溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原影响的分析

目的：探讨溶血标本对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原结果的影响。方法：对400份不同的血清标本采用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的测定,其中阴性标本217份,强阳性标本95份,弱阳性标本88份：用人为方法造成溶血,对溶血标本重新测定,对2次检测结果进行比较。结果：217例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性标本和95例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）强阳性标本,非溶血标本和溶血标本血清检测结果（阴性或强阳性）全部一致,非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的OD值无统计学意义;88例乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱阳性标本,溶血标本血清检测出现假阴性率为7．95％（7,88）,非溶血标本和溶血标本血清的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的OD值具有统计学意义。结论：溶血对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性及乙型肝炎表面抗原（HBsAg）强阳性的标本影响不大,而对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）弱阳性标本的检验结果具有一定影响,甚至可能造成假阴性。     

2种方法检测乙型肝炎表面抗原的比较

目的:比较金标法(GICA)与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的结果。方法:对5 632份血清标本同时采用GICA和ELISA检测HBsAg,以ELISA为标准,对GICA的灵敏度、特异性进行评价。结果:5 632份血清中以ELISA为标准,HBsAg阳性507例,阳性率为9.00%;GICA有34份假阴性,31份假阳性,灵敏度为93.84%,特异性为99.34%。34例假阴性中HBsAg均为弱阳性OD/CO值在1.50～4.76。2种方法测定的HBsAg结果差异无统计学意义(P0.05),且具有高度一致性(Kappa=0.929 4,P0.01)。结论:GICA适用于单份检测,无需任何仪器,且快速简便,但灵敏度、特异性稍差,特别是针对HBsAg弱阳性有漏诊可能;ELISA虽然步骤多,时间长,但灵敏度高,特异性强,适合批量检测。实验室应根据实际需要结合工作情况选用。     

荧光定量PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物2005例结果分析

目的　比较FQ PCR和ELISA测定乙肝病毒标志物的相关性。方法　FQ PCR测定HBVDNA ,ELISA测定HBV抗原、抗体。结果　在 2 0 0 5例血清样本中 ,FQ PCR阳性 2 6 4例 ,阳性率 13.1%。其中 12 6例HBeAg阳性者FQ PCR全部阳性 ,阳性率 10 0 %,HBVDNA平均拷贝数 3.1× 10 7;181例HBeAg阴性而HBsAg、HBcAb均阳性。样本FQ PCR132例阳性 ,阳性率 73%,HBVDNA平均拷贝数 2 .6× 10 4 ;8例单项抗HBc、5 90例单项抗HBs、776例乙肝五项指标全部阴性的样本 ,FQ PCR例阳性率分别为 12 .5 %、0 .34 %和 0 .38%。结论　两种方法均具有很好的相关性 ,都是诊断乙肝病毒感染的重要方法。FQ PCR定量测定HBVDNA ,有助于乙型肝炎的早期诊断、疗效观察和预后判断。     

自身抗体检测方法的性能评价

目的 对自身抗体检测方法的精密度、准确度、临床吻合度进行评价,验证检测方法是否满足临床应用的性能要求.方法 对间接免疫荧光法和免疫斑点法检测自身抗体的精密度、准确度和临床吻合度进行评价.批内精密度验证:将自制的弱阳性标本和患者阴性标本在同一批实验条件下分别作5次重复检测,统计阴性、阳性标本重复检测的一致率;批间精密度验证:用试剂盒内自带的阴性、阳性标本,实验室自制的弱阳性标本按常规检测方法连续检测60d,统计60d阴性、阳性检测结果的一致率.准确度验证:将120个室间质评检测结果与本实验室检测结果作阳性符合率和阴性符合率统计分析.结果 批内和批间检测的阳性一致率和阴性一致率为100%.与120例室间质评检测结果的阴性、阳性符合率为100%.结论 本实验室使用的间接免疫荧光法和免疫斑点法检测自身抗体,其精密度、准确度可满足实验性能和临床应用要求.     

