实验性变态反应性脑脊髓炎豚鼠外周血单个核细胞分泌IFN-γ量的研究

目的观察急性实验变态反应脑脊髓炎（EAE）豚鼠外周血单个核细胞（PBMC）IFN-γ分泌量,探讨其与EAE发病情况的相关性。方法将30只雌性豚鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和佐荆对照组,每组各10只。采用粗制髓鞘碱性蛋白诱发豚鼠急性EAE。记录上述3组豚鼠发病的潜伏期、进展期及神经功能障碍评分,并采用ELISA法测定PBMC培养上清液中IFN-γ量的变化。结果EAE模型组在接种约2周后出现厌食、体重下降,不同程度的肢体瘫痪,且均表现为单病程发病;正常对照组和佐剂对照组未发病。EAE模型组豚鼠PBMC分泌IFN-γ量较正常对照组升高（P〈0．05）;而佐剂对照组与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。EAE模型组豚鼠PBMC分泌IFN-γ的量与发病的潜伏期呈负相关（P〈0．05）,与进展期及高峰期神经功能障碍评分呈正相关（P〈0．05）。结论EAE豚鼠体内存在免疫失衡,IFN-γ分泌量增加,且与发病的严重程度有相关性。     

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠视神经的病理学改变

目的:动态观察实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental allergic encephalomyelitis,EAE)大鼠视神经的病理学变化.方法:建立EAE大鼠模型,采用光镜及透射电镜分别观察第8,12,18及30天大鼠视神经形态学改变.结果:各个时间段视神经发生了不同程度的改变,光镜下表现为不同程度的神经纤维空泡样变性,轴束不规则肿胀,炎细胞浸润,大量胶质细胞和胶原组织形成增生组织成网状.电镜下主要表现为轴突内空泡样变性、髓鞘松解、脱落、微丝微管消失等.结论:EAE大鼠的视神经发生了较为严重的病理学改变.     

火把花根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑IL-2和IFN-γ mRNA的影响

目的:探讨火把花根片对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)Wistar大鼠的治疗作用及IL-2和IFN-γmRNA的影响。方法:模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE;治疗组在模型组基础上予以火把花根片(300 mg.kg-1,BID)治疗,观察症状并评分;HE染色和Loyez氏髓鞘染色,观察病理和髓鞘改变;RT-PCR法测定脑组织的IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平。结果:治疗组未出现EAE症状,脑组织IL-2和IFN-γ的mRNA表达水平分别为0.345±0.032、0.353±0.023,与模型组比较P<0.01;脑和脊髓小血管周围炎症细胞浸润明显减少;髓鞘结构完整。结论:火把花根片对EAE有治疗作用,其机制与抑制了脑组织IL-2和IFR-γ的mRNA表达有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点

目的建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型,并观察其病理特点。方法应用MOG35-55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫雌性C56BL/6小鼠,观察其临床症状、病理改变及影像学变化。结果模型组小鼠发病时间为免疫后(12±4)d(8~16d),发病率83.3%,呈慢性单向过程;H-E染色模型鼠脊髓白质见大量炎症细胞浸润;罗克沙尔坚牢蓝染色显示,脊髓白质呈片状髓鞘脱失;电镜显示,髓鞘内层呈板层剥脱,轴索肿胀,结构疏松;脊髓MRI检查可见髓内斑片状T2异常高信号。结论慢性EAE模型具有发病率高、死亡率低、模型稳定、重复性高、制作方便的特点,模型病理改变接近多发性硬化(MS),是研究MS较为理想的动物模型。     

用髓鞘碱性蛋白建立豚鼠变态反应性脑脊髓炎模型

目的：用髓鞘碱性蛋白(MBP)诱导实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)豚鼠模型。方法：提取MBP并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后。用MBP 完全弗氏佐剂(CFA)免疫豚鼠,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统(CNS)的病理改变。结果：实验组豚鼠均表现出典型的EAE症状,发病率为100％,并在光镜下可见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘病理改变。结论：用MBP CFA成功地诱导了豚鼠的EAE模型,具有模型稳定、发病率高、动物价廉易得的优点。是研究多发性硬化(MS)的理想动物模型。     

