几种子同方式诱导Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19的表达

为探讨一个新的细胞凋亡相关基因－ＴＦＡＲ１９所参与的凋亡途径,我们研究了几种不同方式诱导白血病细胞株Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡过程中ＴＦＡＲ１９表达的变化。采用去除血清,ＶＰ－１６作用及Ｆａｓ单抗活化受体等方法诱导Ｊｕｒｋａｔ细胞凋亡后,以ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ水平ＴＦＡＲ１９的表达,用流式细胞术及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测蛋白水平ＴＦＡＲ１９的表达。实验结果显示,Ｊｕｒｋａｔ细胞在去除血清１２小时,     

维甲酸和三氧化二砷下调NB4细胞组织因子表达的作用机制

目的 研究全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）下调ＮＢ４细胞组织因子（ＴＦ）表达的作用机制。方法 用放线菌酮抑制蛋白合成和用放线菌素Ｄ阻断ＲＮＡ合成后,用逆转录－降合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＴＲＡ对ＮＢ４细胞ＴＦｍＲＮＡ转录的影响。将含有ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白全部编码序列的重组逆转录病毒质粒转染Ｕ９３７细胞,以转染空载体的Ｕ９３７细胞为对照,用ＥＬＩＳＡ方法检测ＡＴＲＡ和Ａｓ     

急性早幼粒细胞白血病维甲酸和砷剂治疗期间组织因子改变的 …

探讨急性早幼粒细胞白血病发病初期和维甲酸及三氧化二砷治疗期间组织因子的表达。方法；采用ＥＬＩＳＡ法测定血浆可溶性纤维蛋白单体复合物，Ｄ－二聚体和细胞裂解液ＴＦ含量；ＲＴ－ＰＣＲ法测定细胞ＴＦ ｍＲＮＡ的转录情况。结果：发病时，患者血浆ＳＦＭＣ和Ｄ－Ｄ水平，骨髓分离的单个核细胞悬液的促凝活性，细胞裂解液的促凝活性，细胞裂解液的ＴＦ水平，ＴＦｍＲＮＡ的转录均显著升高，经ＡＴＲＡ和ＡＳ２Ｏ３治疗后显著降     

肿瘤患者凝血及纤溶分子标志物变化

目的 观察恶性肿瘤患者凝血及纤溶分子标志物的变化,以探索其发生、发展与止凝血的关系。方法 用ＥＬＩＳＡ方法检测２５名正常对照,２０例子宫肌瘤,９１例子宫肌瘤,９１例恶性肿瘤（肺癌２１例、食道癌２０例、胃癌２３例、结直肠癌２７例）组织因子（ＴＦ）、组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）、凝血酶－抗凝血酶复合物（ＴＡＴ）、尿激酶型纤溶酶原激活物（ｕ－ＰＡ）、尿激酶型纤溶酶原激活物受体（ｕ－ＰＡＲ）、纤溶酶－抗纤溶酶复合物（ＰＡＰ）的血浆含量。结果 各种恶性肿瘤ＴＦ、ＴＡＴ、ｕ－ＰＡ、ｕ－ＰＡ、ＰＡＰ均显著高于正常对照组,ＰＦＴＩ水平与正常对照组之间无统计学差异;手术后恶性肿瘤组ＴＦ、ＴＡＴ、ＰＡＰ有所下降,但仍高于正常对照组,而ｕ－ＰＡ、ｕ－ＰＡＲ已与正常对照组之间无统计学差异;子宫肌瘤患者的上述指标测得值与正常对照组之间     

35例急性白血病细胞IL—2受体α的基因表达的检测分析

为研究ＩＬ－２受体α链基因在急性白血病（ＡＬ）细胞的表达，对１９例ＡＬＬ和１６例ＡＭＬ患者治前白血病细胞用逆转录＝聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及芝光素标记单抗ＩＬ－２Ｒ１流式细胞分析，分别进行了ＩＬ－２Ｒα基因ｍＲＮＡ和蛋白质水平表达的检测。３５例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和Ｐ阳性表达者分别为５例和１４例，前者阳性表达明显高于后者，１４例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ表达阳性，     