溶血、脂浊标本对ELISA法检测HBsAg结果的影响

目的探讨溶血、脂浊标本对ELISA法检测乙型肝炎表面抗原弱阳性结果的影响。方法对260份不同的血清标本进行乙型肝炎表面抗原测定,其中溶血标本102份,脂浊标本58份,正常标本100份。溶血、脂浊标本需重新采集复检,并对初复检检测结果进行比较。结果260份不同的血清标本测定结果均为弱阳性,吸光度A值在0．105～0．255,102份溶血标本通过重新采集样本,复检HBsAg,共有49份仍为弱阳性,53份为阴性,溶血标本初复检的HBsAg附陆检出率之间比较差异有显著性（P〈0．05）,58份脂浊标本中重新采集复检后48份仍为弱阳性,10份为阴性,初复检比较差异有显著性（P〈0．05）。结论溶血、脂浊血清标本对ELISA法检测乙型肝炎表面抗原结果有明显的干扰影响,尤其是检测结果弱阳性的标木,可引起吸光度A值升高,导致假阳性。     

全国血站丙型肝炎病毒抗体检验室间质量评价

目的：通过丙肝病毒抗体检验室间质量评价工作，掌握 全国血站丙肝病毒抗体血液筛查状况，使献血员血液筛查逐步规范化，提高血站实验室检验的水平和质量。方法：依据国际标准化组织颁布的ISO指南“实验室能力验证试验的建立和实施”，参考美国AABB/CAP血液检验室间质量评价方案，建立我国丙肝抗体检验室间质量评价方案。通过定期向全国参评实验室寄发质控样品，然后对其回报的数据进行统计分析，作出实验室检验水平评价、试剂临床使用评价。结果；参加室间质量评价的单位为：2000年有235家血站参数，2001年有270家血站参加，2002年有310家血站参数。2000-2002年共计发放9批45支质控样品，其中32支阳性样本，13支阴性样本。2000-2002年阳性样本检出率的平均值为98.8%,阴性样本检出率的平均值为99.6%.2000-2002年获满分的实验室所占百分比为：2000年94.9%,2001年79.8%，2002年97.3%，对9批质控样品检测使用国产试剂（主要厂家）的符合率最低为：2000年97.1%，2001年90.5%,2000年97.1%；使用进口试剂（主要厂家）的符合率最低为；2000年100%，2001年86.0%,2002年95.0%。对强阳性或弱阳性样本检测 ，国产试剂（主要厂家）的平均吸光度值A/临界值co高于进口试剂；但对阳性及阴性样本检测，国产试剂（主要厂家）的CV值要大大低于进口试剂。结论：通过室间质评，血站实验室检验水平有明显提高，试剂使用逐步规范化。在检验试剂方面，几家主要国产厂家的试剂灵敏度要高于同类进口试剂，但国产试剂在特异性方面，试剂批内及批间精密度方面较进口试剂仍有差距。     

不同状态乙型肝炎病毒感染患者血清中HBV DNA定量聚合酶链反应测定

目的 :采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)测定不同状态乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒 (HBV)的载量 ,为乙型肝炎的临床诊断、病程判断和治疗提供参考。方法 :采用实时定量PCR方法 ,检测不同病程状态的乙肝患者血清样本 1 90份 ,其中HBeAg阳性的慢性乙型肝炎 (CHB)患者 2 5例 4 7份样品 ,HBeAg阴性的 4例CHB患者 4份样品 ,接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转归的患者 5例 4 0份样品 ,非活动性HBV携带者 37例 5 7份样品。由CHB康复患者 2 1例 4 2份样品。结果 :HBeAg阳性的CHB血清中HBVDNA水平为 8.3× 1 0 8拷贝 /ml,明显高于HBeAg阴性的CHB患者 (7.0× 1 0 6拷贝 /ml)和HBeAg血清转归患者HBVDNA水平 (6 .2× 1 0 3 拷贝 /ml)以及非活动性HBsAg携带者HBVDNA水平 (5 .6× 1 0 3 拷贝 /ml)。乙型肝炎康复者中未检出HBVDNA。结论 :定量PCR方法可以作为确认HBV感染不同状态的一种有效手段     

全国血站乙肝表面抗原测定室间质量评价结果分析

目的 提高血站实验室乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的检测质量。方法 制备质控血清每批5支，全年4次，通过邮寄发放到各参评实验室，对其回报的结果进行统计、分析。结果 参加1999年HBsAg测定室间质评的血站共有222个，含量最低的两份样本浓度为0．5ng/ml，其阳性检出率为43．4和55．2％；酶联免疫试剂盒的临床使用评价结果显示，试剂盒的质量仍存在一定差异。开展与不开展室内质控的实验室之间的成绩差异极显著（P＜0．01）；使用不同的试剂成绩差异极显著（P＜0．01）。结论 试剂盒的质量和是否开展室内质控这两个因素直接影响室间质量评价的成绩。     

