白藜芦醇对人食管癌EC109细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人食管癌EC109细胞生长、诱导凋亡的作用机制.材料与方法:不同浓度Res作用EC109细胞后,采用MTF法检测Res对人食管癌EC109细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色和倒置相差显微镜观察EC109细胞的形态学改变;流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡.结果:Res(15.62～500 μmol/L)可以抑制人食管癌EC109细胞的生长,且具有时间和剂量依赖性(r=0.918,0.996,P＜0.05、0.01),500 μmol/L Res作用72 h后对细胞的生长抑制率可达87.43%.500 μmol/L Res作用48 h,荧光染色及相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变.细胞周期分析显示Res能诱导EC109细胞在S期停滞,抑制细胞DNA的合成并可明显诱导EC109细胞凋亡,凋亡率最高为62.3%.结论:Res可抑制人食管癌EC109细胞生长,引起细胞周期的S期阻滞,并诱导细胞凋亡.     

白藜芦醇通过Fas依赖途径诱导K562细胞凋亡

目的探讨白藜芦醇对K562细胞的凋亡诱导效应和可能的作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测K562细胞凋亡；采用流式细胞术(FCM)测定细胞Fas蛋白表达水平；采用RT-PCR法检测Caspase-3 mRNA表达水平，采用比色法检测Caspase-3活性。结果白藜芦醇可抑制K562细胞增殖，并呈现典型的凋亡形态改变；DNA电泳可见明显的梯状条带；细胞周期分析显示S期细胞数明显增多，出现S／G2期阻滞。40μmol／L白藜芦醇作用48h到72h后，Fas阳性率由4．1％上升到45．6％；Caspase-3 mRNA表达水平明显升高，活性明显增强。结论白藜芦醇通过Fas依赖性Caspase-3激活途径诱导K562细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用的研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及可能的机制.方法:MTT法检测不同浓度(0、12.5、25、50、100、200、300、400、600μmol/L)Res处理24、48、72h对HeLa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测HeLa细胞的凋亡率.荧光显微镜观测细胞的形态学改变.分光光度法检测Caspase-3活性.结果:Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌HeLa细胞的生长(P<0.05).以0、200、300μmol/L Res处理细胞48小时,HeLa细胞早期凋亡率分别为2.2%、7.1%、6.23%,晚期凋亡率为7.7%、16.04%、15.43%.荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变.200μmol/L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50、100、200μmol/L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1.92倍、2.51倍、4.53倍(P<0.05).结论:白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间和浓度依赖的方式抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡机制的实验研究

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratml,Res)诱导人早幼粒白血病HL60细胞凋亡的机制.材料与方法:用不同浓度Res作用HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞的形态学变化,MTY法检测Res对HL-60细胞增殖的抑制作用,确定Res作用于HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50).Western blot法检测Res作用HL-60后Caspase-3活性的变化及GADD45a、Annexin A1、Bcl-2/Bax、Cleaved-Caspase 3表达的变化.结果:Res处理后,HL-60细胞体积变小,细胞的折光性减弱,细胞内出现颗粒样物质,且随着Res浓度的增加上述形态变化增强.12.5～200 μmol/L浓度的Res可明显抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和剂量依赖性(P<0.05),24 h的IC50为75.64 μmol/L.Res处理后,HL-60细胞Caspase-3活性增强,12 h达高峰,24 h开始下降;细胞的Annexin A1、GADD45α、Bax、Cleaved-Caspase 3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量下降,Bcl-2/Bax比值下降.结论:Res抑制HL-60细胞增殖,并通过依赖Caspase-3途径诱导HL-60细胞凋亡,GADD45α、Annexin A1参与了凋亡过程.     

白藜芦醇对MG132诱导K562细胞凋亡影响的研究

目的:研究白藜芦醇能否增加K562细胞对MG132的敏感性.方法:MG132单独及联合白藜芦醇作用于K562细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测PARP剪切水平.结果:＞50 μmol/L白藜芦醇能够有效地抑制K562细胞的活力,P＜0.01;MG132单独处理K562细胞24 h,对细胞活力的抑制呈剂量依赖性,P＜0.01;而联合用药时,白藜芦醇呈剂量依赖性的对抗了MG132对K562细胞的毒性,并且5μmol/L白藜芦醇有效的降低了K562细胞凋亡率,P＜0.05.结论:白藜芦醇具有对抗MG132诱导细胞毒性的潜在作用.     

