HeLa细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

目的:建立和优化HeLa细胞蛋白质组分析所需的样品处理方法和双向电泳技术.方法:用三种不同配方的裂解液提取HeLa细胞中的蛋白质,进行双向凝胶电泳,用Amersham ImageMaster VDS-CL型凝胶成像系统获取凝胶图像,以PDQuest(7.4.0)软件进行比较分析.结果:联合使用硫脲和尿素有利于蛋白质的提取,增加碱性蛋白点的检出数量;广谱蛋白酶抑制剂的使用可大大增加双向电泳可检出的蛋白点数,同时使可检出的碱性蛋白点明显增加.结论:本文建立了HeLa细胞双向电泳分析方法,提高了2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性,获得了较为理想、清晰的双向电泳图谱,为其蛋白质组学进一步研究奠定了基础.     

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

紫杉醇与褪黑素联合使用对HeLa细胞的生长影响研究

目的；研究紫杉醇与褪黑素联合应用对ＨｅＬａ细胞的生长影响。方法；通过生长曲线，集落形成试验观察二者联合应用对ＨｅＬａ的影响作用。结果；单独应用紫杉醇和褪黑素对二者联合应用其生长曲线，集落形成试验的结果无明显差别。结论：紫杉醇与褪黑素联合应用对ＨｅＬａ细胞的生长影响与单独应用二者无明显判别。     

TALENs介导的Nanog基因表达下调对宫颈癌HeLa 细胞恶性行为的影响

目的 研究Nanog表达下调对宫颈癌HeLa 细胞恶性行为的影响。方法 通过基因编辑工具转录激活样效应器核酸酶（TALENs）介导Nanog 下调表达,基因测序分析Nanog的突变情况;挑取单个细胞培养以筛选出Nanog明显下调表达的单克隆HeLa细胞;RT-PCR 检测mRNA 表达水平;Western blot 检测蛋白表达水平;HeLa细胞的集落形成能力、侵袭性及耐药性分别通过集落形成实验、 Transwell 侵袭实验及药物敏感性实验检测。 结果 TALENs成功介导Nanog 基因突变并导致其下调表达,Nanog突变的单克隆HeLa细胞Nanog mRNA和蛋白表达水平较野生型HeLa细胞均下调表达（P<0.05）。Nanog突变单克隆HeLa细胞相对于野生型HeLa细胞表现出明显减弱的侵袭、集落形成及化疗药物抵抗能力（P<0.05）。 结论 Nanog突变减弱HeLa 细胞的恶性行为,下调或沉默Nanog表达有望成为一种新型的治疗宫颈癌策略。     

SRB法检测4HPR对HeLa细胞生长的影响

目的；检测４ＨＰＲ对ＨｅＬａ细胞生长的影响。方法；采用ＳＲＢ实验法。结果：１０６４４ｇ／ｍｌ，２μｇ／ｍｌ，４μｇ／ｍｌ，８μｇ／ｍｌ，１６μｇ／ｍｌ，的４ＨＰＲ作用２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ后ＨｅＬａ细胞其ＯＤ值分别为１．７８，１．７７，１．７２，１．６８，１．６０，１．５９，１．５５，１．４０，１．３３，１．３２，１．１６，１．０３，０．７５，０．６９，０．５４。对照组为１．７０，１７１，１．７７     

白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖及其作用机制

目的研究白藜芦醇(Res)对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制作用及其机制。方法以17.5、35.0、70.0、140.0μmol/L Res分别处理HeLa细胞24、48与72 h,采用MTT法检测HeLa细胞存活率;应用70μmol/L的Res处理HeLa细胞24 h,采用Western Blot检测HeLa细胞中磷酸化真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)、磷酸化4E结合蛋白1(p-4E-BP1)和半胱氨酸蛋白酶蛋白3(caspase-3)的表达。结果不同浓度的Res作用不同时间后HeLa细胞增殖受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性,在相同时间内,随着Res浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高(F=93.76~637.22,P<0.01);在同一浓度时,随着Res作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高(F=8.79~29.99,P<0.01)。70μmol/L的Res作用HeLa细胞24 h后,HeLa细胞中p-eIF4E、p-4E-BP1蛋白表达较对照组减少(t=14.93、4.78,P<0.01),caspase-3蛋白表达较对照组增加(t=10.68,P<0.01)。结论 Res对宫颈癌HeLa细胞体外生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制p-eIF4E、p-4E-BP1表达,并诱导caspase-3活化,从而增加HeLa细胞凋亡有关。     

芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的探讨芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响。方法通过四甲基偶氮唑蓝法及平板克隆形成实验研究芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响。结果不同浓度的芹菜素(5、10、20 mg/L)对HeLa细胞的生长均有显著的抑制作用,随着芹菜素浓度的增加,抑制作用显著增强;平板克隆实验结果表明,芹菜素能使HeLa细胞的平板克隆形成能力减弱,不论从克隆的大小还是克隆的数目上,实验组均较对照组明显下降,芹菜素浓度越大,平板克隆形成能力越弱。结论芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞的生长有显著的抑制作用。     