不良结局家族聚集性乙肝感染者HBV基因分型

目的 探讨不良结局家族聚集性乙肝感染者HBV基因分型情况。方法 A组选择15个家系中54份HBV感染者血清,其中HBV携带者（ASC）30例,慢性乙型肝炎（CHB）7例,肝硬化（LC）13例,肝细胞癌（HCC）4例。B组选择非家族聚集性乙肝感染者60份血清,其中HBV携带者（ASC）36例,慢性乙型肝炎（CHB）10例,肝硬化（LC）9例,肝细胞癌（HCC）5例;应用HBV基因型特异性引物进行聚合酶链反应,经琼脂糖凝胶电泳分析其基因型并进行HBVDNA定量检测。结果 114份血清标本中109份HBVDNA阳性,A组有5份血清HBVDNA检测失败,余49份血清标本中,HBV基因型为C型46例,B/C混合型3例,未检测到其他基因型。B组60份血清标本中,HBV基因型为C型44例,B/C混合型5例,B型11例。两组相比在不同临床类型分布方面均无显著差异。但在肝硬化及肝细胞癌患者中,C型所占比例高,分别为80%和100%。结论 不良结局家族聚集性乙肝感染者,以C型为主,基因型与乙肝病情发展有一定关系。     

乙肝病毒携带产妇血清、乳汁HBVDNA检测及临床意义

目的研究分析HBV携带产妇血清、乳汁中HBVDNA含量以及与血清HBV标志物之间的关系，探讨HBV携带产妇母乳喂养的安全性。方法采用荧光定量PCR技术检测HBV携带产妇血清、乳汁中HBVDNA含量。结果32例HBeAg阳性产妇血清和乳汁中HBVDNA阳性率分别为100％和78％（X^2=7．86，P〈0．05），其中HBVDNA〉10^7拷贝／mL各占75％和6％（X^2=31．35，P〈0．05）；38例HBeAg阴性产妇血清和乳汁中HBVDNA阳性分别为63％和26％（X^2=10．43，P〈0．05）。结论HBV携带产妇乳汁具有一定的传染性，乳汁的传染性低于血液；HBeAg阳性产妇经母乳传播HBV的机率高于HBeAg阴性产妇。     

慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒C基因启动子变导异的初步研究

为建立快速特异检测乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA的聚合酶链式反应（PCR）方法,产初步分析患者体内乙型肝炎病毒C基因启动子（HBV.CP）变异的情况,对PCR法扩增的HBV DNA直接测序,并应用计算机进行DNA同源性分析。结果显示：应用PCR法扩增20份慢性乙肝患者血清阳性率为95%（19/20）;选择中度、重度乙肝患者血清和pGEM.7Z-HBV质粒扩增的HBV.CP各1份分别测序,与报告基因的同源性分别为72.0%、66.5%、90.0%。研究表明,PCR法可用于HBV.CP区变异的检测,慢性乙型肝炎患者存在该区变异。     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测对判断病毒复制的临床意义

目的:了解HBV外膜大蛋白(HBV-LP)对HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后评估的作用。方法:收集104例乙型肝炎患者血清(HBsAg阳性),同时检测血清HBV-M、HBV-LP、HBV DNA,HBV-LP检测采用ELISA法,HBV DNA由广州达安基因股份有限公司提供检测;测定采用FQ PCR。结果:不同HBV-M模式中,HBV DNA、HBV-LP阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05),HBV DNA含量(拷贝数对数)与HBV-LP浓度均值呈正相关关系。在72例血清HBV DNA阳性患者中,HBV-LP阳性65例,阳性率90.3%。结论:HBV-LP在不同HBV-M感染模式中,与HBV DNA的阳性率比较吻合,而且HBV-LP浓度能较好的反映体内HBV DNA的存在状态。     

