褪黑素联合顺铂通过诱导细胞凋亡抑制人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖

目的：研究褪黑素（melatonin,MT）和顺铂（cisplatin,DDP）单独或联合应用对人胶质瘤细胞U251和SHG-44增殖及凋亡的影响。方法：采用不同质量浓度MT和DDP单独或联合处理U251和SHG-44细胞,并设对照组（不加任何药物）及乙醇组（加入乙醇）;以CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期,采用两药相互作用指数（coefficient of drug interaction,CDI）评估MT是否影响U251和SHG-44细胞对DDP的敏感性。结果：CCK-8结果显示,单用MT或DDP可浓度依赖性抑制U251和SHG-44细胞的增殖,MT还可协同增强DDP对U251和SHG-44细胞的增殖抑制作用（CDI<1）。流式细胞术检测结果显示,MT可促进U251和SHG-44细胞的凋亡,MT可增强DDP对U251和SHG-44细胞的凋亡诱导作用,0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP组U251和SHG-44的细胞凋亡率显著高于20 μg/ml DDP组\[（66.3±1.0）% vs （45.9±1.7）%,（35.5±0.8）% vs （15.5±0.8%）;均P<0.01\];而且0.5 mmol/L MT联合20 μg/ml DDP 组U251和SHG-44细胞的G1期比例显著高于20 μg/ml DDP组\[（52.4±2.1）% vs （27.9±1.5）%,（39.7±1.5）% vs （27.7±1.3）%;均P<001\]。结论：MT能显著增强DDP对人胶质瘤细胞U251和SHG-44的凋亡诱导作用,从而协同增强DDP对细胞增殖的抑制作用,有望成为人胶质瘤化疗的辅助药物。     

沉默lncRNA UCA1通过上调miR-873-5p表达对胶质瘤细胞放射敏感性影响

目的 探讨lncRNA UCA1通过调控miR-873-5p表达对体外培养的胶质瘤SHG-44、U87、U251细胞放射敏感性的影响。方法 采用克隆形成实验检测X线照射0、2、4、6、8Gy SHG-44、U87、U251细胞存活情况,qRT-PCR检测SHG-44、U87、U251细胞中UCA1基因表达。以放射抵抗的U87、U251细胞为研究对象,沉默UCA1表达、过表达miR-873-5p后用克隆形成实验及流式细胞术检测细胞存活分数和细胞凋亡率。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证UCA1和miR-873-5p的靶向关系。结果 UCA1在U87、U251细胞中表达上调。沉默UCA1或过表达miR-873-5p可抑制U87、U251细胞存活,并促进细胞凋亡。miR-873-5p是UCA1靶基因,UCA1可负性调控miR-873-5p1的表达。抑制miR-873-5p表达可逆转沉默UCA1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。沉默UCA1增加射线对胶质瘤细胞U251移植瘤的抑制作用。结论 沉默UCA1通过上调miR-873-5p表达,抑制胶质瘤细胞存活并促进其凋亡,从而提高胶质瘤细胞放射敏感性。     

新型 CDK7抑制剂对人胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的：探究新型 CDK7抑制剂 THZ1对人胶质瘤细胞系 U87及 U251增殖、凋亡、侵袭能力的影响及细胞周期的阻滞作用。方法：将 U87及 U251细胞分成对照组及实验组,实验组加入不同浓度的 THZ1处理后,以 CCK －8法及平板克隆形成试验分析细胞增殖;Transwell 侵袭试验观测各组侵袭能力的变化;流式细胞仪检测各组细胞周期分布及凋亡情况;Western blot 实验检测凋亡相关蛋白 Caspase －3的表达量。结果：THZ1抑制 U87及 U251的增殖,根据实验结果用 SPSS 20．0分析出72小时药物 IC50,U87细胞为83．1nmol／L、U251细胞为13．7nmol／L。平板克隆形成试验结果显示低浓度药物即可明显抑制克隆形成。THZ1降低U87细胞的侵袭性。THZ1促进 U251细胞凋亡,Caspase －3表达增加。THZ1阻滞 U87及 U251细胞周期进展,G2期细胞显著增加。结论：THZ1能够抑制胶质瘤细胞 U87及 U251的增殖,促进凋亡,抑制侵袭,并阻滞细胞周期进展。     

