非酒精性脂肪肝与脂肪性肝炎动物模型研究进展

非酒精性脂肪肝是无酒精滥用的包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬化的肝病综合征，目前已成为广受关注的肝病医学难题。随着抗脂肪肝药物的深入研究，动物模型制作得到很好发展。近年来，在大鼠、沙鼠、小鼠、兔和小猪等动物种属成功地建立了食物、胃肠外营养与蛋氨酸胆碱缺乏等诱导的单纯性脂肪肝和脂肪性肝炎动物模型，这些模型为研究脂肪肝和脂肪性肝炎的发病机理与治疗提供了机会。每种动物模型各有优缺点，合理应用动物模型能更好地开展脂肪肝病的实验和临床研究。本文综述了非酒精性脂肪肝及脂肪性肝炎动物模型制作方法的若干研究进展。     

非酒精性脂肪性肝炎研究进展

19世纪末，病理学家发现脂肪肝和肝硬化之间存在某种联系。当时，酒精是导致脂肪肝的最主要病因。后来发现除了酒精因素外，仍有一部分病人会发生脂肪性肝炎甚至纤维化，且在女性、肥胖和糖尿病病人中好发。当时，曾用“脂肪性肝炎”、“脂肪坏死”、“糖尿病肝炎”来描述。不久，又发现用空回肠旁路手术治疗肥胖症后可出现与酒精性肝病相类似的病理改变。即：肝细胞脂肪变性、小叶和汇管区炎症，有时也可有Mallory小体形成和肝纤维化等，这个发现为非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)可能是代谢异常提供了可靠依据。     

非酒精性脂肪性肝炎的中医药研究进展

查阅、分析近10年的相关研究文献,对非酒精性肝炎的中医药治疗方面的发展现状等进行归纳,以探索客观、有效的治疗方法。     

中医辨证论治非酒精性脂肪性肝炎的数据挖掘

目的 总结非酒精性脂肪性肝炎常见中医证型的用药规律及配伍特点.方法 计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库(VIP)、生物医学文摘数据库(CBM)和万方数据库中关于中医药治疗非酒精性脂肪性肝炎的相关文献,将纳入文献中非酒精性脂肪性肝炎中医证型规范为痰瘀互结证、湿浊内停证、肝郁脾虚证、湿热蕴结证、脾肾两虚证...     

内毒素诱发非酒精性脂肪性肝炎的机制

目的 探讨肠源性内毒素血症(IETM)对高糖高脂膳食所致的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用机制.方法 将24只Wistar雄性大鼠随机分为4组:4周正常对照组,4周高糖高脂组,9周正常对照组,9周高糖高脂组.测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、内毒素(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、脂联素(APN)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(IRI).肝脏切片HE染色,观察肝脏组织学变化.结果 与正常对照组相比,4周和9周高糖高脂组的大鼠血清ALT、LPS、TNF-α、FPG、FINS和IRI的水平都升高,而APN和IL-10的水平降低,4周的结果差异能看出变化的趋势但无统计学意义,9周的结果差异有统计学意义(P<0.05).结论 高糖高脂饮食可诱导大鼠发生严重的NASH以及早期糖尿病,其机制可能是与LPS引发的胰岛素抵抗以及TNF-α、IL-10和APN等因子水平失衡和相互作用有关.     

电针治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床研究

目的 观察电针治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床疗效。方法 电针组（60例）取穴足三里、丰隆。电针治疗，留针10min，每天治疗1次，连续6d后休息1d，共治疗8周。西药对照组（48例）每天给予西药阿托伐他汀片，10mg，日1次，口服；肝泰乐片，0．2g，日3次，口服，连续8周。两组均8周为1个疗程。结果 电针组临床症状改善明显，两组临床治愈率比较差异有非常显著性意义（P〈0．01），两组总有效率比较差异有显著性意义（P〈0．05）。电针在使ALT、GGT恢复正常，降低TC、TG及肝纤维化指标血清Ⅲ型前胶原蛋白（PCⅢ）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）和Ⅳ型胶原（CIV）方面与治疗前相比差异非常显著（P〈0．05或0．01），与西药对照组比较差异非常显著（P〈0．01）。结论 电针具有明显的改善非酒精性脂肪性肝炎患者的临床症状、改善肝功能、降低血脂及抗肝纤维化的作用．对非酒精性脂肪性肝炎防治有较好的疗效。     

