辛伐他汀对高糖诱导下人腹膜间皮细胞TGF—β1和CTGF表达的影响

【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法（Semi—QuantitativeRT—PCR）检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;酶联免疫双抗夹心法（ELISA）检测细胞上清液中TGF—β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。【结果】辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平（TGF—β1,P〈0．05;CTGF,P〈0．01）,并下调其mRNA表达（TGF-β1,P〈0.01;CTGF,P〈0．05）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达。     

TGF-β1对人腹膜间皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

[目的]观察TGF-β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA和蛋白表达影响并就可能的机制进行探讨。【方法】取健康成年人大网膜进行原代培养,用5ng／ml TGF—β1刺激第三代培养细胞,采用免疫组织化学染色、Western blot、ELISA以及RT—PCR等方法,分别观察PAI-1的mRNA和蛋白表达,纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(COLI)的mRNA和蛋白表达,细胞内磷酸化Smad2／3(p-Smad2／3)的蛋白表达。【结果】刺激组PAI-1的mRNA和蛋白表达与对照组相比均显著增加,其中24h为高峰,48h、72h依次递减;刺激组FN和COLI的mRNA和蛋白表达与对照组比均呈时间依从性显著增加;对照组细胞内几乎不表达p-Smad2／3,阳性细胞率3％,在刺激后15min蛋白表达即开始增加,阳性细胞率29％,1h增加最明显,阳性细胞率达84％,2h明显回落,此时阳性细胞率为37％。[结论]TGF—β1在致腹膜纤维化过程中诱导了HPMCs内PAI-1的转录与蛋白表达,这可能与TGF—β1激活了HPMCs内Smad信号通路有关。     

灯盏花素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞转化生长因子β1的影响

背景：从不同层面了解灯盏花素阻止/延缓腹膜功能衰竭的作用及其机制,从而在临床上推广使用灯盏花素来阻止/延缓腹膜功能衰竭从而延长终末期肾脏病患者腹膜透析时间、提高透析质量、减少透析失败率,提高腹膜透析远期疗效具有广泛的应用前景。目的：观察灯盏花素对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌及其增殖活性的影响。方法：体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组：分别为对照组、腹膜透析液组、灯盏花素终浓度为5,10,20μmol/L组。检测各组上清液中转化生长因子β1的水平以及间皮细胞的增殖活性。结果与结论：腹膜间皮细胞在腹膜透析液诱导下,转化生长因子β1分泌显著增加、细胞增殖活性显著降低。灯盏花素5μmol/L组转化生长因子β1分泌低于腹膜透析液组（P〈0.05）,细胞增殖活性高于腹膜透析液组（P〈0.05）;灯盏花素10,20μmol/L组转化生长因子β1分泌显著低于腹膜透析液组（P〈0.01）,细胞增殖活性显著高于腹膜透析液组（P〈0.01）。结果显示灯盏花素可以抑制腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。     

灯盏花素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞转化生长因子β1的影响

背景:从不同层面了解灯盏花素阻止/延缓腹膜功能衰竭的作用及其机制,从而在临床上推广使用灯盏花素来阻止/延缓腹膜功能衰竭从而延长终末期肾脏病患者腹膜透析时间、提高透析质量、减少透析失败率,提高腹膜透析远期疗效具有广泛的应用前景。目的:观察灯盏花素对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌及其增殖活性的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组:分别为对照组、腹膜透析液组、灯盏花素终浓度为5,10,20μmol/L组。检测各组上清液中转化生长因子β1的水平以及间皮细胞的增殖活性。结果与结论:腹膜间皮细胞在腹膜透析液诱导下,转化生长因子β1分泌显著增加、细胞增殖活性显著降低。灯盏花素5μmol/L组转化生长因子β1分泌低于腹膜透析液组(P<0.05),细胞增殖活性高于腹膜透析液组(P<0.05);灯盏花素10,20μmol/L组转化生长因子β1分泌显著低于腹膜透析液组(P<0.01),细胞增殖活性显著高于腹膜透析液组(P<0.01)。结果显示灯盏花素可以抑制腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。     

葛根素对腹膜透析液诱导的体外培养人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

【目的】了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性及转化生长因子β1（TGF-β1）分泌的影响。【方法】体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组（葛根素终浓度为50μg／mL）、B组（葛根素终浓度为100μg／mL）、C组（葛根素终浓度为200μg／mL）五组观察。检测各组上清液中TGF-β1的含量以及间皮细胞的增殖活性并比较。【结果】腹膜间皮细胞在PDS干预下,TGF-β1分泌显著增加,添加葛根素再干预的A、B、C组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降。与PDS组比较,A、B、c纽间皮细胞增殖活性显著升高。【结论】葛根素可以抑制腹膜间皮细胞TGF-β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。     

晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的表达

目的探讨晚期氧化蛋白产物（AOPP）诱导体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMCs）对转化生长因子（TGF-β1）表达的影响及内源性活性氧（ROS）在此过程中的调节机制。方法体外制备AOPP-HSA模型，原代培养人腹膜间皮细胞。采用ELISA法检测TGF-β1蛋白水平，采用RT-PCR半定量分析HPYCs中TGF-β1 mRNA的基因表达水平，同时应用流式细胞仪检测细胞内活性氧的水平。结果AOPP-HSA能显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，同时增加细胞内ROS的生成，呈时间与剂量依赖关系（P〈0．01），不同浓度的抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸预处理细胞，可明显地降低细胞内ROS的生成量，同时显著地抑制AOPP-HSA诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，呈剂量依赖关系（P〈0．01），其中维生素E（50μmol／L）组和NAC（10mmol／L）组抑制更加显著。结论体外制备的AOPP可显著诱导人腹膜间皮细胞TGF-β1的分泌与基因表达，部分可能通过内源性ROS介导细胞内信号转导途径调节此过程，抗氧化剂维生素E和N-乙酰半胱胺酸可显著降低细胞ROS的生成量和显著抑制TGF-β1的分泌与基因表达。此研究揭示抗氧化剂在防治腹膜纤维化发生过程也许是一种可行的治疗策略。     

腹膜透析引流液离心法和大网膜消化法原代培养人腹膜间皮细胞

[目的]建立和改善两种人腹膜间皮原代细胞培养的方法.[方法]分别采用离心法从腹膜透析（PD）引流液中及胰蛋白酶-EDTA消化法从人的腹膜组织中分离培养人腹膜间皮细胞（HPMC）,并分别对两种原代培养的HPMC采用相差倒置显微镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定.[结果]①两种方法均在体外原代培养成活,在相差倒置显微镜下观察细胞均呈典型的铺路石样外观,免疫组化显示两种方法培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达阳性,提示为腹膜间皮细胞.②经大网膜消化法获得的HPMC可传至第四代,保持原有铺路石样外观,PD引流液离心法获得的HPMC传代后生长缓慢,长期接受PD后HPMC可呈现成纤维细胞样改变.[结论]成功应用离心法和消化法进行HPMC原代培养,有助于PD研究体外实验的开展.     

pcDU6质粒载体介导的TGFβ1shRNA及pcDNA3.1介导的TGF-β1反义RNA抑制人腹膜间皮细胞TGFβ1的表达及细胞外基质的分泌

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和TGF-β1反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达及细胞外基质分泌的影响.方法利用带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6)构建TGF-β1短发夹RNA的产生质粒,用pcDNA3.1(-)载体构建反义TGF-β1基因真核表达载体,采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF-β1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒人高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1mRNA的表达以及纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)和胶原Ⅰ(ColⅠ)的mRNA表达.采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平.结果HPMC在高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P＜0.01),TGF-β1反义RNA转染HPMC后,与对照组相比,转染24小时后,FN、ColⅠ、PAI-1 mR-NA分别下调17.0%、26.0%、9.6%(P＜0.05).pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA干扰组较Gs LPS组及pcDU6空载体组明显下调TGF-β1的表达(P＜0.01),pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组与pcDU6空载体组比较差异无显著性(P＞0.05),pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA干扰组较pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组明显下调TGF-β1的表达(P＜0.01).结论pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1shRNA能够明显抑制在高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)的刺激下的HPMC转化生长因子β1的基因表达,可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法.     