HBV宫内感染的危险因素及与HBV DNA的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的危险因素及HBV DNA含量对HBV宫内感染的影响。方法 分别用酶联免疫吸附法及荧光定量PCR法检测230例HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血HBV血清标志物和HBV DNA含量,发生宫内感染的为病例组,余为对照组,运用非条件Logistic回归模型对宫内感染的危险因素进行分析。结果 （1）230例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,有22例发生宫内感染。其中HBsAg阳性7例,HBV DNA阳性18例,HBsAg和HBV DNA均阳性的3例,总的HBV宫内感染率为9．6％（22／230）。（2）非条件Logistic多元回归分析表明,仅HBV DNA浓度分级有统计学意义,OR为1．57（1．12．2．21）。（3）230例HBsAg阳性孕妇中HBV DNA阳性者119例,发生宫内感染18例,感染率为15．1％（18／119）,并且当孕妇血清HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,HBV宫内感染率显著增加,（χ^2=-7．92,P〈0．05）。结论 孕妇血清HBV DNA浓度分级是HBV宫内感染的危险因素,并且当HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,其宫内感染率显著增加。     

人乳头瘤病毒16,18型核酸检测质控物的研制及应用

目的研制得到能模拟真实临床标本的人乳头瘤病毒（HPV）高危型16,18核酸检测质控物,并探讨其用于临床实验室室间质量评价的有效性。方法采用分子克隆方法得到含HPV．16靶基因的重组质粒载体,转染已含HPV-18的宫颈癌上皮细胞系（HeLa）,获得含HPV-16,18核酸的上皮细胞原液,经适当灭活后甲醇固定。将该细胞原液适当稀释后,组成含阴阳性共12份标本的样本盘,发至全国各开展临床HPV一16,18检测的实验室,对回报结果进行分析。结果细胞原液经1：10,1：50,1：100,1：500稀释,实时荧光PCR检测,HPV-16Ct值分别为29．10,31．19,32．15和32．73,HPV-18Ct值分别为30．32,32．13,32．22和35．55。质控物在4℃可稳定40d以上,盲邮至新疆乌鲁木齐、内蒙古呼和浩特和厦门的样本,返回后检测无明显变化。44个临床实验室对高浓度样本的检测符合率平均为95．1％,对低浓度样本的检测符合率为57．4％。对阴性样本符合率为98．3％。结论获得可模拟临床标本的HPV-16,18核酸检测质控物,质评结果表明可有效地用于临床实验室室间质评。     

合并乙肝的实体瘤患者化疗期间预防性护肝治疗的意义研究

目的评价实体瘤患者化疗过程中预防性护肝治疗对患者肝功能损害的影响,评价预防性护肝治疗的价值。方法收集2008年2月～2012年7在我院接受化疗的实体瘤患者317例,并根据患者是否接受预防性护肝药物治疗、乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAg）及HBV DNA状态进行分组。评价化疗后肝功能损伤的发生率及程度。结果 HBV DNA阳性乙肝患者肝功能损害发生率明显高于未合并乙肝患者（61.5%vs 34.0%,P〈0.01）;预防性使用护肝药物后,HBV DNA阳性乙肝患者肝功能损害发生率显著减少（61.5%vs 35.2%,P〈0.05）,与未合并乙肝感染的患者类似（35.2%vs 29.8%,P〉0.05）;其中轻度（Ⅰ、Ⅱ级）肝功能损害的发生率下降尤为显著（51.9%vs 28.3%,P〈0.05）。而对于未合并乙肝或HBV DNA阴性乙肝患者,预防性使用护肝药物也观察到肝功能损害发生率的下降趋势,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在HBV DNA阳性的乙肝患者化疗过程中,建议在抗乙肝病毒药物基础上,预防性使用护肝药物治疗;而在HBV DNA阴性的乙肝患者以及无乙肝感染的患者中,预防性护肝治疗的作用尚有待进一步研究明确。     