咪唑克生对实验性变态反应性脑脊髓炎干预作用的初步观察

目的:探讨不同剂量的咪唑克生(Ida)对Lewis大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的影响.方法:采用豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)脚垫皮下注射,免疫Lewis大鼠复制EAE模型,采用量化评分法,比较不同剂量组咪唑克生对EAE发病率、潜伏期、临床症状和组织学的影响.结果:对照组的发病率为85.7%(6/7),潜伏期为(11.2±0.45)d.低剂量咪唑克生(2 mg/kg)可降低发病率37.5%(3/8),明显延长潜伏期[(13.05±0.58)d,P＜0.05],减轻其临床症状和中枢神经系统(CNS)炎症细胞浸润(P＜0.05),而高剂量咪唑克生(16 mg/kg)对EAE的潜伏期、临床症状和CNS炎症细胞浸润均无影响.结论:低剂量咪唑克生可减轻Lewis大鼠EAE的炎症细胞浸润、脱髓鞘改变及临床症状,对EAE的发病具有干预(保护)作用.推测这可能与CNS内咪唑啉2受体有关.     

实验性变态反应性脑脊髓炎模型

实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）是一种以特异性致敏的CD4＋T细胞介导为主的,以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病,是人类多发性硬化（MS）的理想动物模型[1],在临床神经免疫学的研究中具有重要意义[2,3] .国内外学者试用多种易感动物建立EAE模型,以期阐明MS及EAE的发病机制,并为其病情的监测、复发的预防、治疗方案的选择以及新疗法或新药物的筛选等提供可靠依据.本文就近年来EAE模型方面的研究综述如下.     

全脊髓匀浆建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型

目的:用全脊髓匀浆(粗制髓鞘碱性蛋白)建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型.方法:Wistar大鼠全脊髓匀浆 完全福氏完全佐剂(CFA)免疫豚鼠,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统(CNS)的病理改变.结果:实验豚鼠均表现典型的EAE症状;光镜观察见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘改变.结论:全脊髓匀浆加完全福氏完全佐剂成功的诱导了豚鼠的EAE模型,具有模型稳定、发病率高、动物廉价易得的优点,是研究多发性硬化理想的动物模型.     

豚鼠过敏性脑脊髓炎CNS中IL-1R的表达

目的 探索中枢神经系统脱髓鞘疾病进程中IL－1R的表达与神经胶质细胞活化的关系。方法 用牛脊髓髓鞘碱性蛋白加完全福氏佐剂对豚鼠进行免疫,诱发实验性过敏性脑脊髓炎（EAE）模型,采用免疫组化方法对EAE不同时期中枢神经系统中IL－1R的表达进行研究,同时采用抗蓖 凝集素RCA－1标记小胶质细胞、抗胶质纤维酸性蛋白标记星型胶质细胞。结果 在EAE症状出现之前3d至临床高峰期,小胶质细胞样细胞呈现IL－1R免疫反应阳性,表达IL－1R的星型胶质细胞样细胞呈活化状态,而恢复期则主要为星型胶质细胞样细胞呈现免疫反应阳性。结论 在EAE不同时期表达IL－1受体的细胞型不同与不同时期神经胶质细胞的活化类型有关,即与EAE早期小胶质细胞的活化和恢复期星型胶质细胞增生有关。     

大鼠室周器官内小胶质细胞在实验性变态反应性脑脊髓炎不同时期的形态学观察

室周器官(circumvent ricular organs,CVOs)是指由室管膜特化形成的位于第三、四脑室壁上的一些微小器官,包括穹窿下器、正中隆起等.小胶质细胞是中枢神经系统中主要的宿主免疫细胞,关于CVOs处小胶质细胞的分布尚缺乏形态学报道.     

豚鼠脊髓匀浆诱发大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是人类中枢神经系统常见的自身免疫性脱髓鞘疾病,其发病机制至今尚未完全阐明.实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)是用于研究MS的模型,本课题应用豚鼠的脊髓匀浆和完全弗氏佐剂(CFA)制成抗原乳剂,再加入百日咳杆菌免疫Wistar大鼠,建立了可靠的EAE模型,报告如下.     