炎症小体与非酒精性脂肪性肝炎

NLR等作为炎症小体的核心,通过识别PAMPs和DAMPs,经衔接蛋白ASC活化Casp1,从而促进IL-18和IL-1β等细胞因子的分泌,在非酒精性脂肪性肝炎的发生与发展中起到了重要作用。本文对炎症小体在非酒精性脂肪性肝炎发生机制中的最新研究进行综述。     

大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型的制备

目的 建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的动物模型。方法 雄性SD大鼠20只,随机分为模型组（n=10）和正常对照组（n=10）。模型组喂养高脂饮食,即在普通饲料基础上加10％猪油、2％胆固醇、5％蛋黄粉。正常对照组喂养普通饲料。喂养12周后,观察一般情况,检测大鼠血清生化指标及炎症介质,并行肝组织病理检查。结果模型组体重、肝体比、血清甘油三脂（TG）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）均高于正常组;病理学均出现弥漫性肝细胞脂肪变性,且90％存在小叶内炎症,80％出现汇管区炎症;电镜示肝细胞索排列紊乱,胞浆脂滴大量出现、聚积、线粒体嵴肿胀,肝星形细胞和枯否细胞增生,细胞核变形,部分呈现核固缩表现。结论 通过12周的高脂肪、高胆固醇饮食成功地制备出大鼠NASH模型。     

百赛诺片治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床研究

目的：评价百赛诺片治疗非酒精性脂肪性肝炎的疗效。方法：191例非酒精性脂肪性肝炎患者分为两组，分别用百赛诺片和水飞蓟素进行治疗24周，观察治疗前后肝功能、血脂、B超声像图的改变。结果：百赛诺可以显著改善酶学指标，可以改善肝损伤引起的炎症和坏死等病理变化，维护肝细胞的正常形态。结论：百赛诺片对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）患者具有明显的治疗作用，强于对照组。     

高血糖对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝星状细胞活化作用的研究

目的：观察高血糖在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、肝纤维化形成中的作用以及此过程中肝星状细胞的活化机制。方法将60只SD大鼠分成正常对照组、高血糖模型组、复合模型组、氨基胍组和格列美脲组5组,分别检测各组大鼠血糖值,HE染色观察肝组织的病理改变,Masson染色观察肝脏纤维组织变化,免疫组化检测α-平滑肌动蛋白（α- SMA）的表达评分、ELISA法检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和晚期糖基化终产物（AGEs）含量的变化。结果氨基胍组、格列美脲组大鼠的血糖值较高血糖模型组和复合模型组均降低（均P＜0.05）;光镜下观察高血糖模型组和复合模型组出现肝细胞变性和纤维化改变。与复合模型组比较,格列美脲组肝细胞形态较正常,可见轻度水肿、脂肪变性及炎细胞浸润,纤维化明显降低,α- SMA表达明显降低,TIMP-1、TGF-β1、AGEs含量也显著降低,均有统计学差异（均P＜0.01）。与复合模型组比较,氨基胍组肝组织形态明显改善,脂肪变性、水样变性、纤维化程度有所减轻,TIMP-1、AGEs含量降低（均P＜0.01）,α- SMA表达增高（P＜0.05）,同时TGF-β1表达减低,但无统计学差异（P＞0.05）。结论高血糖促进了NASH、肝纤维化的形成,通过降低血糖和减少AGEs形成后,肝纤维化程度也有所减轻;机制之一是激活肝星状细胞。格列美脲较氨基胍改善NASH、肝纤维化更明显。     

芦荟大黄素对非酒精性脂肪性肝炎细胞模型脂质过氧化损伤的影响

目的：探讨芦荟大黄素（aloe-elodin,AE）对非酒精性脂肪肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）细胞模型脂质过氧化损伤的影响。方法：将正常人肝细胞株 L-02分为对照组和实验组,对照组用普通培养基,实验组按培养基含30％脂肪乳剂终浓度不同再分为0．25,0．5,0．75,1 mL／L 组,培养72 h 后予以油红 O 染色,观察细胞形态和细胞内脂肪滴数量,测定培养液谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、三酰甘油含量。选择最合适浓度（0．5 mL／L 组）建立 NASH 模型,再设立对照组、模型组、实验组,实验组加入10－4,10－5,10－6 mmol／L 的 AE,分别于培养24,48,72 h 监测细胞内脂滴数量、三酰甘油含量和细胞培养液中 ALT、AST、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛、内毒素、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）等指标。结果：用含30％脂肪乳剂0．5 mL／L 的培养液培养 L-02细胞株72 h,成功建立 NASH 肝细胞模型。不同浓度 AE 干预 NASH 细胞72 h 后,培养液中 ALT、AST、丙二醛、内毒素、TNF-α等含量均较模型组明显下降,SOD 含量较模型组明显升高（P ＜0．05）。结论：AE 可改善肝细胞脂质过氧化程度,减轻炎症反应及细胞损伤。     

