。结果乌头碱中毒患者尿液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法检出限为10μg/L,2个水平的平均回收率为76.0%~115.0%,6次平行测定变异系数(CV)为4.1%~8.2%。在草乌中毒患者的尿液中检出新乌头碱,含量为0.28 mg/L~1.60 mg/L,乌头碱和次乌头碱未检出。结论该方法测定乌头类生物碱中毒事件中毒患者尿样的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱方便、快速、准确、可靠、实用性强。     

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。     

乌头类中药及其制剂的镇痛作用研究

乌头类中药在临床治疗当中有着十分广泛的应用,乌头类中药当中的乌头碱具备极高的药用价值,当前广泛应用在多种疾病的临床治疗当中,也显现出了明显的疗效。乌头类中药制剂具备显著的镇痛作用。不过在对乌头类中药进行研究和应用的过程中,发现其存在一定的毒性。为了加强对乌头类中药的了解,扩大其临床应用范围,进一步挖掘其应用效果,保证安全用药,本文将着重对乌头类中药及其制剂的镇痛作用展开分析,给临床安全用药提供有效根据。     

乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞的毒性。[方法]对25～29日龄雌性SD大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),无菌制备卵巢颗粒细胞悬液,采用透射电镜观察管嵴状线粒体进行细胞鉴定。试验设4个乌头碱浓度组(0、5×101、5×102、5×103、5×104μg·L-1)和1个溶剂对照组(二甲亚砜)。选用MTT法(四唑盐比色法)测定乌头碱对大鼠卵巢颗粒细胞活力的影响,用雌二醇和孕酮的放免分析药盒测定乌头碱对颗粒细胞激素分泌功能的影响,用丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒测定乌头碱对大鼠颗粒细胞的氧化损伤作用。[结果]与溶剂对照组相比,乌头碱作用24h后,高浓度和次高浓度组(5×103、5×104μg·L-1)可明显抑制大鼠颗粒细胞的增殖,差异有统计学意义(P﹤0.01);高剂量组(5×104μg·L-1)丙二醛含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]在本实验室条件下,乌头碱浓度高于5×103μg·L-1时,对雌性大鼠卵巢颗粒细胞有毒性作用,主要表现为抑制颗粒细胞的增殖及对细胞的氧化损伤作用。     

超高效液相色谱法同时测定胃内容物中3种乌头碱

目的建立超高效液相色谱法同时测定胃内容物(或呕吐物)中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的方法。方法样品经0.1 mol/L盐酸提取,8 000 r/min离心20 min,残渣重复提取一次,合并上清液用Oasis HLB固相萃取柱净化后,解析液45℃氮吹至干,已腈-0.1%乙酸(1∶1,V/V)复溶,过0.22μm滤膜进样,ACQUITY UPLC HSS T3柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)液相色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法定量。结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.996~0.999 5,检出限分别为0.075 mg/kg、0.10 mg/kg、0.05 mg/kg,定量限分别为0.23 mg/kg、0.30 mg/kg、0.15 mg/kg;空白基质中加标实验显示加标回收率为86.3%~110.9%,加标回收率的精密度为3.50%~9.70%。结论该方法操作简便,准确度好,精密度高,能对胃内容物(或呕吐物)中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱进行定性定量检测。     

常用炮制对滇产草乌3种乌头碱减毒情况分析

目的 利用几种常规的炮制方法分析草乌中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的减毒情况。方法 将大小形状不同的草乌样品分别经过水煮法、蒸法及烘烤法进行不同时长炮制,采用超高效液相色谱串联质谱进行含量测定分析,外标法定量。结果 3种乌头碱在0.20～100.0μg/L浓度范围内均具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9997。草乌不同形状减毒效果为粉末＞片状＞完整个头,不同炮制方法减毒效果为水煮＞蒸＞烘烤,烘烤炮制对草乌样品未有良好减毒效果。浓度为1.0μg/mL的乌头碱、新乌头碱和次乌头碱标准品分别经过0.5h、1.5h和1.5h水煮炮制可达到100%完全降解,但其他炮制样品的减毒效果根据不同的炮制方法显现出较大差异性。结论 3种乌头碱经过足够时长的水煮及蒸法炮制均可达到显著的减毒效果,烘烤法对草乌减毒作用较小,民间食用草乌的安全性应引起高度重视。     

白藜芦醇对食管癌Eca109细胞的抑制作用研究

[目的]研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对食管癌Eca109细胞的抑制作用。[方法]将食管癌Eca109细胞分为4组:Res1组、Res2组、Res3组和对照组,Res浓度分别为10、20、40和0μmol/L。用MTT法测定Res对Eca109细胞的抑制作用,采用RT-PCR方法检测Eca109细胞Caspase-3、Fas基因表达情况。[结果]10μmol/LRes处理24h对Eca109细胞有明显的抑制作用;20μmol/LRes处理48h后抑制作用达到极显著水平。20μmol/L和40μmol/LRes处理72h,Eca109细胞Caspase-3、Fas基因表达明显高于对照。[结论]Res可显著抑制Eca109细胞增殖,Res可通过促进食管癌细胞株中Caspase-3、Fas的表达发挥其抗肿瘤作用。     

