红细胞生成素对白蛋白诱导HK-2细胞转分化中TGFβ1/ILK通路的调控作用

目的 研究TGFβ1/ILK(转化生长因子-β1/整合素连接激酶)通路在人白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化过程中的作用,探讨红细胞生成素(EPO)是否通过抑制TGFβ1/ILK通路而产生保护效应.方法 体外培养HK-2细胞,RT-PCR法检测TGF β1、ILK mRNA的表达;细胞免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(0-SMA)的蛋白表达;ELISA法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 白蛋白诱导组TGFβ 1、ILK mRNA较空白对照组显著升高,EPO干预组TGFβ1、ILKmRNA显著下调;白蛋白诱导组E-cadherin的蛋白表达较空白对照组下降,α-SMA、FN的蛋白表达上升,而在EPO干预组及TGFβ1拮抗剂组E-cadherin的蛋白表达较白蛋白诱导组显著上调,α-SMA、FN的蛋白表达显著下调,且与EPO的浓度有关;Person直线相关分析显示白蛋白诱导组及EPO干预组TGFβ1mRNA与ILK mRNA呈正相关.结论 TGFβ1/ILK通路参与了白蛋白诱导的HK 2细胞转分化过程,EPO通过抑制TGFβ1/ILK通路而抑制转分化过程,产生肾保护效应.     

人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化.方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGF mRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体.结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8 ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8 ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMA mRNA表达(P＜0.001).(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1 ng/mlTGFβ1刺激后VEGF mRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P＜0.001);而3、5和8 ng/ml TGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P＜0.001).8 ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGF mRNA和蛋白表达强度高于对照组(P＜0.001);而刺激较长时间(36、48和72 h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P＜0.001).(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P＜0.001).结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调.     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的应用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,研究肝细胞生长因子(HGF)对肾小管上皮细胞的表型重塑的作用和机制。方法在正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E细胞株)培养液中分别加入TGF-β1及HGF,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化;免疫组织化学方法检测肌纤维母细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;ELISA法分析测定培养细胞上清液中纤维连结蛋白(FN)的含量;RT-PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达。结果1TGF-β1诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;α-SMA的表达、上清液FN含量、细胞CTGFmRNA表达明显增加(P<0.05)。2单纯HGF对细胞形态学、α-SMA的表达及FN含量与空白对照组无明显影响;不同浓度HGF组的CTGFmRNA表达较空白对照组均增加(P<0.05)。3HGF能抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态学改变;α-SMA的表达、FN水平均比诱导组TGF-β1明显下降(P<0.05);HGF抑制了TGF-β1诱导的CT-GFmRNA表达(P<0.05)。结论HGF能够负性调控TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化作用,减少FN分泌;HGF对TEMT的负性调节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的。     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化的影响

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGFβ-1)诱导肺泡上皮细胞转分化的影响。方法:应用TGF-β1诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化。将人肺腺癌A549细胞株培养液分为4组:①对照组;②HGF组;③TGFβ-1组;④HGF+TGFβ-1组,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肺泡上皮细胞特异性标志物肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的表达。结果:①TGF-β1组肺泡上皮细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态。②TGF-β1组的细胞α-SMA的表达明显增加,SP-A的表达明显减低。③HGF组的细胞形态学、α-SMA、SP-A的表达与对照组无明显差异。④HGF+TGFβ-1组,多数细胞保持原来肺泡上皮细胞的形态,α-SMA表达明显低于TGFβ-1组、SP-A表达明显高于TGFβ-1组。结论:HGF能够在一定程度上负性调控TGFβ-1诱导的肺泡上皮细胞的转分化。     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾刀、管上皮细胞转分化实验研究

目的：通过观察人参皂苷Rgl对转化生长因子-β1（TGF—β1）诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rgl在肾小管纤维化形成方面的作用。方法：将NRK52E细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF—β1诱导组（5ng／mLTGF—β1）,人参皂苷Rgl与TGF—β1共同干预组（5ng／mLTGF—β1的基础上分别加入10、20、40μg／mL的人参皂苷Rgl）,培养72h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rgl对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响.结果：TGF—β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异（P〈0.05）,人参皂苷Rgl能抑制TGF—β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论：人参皂苷Rgl能抑制TGF—β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化实验研究

目的 :通过观察人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rg1在肾小管纤维化形成方面的作用。方法 :将NRK52E细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组(5 ng/mL TGF-β1),人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5 ng/mL TGF-β1的基础上分别加入10、20、40μg/mL的人参皂苷Rg1),培养72 h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。结果 :TGF-β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异(P<0.05),人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论 :人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