NF-κB抑制剂QNZ对人胶质瘤细胞生物学功能的影响

目的:探究NF-κB抑制剂QNZ对人胶质瘤细胞系U251生物学功能的影响。方法:胶质瘤U251细胞中加入QNZ处理,用CCK8法、Transwell实验、流式细胞术和Western blot检测细胞增殖、侵袭、凋亡以及Caspase-3的表达。结果:QNZ处理后绘制出生长曲线,发现胶质瘤细胞增殖受到抑制。QNZ降低U251细胞的侵袭性。不同浓度QNZ处理后,U251细胞凋亡增加,与QNZ浓度有相关性。QNZ处理后细胞周期被阻滞于G2期。结论:QNZ抑制胶质瘤细胞U251的增殖和细胞侵袭力,促进凋亡并阻滞细胞周期进展,为胶质瘤治疗提供新的思路。     

STIP1在脑胶质瘤组织中的表达及对胶质瘤细胞株增殖、凋亡、侵袭的影响

目的:检测磷酸化应激诱导蛋白1（stress-induced phosphoprotein 1,STIP1）在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异,探讨STIP1对胶质瘤细胞株U87、U251细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、免疫组化及蛋白印迹检测胶质瘤组织和正常脑组织中STIP1的表达;小干扰RNA（STIP1-siRNA）转染U87、U251细胞株后,使用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和Transwell小室观察细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。结果:STIP1在胶质瘤Ⅳ级组织中的表达明显高于正常脑组织,但在胶质瘤Ⅱ、Ⅲ级中的表达与正常脑组织无明显差异。U87、U251细胞株转染STIP1-siRNA后,细胞增殖和侵袭能力明显受到抑制,而细胞凋亡率明显上升。结论:STIP1在胶质母细胞瘤组织中高表达,下调STIP1可以抑制胶质瘤细胞株U87和U251的增殖,阻滞细胞周期,促进其细胞凋亡,并可抑制其侵袭力。     

p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究

背景与目的：肿瘤抑制基因p53是调节多种与细胞周期、凋亡、DNA修复等有关基因表达的转录因子。p53基因在大约30％的胶质瘤中发生突变，在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。本文主要探讨野生型p53基因过表达对脑胶质瘤细胞系U251细胞生长抑制的机制。方法：通过p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染U251细胞系，RT-PCR及Westem blot方法检测转染效率；并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因对U251细胞生长的影响。结果：MOI为100时，野生型p53基因的过表达可引起U251细胞G0、G1期阻滞、诱导U251细胞凋亡以及引起U251细胞生长抑制。结论：p53基因可以通过细胞周期G0、G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长。     

榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及对端粒酶活性和hTERT表达影响的研究

目的：探讨榄香烯诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡及其影响端粒酶活性及其催化亚单位人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达的机制。方法：将榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株后，用MTT法检测细胞增殖抑制率．并求出半数抑制浓度（IC50），倒置显微镜和电镜观察经榄香烯处理的U251细胞形态。流式细胞仪和原位末端标记技术检测细胞周期及细胞凋亡率的变化，免疫荧光技术观簪凋亡小体．流式细胞仪测定bcl-2表达水平．端粒重复扩增（TRAP）法测定端粒酶活性的变化，RT—PCR检测bcl-2和hTERT的表达。结果：榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用，呈剂量和作用时间的依赖性，IC50为0.062mg／ml，倒置显微镜下可见榄香烯组细胞皱缩、变小，电镜下可见具有典型新月形核的凋亡细胞和凋亡小体，流式细胞仪检测榄香烯阻滞U251细胞周期中S期向G2／M期的转变过程，减少有丝分裂，并引起细胞凋亡，免疫荧光技术观察凋亡小体，TRAP法发现榄香烯可以降低端粒酶活性的变化＋呈时间和剂量依赖型。RT—PCR分别证实榄香烯降低bcl-2和hTERT基因表达水平。结论：榄香烯诱导人脑胶质瘸U251细胞凋亡，并抑制U251细胞端粒酶的活性，榄香烯作用于胺质瘤的分子生物学机制可能通过抑制bc1-2表达，下调hTERT基因，降低端粒酶的活性，从而诱导细胞调亡。     