白藜芦醇诱导白血病Molt-4细胞凋亡及对WAVE1基因表达的影响

 目的　探讨白藜芦醇诱导人类急性淋巴细胞白血病Molt-4细胞凋亡的作用机制。方法　噻唑蓝比色法（MTT）测定细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡率;半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测WAVE1基因的表达。结果　MTT结果显示：12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μmol／L的白藜芦醇作用于Molt-4细胞24、48、72 h后,细胞的最大抑制率分别达到29.32 %、36.11 %、53.92 %、62.50 %、74.98 %,并呈时间-剂量依赖性（F＝33.614,P＜0.05）;流式细胞术检测结果显示：与对照组相比,50.0、100.0 μmol／L白藜芦醇作用于Molt-4细胞48 h后,S期细胞比例由42.2 %分别上升为68.6 %和78.1 %,细胞发生了S期阻滞（F＝19.453, P＜0.01）;PCR结果显示：50.0、100.0 μmol／L的白藜芦醇处理Molt-4细胞48 h后,WAVE1／GAPDH比值分别为0.356±0.03、0.382±0.05,与对照组 （0.586± 0.06）比较,差异有统计学意义（F＝8.950,P＜0.01）。结论　白藜芦醇可诱导Molt-4细胞发生凋亡,其作用机制可能与下调WAVE1基因表达有关。     

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。     

白藜芦醇抑制ls174t细胞生长及其在裸鼠皮下移植瘤中的作用机制

目的 探讨白藜芦醇对结肠癌ls174t细胞及其鼠移植瘤组织生长的作用及机制.方法 二苯基溴化四氮唑蓝(MTY)法检测白藜芦醇对体外ls174t细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的改变,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达.将ls174t细胞移植至裸鼠皮下,观察白藜芦醇对皮下移植瘤生长的影响;RT-PCR法检测瘤组织中bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达.结果 (1)白藜芦醇具有体外抑制ls174t细胞增殖的作用,25、50、100、200、400 μmol/L的白藜芦醇作用ls174t细胞24 h,抑制率分别为1.0%、9.1%、17.4%、27.8%和66.5%;作用48 h,抑制率分别为3.6%、13.7%、30.2%、58.4%和86.1%;作用72 h,抑制率分别为18.1%、33.0%、48.6%、61.2%和89.4%,差异有统计学意义(P<0.01).不同浓度的白藜芦醇作用ls174t细胞后,随自藜芦醇浓度的增加,bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,baxmRNA和蛋白表达增强.流式细胞仪检测显示,白藜芦醇能诱导ls174t细胞的凋亡,使细胞周期阻滞于S期.(2)白藜芦醇可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,最大抑制率为47.9%.200 mg/kg白藜芦醇治疗组和800 mg/kg白藜芦醇治疗组的裸鼠皮下移植瘤重量分别为(4.10±0.18)g和(3.05±0.35)g,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).白藜芦醇可使裸鼠肿瘤组织中bcl-2 mRNA和蛋白表达降低,而bax mRNA和蛋白表达增强.结论 白藜芦醇具有抑制ls174T细胞和皮下移植瘤生长的作用,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节bcl-2、bax表达有关.     

胶质瘤细胞诱导分化后的凋亡现象

目的：研究胶质瘤细胞诱导分化后的去向,籽胶质瘤诱导化疗法提供理论基础。方法：采用MTT,免疫荧光等方法鉴定二甲基甲酰胺DMF诱导胶质瘤细胞系,SHG－44的分化,用形态学,吖啶橙／溴化乙啶活细胞染色（AO／EB）,流式细胞术,Annexin V检测凋亡。结果：DMF可以引起剂量依赖性的显著诱导分化作用,从细胞形态,AO／EB染色上可以观察到细胞经1％DMF诱导分化后发生了凋亡。经流式细胞术DNA图谱定量,诱导1,5天凋记细胞占3．5％,第3天占26．8％,用检测细胞膜不对称性的Annexin V凋亡检测发现,第1．5天即可观察到12．18％,的早期凋亡细胞,并排除坏死,结论：胶质瘤细胞系SHG－44经DMF诱导分化后,将逐渐凋亡。     