卡氏肺孢子虫肺炎小鼠改良模型的建立

目的获得低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎（Pneumocystis carinii pneumonia，PCP）小鼠模型并缩短诱导时间。方法将雌性C57小鼠随机分为地塞米松实验组、氢化可的松实验组和对照组。地塞米松实验组采用每隔2d皮下注射地塞米松1次的方法诱导PCP；氢化可的松实验组每周皮下注射氢化可的松2次；对照组注射等体积0．9％氯化钠注射液。结果地塞米松实验组至用药第16次（48d）后未见一只小鼠死亡，卡氏肺孢子虫（Pneumocystis carinii，PC）包囊总检出率为86．67％（26／30），与氢化可的松实验组PC包囊总检出率63．33％（19／30）相比，差异具有统计学意义（P〈0．05）。地塞米松实验组给药14次（42d）后PC包囊检出率与氢化可的松实验组给药56d后比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论每隔2d皮下注射地塞米松1次可建立低死亡率小鼠PCP模型且缩短诱导时间。     

保健食品增加骨密度动物模型的建立及应用研究

目的建立增加骨密度动物模型，并考核该模型应用于保健食品的筛选与评价的效果。方法实验设低、中、高三个剂量组，另设一个低钙对照组和一个碳酸钙对照组。观察包括生长发育、骨钙含量、骨密度及钙表观吸收率等相关指标。结果高剂量组钙的表观吸收率与相同水平的碳酸钙对照组比较皆明显增加，差异有非常显著性意义（P〈0．01），表明受试样品与碳酸钙标准一样皆可作为补钙剂；各剂量组动物右侧股骨重量与低钙对照组比较增加，差异均有非常显著性意义（P〈0．01），而高剂量组动物股骨重量与相同水平碳酸钙对照组比较未见显著降低；各剂量组动物左侧股骨骨密度与低钙对照组比较增加，差异均有非常显著性意义（P〈0．01），但高剂量组与相应碳酸钙对照组比较降低，且差异有显著性意义（P〈0．05），故不能判定骨密度结果阳性；各剂量组动物右侧股骨钙含量与低钙对照组比较增加，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；高剂量组动物右侧股骨钙含量与相同水平碳酸钙对照组比较未见显著降低，表明该受试样品骨钙含量结果阳性。根据《保健食品检验与评价技术规范〉（2003年版）中增加骨密度功能检验方法判定标准，试验时间共30d，其动物模型评价受试样增加骨密度功能阴性，但可作为补钙剂使用。结论增加骨密度动物模型建立成功，可应用于保健食品增加骨密度功能的评价。     

柯萨奇病毒A16型感染性模型的建立及其相关免疫学指标和应用的评价

目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50%致死剂量(LD50);并测定感染3 d后其血液和主要组织器官中CVA16病毒滴度;最后用CVA16灭活疫苗在1日龄和11日龄免疫2针沙鼠后,在14日龄时用LD50剂量病毒攻毒,观察并记录沙鼠体重、症状及死亡率,2周后眼球采血,应用微量中和试验和ELISA分别检测中和抗体效价和总抗体水平。结果长爪沙鼠感染CVA16后出现活动减少、后肢无力、麻痹瘫痪、死亡等临床症状,不同日龄沙鼠对CVA16感染的易感能力和感染后发病程度不同,7日龄和14日龄沙鼠易感,28日龄沙鼠不易感染,最敏感和最合适接种日龄为14日龄,其LD50为1×104.5 CCID50,感染3 d后其血液和主要组织器官中均可检测到高滴度的CVA16病毒,免疫两针灭活疫苗的14日龄沙鼠用LD50剂量攻毒,存活率87.5%,疫苗免疫诱导沙鼠产生的CVA16中和抗体几何平均值(GMT)为28.14,抗体阳性率为87.5%。结论长爪沙鼠对CVA16敏感并且病毒能在其体内进行有效的复制和繁殖,可作为CVA16致病机制研究、疫苗研发及药物评价的可靠小动物模型。     