Galectin-3调控Wnt信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的:半乳糖凝集素-3（Galectin-3）调控Wnt信号通路对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR及Western blot检测人脑胶质瘤组织中Galectin-3的mRNA和蛋白表达;Western blot检测人脑胶质瘤U251、U87、SHG-44细胞中Galectin-3的蛋白表达;将Galectin-3的特异性siRNA(Galectin-siRNA)转染人脑胶质瘤U87细胞,Western blot、流式细胞术分别检测转染48 h后Galectin-3、Wnt5a、β-catenin和Cleaved caspase3蛋白表达及细胞凋亡率。结果:Galectin-3在人脑胶质瘤组织mRNA和蛋白表达均显著高于瘤旁组织（P＜0.01）;U251、U87、SHG-44细胞中Galectin-3蛋白表达从高到低为U87>U251>SHG-44,选择U87细胞作为后续研究;Galectin-3-siRNA1的Galectin-3蛋白表达最低,选择作为后续研究;NC-siRNA组细胞凋亡率、Cleaved caspase3、Wnt5a、β-catenin蛋白表达与对照组差异不显著（P＞0.05）,与对照组比较,Galectin-3-siRNA组细胞凋亡率明显升高,Cleaved caspase3蛋白表达明显升高,Wnt5a和β-catenin蛋白表达明显降低（P＜0.01）。结论:沉默Galectin-3表达可诱导人脑胶质瘤细胞凋亡,机制可能与Wnt信号通路的下调有关。     

白藜芦醇对人食管癌EC109细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人食管癌EC109细胞生长、诱导凋亡的作用机制.材料与方法:不同浓度Res作用EC109细胞后,采用MTF法检测Res对人食管癌EC109细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色和倒置相差显微镜观察EC109细胞的形态学改变;流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡.结果:Res(15.62～500 μmol/L)可以抑制人食管癌EC109细胞的生长,且具有时间和剂量依赖性(r=0.918,0.996,P＜0.05、0.01),500 μmol/L Res作用72 h后对细胞的生长抑制率可达87.43%.500 μmol/L Res作用48 h,荧光染色及相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变.细胞周期分析显示Res能诱导EC109细胞在S期停滞,抑制细胞DNA的合成并可明显诱导EC109细胞凋亡,凋亡率最高为62.3%.结论:Res可抑制人食管癌EC109细胞生长,引起细胞周期的S期阻滞,并诱导细胞凋亡.     

榄香烯抑制人脑胶质瘤U251细胞株c-myc癌基因表达及其影响细胞凋亡机制的研究

目的:探讨榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞株c-myc癌基因表达及其影响细胞凋亡的机制.方法:应用榄香烯处理人脑胶质瘤U251细胞株,应用MTT法检测细胞增殖抑制试验,并求出半数致死浓度(IC50),倒置显微镜和电镜观察经榄香烯处理的U251细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期的变化,凝胶电泳检测凋亡梯度,免疫荧光技术观察凋亡小体,免疫组织化学检测c-myc蛋白和RT-PCR检测c-myc基因的表达.结果:榄香烯对U251细胞株增殖具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性,IC50为0.062mg/ml,倒置显微镜下可见榄香烯组细胞皱缩、变小,电镜下可见具有典型新月形核的凋亡细胞和凋亡小体,流式细胞仪检测榄香烯阻滞U251细胞株周期中S期向G2/M期的转变过程,减少有丝分裂,并引起细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳获得清晰的凋亡特征性梯形条带,免疫荧光技术观察凋亡小体,免疫组织化学和RT-PCR分别证实榄香烯抑制c-myc蛋白和c-myc基因的表达.结论:榄香烯可抑制人脑胶质瘤U251细胞株c-myc癌基因表达,并通过下调U251细胞株的凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖.     

BML-210对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂BML-210 对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用0、5、10、20 μmol／L BML-210 处理U251细胞,活细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测不同浓度BML-210处理24、48、72和96 h的增殖抑制率,磷酯酰丝氨酸结合蛋白-异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin-FITC／PI）双染法检测不同浓度BML-210处理后的细胞凋亡率,流式细胞仪检测不同浓度BML-210处理48 h后的细胞周期分布情况,免疫印迹检测不同浓度BML-210处理48 h后凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）蛋白表达。结果 BML-210 可呈剂量和时间依赖的方式抑制U251细胞的增殖（P＜0.05）;除5 μmol／L组的晚期凋亡率外,BML-210处理组的早、晚期凋亡率均高于对照组（P＜0.05）,且BML-210处理组作用48 h后的凋亡率均高于24 h,组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,BML-210作用48 h后U251细胞的Bcl-2水平及S、G2／M期细胞比例降低,Bax和Cleaved caspase-3水平及G0／G1期细胞比例升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 BML-210 可抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖并诱导其凋亡和细胞周期阻滞,对脑胶质瘤的辅助治疗有一定价值。     