转化生长因子β1／整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应

目的：研究转化生长因子β1整合素连接激酶（transforming growth factor-betal／integrin-linked kinase,TGF-β1／ILK）信号通路在白细胞介素β1（interleukin-1β,IL-1β）诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT）中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。 方法：以雄外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株（NRK52E）为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂（SB431542）阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）和E-钙黏连素（E-cadherin）的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白（fibronectin,FN）含量。结果：与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加（P〈0．05）,大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化（P〈0．05）。阻断TGF-β1信号通路后,IL-1β诱导的TEMT明显受抑,且ILK表达减少。与大黄素阻断剂组比较,大黄素预处理不能预防IL-1β诱导的TEMT,大黄素不能逆转IL-1β诱导的TEMT。相关分析显示,TGF-β1表达与α-SMA、FN、ILK表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。ILK表达与α-SMA、FN表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。结论：1L-1β通过激活TGF-β1／ILK信号通路蛋白而诱导TEMT,大黄素通过抑制TGF-β1／ILK信号通路蛋白而抑制IL-1β诱导TEMT。     

RNA干扰沉默转化生长因子β1对大鼠移植肾上皮细胞转分化的作用

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)的RNA干扰质粒(shRNA-TGF-β1)对大鼠移植肾上皮细胞转分化的作用.方法 将受体大鼠分为4组:假手术组、质粒组、空质粒组、单纯移植组;建立大鼠肾移植纤维化加快模型,以流体力学为基础的肾脏基因转染方法转染质粒;分1、2、3个月收集肾脏标本;逆转录-PCR及Western印迹法检测TGF-β1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA及蛋白表达;HE染色观察肾脏的病理变化;上皮钙黏蛋白及α肌动蛋白(α-SMA)免疫组化标记肾小管上皮细胞及成纤维母细胞.结果 质粒组TGF-β1在3个检测时间段表达均受到抑制,明显低于空质粒组、单纯移植组[第3个月时TGF-β1 mRNA分别为0.73±0.08比0.92±0.07、0.95±0.04(均P<0.01)];质粒组上皮钙黏蛋白表达高于空质粒组、单纯移植组[第3个月时上皮钙黏蛋白mRNA分别为0.39±0.11比0.15±0.07、0.17±0.06(均P<0.01);上皮钙黏蛋白蛋白分别为0.38±0.08比0.15±0.07、0.15±0.07(均P<0.01)];质粒组肾小管上皮细胞多于空质粒组、单纯移植组,成纤维母细胞少于空质粒组、单纯移植组;病理染色显示质粒组慢性炎症较轻,纤维母细胞较少,细胞外基质沉积较轻.结论 质粒shRNA-TGF-β1能抑制移植肾肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是抑制TGF-β1的表达、上调上皮钙黏蛋白的表达.     

曲尼司特对TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化进程的影响

目的:观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)诱导的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化过程中转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达情况及曲尼司特对其转分化的影响.方法:应用TGF-β1(8 ...     

TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1（TGF-β1/ILK/FSP1）信号通 路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细 胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组：细胞培养液加环孢素A1 mg/L;TGF-β1干预组：阻断剂（SB431542）10 μmol/L 加环孢素A1 mg/L;ILK干预组：阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A1 mg/L;阴性对照组：阴性转染ILKshRNA后加入环孢素 A1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免 疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表 达量均显著增加（P<0.05）;TGF-β1 干预组经SB431542 处理后,TGF-β1、ILK 和FSP1 水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）;经 ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较 环孢素诱导组降低（P<0.05）。结论TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制 之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。     

川芎嗪对TGF-β1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近端小管上皮细胞的原代培养。原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞传至第2代后分为5组,空白对照组、10ng/mL TGF-β1刺激组、5ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组、10ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组及20ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组。刺激48h后,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、酶化学染色和免疫细胞化学方法检测细胞的转分化情况。结果 TGF-β1刺激人胚肾近端小管上皮细胞后细胞拉长呈梭形,细胞间隙加大;电子显微镜下细胞失去极性,微绒毛减少直至消失;碱性磷酸酶染色阴性;细胞角蛋白18(CK-18)表达减弱,波形蛋白(Vimentin)表达增强,并表达α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)。各浓度TMP+10ng/mL TGF-β1刺激组细胞的上述变化均有不同程度的减弱,减弱程度与TMP浓度呈正比。结论 TMP能以浓度依赖方式阻止TGF-β1诱导的人胚肾近端小管上皮细胞的转分化。     