荧光定量PCR检测外周血中JAR细胞的探讨

目的 建立灵敏可靠的外周血中检出滋养细胞肿瘤细胞的方法，为早期诊断滋养细胞肿瘤的转移奠定实验基础。方法 在已知数量的ＪＡＲ细胞掺入１０ｍｌ外周血中建立肿瘤细胞血行转移实验模型，荧光定量逆转录－聚合酶链反应（ＦＱ－ＲＴ－ＰＣＲ）定量检测ＪＡＲ细胞的β－ｈＣＧ－ｍＲＮＡ。结果 ＦＱ－ＲＴ－ＰＣＲ可检测到相当于１个ＪＡＲ细胞表达的β－ｈＣＧ－ｍＲＮＡ量，但当ＪＡＲ细胞被掺入１０ｍｌ外周血中时，细胞数〉１     

急性髓细胞白血病骨髓有核细胞的TGF－β mRNA，TNF－αmRNA表达

急性髓细胞白血病骨髓有核细胞的ＴＧＦ－β　ｍＲＮＡ，ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达吴克复，宋玉华，马小彤，郑国光，孔祥银，李牧，邱录贵，孟庆祥近年来研究表明：β－转化生长因子（ＴＧＦ－β）是造血前体细胞的重要生理性负调节因子￣［１］。它不仅以旁分泌（Ｐａｒａ...     

抗PML—RARα反义核酸对NB4细胞形态,PML—RARα mRNA及蛋白质？…

目的 探讨抗ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸（ＦＵＡＳ）对ＮＢ４细胞的分化、ＰＭＬ－ＲＡＲα ｍＲＮＡ表达及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位的影响。方法 以ＮＢ４细胞为研究对象,细胞形态观察采用Ｗｒｉｇｈｔ染以法;ＰＭＬ－ＲＡＲαｍＲＮＡ表达采用ＲＴ－ＰＣＲ法;ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位采用免疫荧光技术。结果 ＦＵＡＳ处理后第５天,细胞出现部分分化。处理后２４,７２,１２０小时,ＰＭＬ－     

两种早幼粒细胞白血病融合维甲酸受体α的比较研究

目的：就配基－受体、受体－ＤＮＡ和蛋白质－蛋白质相互作用，以及蛋白质的亚细胞定位等方面，对早幼粒细胞白血病－维甲酸受体α（ＰＭＬ－ＲＡＲα）与早幼粒细胞白血病锌指－维甲酸受体α（ＰＬＺＦ－ＲＡＲα）融合蛋白的生物学功能进行比较。方法：采用受体放射配基结合分析、受体－ＤＮＡ结合分析及免疫荧光技术。结果和结论：ＰＭＬ－ＲＡＲα与ＰＬＺＦ－ＲＡＲα融合蛋白有相似的配基结合亲和力；两者都能以同二聚体形式结合维甲酸反应元件（ＲＡＲＥｓ）；都能与维甲类Ｘ受体（ＲＸＲ）结合，提示ＰＭＬ－ＲＡＲα和ＰＬＺＦ－ＲＡＲα在急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的发病中有共同的分子基础。但是，两者在某些特性方面又有所不同，如：ＰＭＬ－ＲＡＲα和ＰＬＺＦ－ＲＡＲα结合ＲＡＲＥｓ的相对强度有所差异；两者在与ＲＸＲ形成复合物的行为以及亚细胞定位方面亦不尽相同；尤为重要的是，两者可分别通过与ＰＭＬ和ＰＬＺＦ形成异源复合物而阻断ＰＭＬ和ＰＬＺＦ蛋白质所介导的不同调节途径。因此，ＰＭＬ－ＲＡＲα与ＰＬＺＦ－ＲＡＲα之间的这些差异，可能部分解释伴ｔ（１１；１７）的ＡＰＬ患者对全反式维甲酸诱导分化治疗耐药的原因。     