短发夹结构RNA对人腹膜间皮细胞转化生长因子-β1表达和超微结构的影响

目的 研究靶向转化生长因子-β1（TGF-β1）的短发夹RNA（shRNA）表达载体对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMC）表达TGF-β1的影响,并观察其对HPMC超微结构的影响. 方法 利用pcDU6质粒构建两个靶向TGF-β1的shRNA真核表达载体pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,使用脂质体介导转染腹膜透析液刺激下的HPMC,采用半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附（ELISA）检测shRNA表达载体对于TGF-β1基因和蛋白质表达水平的抑制效果,使用透射电镜观察HPMC超微结构的改变. 结果 HPMC暴露于4.25%腹膜透析液中48小时后,其上清中TGF-β1的浓度与对照组相比显著增高分别为（39.71±6.60）pg/10^5 cells和（16.32±2.71）pg/10^5 cells,P＜0.01）,1.5%腹膜透析液对于TGF-β1蛋白合成无明显影响;而预先转染了shRNA载体的两组与转染pcDU6载体（空载体）的组相比,其由4.25%腹膜透析液诱导的TGF-β1蛋白增高幅度明显减少,分别下降了39.2%和47.2%（P＜0.01）;两组转染不同的shRNA载体的HPMC之间相比TGF-β1浓度无显著差异,pcDU6载体（空载体）转染组与4.25%腹膜透析液刺激组TGF-β1浓度亦无显著差异.透射电镜显示HPMC暴露于4.25%腹膜透析液可导致细胞扁平、微绒毛减少和线粒体水肿等,而转染shRNA载体组细胞的改变相对较轻. 结论 pcDU6质粒载体介导的短发夹结构RNA（shRNA）能够明显抑制腹膜透析液刺激下的人腹膜间皮细胞TGF-β1的高表达,并减轻其超微结构的异常,提示shRNA表达载体可能有益于腹膜纤维化的防治.     

TGF—β1诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的影响

目的观察TGF-β1在诱导肾小管上皮细胞转分化过程中对细胞骨架的调节作用。方法选择正常大鼠肾小管上皮细胞株NRK52E,经TGF-β1（15μg／L）体外诱导3天,RT-PCR检测细胞廿平滑肌动蛋白（α-SMA）评价细胞的转分化状态,观察细胞形态,同时检测细胞骨架成分β-actin、α—tubulin mRNA的表达;免疫荧光染色观察上述细胞骨架蛋白在细胞内的排列。结果培养的NRK52E细胞经TGF-81体外诱导3天后,细胞中α—SMAmRNA的表达水平明显增多,高于相应的对照组细胞（P〈0．001）,说明NRK52E上皮细胞出现了表型转化,此时培养细胞的形态也发生了改变,由典型的鹅卵石样变为成纤维细胞样,并有多个突起;细胞骨架蛋白β-actinmRNA的表达也明显增多（P〈0．05）;β—actin蛋白的排列也发生了改变,其在胞膜下形成的厚的板样结构消失,转而在胞浆中形成粗大的束状应力纤维,沿细胞长轴纵行排列,此外,β-actin尚在某些细胞边缘形成了片层样伪足和丝状伪足。微管成分α-tubulinmRNA的表达和分布与对照组比较无明显不同。结论TGF-β1能够诱导体外培养的NRK52E细胞转分化,在此过程中细胞形态发生了改变,骨架蛋白β-actin的表达增多并发生了重建,同时骨架蛋白α—tubulin未见明显变化。     

丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞氧化应激及其损伤的影响

【目的】研究丹参酮ⅡA对腹膜透析液（PDF）诱导人腹膜间皮细胞（HPMCs）氧化应激及其损伤的影响。【方法】体外培养的HPMCs同步后分为五组：A组即对照组（DMEM培养基＋完全培养基）;B组即腹膜透析液组（含4．25％PDF的完全培养基）;C组即丹参酮组（含100μmmol／L丹参酮的完全培养基）;C1组即丹参酮1组（含50μmol／L丹参酮ⅡA的PDF）、C2组即丹参酮2组（含100μmol／I。丹参酮ⅡA的PDF）,干预72h后（其中B组、C1、C2组为加热的PDF）,流式细胞仪及荧光显微镜检测线粒体膜电位的变化;荧光显微镜检测胞内钙离子浓度的变化。采用活性氧捕获剂二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH—DA）孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧水平。并检测上清液中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、和丙二醛含量;不同浓度丹参酮ⅡA干预48h后,MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA干预下细胞增殖活力。【结果】B组上清液丙二醛含量、胞内钙离子、细胞内活性氧水平较对照组及C1、C2组显著增加（P〈0．01）,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及线粒体膜电位水平显著降低（P〈0．01）。不同浓度丹参酮ⅡA组HPMCs的增殖活性显著高于B组（P〈0．01）,丹参酮ⅡA不同浓度间无显著差异（P〉0．05）。【结论】丹参酮ⅡA可以通过降低PDF干预下丙二醛含量、减轻钙离子负荷、维持线粒体膜电位的水平、保护抗氧化还原酶的活性来拮抗商业性PDF对HPMCs的氧化应激及其损伤。     