红细胞生成素对肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF表达变化的关系

目的探讨红细胞生成素（rHuEPO）对人肾小管上皮细胞（HKC）上皮-间充质细胞转化（EMT）的作用及其与该细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达变化的关系。方法体外培养HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml的转化生长因子-β1（TGF-β1）处理的HKC为阳性对照,以不同浓度（0.1、1.0、10、50、100IU/ml）的rHuEPO与8ng/ml的TGF-β1共同处理HKC,或在不同时间（-24、0、12、24、36h）用同一浓度rHuEPO（100IU/ml）对8ng/ml的TGF-β1处理的HKC进行干预。应用RT-PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和VEGFmRNA转录水平,应用免疫印迹方法检测α-SMA、E钙黏蛋白以及VEGF的蛋白表达水平。结果rHuEPO以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的HKCα-SMAmRNA和蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,保护性上调TGF-β1抑制的HKC细胞E钙黏蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）;同时上调TGF-β1抑制的HKC细胞VEGFmRNA和蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）。结论rHuEPO对TGF-β1诱导的EMT具有一定的抑制作用,并具剂量-时间依赖性;该作用可能与rHuEPO上调肾小管上皮细胞VEGF的表达有关。     

螺内酯对清蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨螺内酯对人清蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生转分化的影响,以及该过程是否通过转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路发挥作用。方法体外培养HK-2细胞,将其随机分为7组:A组(未加刺激物)、B组(加入10-7 mol/L螺内酯)、C组(加入5mg/mL清蛋白)、D组(加入5mg/mL清蛋白及10-8 mol/L螺内酯)、E组(加入5mg/mL清蛋白及10-7 mol/L螺内酯)、F组(加入5mg/mL清蛋白及10-6 mol/L螺内酯)、G组(先加10μmol/L TGF-β1拮抗剂,30min后加入5mg/mL清蛋白)。采用RT-PCR检测TGF-β1和整合素连接激酶(ILK)的mRNA表达;细胞免疫荧光检测上皮钙黏素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)的蛋白水平。结果 C组ILK mRNA,α-SMA、FN蛋白较其他各组表达明显增高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达明显下降(P<0.05),而TGF-β1mRNA表达高于除G组以外其余各组(P<0.05)。与G组相比,C组TGF-β1mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),而ILK mRNA,α-SMA、FN蛋白表达明显下降(P<0.05),E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。D、E、F组TGF-β1、ILKmRNA、α-SMA,FN蛋白表达逐渐下降,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);E-cadherin的表达逐渐增高(P<0.05)。结论一定浓度的清蛋白可以诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化;螺内酯可抑制人清蛋白诱导HK-2细胞转分化作用,且呈剂量依赖性;TGF-β1/Smads信号通路可能是此过程中的重要通路。     

槲皮素抗肾小管上皮细胞转分化的机制研究

目的探讨槲皮素对转化生长因子β（TGF-β）诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）的影响。方法TGF-β刺激体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株（NRK5ZE）,同时以不同浓度槲皮素进行干预,细胞免疫化学染色法和PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。结果TGF-β刺激导致α-SMA表达增加,不同浓度槲皮素作用后,可减轻TGF-β诱导的α-SMA表达,上调E-cadherin的表达（P〈0．05）。结论槲皮素对TGF-β刺激的NRK52E细胞转分化有明显抑制作用。     

曲尼司特对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化作用的影响及机制

目的:探讨曲尼司特对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化作用的影响及机制。方法:应用TGF-β1刺激NRK-52E,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量曲尼司特干预组,用流式细胞仪观察曲尼司特干预后NRK-52E的转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况。结果:在TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化过程中,曲尼司特能剂量依赖性下调α-SMA表达,上调E-cadherin表达,两者表达呈负相关(r=-0.653)。结论:提示曲尼司特在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化中发挥保护作用。     

丹酚酸B对TGF-β1诱导的人肾小管细胞转分化的影响

目的:探讨丹酚酸B对转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞—间充质细胞转分化的影响?方法:将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:①对照组:未加入丹酚酸B或者TGF-β1;②TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5 ng/ml);③丹酚酸B+TGF-β1组:在细胞培养基中分别加入丹酚酸B和TGF-β1(浓度为5 ng/ml),按丹酚酸B的浓度分为A?B?C?D 4个亚组:丹酚酸B的浓度分别为A组:0.1 μmol/L,B组:1 μmol/L,C组:10 μmol/L,D组:100 μmol/L?72 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学染色检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-cadherin的表达情况?结果:TGF-β1组HK-2细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态;胞浆内大量表达α-SMA,同时E-cadherind的表达明显减少;不同剂量丹酚酸B治疗可减轻TGF-β1诱导的细胞形态学改变和胞浆内α-SMA的表达,同时E-cadherind的表达得到明显恢复,且呈剂量依赖性?结论:丹酚酸B具有阻止慢性肾脏疾病进行性发展的潜能,而这一作用与其能有效阻止TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化有关?     