PTEN在人脑胶质瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

背景与目的:PTEN基因的缺失及突变与多种肿瘤有关,而脑胶质瘤是与PTEN基因变异关系最为密切的恶性肿瘤之一.本研究旨在观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,为PTEN用于胶质瘤基因治疗提供科学的实验依据.方法:(1)应用RT-PCR方法扩增人脑胶质瘤细胞U251、SHG-44中PTEN基因,序列测定分析.(2)采用阳离子聚合物转染试剂,将携带野生型PTEN基因的重组真核表达载体质粒转染至胶质瘤细胞,G418筛选出稳定转染的细胞并扩增培养.通过细胞形态学、细胞生长曲线观察PTEN基因表达对细胞形态和增殖的影响,应用Western blot、免疫细胞化学法检测相关蛋白的表达.结果:(1)胶质瘤细胞U251和SHG-44的PTEN mRNA分别存在着突变型、缺失型两种表达方式.(2)稳定转染的U251和SHG-44细胞株的生长曲线显示细胞增殖明显受抑制,第7天细胞计数分别为未转染对照组细胞数的39.1%、27.8%;Westem blot显示稳定转染细胞株有外源性PTEN蛋白的表达;细胞免疫化学法显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达量增加,从而表现出对细胞形态影响的差异,稳定转染的U251细胞出现向星形细胞分化的特征,SHG-44细胞形态转染前后无明显改变.结论:恢复野生型PTEN基因表达对胶质瘤细胞存在差异性的诱导分化作用.     

Histone deacetylase inhibitors, N-butyric acid and trichostatin A, induce caspase-8- but not caspase-9-dependent apoptosis in human malignant glioma cells

Histone deacetylase (HDAC) inhibitors have both apoptotic and differentiating effects on various tumor cells. However, the mechanisms underlying the effect of HDAC inhibitors remain unclear. In this study, we investigated the function of anti-proliferative effects of HDAC inhibitors, N-butyric acid and trichostatin A, on human malignant glioma cell lines, U251-MG and D54. MTT assay showed a dose-dependent inhibition of cellular proliferation in both cell lines. Cell cycle analysis revealed increased sub-G1 population in both lines, and G1 arrest only in U251-MG cells. Induction of apoptosis was also supported by the occurrence of DNA fragmentation in tumor cells treated with HDAC inhibitors. Furthermore, caspase inhibition assay indicated that HDAC inhibitor-induced apoptosis was caspase-dependent. Neither mitochondrial membrane potential nor the expression of caspase-9 was changed by treatment with HDAC inhibitors, suggesting the possibility that HDAC inhibitor-induced apoptosis was not mediated by the mitochondrial cell death pathway. On the other hand, immunoblot assay confirmed increased expression of caspase-8 in both lines, and elevation of p21 but not p27 protein in U251-MG cells following HDAC inhibitor treatment. Taken together, the HDAC inhibitors, N-butyric acid and trichostatin A, induce caspase-8- but not caspase-9-dependent apoptosis with or without p21-mediated G1 arrest in human malignant glioma cells.     

KIF20A对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡及细胞周期分布的影响

目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化,流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达,CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力,流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导胶质母细胞瘤凋亡研究

目的：研究斑蝥酸钠维生素B6（ Sodium cantharidinate ,SCA）体外诱导胶质母细胞瘤U87凋亡作用及其机制。方法利用 MTT 法检测0．3125μg/mL,0．625μg/mL,1．25μg/mL,2．5μg/mL,5μg/mL SCA在24 h、48 h和72 h对U87的生长抑制作用,Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察SCA作用24 h后U87细胞的形态学变化,利用流式细胞术分别检测SCA作用12 h,24 h后U87细胞凋亡率及细胞周期阻滞。 RT-PCR分析SCA作用24小时后U87凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化。结果 MTT法结果显示SCA对U87细胞的生长抑制作用随着药物浓度的增加而增强,流式细胞术检测结果显示SCA可将细胞周期阻滞于G2/M期,并且可诱导U87细胞凋亡。 Hoechst 33258染色可见经SCA作用后U87细胞出现凋亡形态：染色质凝集、细胞核固缩、部分核碎裂和凋亡小体的形成。 RT-PCR结果显示：SCA作用后,Caspase-3、Bax表达较对照组明显增高（P＜0．05）,Bcl-2表达明显下降（P＜0．05）, p53表达无显著增高（P＞0．05）。结论体外实验研究表明SCA可抑制U87细胞增殖,并诱导其凋亡。