腹膜透析液中钙对持续性不卧床腹膜透析患者腹膜间皮细胞的影响

[目的]探讨腹膜透析液(PDS)中不同浓度钙对体内腹膜间皮细胞(HPMCs)损伤,增殖及间质纤维化的影响.[方法]选择规律性腹膜透析治疗的终末期肾功能衰竭患者30例,既往使用PD4(钙浓度1.25mmol/L)透析,作为对照组.改用标准钙透析液(钙浓度1.75 mmol/L)透析4用,每周末作为一个实验组.期间每周末检测腹透引流液中纤维连接蛋白(FN)、CAl25,LDH,同时测定血磷、钙、甲状旁腺激素水平变化情况.[结果]换用标准钙透析液治疗后,与对照组相比,腹透引流液中LDH水平随作用时间延长呈上升趋势(P＜0.01),第4用CAl25、FN浓度值明显降低(P＜0.05),血钙浓度显著升高,磷、PTH浓度差异无显著性.[结论]生理钙PDS与标准钙PDS相比,可抑制HPMCs增殖、损伤HPMCs及促进FN合成,能保护腹膜功能并一定程度延缓腹膜纤维化进程.     

不同浓度钙对人腹膜间皮细胞影响的实验研究

[目的]观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）及细胞外基质的影响.[方法]采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶（LDH）和四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）评估细胞的活力和增殖能力;采用免疫细胞化学法来检测纤维连接蛋白（FN）的表达.[结果]不同浓度钙均可促进HPMCs增殖（P〈0.01）,而以1.25 mmol/L及1.0 mmol/L钙作用最明显,且呈时间依赖关系.不同浓度钙组与对照组相比均可明显升高LDH水平,其中以1.25 mmol/L钙的LDH水平最低（P〈0.01）,且呈时间依赖关系.2.0 mmol/L和1.75 mmol/L钙可明显上调FN的表达（P〈0.01）.[结论]高钙可明显损伤HPMCs及促进FN合成,其在腹膜纤维化的发生中可能起了一定作用;而浓度为1.25 mmol/L钙可保护腹膜,并在一定程度上有预防腹膜纤维化的作用.     

视紫红质蛋白激酶抑制剂4-氨基吡啶类化合物对大鼠腹膜间皮细胞转分化的作用

背景:有实验证明,Rho/ROCK信号通路在转分化过程中发挥了重要作用.目的:探讨视紫红质蛋白激酶抑制剂4-氮基吡啶类化合物对转化生长因子β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响.设计、时间及地点:动物实验观察,2007-03/2008-03在中山大学附属第一医院肾脏病实验室完成.材料:健康清洁级雄性SD大鼠10只,由中山大学动物实验中心提供.4-氨基吡啶类化合物为德国Calbiochem公司产品.转化生长因子β1为美国R&D公司产品.方法:体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,第2代细胞静止24 h后,随机分为4组:正常对照组:用无血清的DMEM/F12培养基培养:转化生长因子β1组:用无血清的DMEM/F12培养基培养,加入转化生长因子β1 10 μg/L;4-氨基吡啶类化合物组:用无血清的DMEM/F12培养基培养,加入4-氨基吡啶类化合物10 μmol/L.转化生长因子β1+4-氨基吡啶类化合物组:其中4-氨基吡啶类化合物(10 μmol/L)提前孵育2 h进行干预处理后再加入转化生长因子β1.48h后收集细胞.主要观察指标:用RT-PCR方法检测E-钙黏素、α-SMA mRNA表达,Western Blot检测E-钙黏素、α-SMA和波形蛋白表达.结果:转化生长因子β1组与正常对照组比较E-钙黏素明显下调,波形蛋白和α-SMA的表达明显上调;4-氨基吡啶类化合物能显著下调α-SMA和波形蛋白的表达(P＜0.05),但不能上调E-钙黏素的表达.结论:转化生长因子p1能够诱导腹膜间皮细胞的转分化;4-氨基吡啶类化合物能够改善转化生长因子B1诱导的大鼠腹膜问皮细胞转分化.     