RNAi沉默HSP70基因对宫颈癌HeLa细胞的影响

目的:本研究初步探讨RNAi技术应用于宫颈癌基因治疗的特异性及其作用机理。方法:设计靶向HSP70基因siRNA序列,构建重组表达载体pTZU6+1-siRNA-HSP70,在脂质体介导下瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,在体外诱导RNAi沉默HSP70基因,同时设转染空载体pTZU6+1为阴性对照组和不加任何试剂的空白对照组。采用RT-PCR和Western blotting方法检测实验组和对照组中HSP70表达;MTT法检测细胞生长与增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果:与对照组相比,实验组转染HeLa细胞后,细胞的HSP70 mRNA和蛋白表达均明显下调(P<0.01);细胞生长抑制率增高(P<0.05);细胞周期相分布发生变化。结论:siRNA明显抑制HSP70的表达及宫颈癌HeLa细胞的增殖,并引起细胞凋亡和细胞周期改变,为进一步研究HSP70基因在宫颈癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础。     

人宫颈癌HeLa细胞核内M-CSF高表达对抗肿瘤药物的影响

目的探讨人宫颈癌HeLa细胞核内M-CSF高表达对抗肿瘤药物的影响。方法体外培养转染M-CSF人宫颈癌HeLa-M细胞、HeLa细胞、转染M-CSF空载体人宫颈癌HeLa-C细胞;分别以顺铂(0.2、2.0、20μg/mL)、紫杉醇(0.2、2.0、20μg/mL)作用于HeLa-M细胞、HeLa细胞、HeLa-C细胞48 h后,MTT法检测细胞相对活性;Western blot分析胞核内M-CSF对人宫颈癌HeLa细胞Bcl-2蛋白表达的影响。结果MTT比色法测定结果显示:在顺铂和紫杉醇单药药物浓度为20、2.0μg/mL时,HeLa-M细胞相对活性明显高于HeLa细胞、HeLa-C细胞(P<0.01),而在两药单药药物浓度为0.2μg/mL时三种细胞相对活性相比无明显差别(P>0.05)。HeLa细胞与HeLa-C细胞相比无明显统计学差异(P>0.05);Western blot法检测胞核内M-CSF明显上调人宫癌HeLa细胞Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论胞核内M-CSF能增加人宫颈癌HeLa细胞的药抗性并抑制HeLa细胞凋亡。     

联合放疗热疗对人宫颈癌HeLa细胞作用的实验研究

目的观察放疗联合热疗时相同放射剂量不同温度和不同持续时间,不同处理顺序及同一处理顺序不同时间间隔对人宫颈癌HeLa细胞杀伤效果的影响。方法对人宫颈癌HeLa细胞进行放疗、热疗及放疗联合热疗处理后绘制生长曲线,计算克隆形成率及抑制率。结果1)热疗43℃持续30 min与42℃持续2 h相比,肿瘤细胞生长抑制率、克隆形成率及克隆形成抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。2)放疗联合热疗对HeLa细胞的抑制作用强于单独应用放疗或热疗(P<0.05)。3)不同处理顺序(放疗后热疗、热疗后放疗)对HeLa细胞抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。4)同一处理顺序、不同时间间隔(30 min、2 h、24 h)对HeLa细胞抑制率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论放疗联合热疗比单用放疗或热疗更有效地抑制HeLa细胞生长及克隆形成。相同放射剂量的条件下,采用不同时间间隔放疗后热疗或热疗后放疗对HeLa细胞生长抑制无显著影响。     

奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的体外作用

【目的】研究奥沙利铂对人宫颈癌HeLa细胞株的生长抑制作用及对Caspase-3活性的影响。【方法】用人宫颈癌HeLa细胞株经奥沙利铂处理后,MTT法测定细胞生长抑制率,透射电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪和原位末端标记技术法（TUNEL）检测细胞凋亡率,比色法检测Caspase-3活性变化,,并利用AC-DEVD-CHO进行Caspase-3抑制试验。【结果】奥沙利铂（4～64μmol/L）在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌HeLa细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡,奥沙利铂作用细胞株48 h后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;并能增加HeLa细胞的Caspase-3活性,AC-DEVD-乙醛（AC-DEVD-CHO）可有效抑制奥沙利铂诱导的HeLa细胞凋亡。【结论】奥沙利铂在体外能抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,Caspase-3活化参与了奥沙利铂诱导HeLa细胞的凋亡过程。     