人脑胶质瘤细胞株MGR2放射抗拒性的诱导

背景与目的:放射治疗是脑胶质瘤重要辅助治疗手段之一,但脑胶质瘤放射敏感性存在很大差异。本研究通过对放射相对敏感的人脑胶质瘤细胞株进行放射诱导得到具有稳定放射抗拒性的后代细胞,从而为研究胶质瘤放射抗拒机制提供具有可比性的成对细胞。方法:选取对X射线相对敏感的人脑胶质瘤细胞株MGR2[2Gy照射下的存活分数(survivalfractionof2Gy,SF2)为0.180±0.05]进行间歇性大剂量X射线照射(每次2Gy,共3次,而后每次5Gy,共2次),每次照射后的细胞继续培养,待5～8周存活的细胞状态稳定后进行下一次照射,整个照射及培养过程历时11个月,最终得到的后代细胞命名为MGR2R(MGR2radiationinduction)。采用MTT法检测MGR2和MGR2R细胞生长的倍增时间,平板集落形成法和线性二次模型(L-Q模型)拟合MGR2和MGR2R细胞的存活曲线并计算相关放射生物学参数和SF2值。血清饥饿细胞周期同步化方法检测MGR2和MGR2R的细胞周期变化。结果:MGR2的倍增时间为3.6天,MGR2R的生长速度减慢,倍增时间为4.0天。MGR2和MGR2R的α值分别为0.447和0.089(t=4.524,P=0.011),β值分别为0.177和0.141(t=1.562,P=0.193),SF2值为0.208和0.478(t=-6.062,P=0.040),MGR2R的放射抗拒性增加。细胞周期同步化后MGR2的细胞周期分布为G1期54.8%,S期30.9%,G2期14.3%,去同步化后G1期35.9%,S期51.2%,G2期12.8%,MGR2R正常生长时存在G2期阻滞(81.7%),同步化后G1期55.7%,S期27.8%,G2期16.6%,去同步化后分别为G1期56.4%,S期26.7%,G2期16.9%,MGR2R存在G1期阻滞,去同步化后两者细胞周期改变不同。结论:人脑胶质瘤细胞株MGR2经间歇性大剂量X射线多次照射后得到的后代细胞MGR2R具有稳定放射抗拒性。MGR2R生长速度减慢,倍增时间延长,同时存在G1和G2期阻滞,可能与其放射抗拒性的产生有关。     

人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

莱菔硫烷促进神经胶质瘤细胞凋亡的机制探讨

目的探讨莱菔硫烷(SFN)促进神经胶质瘤细胞凋亡的作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法与流式细胞法检测不同浓度的SFN对神经胶质瘤U251细胞系生长的抑制作用,测定半数抑制浓度,空白对照设为对照组;采用Western blot研究SFN对U251细胞内Cyt-c的表达情况。结果不同浓度SFN组A值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度SFN均对U251细胞生长有一定抑制作用,12.5μmol/l、25μmol/l、50μmol/l、100μmol/l浓度的SFN对U251细胞生长抑制率逐渐增强,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。但100μmol/l与200μmol/l浓度的SFN对U251细胞生长抑制率比较无统计学意义(P>0.05)。不同浓度SFN诱导细胞凋亡率及Cyt-c蛋白表达均显著高于对照组,且随着SFN浓度递增,U251细胞凋亡率、Cyt-c蛋白表达逐渐增加,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SFN可能参与神经胶质瘤细胞的凋亡过程,表现为诱导凋亡U251细胞,可能与Cyt-c表达增高存在关系。     

IFN-β基因诱导裸鼠胶质瘤Fas 表达上调及细胞凋亡的实验研究

 目的 研究β干扰素基因对人脑胶质瘤的诱导凋亡作用,以及能否诱导胶质瘤细胞Fas表达上调,并探讨了β干扰素基因诱导细胞凋亡及Fas表达上调之间的联系. 方法 建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将IFN-β基因的真核表达载体pSV2IFNβ注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、TUNEL染色,了解IFN-β基因诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的作用以及胶质瘤细胞Fas表达情况. 结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡,胶质瘤细胞Fas表达明显高于对照组. 结论 IFN-β基因能够抑制人脑胶质瘤生长,并诱导胶质瘤细胞凋亡;IFN-β基因诱导胶质瘤细胞凋亡可能是Fas表达上调的结果.     