转化生长因子-β1和表皮生长因子在诱导人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的　探讨表皮生长因子 (EGF)和转化生长因子 β1(TGF β1)及两者联合应用对人类肾小管上皮细胞 (HKC)转分化的影响。方法　用相差显微镜、透射电镜和扫描电镜观察HKC株的形态和结构。应用间接免疫荧光法检测HKC角蛋白和波形蛋白的表达 ;应用免疫组织化学双染色技术测定HKCE 钙粘连蛋白和α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达。应用流式细胞技术测定HKC表达α SMA阳性的百分率。结果　 10、2 0、4 0ng/ml浓度EGF及 3ng/ml浓度TGF β1单独作用时 ,无明显促进HKC转分化的作用。TGF β1单独应用 (10、2 0ng/ml)有轻度的诱导HKC转分化的作用。当TGF β1(3ng/ml)与EGF(10ng/ml)、TGF β1(10ng/ml)与EGF(2 0ng/ml)、TGF β1(2 0ng/ml)与EGF(40ng/ml)共同作用时 ,对诱导HKC转分化有显著的协同作用 [(35 17± 2 86 ) %、(5 1 2± 1 10 ) %、(5 5 4 3± 1 15 ) %vs(3 5 3± 0 0 9) % ,P <0 0 5 ]。结论　一定浓度的TGF β1和EGF在诱导HKC转分化中有显著的协同作用 ,为研究HKC转分化提供了模型。     

转化生长因子β1在大鼠纤维化腹膜组织中的表达及作用

目的:检测转化生长因子β1在腹膜透析大鼠腹膜内表达,并探讨其在腹膜纤维化中的意义。方法:实验于2005-06/2006-03在中南大学湘雅二医院肾内科实验室完成。①实验材料:雄性SD大鼠,体质量180～240g,由中南大学湘雅二医院动物实验中心提供。②实验方法:将28只大鼠按随机数字表随机分为4组,每组7只。正常对照组不予任何干预;生理盐水组腹腔注射20mL生理盐水;低糖透析液组腹腔注射20mL1.5%葡萄糖透析液;高糖透析液组腹腔注射20mL4.25%葡萄糖透析液,均为1次/d。4周后,向大鼠腹腔注射4.25%葡萄糖腹膜透析液20mL,4h后于大鼠右下腹缓慢插入带有多个侧孔的10号静脉留置针,缓慢低位引流腹透液,量取引流液。③实验评估:取大鼠壁层腹膜组织,以苏木素-伊红染色,镜下测量腹膜厚度,采用免疫组织化学方法检测大鼠腹膜中转化生长因子β1及纤连蛋白。结果:28只大鼠均进入结果分析。①高糖透析液组、低糖透析液组超滤量均明显低于正常对照组与生理盐水组,并且高糖透析液组超滤量明显少于低糖透析液组(P均<0.05)。②高糖透析液组腹膜明显增厚,表面粗糙,间皮细胞肿胀,脱落,间皮下有大量血管生成以及胶原纤维沉积,还可见单核细胞等炎症细胞浸润,与其他组比较,腹膜厚度明显增加(P<0.05)。③高糖透析液组转化生长因子β1、纤连蛋白表达量均明显高于其他组;低糖透析液组转化生长因子β1、纤连蛋白表达量均明显高于正常对照组与生理盐水组(P<0.05)。④大鼠腹膜组织转化生长因子β1蛋白与纤连蛋白表达量、腹膜厚度之间呈明显的正相关(r=0.86,0.83,P<0.05)。结论:葡萄糖透析液可诱导腹膜组织转化生长因子β1明显上调,腹膜转化生长因子β1高表达与腹膜透析腹膜纤维化密切相关。     

血红素加氧酶-1对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β1和纤维连接蛋白表达的影响

目的研究血红素加氧酶-1（HO-1）对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉（CoPP）＋高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP＋高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP＋高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP＋高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP＋高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP＋高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。     