上调整合素连接激酶可抑制肾小管上皮细胞E-cadherin 表达

目的 研究上调整合素连接激酶（integerin-linked kinase,ILK） 对肾小管上皮细胞（human kidney tubular cells,HKC）E- 钙黏素（E-Cadherin） 表达的影响。肾小管上皮细胞转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT） 在肾间质纤维化中发挥重要作用。E-Cadherin 是维持肾小管上皮细胞极性的关键蛋白。ILK 是调控上皮细胞转分化的重要蛋白,其作用机制目前还不清楚。方法 本研究中我们将ILK 转染到HKC 中过表达,然后用RT-PCR、Western blot 及免疫荧光方法观察了ILK 对E-Cadherin 表达及糖原合成激酶-3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β） 活性的影响。进一步用磷酸化下游底物GSK-3β 抑制剂SB415286 观察对E-Cadherin 表达的影响。结果 ILK 过表达可以明显抑制E-Cadherin 表达, 增加GSK-3β 活性。用GSK-3β 抑制剂处理后可以下调E-Cadherin 的表达。免疫荧光显示ILK 过表达可使上皮细胞发生极性改变,E-Cadherin 表达下调。表明ILK 上调可通过激活GSK 抑制E-Cadherin 表达,进而诱导肾小管上皮细胞出现转分化表型。     

整合素连接激酶在人肾间质纤维化组织中的表达及意义

目的探讨在慢性肾脏病患者肾间质中ILK的表达和其在肾间质纤维化发生、发展中的意义.方法选择各型慢性肾脏病患者49例,按肾间质病理损伤程度对肾组织标本进行分组:正常对照组4例,轻度损伤组17例,中度损伤组16例,重度损伤组12例.用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测肾间质的ILK、TGFβ1、E-cadherin和FN表达面积,并将ILK表达水平与患者血清肌酐(SCr)进行比较.结果肾小管上皮细胞是间质中ILK的主要来源,ILK表达量与肾小管间质病变程度呈正相关(P<0.01).此外,ILK与TGFβ1和FN的表达量呈正相关(P均<0.01),而与E-cadherin的表达量呈负相关(P<0.01);ILK还与患者SCr升高水平呈正相关(P<0.01). 结论随着慢性肾小管间质病变程度加重,ILK的表达显著增加,因此它在肾间质纤维化形成中起重要作用.ILK作为TGFβ1的下游因子, 可能通过促进肾小管上皮细胞的转分化(EMT)和细胞外基质(ECM), 如FN等的合成增加,参与肾间质纤维化的发生.     

TGFβ1对人肾小管上皮细胞表达糖原合成酶激酶-3β的影响

目的 研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)对人肾小管上皮细胞株(human kidney proximal tubular epithelial cell line, HKCs)表达糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响.方法 将体外培养的的HKCs随机分为4组:正常对照组(C组):无血清培养基(free serum medium, FSM)培养; Ta组、Tb组和Tc组:用含不同浓度TGFβ1(Ta组:ng/ml,Tb组:0ng/ml,Tc组:0ng/ml)的FSM培养.12h后,分别用RT-PCR、Western blot检测HKCs GSK-3β的mRNA、总蛋白表达量以及蛋白磷酸化水平.结果 (1)GSK-3β mRNA和总蛋白在各组间表达量差异无统计学意义(P＞0.05),和C组相比各T组GSK-3β蛋白磷酸化水平显著升高(P＜0.01);(2)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平更高(P＜0.01);(3)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGFβ1虽不影响HKCs的GSK-3β mRNA和总蛋白表达量,但能提高GSK-3β蛋白磷酸化水平,后者可能参与TGFβ1诱导的 HKCs转分化过程.     

肝细胞生长因子对IL-1α刺激肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化的作用

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对IL-1α诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT)及细胞分泌功能的影响。方法在体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)中加入IL-1α 20ng／ml诱导．并加入大(1600ng／ml)、中(1200ng／ml)、小(800ng／ml)剂量HGF阻断，流式细胞仪和免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达；倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化；ELISA法测定培养细胞上清液分泌的粘连蛋白(FN)含量。结果IL-1α刺激后细胞转变为类似成纤维细胞形态；α-SMA阳性细胞百分数及α-SMA表达的平均荧光强度明显增加(P＜0．05)；培养上清液中FN含量增加(P＜0．05)。HGF可剂量依赖性地抑制IL-1α诱导NRK52E细胞形态学改变及α-SMA的表达(P＜0．05)，不同程度地抑制IL-1α的促FN分泌作用(P＜0．05)。单独加入不同剂量HGF对肾小管细胞无影响。结论HGF可抑制IL-1α诱导的TEMT作用，减少FN的分泌，对肾间质纤维化具有负性调节作用。