不同造血生长因子对脐血有核细胞体外扩增作用的实验研究

目的：探讨造血生长因子不同组合方式对脐血有核细胞的扩增作用以及脐血扩增后Ｔ淋巴细胞和ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞变化情况。方法：在脐血有核细胞体外培养体系中分别加入不同组合的细胞因子，观察细胞数、ＣＤ３４＋细胞、ＣＦＵ－ＧＭ、Ｔ４（ＣＤ４＋ＣＤ８－ＣＤ３＋）细胞、Ｔ８（ＣＤ４－ＣＤ８＋ＣＤ３＋）细胞以及ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞的变化。结果：脐血有核细胞在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的作用下扩增效果最佳。结论：脐血有核细胞在各种造血生长因子的协同作用下可以在体外扩增。脐血扩增后Ｔ４、Ｔ８细胞减少，可能会降低脐血移植急性ＧＶＨＤ发生，但ＨＬＡ－ＡＢ和ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞数急剧上升，增加了免疫排斥的可能性。     

尿激酶受体基因反义RNA转移体系的建立及其在白血病研究中的应用

尿激酶受体 (uPAR)表达与肿瘤 /白血病细胞的侵袭与转移能力明显相关。为探讨逆转录病毒载体介导的uPAR基因反义RNA转移体系在抑制白血病细胞表达uPAR中的价值 ,构建了表达反义uPAR基因的逆转录病毒载体LaCD87SN ,用脂质体转染 交互感染策略建立uPAR基因反义RNA转移体系 ,并以双嗜型aCD87病毒转导U937白血病细胞 ;用PCR分析反义uPAR基因的整合和表达 ;用流式细胞术和明胶酶谱分别检测白血病细胞CD87表达和基质金属蛋白酶 (MMP)活性。结果显示 :通过转染 交互感染获得上清中病毒滴度为 6 .3× 10 5cfu/ml的双嗜型病毒产生细胞Am12 /aCD87;aCD87病毒感染的U937/aCD87细胞内存在aCD87原病毒的整合 ,并高水平表达uPAR基因反义RNA。此外 ,与载体对照的U937/NeoR细胞相比 ,U937/aCD87细胞表面CD87分子表达并无明显降低 ,但其分泌MMP 9的能力显著下降。结论 :逆转录病毒载体介导的反义RNA转移不能有效地下调白血病细胞表面uPAR表达 ,但可能干扰CD87分子与MMP的相互作用。     

ShRNA靶向沉默VEGFR1基因对U937细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 探讨慢病毒载体介导shRNA(short harpin RNA,siRNA前体)靶向沉默血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)基因对U937细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 构建针对VEGFR-1基因干扰序列和无关序列的shRNA慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染293T细胞,包装产生的病毒液感染U937细胞(U937-shVEGFR-1 KD组).采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测RNA干扰对U937细胞VEGFR-1 mRNA和蛋白表达的影响;ELISA法检测细胞培养上清液VEGF表达水平的变化;CCK-8法检测常规培养条件下和不同浓度阿糖胞苷(Ara-C)作用下细胞增殖率和抑制率变化;流式细胞术检测经Ara-C作用后细胞凋亡率变化;Transwell小室检测不同条件下细胞迁移数量的变化.结果 成功构建VEGFR-1基因shRNA慢病毒载体,转染U937细胞后,U937-shVEGFR-1 KD组细胞VEGFR-1 mRNA和蛋白表达均显著下降;细胞培养上清液VEGF表达水平明显下降,细胞增殖速度减慢;Ara-C作用下,U937-shVEGFR-1 KD组细胞增殖抑制率及凋亡率较U937无关序列shRNA阴性对照(NC)组和U937空白对照(CON)组细胞明显增高.无药物及VEGF作用下,U937-shVEGFR-1 KD组细胞迁移数量均低于U937 NC组和U937 CON组细胞;Bevacizumab作用下,U937 NC组和U937 CON组细胞迁移数量降低,而U937-shVEGFR-1 KD组细胞迁移数量无明显变化.结论 慢病毒载体介导的shRNA干扰VEGFR-1基因可有效抑制U937细胞增殖、迁移,并能够增强U937细胞对Ara-C的敏感性.     