2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中相关蛋白及转化生长因子β1的变化

目的：观察2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白、角蛋白18及转化生长因子β1表达变化，分析糖尿病肾病时肾小管病变、肾间质纤维化可能的发生、发展机制。 方法：实验于2002—10／2003-05在河北医科大学第二医院完成。纳入二级8周龄雌性SD大鼠40只。随机分为正常对照组和糖尿病组，各20只。通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素的方法，制作2型糖尿病大鼠模型。分别动态观察12，24周时对照组，糖尿病组大鼠糖尿病肾病时，肾脏的病理改变及功能变化，并同时应用免疫组化技术及流式细胞学技术检测肾小管上皮细胞转分化过程中的标志蛋白：α-平滑肌肌动蛋白、角蛋白18及转化生长因子β1在肾小管上皮细胞中的表达。 结果：糖尿病组共成模16只，血糖没有升高的大鼠未纳入结果分析，两组共纳入结果分析36只。①糖尿病组大鼠12周时光镜下可见部分肾小管轻度萎缩或管腔扩张，上皮细胞水肿，胞浆内可见小脂肪空泡，肾小管损伤指数增高；24周时上述变化程度加深，管腔内可见破碎脱落的细胞。24周电镜下可见线粒体部分水肿，嵴大部分消失，微绒毛显著减少，部分肾小管基底膜明显增厚，小管间可见大量胶原纤维。②免疫组化显示：糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞胞浆中α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1表达增强，角蛋白18表达则下降，它们均随病程进展而加重。③流式测α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1表达与免疫组化结果一致，并且与三酰甘油、胆固醇、24h尿白蛋白排泄率明显正相关，与肌酐清除率负相关。 结论：在2型糖尿病肾病的发展过程中确实存在小管上皮-肌成纤维细胞转分化，而且转化生长因子β1是其重要的促进因子。小管上皮-肌成纤维细胞转分化与肾功能下降的程度相平行。     

慢性乙型肝炎患者血清TGF—β1水平与肝纤维化的关系

目的：观察慢性乙型肝炎（CHB）患者血清转化生长因子β-（TGF—β1）在肝纤维化不同阶段的表达情况，探讨TGF—β1与肝纤维化程度的关系，评价其对肝维化诊断的价值。方法：采用酶联免疫吸附法（ELASA）检测40例慢性乙型肝炎患者血清TGF—β1水平．放射免疫法（RIA）检测血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）、Ⅳ型胶原（CⅣ）水平，40例患者全部进行肝组织活检，分析TGF-β1与肝组织纤维化程度分期和炎症活动度分级的关系以及与HA、LN、PⅢNP、CⅣ四项指标的相关性。结果；（1）慢性乙型肝炎患者TGF-β1水平明照高于正常对照组（P〈0．01）．且随肝纤维化程度的加重而升高（P〈0．01），TGF-β1变化趋势与HA、LN、PⅢNP、CⅣ均呈正相关（P〈0．01）。（2）按炎症活动度（G）分组，TGF-β1在G1～G4组水平明显高于G0组（P〈0．01），但组间两两比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：血清TGF—β1表达水平与乙肝患者肝纤维化程度密切相关，且不受肝组织炎症程度的影响，在早期肝纤维化的敏感性高于HA、LN、PⅢNP、CⅣ，可作为早期肝纤维化的诊断指标。     

转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化及大黄素干预中的作用

目的:大黄素对白细胞介素1β诱导NRK52E细胞转分化有显著抑制作用。实验拟进一步观察转化生长因子β1在白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化及大黄素抑制作用中的意义。方法:实验于2006-10/2007-05在泸州医学院附属医院免疫实验室完成。⑴实验材料及分组:以培养的大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)为观察对象,按如下分组分别添加不同处理因素:①对照组:仅加入体积分数为0.05小牛血清的高糖DMEM培养基。②白细胞介素1β诱导组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L的高糖DMEM培养基。③SB431542阻断组:加含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及SB431542终浓度为10μmol/L的高糖DMEM培养基。④白细胞介素1β 大黄素组:同时加分别含白细胞介素1β终浓度为10μg/L及大黄素终浓度为25mg/L的高糖DMEM培养基。⑵实验评估:培养48h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色法检测肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1的表达。结果:①白细胞介素1β可诱导部分细胞由卵圆形转变为梭形,且肌酸激酶表达减弱(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白及转化生长因子β1表达显著增强(P<0.01)。②SB431542特异性抑制转化生长因子β1作用后,白细胞介素1β诱导的细胞形态改变受抑,同时肌酸激酶表达增强(P<0.01),α-平滑肌肌动蛋白表达减弱(P<0.01),但转化生长因子β1的表达却无明显变化。③大黄素对白细胞介素1β诱导的细胞形态改变及肌酸激酶、α-平滑肌肌动蛋白的表达有明显抑制作用,其抑制作用与SB431542的作用相比无显著差异;同时,大黄素对白细胞介素1β诱导的转化生长因子β1的表达也有明显抑制作用(P<0.01)。结论:转化生长因子β1可能介导了白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化,并参与了大黄素抑制白细胞介素1β诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。