不同采收期的附子中3种乌头碱的含量比较

目的:考察不同采收时间的附子中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量。方法:采用高效液相色谱法进行测定,色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相A:乙腈—四氢呋喃(25:15),流动相B:0.1 mol/L醋酸铵溶液,检测波长:λ=235 nm,流速:1 ml/min,柱温:25℃。结果:不同采收时期附子中3种乌头碱的含量发生了明显变化,随着时间(7~9月份)的推移,新乌头碱的含量呈下降趋势,次乌头碱、乌头碱的含量呈上升趋势。结论:方法简单、易行,可为附子的进一步研究提供科学依据。     

附子的毒性与安全用药研究

附子始载于《神农本草经》,因毒性剧烈,被列为下品。附子味甘辛,性热,有毒,具有回阳救逆,补火助阳,散寒止痛的功效。自古以来在临床上极为常用。但附子的毒性反应在临床上也时常可见,为了减少不良反应,现分述如下：1附子的毒性1.1附子的毒性机理：附子主要含有乌头类生物碱,其中双酯型生物碱含量较高,如新乌头碱,乌头碱,次乌头碱该类成分既是有效成分,同时毒性剧烈,一般都经过炮制后才能入药,经炮制后,转化为苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头碱等单酯型生物碱，毒性大大降低。附子的毒性主要是对神经系统和心脏的损害。机理之一是兴奋迷周神经，二是直接对心脏的毒性作用，可引起心律失常，以颇发室早最常见，且为多源性，并易形成二联律及阵发性室速、扭转型室速、甚至发展为室颤。     

食物中毒样品中的乌头碱的SPE—UFLC／MS／MS快速测定法

目的建立SPE．UFLC／MS／MS快速测定食物中毒事件中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的方法。方法各种食物样品及呕吐物经0．1mol／LHCl提取,SPE固相萃取小柱净化,经AgilentSBC182．1mm×50mm,1．8μm分离,在正离子模式下用串联质谱仪定性定量分析。结果食物样品及呕吐物中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的方法检出限为1—3μg／L,2个水平的加标回收率为79．8％～112．5％,相对标准偏差均小于9．4％。结论该方法测定各种食物样品及呕吐物中的乌头碱、次乌头碱、中乌头碱快速,准确,可靠,灵敏度高。     

CFSE活性染剂检测放化疗联合治疗对胶质瘤复发影响的研究

[目的]探索利用顺铂联合放疗对胶质瘤治疗复发率的影响。[方法]将C6细胞分为空白对照组、单纯放疗组、单纯化疗组和放疗加化疗组,激光共聚焦观察细胞形态,用流式细胞仪测定CFSE的荧光信号。[结果]放疗加化疗组细胞的增殖能力较单纯放疗及单纯化疗组明显下降。[结论]放疗加化疗联合不仅减少了化疗药物和射线的用量,也大大降低了治疗后的肿瘤细胞增殖能力,为指导临床胶质瘤的后续治疗提供依据。     

西黄丸对H22荷瘤小鼠Bcl-2基因mRNA表达的影响

[目的]研究西黄丸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织中bcl-2基因mRNA表达的影响。[方法]采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定肿瘤组织中bcl-2基因mRNA在给药10d前后的表达差异。[结果]西黄丸可下调H22荷瘤小鼠瘤组织中凋亡相关基因bcl-2基因mRNA的表达。[结论]西黄丸可通过诱导肿瘤细胞凋亡而实现抑瘤作用,为传统中成药在临床上治疗肿瘤提供进一步的理论依据。     

扇贝裙边提取物对小鼠移植宫颈癌的抑制作用研究

目的　观察扇贝裙边提取物对荷瘤鼠免疫和抗氧化功能的影响。方法　选用小鼠移植宫颈癌模型 ,以一定量的扇贝裙边提取物连续 1 7d灌胃荷瘤小鼠。末次给药后的次日 ,进行免疫和抗氧化功能指标测定。结果　扇贝裙边提取物能使肿瘤抑制率达 37%以上 ;而且宿主因荷瘤而下降的免疫指标包括脾脏 NK细胞杀伤活性 ,丝裂原诱发的淋巴细胞转化强度 ,总 T细胞数和脾脏重量明显回升 ;因荷瘤而下降的抗氧化物酶谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)活性显著增高 ,脂质过氧化物 (LPO)含量显著下降。结论　扇贝裙边提取物可能通过增强宿主免疫功能和提高机体抗氧化能力而抑制肿瘤的生长。     