宫颈腺癌和子宫内膜腺癌中hr-HPV(16/18)DNA和p16,Vimentin,ER,PR表达组型的检测及鉴别诊断价值

目的:探讨hr-HPV(16/18)DNA及4种免疫标记物(p16,Vimentin,ER,PR)表达组型的检测在宫颈腺癌(ECA)和子宫内膜腺癌(EMA)鉴别诊断中的价值。方法:分别采用原位杂交和免疫组化(EliVisionTMplus)法对ECA和EMA肿瘤组织中的hr-HPV(16/18)DNA和4种免疫标记物(p16,Vimentin,ER,PR)的表达进行检测。阳性表达细胞≤50%为低表达(L),>50%为高表达(H)。结果:1hr-HPV(16/18)DNA在ECA和EMA中的检出率分别为72.7%(24/33)和12.9%(4/31)。ECA中hr-HPV(16/18)DNA检出率显著高于EMA(P<0.01)。2在24例hr-HPV(16/18)DNA阳性的ECA病例中4种标记物组合有2种表达组型。其中23例(95.8%)呈p16(H)/Vim(L)/ER(L)/PR(L)表达类型,在9例hr-HPV(16/18)DNA阴性的ECA病例中,8例呈p16(L)/Vim(L)/ER(L)/PR(L)表达组型(88.9%)。3在27例hr-HPV(16/18)DNA阴性的EMA病例中,4种标记物组合有5种表达组型。其中21例(77.8%)为p16(L)/Vim(H)/ER(H)或/和PR(H)表达组型。在4例hr-HPV(16/18)DNA阳性EMA病例中,2例呈p16(H)/Vim(H)/ER(L)/PR(L)表达组型(50.0%),剩余2例(50.0%)分别为p16(H)/Vim(L)/ER(L)/PR(L)和p16(H)/Vim(H)/ER(H)/PR(H)表达组型。结论:hr-HPV(16/18)DNA检测和4种免疫标记物组合(p16,Vimentin,ER,PR)的不同表达组型在ECA和EMA的鉴别诊断中具有重要实用价值。     

用聚合酶链反应微孔板杂交技术检测HBV DNA

目的 :建立并优化HBVDNA的PCR 微孔板杂交技术检测体系 ,使临床PCR结果判定更加客观可靠。方法 :采用碱裂解标本中的HBV、玻璃粉吸附提纯模板DNA ,用 5’端标记生物素的引物进行PCR ,PCR扩增产物与包被于微孔板中的靶基因杂交 ,酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合后 ,用酶底物与所标记酶进行显色反应 ,最后通过测定其光密度来判定结果。结果 :建立并优化的PCR 微孔板杂交检测方法提高了检测的灵敏度和特异性。PCR 微孔板杂交法对HBVDNA的检出阳性率 (79.8% )比电泳法 (6 9.0 % )高 ,2 0份非乙肝患者血清标本两方法检测均阴性。结论 :本方法灵敏、特异、操作简便、快速、结果客观可靠。     

慢性乙型肝炎活动期HBV复制与血清β2-MG变化的关系

目的探讨慢性乙型肝炎活动期HBV复制与血清β2-MG变化的关系.方法 75例慢性乙型肝炎活动期患者和61例正常体检者采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定血清HBV-DNA的水平,放射免疫法(RIA)测定血清β2-MG的水平,并同时行肝功能及病毒性肝炎标志物检测.结果慢性乙型肝炎组血清β2-MG水平显著高于正常对照组(P<0.05),HBV-DNA 阳性组血清β2-MG水平显著高于HBV-DNA阴性组(P<0.01),HBV-DNA阴性组血清β2-MG水平与正常对照组比较,无显著性差异(P>0.05).结论 (1)慢性乙型肝炎活动期患者血清β2-MG水平升高,是病情活动的指标之一;(2)联合检测血清HBV-DNA和血清β2-MG对于观察病情和评估疗效有重要的临床应用价值.     

Detection of hepatitis B viral DNA in liver with polymerase chain reaction

The sensitivity of PCR was determined for detection of HBV DNA in paraffin-embed-ded liver tissue with different methods for sample preparation.Of 8 cases of HBeAg-positiveHBV infection,HBV DNA was detected in 6 by extracting DNA from both frozen and dewaxedsamples,but in none by direct reaction.Of 12 cases subjected to Southern blot hybridization,HBV DNA was detected in 7 by this technique,in 10 by PCR with both methods of DNA extrac-tion and in 3 by direct PCR.The results showed that PCR was sensitive and was comparablewith blot hybridization in detecting intrahepatic HBV DNA.In comparison between differentmethods of sample preparation,the viral detection rate from the dewaxed samples was near thatfrom the frozen ones,while by the direct reaction HBV DNA could be detected only in a fewsamples with high level of infection.     

应用多聚酶链反应技术研究HBV感染者精液的传染性

目的：研究ＨＢＶ感染者精液的传染性。方法：应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）分别对９０例ＨＢＶ感染者精液和血液ＨＢＶＤＮＡ进行检测。结果;发现精液ＨＢＶＤＮＡ检出率为５５．５６％,血液ＨＢＶＤＮＡ检出率为８１．１１％,结论：ＨＢＶ感染者精液具有较强的传染性,其性伴应行乙肝疫苗的预防接种。