不同剂量2-BFI对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的 观察不同剂量的2-BFI对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响.方法 将60只SD大鼠分为对照组、EAE组和2-BFI(0.75、1.5、3及6mg/kg)组,采用动物行为学、常规HE染色和LFB髓鞘染色观察大鼠的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化.结果 EAE组9只大鼠出现典型的EAE行为学改变,CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失.经2-BFI干预后,大鼠EAE发病率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润减少和髓鞘脱失减轻.但与EAE组比较,仅3 mg/kg 2-BFI在EAE临床症状和CNS内炎性细胞浸润方面差异有统计学意义(P＜0.05).结论 3 mg/kg 2-BFI对EAE大鼠有神经保护作用.     

1,25-二羟维生素D3对豚鼠实验性变态反应性脑脊髓炎血淋巴细胞亚群的影响

目的研究1,25-二羟维生素D3对豚鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)外周血淋巴细胞亚群的影响,探讨1,25-二羟维生素D3防治EAE的免疫调节机制。方法采用粗制碱性髓鞘蛋白(coarsemyelin basic protein,CMBP)加福氏完全佐剂皮下注射的方法建立EAE模型。将50只豚鼠随机分成5组:正常对照组、EAE对照组、EAE低剂量治疗组、EAE中剂量治疗组和EAE高剂量治疗组,每组10只,造模前3d正常对照组和EAE对照组每天灌喂0.4ml花生油,EAE低、中、高剂量治疗组分别在造模前3d开始灌喂含1,25-二羟维生素D30.5μg·kg-1.d-1,1.25μg·kg-1.d-1,2.5μg·kg-1.d-1的花生油0.4ml,至实验结束。流式细胞仪法测定高峰期外周血T细胞亚群。结果EAE对照组外周血CD4 、CD8 含量及CD4 /CD8 比值较正常对照组差异有统计学意义(P<0.05);EAE低、中、高剂量治疗组外周血CD4 、CD8 含量及CD4 /CD8 比值较EAE对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)EAE豚鼠外周血CD4 、CD8 含量下降、CD4 /CD8 比值升高,存在T细胞亚群失衡;(2)1,25-二羟维生素D3能提高外周血CD4 和CD8 含量、降低CD4 /CD8 比值,具有调节T细胞亚群失衡和纠正CD4 /CD8 比值倒置的作用。     

树突状细胞与实验性变态反应性脑脊髓炎

自身免疫性疾病的激发和自身反应性T细胞的激活与维持的机制尚不十分清楚。作为有力的抗原呈递细胞(APC)的树突状细胞(DC)，兼有抗原传递以及初级致敏T细胞的作用，可以破坏自身忽略并诱发进展的自身反应性T细胞。在自身免疫性疾病中，不同类型的树突状细胞在诱导Th1／Th2细胞的反应中发挥了重要作用。特定的细胞因子可以诱导免疫源性的树突状细胞向耐受源性的树突状细胞分化。     

1,25二羟基维生素D3缓解急性实验性自身免疫性:脑脊髓炎的机制

目的 探讨1,25二羟基维生素D3迅速减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的机制.方法 建立Lewis大鼠急性EAE模型;预防组及治疗组分别于致敏日及症状出现日投给1,25二羟基维生素D3.致敏后第13天处死,观察中枢神经系统病理改变,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组化法检测iNOS、FasL及TGF-β1的表达,并测定外周血单个核细胞(MNC)培养上清液中亚硝酸盐的含量.结果 1,25二羟基维生素D3干预的预防组及治疗组与其相应对照组比较,临床评分及病理评分均降低(均P<0.01),凋亡细胞数增加(均P<0.01),半定量iNOS阳性细胞数减少,但TGF-β1、FasL阳性细胞数无明显变化.1,25二羟基维生素D3干预后,EAE大鼠外周血单个核细胞培养上清中业硝酸盐含量有增加趋势,但与对照组的差异无统计学意义.结论 1,25二羟基维生素D3通过增加炎性细胞凋亡迅速缓解EAE症状,其原因可能与改变中枢神经系统的内环境有关.     