谷氨酰胺对运动员Th1/Th2细胞平衡影响的研究

[目的]采用流式细胞仪检测外周血T细胞表型和淋巴细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4的表达,探讨大强度运动期间补充谷氨酰胺对Th1/Th2细胞平衡的影响。[方法]将24名游泳运动员随机分为对照组和谷氨酰胺(Gln)组。两组运动员在3周时间内接受相同的运动强度和运动量训练,并于实验前、后对两组运动员采静脉血进行相关指标检测。[结果](1)3周大强度运动后,Gln组CD4+、CD4+/CD8+高于对照组,而CD8+则明显低于对照组;CD3+两组比较无明显差异。(2)3周大强度运动使对照组的IFN-γ和IFN-γ/IL-4比值降低,IL-4无明显变化;而Gln组IFN-γ和IFN-γ/IL-4均高于对照组,IL-4两组比较差异无统计学意义。[结论]3周大强度训练使运动员CD4+/CD8+比值明显下降,Th1/Th2比值低于运动前,致使Th2优势表达,免疫平衡向Th2方向漂移,产生运动性免疫抑制现象。补充谷氨酰胺可调节和提高大强度运动后运动员的免疫功能,有效预防运动性免疫抑制的发生。     

大豆异黄酮对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用

目的研究大豆异黄酮(SI)对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用,为SI应用于抗电离辐射药物和功能食品的研究提供依据。方法24只雄性昆明小鼠,随机分为正常对照组、辐射对照组和辐射补充0.5%SI组,喂养2周后,后两者给予4.0Gyγ射线照射。照射后7d处死小鼠,分离双侧股骨,观察骨髓细胞(BMC)形成细胞集落的能力。体外实验取正常组小鼠的股骨,制成BMC单细胞悬液,4.0Gyγ射线照射,测定BMC的细胞周期和3H-TdR掺入量。结果辐射使小鼠BMC的粒-巨细胞集落形成单位(CFU-GM)和成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)明显减少,辐射补充SI组BMC的CFU-GM〔(26.0±6.9)个/105BMC〕和CFU-F〔(23.4±8.6)个/106BMC〕明显高于辐射对照组〔相应为(17.3±4.4)个/105BMC和(15.6±4.9)个/106BMC)(P0.05)〕。体外实验结果表明,辐射使细胞周期的G0-G1期细胞数量明显增加,S和G2-M期细胞明显减少,细胞的3H-TdR掺入量明显减少;补充SI组与辐射对照组相比,G0-G1期细胞数量明显减少(P0.05),S和G2-M期的细胞数明显增加(P0.05),细胞的3H-TdR掺入量明显增加(P0.05)。结论大豆异黄酮对小鼠骨髓细胞辐射损伤有一定的防护作用。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞株N-ras基因表达的影响

目的 :　研究二十碳五烯酸 (Eicosapentaenoicacid,EPA )是否协同视黄酸 (retinoicacid,RA)影响 HL-60细胞的增殖与分化功能及相应分子机制。方法 :　流式细胞仪 (FCM)测定细胞增殖功能 ;NBT还原实验鉴定 HL-60细胞分化 ;Western blot法分析 p2 1 N- ras表达。结果 :　EPA和 RA联合应用能增强 HL-60细胞的增殖抑制和分化效应 ,同时细胞内 p2 1 N- ras表达降低。结论 :　 EPA和 RA可能通过下调节 N-ras基因的蛋白质表达 ,发挥它们对 HL-60细胞增殖与分化功能的联合效应     

天然虾青素软胶囊对人体抗氧化功能试验研究

[目的]探讨天然虾青素软胶囊对人体的抗氧化作用。[方法]将106例年龄在45～65岁之间的健康志愿者按血清丙二醛含量随机分为受试组和对照组,受试组连续服用受试物90d。测定血清中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和安全性指标。[结果]试食后受试组MDA含量明显下降,自身前后比较差异有统计学意义(P﹤0.01),下降率为3.25%;SOD活性明显升高,自身前后比较差异有统计学意义(P﹤0.01),升高率为4.59%;GSH-PX活性明显升高,自身前后比较差异有统计学意义(P﹤0.01),升高率为5.54%。各项安全性指标试验前后均无明显改变。[结论]天然虾青素软胶囊对人体具有抗氧化作用。     

RNA干扰抑制结肠癌细胞内Bcl-2/C-Raf的表达

[目的]构建Bcl-2/C-Raf的双靶点的RNAi质粒表达载体与单靶点表达载体比较,研究RNAi对各组癌细胞增殖的抑制作用。[方法]分别构建了针对Bcl-2、C-Raf和Bcl-2/C-Raf靶基因的质粒表达载体,通过Lipofec-tamineTM2000介导转染人结肠癌细胞系HCT-8后,检测相应转染组靶基因的mRNA和蛋白质表达量,测定各组细胞活性。[结果]分别转染3种质粒表达载体后,3组结肠癌细胞中相应靶基因的mRNA和蛋白质表达量均降低;转染双靶点干扰质粒的试验组;其细胞活性低于单靶点组;对于针对Bcl-2,C-Raf和Bcl-2/C-Raf基因的3组干扰实验,RNAi对结肠癌细胞增殖的抑制率分别为43.87%、40.64%和63.85%。[结论]Bcl-2/C-Raf双靶点的表达载体对结肠癌细胞增殖的抑制作用要明显优于单靶点表达载体。双靶点质粒表达载体在结肠癌的基因治疗中具有很大优势。