去甲二氢愈创木酸诱导体外恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的：观察去甲二氢愈创木酸（nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡的影响,并探讨其发生的可能机理。方法：采用MTT（methy thiazolyl tetrazolium)法检测细胞增殖抑制的情况。利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测体外培养细胞的凋亡情况,用免疫组织化学,原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：（1）一定浓度（100μmol/L）的NDGA处理SHG-44细胞不同时间后,在NDGA抑制细胞增殖的同时,也可诱导此细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;（2）免疫组化染色结果表明,一定浓度的NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生呈负相关;（3）原位杂交结果显示;NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA可诱导SHG-44细胞的凋亡,这种作用可能与其下调bcl-2基因的表达有关,确切机制有待进一步深入研究。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导脑胶质瘤细胞凋亡及其机制的研究

背景与目的:使用分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:以不同药物浓度梯度与U251细胞分别共培养24、48和72h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,Transwell法检测药物作用前后U251细胞迁移能力的变化,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量,免疫印迹检测IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白和聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达。结果:MS-275能显著抑制U251细胞的增殖。MS-275药物浓度40nmol/mL,与U251共培养72h,细胞增殖抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用72h后,U251细胞凋亡率为(29.000±2.306)%;实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量随药物作用时间的延长而降低,免疫印迹检测提示IκB-α蛋白表达水平降低,IκB-α蛋白磷酸化被抑制,PARP被剪切。结论:MS-275对胶质瘤细胞的增殖和迁移抑制作用具有浓度和时间依赖性,其机制是通过抑制IκB-α蛋白磷酸化诱导凋亡实现的。     

Resveratrol Affects Protein Kinase C Activity and Promotes Apoptosis in Human Colon Carcinoma Cells

Background: Resveratrol has been reported to have potential chemopreventive and apoptosis-inducing properties in a variety of tumor cell lines. Objective: In this study, to investigate the effects of resveratrol on protein kinase C (PKC) activity and apoptosis in human colon carcinoma cells, we used HT-29 cells and examined the PKCα and ERK1/2 signaling pathways. Methods: To test the effects of resveratrol on the growth of HT- 29 cells, the cells were exposed to varying concentrations and assessed with the the MTT cell-viability assay.Fluorescence-activated cell sorter (FACS) analysis was applieded to determine the effects of resveratrol on cell apoptosis. Western blotting was performed to determine the protein levels of PKCα and ERK1/2. In inhibition experiments, HT-29 cells were treated with Gő6976 or PD98059 for 30 min, followed by exposure to 200 μM resveratrol for 72 h. Results: Resveratrol had a significant inhibitory effect on HT-29 cell growth. FACS revealed that resveratrol induced apoptosis. Western blotting showed that e phosphorylation of PKCα and ERK1/2 was significantly increased in response to resveratrol treatment. Pre-treatment with PKCα and ERK1/2 inhibitors (Gő6976 and PD98059) promoted apoptosis. Conclusion: Resveratrol has significant anti-proliferative effects on the colon cancer cell line HT-29. The PKC- ERK1/2 signaling pathway can partially mediate resveratrol-induced apoptosis of HT-29 cells.     

Tumor Necrosis Factor-α Gene Transfer Augments Anti-Fas Antibody-mediated Apoptosis in Human Glioma Cells

To effectively induce apoptosis in human glioma cells, we tried to transfer the tumor necrosis factor (TNF)-α gene into glioma cells to produce TNF-α locally in these cells. The stable transfectants of three gliorna cells (U251-SP, U251-MG, and T98G) were resistant to exogenous TNF-α, but their cell surface expression of the Fas antigen was dramatically enhanced by about 10 to 100-fold as compared with untransfected glioma cells exposed to exogenous TNF-α. The Fas antigen is a transmemhrane cytokine receptor protein of the nerve growth factor/TNF receptor superfamily. Although the untransfected glioma cells tested were resistant to anti-Fas antibody-mediated apoptosis, the TNF-α gene-transfected glioma cells exhibited high susceptibility to anti-Fas antibody-mediated apoptosis. Thus, TNF-α gene transfer combined with anti-Fas antibodies may be useful for the treatment of malignant glioma.     

整合素与胶质瘤细胞凋亡

 目的　研究整合素 β1在胶质瘤细胞中的表达及在胶质瘤细胞增殖、生存方面的作用。 方法　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞整合素 β1的含量 ,以不同浓度的抗整合素 β1抗体处理在胶原蛋白I上培养的SHG4 4胶质瘤细胞 ,MTT法测定ID50 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞仪分析细胞周期改变。结果　流式细胞仪检测SHG4 4胶质瘤细胞表达整合素 β1,MTT曲线测定发现 ,2 0 μg/ml抗整合素 β1抗体处理SHG4 4胶质瘤细胞 4 8小时后 ,显著抑制SHG4 4胶质瘤细胞的增殖。流式细胞仪分析可检出凋亡峰。结论　整合素 β1在SHG4 4胶质瘤细胞中高表达 ,并与胶质瘤细胞增殖、生存密切相关 ,抑制整合素 β1的表达可促进胶质瘤细胞的凋亡及坏死。