α-黑素细胞刺激素对EAE豚鼠外周血IL-17、IL-23水平的影响

目的通过研究α-黑素细胞刺激素（α-MSH）对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）豚鼠外周血IL-17、IL-23水平的影响,探讨α-MSH对EAE发病保护作用及免疫学机制。方法将40只雌性豚鼠随机分为正常对照组、EAE对照组和EAE高剂量治疗组、EAE低剂量治疗组,每组各10只。EAE对照组及EAE高剂量治疗组、EAE低剂量治疗组采用粗制髓鞘碱性蛋白（cMBP）诱发急性EAE,EAE高、低剂量治疗组自造模前7d始分别按1mg/（kg.d）及0.25mg/（kg.d）予腹腔注射注射α-MSH直至试验结束。观察4组豚鼠神经功能障碍评分变化,并用ELISA法测定IL-17、IL-23水平。结果 EAE高剂量治疗组、EAE低剂量治疗组神经功能障碍评分较EAE对照组显著降低（P〈0.01,P〈0.05）,且EAE高剂量治疗组降低更明显（P〈0.05）。EAE对照组及EAE低剂量治疗组豚鼠发病高峰期外周血IL-17、IL-23水平均较正常对照组升高（均P〈0.01）,EAE高剂量治疗组与正常对照组比较IL-17、IL-23水平差异均无统计学意义（P〉0.05）,EAE高剂量治疗组与EAE低剂量治疗组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。EAE各组豚鼠发病高峰期外周血IL-17、IL-23水平与神经功能障碍评分均呈正相关（r=0.79、P〈0.05,r=0.84、P〈0.01）。结论α-MSH对EAE豚鼠发病具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制IL-17、IL-23生成发挥调节作用的。     

糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎中对调节性T细胞的作用

目的:研究糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)治疗中对调节性T细胞的调变作用. 方法:采用从新鲜牛脊髓中提取的髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫诱导Balb/c小鼠成功诱发EAE后,分组注射糖皮质激素或者安慰剂,在采用指标评估基础上,分别采用流式细胞术和ELISA方法检测CD4 CD25 调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL-10的表达水平. 结果:与对照组相比,糖皮质激素注射组小鼠发病程度轻,调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL-10的表达水平均有明显差异. 结论:糖皮质激素可能通过增加调节性T细胞的数量及活性,减轻EAE的症状,为临床治疗多发性硬化(MS)提供理论基础.     

咪唑克生对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓GFAP及mRNA表达的影响

目的探讨咪唑克生（Ida）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）Lewis大鼠脊髓内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）蛋白及其mRNA表达的影响。方法将30只雌性Lewis大鼠分为三组：正常对照组、EAE组和Ida组。以豚鼠脊髓匀浆（GPSCH）诱发制备大鼠EAE模型,并于给予GPSCH当日开始分别腹腔注射10mg/kgIda（Ida组）和生理盐水（EAE组和对照组）连续10d,观察EAE症状并评分。用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测GFAP蛋白及mRNA在脊髓中的表达。结果10d后Ida组大鼠的临床症状和病理学改变减轻（〈0.05）。脊髓组织中GFAP蛋白及其mRNA的表达,EAE模型组显著高于对照组,Ida组较EAE组显著增高,差异有统计学意义（〈0.05）。结论Ida可促进GFAP在EAE大鼠脊髓中的表达,可能是其保护EAE大鼠的部分作用机制。     

胍丁胺对实验性变态反应性脑脊髓炎中枢神经系统内GFAP表达的影响

目的观察胍丁胺对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）中枢神经系统内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠建立EAE动物模型,于免疫当日开始分别予25、50、100mg/kg胍丁胺,腹腔注射,每天1次,连续14d。比较各组的行为学的变化,应用免疫组化法观察脑和脊髓组织中的GFAP的表达。结果与模型组比较,胍丁胺给药14 d EAE大鼠的发病率低,临床症状改善;EAE大鼠CNS内的炎性脱髓鞘病灶内和周围GFAP表达明显升高（〈0.01）。结论胍丁胺对EAE具有保护作用。其机制可能与星形胶质细胞增殖活化有关。