肝愈胶囊治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床观察

目的评价肝愈胶囊对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的疗效。方法79例符合NASH诊断标准的患者随机分为两组,即对照组和治疗组,对照组用益肝灵、脂必妥治疗,治疗组则口服肝愈胶囊,1日3次,每次6粒,1个月为1疗程,连用3个疗程,治疗前后分别观察症状和体征的变化,检查血糖、血脂和肝功能,计算肝脏的B超检查积分。结果经治疗3个疗程后,两组病人血糖、血脂、肝功能和B超积分均有不同程度的改善,但治疗组改善明显优于对照组,两组的总有效率分别为55.00%和76.92%,P<0.05。结论肝愈胶囊治疗NASH不但能降低血糖、血脂,减轻脂肪肝,而且明显改善肝功能。     

幽门螺杆菌国内流行株动物模型的建立

目的建立国内幽门螺杆菌（Hp）流行株的动物模型,研究Hp流行株感染小鼠的胃黏膜改变,为进一步治疗提供更好的动物模型。方法60只SPF级C57BL/6小鼠,分为正常组和模型组,每组30只。模型组经口灌服VacAs1、CagA、iceA阳性的临床分离株,距末次灌胃后5、10、15、20、25、30周分6批处死,取标本行快速尿素酶试验,Giemsa染色法观察Hp在胃黏膜上的定植情况,HE染色观察小鼠胃黏膜的病理变化。结果正常组小鼠的胃窦、胃体及十二指肠黏膜的尿素酶试验,Giemsa染色结果均阴性,模型组在距末次灌胃后5、10、15、20、25、30周Hp定植率分别为60%、80%、100%、100%、100%、100%。至30周模型组慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化、异型增生、胃癌发生率分别为100%、60%、0%、0%、0%。结论成功建立了HpVacAs1、CagA、iceA阳性的国内流行株感染C57BL/6小鼠的模型,并明确了其感染小鼠后各阶段的胃黏膜病理改变。     

愤怒心理应激动物模型的制作与行为学评估

目的 制作愤怒心理应激的动物模型,并建立行为评估体系。方法 采用MeganE.方法造模,记录并分析大鼠行为变化,评价模型质量。结果 ①模型组大鼠行为得分平均水平为 65. 88;②模型组大鼠各行为指标与总分呈中 高度正相关(r=0. 363~0. 915);③旷场实验各行为指标与正常对照组均有显著性差异(P<0. 05)。结论 该模型是理想的愤怒心理应激模型,模型评估方法可行性较好。     

人子宫内膜异位症NOD-SCID鼠模型的建立

目的　探讨采用人在位子宫内膜及异位子宫内膜建立子宫内膜异位症动物模型的可行性。方法　获取人分泌晚期在位子宫内膜及人异位子宫内膜种植于NOD -SCID鼠腹部皮下 ,随机分成 4组 ,分别在 2、4、6、8周取出其皮下移植物行病理检查。结果　 3 2只小鼠均存活 ,有 15只小鼠皮下在位内膜移植物经HE染色可见明显的子宫内膜腺体和间质 ,成功率为 93 .75 %。而异位内膜移植物仅见到纤维结缔组织。结论　用人在位内膜建立NOD -SCID小鼠子宫内膜异位症模型成功率高 ,模型性状显著且稳定。     

金黄地鼠胰腺癌动物模型的建立

目的:建立N-Nitrosobis(2-oxopropyl)amine(BOP)诱导性金黄地鼠胰腺癌动物模型。方法:将120只雌性叙利亚金黄地鼠随机分为实验组(80只)和对照组(40只)。按10 mg/kg体重分别给实验组金黄地鼠皮下注射BOP,每周1次,持续7周;对照组皮下注射生理盐水。第1次注射后第11周开始,每两周1次,处死实验组金黄地鼠10只,对照组5只。行组织病理学检查。结果:实验组部分动物出现黄疸及营养不良、远处转移,平均体重轻于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。剖腹肉眼观察,在18只实验组动物中发现23个胰腺肿瘤。其中,1只有3个胰腺肿瘤,3只有2个肿瘤,其余均为单发。其中,7个肿瘤直径<5 mm,16个肿瘤直径≥5 mm,最小肿瘤直径2.0 mm,最大肿瘤直径17 mm。肿瘤直径中位数6.8 mm,体积中位数178.71 mm3,质量中位数0.32 g。组织学检查共在26只实验鼠中发现31个胰腺癌,其中原位癌9个,浸润癌22个,均为胰腺导管腺癌。所有荷瘤鼠均伴有不同程度不典型增生,19周后,所有的实验组动物均发现不典型增生,共在65只实验组动物中发现胰腺不典型增生。实验组总成瘤率81.3%(65/80)。结论:经皮下注射BOP,成功建立诱导性金黄地鼠胰腺癌动物模型,操作方法简单,易复制,组织病理学与人胰腺癌相似,是胰腺癌体内研究理想的动物模型。