桦褐孔菌醇对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的：研究桦褐孔菌醇（Inotodi01）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：以不同浓度的Inotodiol处理HeLa细胞24h、48h和72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,透射电镜观察细胞超微结构变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测caspase-3蛋白的表达。结果：Inotodiol能抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系（P〈0．05,P〈0．01）;超微结构观察可见细胞体积缩小、核固缩、核内异染色质增多并边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;TUNEL法显示,经50μg/ml的lnotodiol处理48h,HeLa细胞发生凋亡;免疫细胞化学结果表明,与对照组相比,Inotodiol组HeLa细胞中caspase-3蛋白表达上调（P〈0．01）。结论：在一定浓度范围内,Inotodiol可在体外抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调easpase-3蛋白的表达有关。     

宫颈癌细胞增殖和DNA倍体与放射敏感性的关系

为研究宫颈癌细胞增殖参数 S期比例 (SPF)、增殖指数 (PI)和 DNA倍体与宫颈癌放射敏感性的关系 ,探讨它们在预测宫颈癌放射敏感性中的价值。对 4 7例宫颈癌患者放疗前行宫颈癌组织取材 ,进行流式细胞术分析 ,在放疗过程中每周测量 1次宫颈局部瘤床的大小 ,计算肿瘤消退 1/ 2所需照射剂量 (D0 .5 ) ,研究 SPF、PI和 DNA倍体与D0 .5之间的关系。结果显示 :SPF与 D0 .5呈正相关 (r=0 .6 0 4 ,P<0 .0 1) ,PI与 D0 .5无明显关系 ,DNA倍体对 D0 .5的影响有显著性意义 (P<0 .0 5 )。提示 :宫颈癌细胞放疗前 SPF和 DNA倍体与放射敏感性有关 ,该两项指标有可能成为宫颈癌放射敏感性的预测指标     

5-FU和放射线联合应用对人子宫颈腺癌HeLa细胞凋亡的影响

 目的研究5-氟尿嘧啶(5-FU)和放射线联合应用对人子宫颈腺癌HeLa细胞凋亡的影响。方法将人子宫颈腺癌HeLa细胞分为单纯5-FU化疗组、单纯放射线组、放化疗联合组(5-FU和放射线联合应用组)及空白对照组4组。应用MTT法筛选5-FU作用于人子宫颈腺癌HeLa细胞的药物浓度(48hIC50);经AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)进行细胞凋亡分析;用荧光显微镜观察各组细胞经作用后凋亡的形态学变化。结果单纯化疗、单纯放疗及放化疗联合都可诱导HeLa细胞凋亡,放化疗联合组与单纯化疗和单纯放疗组比较可明显增加HeLa细胞凋亡率(P<0.05)。结论5-FU和放射线联合应用可明显增加人子宫颈腺癌HeLa细胞的凋亡,为临床应用提供理论依据。     

白藜芦醇对宫颈癌细胞株Hela增殖的影响

目的研究白藜芦醇诱导宫颈癌细胞株Hela的细胞生长和发育的改变,细胞周期的进行和凋亡等。方法MTT法测定白藜芦醇对Hela细胞的作用。3H-TdR掺入法检测白藜芦醇对Hela细胞DNA合成的影响。流式细胞术分析细胞周期。结果白藜芦醇作用后,Hela细胞的增殖速度减缓,DNA合成减少。白藜芦醇在较低浓度时即可诱导较快的可逆的S期停滞。结论合适浓度的白藜芦醇可有效预防早期肿瘤,但不至于引起细胞毒作用和细胞死亡。     

白藜芦醇对人CIK细胞功能的影响

目的探讨白藜芦醇对人C IK细胞生长以及体外杀伤活性的影响。方法体外常规法培养CD3＋CD56＋达15%以上的C IK细胞。用不同浓度的白藜芦醇诱导人CIK细胞48 h后：MTT比色法检测人CIK细胞增殖力、流式细胞术（FCM）测定CIK细胞表达的穿孔素和颗粒酶B的变化和乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤活性。结果白藜芦醇浓度在0～1.6μmol/L时能促进C IK细胞生长,并增加CIK细胞穿孔素、颗粒酶B的含量表达。当浓度大于3.1μmol/L时可抑制CIK细胞生长,并随着药物浓度的递增抑制率逐渐增加。结论白藜芦醇在一定浓度下可促进CIK细胞生长,提高CIK细胞的杀伤活性。     

维生素K_3对宫颈癌HeLa细胞mTOR信号转导蛋白基因表达的影响

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在感受营养信号、调节细胞生长与增殖中起着关键性的作用。mTOR可磷酸化核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶和真核起始因子4E结合蛋白1,促进蛋白质合成。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B和蛋白激酶B/肿瘤抑制因子1～2两条信号通路都可调控mTOR活性,进而调节细胞的生长与增殖。维生素K3是一类化学合成的脂溶性维生素,已有研究表明维生素K3可抑制肿瘤细胞增殖,其机制与降低mTOR信号转导蛋白及细胞周期蛋白D1的基因表达有关。