低密度脂蛋白循环免疫复合物对U937细胞基质金属蛋白酶-1及其抑制物的作用

目的探讨低密度脂蛋白循环免疫复合物(LDL-IC)对U937细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法分别采用不同浓度的天然低密度脂蛋白(N-LDL)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)及其免疫复合物作用U937细胞,通过半定量RT-PCR分析U937细胞中MMP-1和TIMP-1基因表达的变化。结果正常U937细胞几乎不表达MMP-1,而高表达TIMP-1。N-LDL对细胞MMP-1和TIMP-1 mRNA表达没有影响。Ox-LDL能引起MMP-1轻度表达,但显著地下调TIMP的表达;而天然、氧化LDL的循环免疫复合物均非常显著地增加MMP-1和降低TIMP-1的mRNA表达(P<0.001),且较Ox-LDL对MMP-1的作用更为显著(P<0.001),并具剂量效应。结论N-LDL-IC和Ox-LDL-IC增强U937细胞MMP-1 mRNA表达,下调其抑制物TIMP-1的表达。     

Histamine differentially interacts with tumor necrosis factor-α and thrombin in endothelial tissue factor induction: the role of c-Jun NH2-terminal kinase

BACKGROUND: Histamine plays an important role in vascular disease. Tissue factor (TF) expression is induced in vascular inflammation and acute coronary syndromes. OBJECTIVES: This study examined the effect of histamine on tumor necrosis factor-alpha- (TNF-alpha-) vs. thrombin-induced endothelial TF expression. METHODS AND RESULTS: Histamine (10(-8)-10(-5) mol L-1), TNF-alpha (5 ng mL-1), and thrombin (1 U mL-1) induced TF expression in human endothelial cells. Although TF expression by TNF-alpha and thrombin was identical, histamine augmented TNF-alpha-induced expression 7.0-fold, but thrombin-induced expression only 2.6-fold. Similar responses occurred with TF activity. The H1-receptor antagonist mepyramine abrogated these effects. Differential augmentation by histamine was also observed at the mRNA level. Histamine-induced p38 activation preceded a weak second activation to both TNF-alpha and thrombin. Histamine-induced c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) activation was followed by a strong second activation to TNF-alpha, and less to thrombin. Selective inhibition of this second JNK activation by SP600125 reduced TF induction to histamine plus TNF-alpha by 67%, but to histamine plus thrombin by only 32%. Histamine augmented TNF-alpha- and thrombin-induced vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) expression to a similar extent. Consistent with this observation, VCAM-1 induction to TNF-alpha and thrombin was mediated by p38, but not by JNK. CONCLUSIONS: Histamine differentially augments TNF-alpha- vs. thrombin-induced TF expression and activity, which is mediated by the H1-receptor, occurs at the mRNA level, and is related to differential JNK activation.     

CCL23/骨髓抑制因子1(MPIF-1)对于U937细胞的增殖、凋亡和分化的影响

CCL23/MPIF-1是人类趋化因子CC家族的一员,在血细胞中仅在单核细胞源的树突状细胞中持续表达,在体内和体外实验中对人、鼠的髓系祖细胞的增殖和分化均有明显的抑制作用。最近的研究发现,CCL23在儿童急性髓系白血病骨髓和外周血样本均有高表达。为了了解CCL23的高表达在白血病进展、治疗和预后中的意义,选用白血病细胞系U937细胞作为研究对象,加入人类重组CCL23培养72小时,用CCK-8试剂盒测细胞增殖,FITC-AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,并观察不同处理条件下细胞分化情况及CCL23受体CCR1的表达水平。结果发现：单独的CCL23对于U937细胞的增殖、凋亡和分化无明显作用（P〉0.05）;但在U937受PMA诱导分化的过程中,CCL23有明显的促分化作用,同时发现此过程中CCR1表达显著升高（P〈0.05）。结论：CCL23对U937细胞无明显抑制作用,但可能与PMA产生协同诱导分化作用,而且该作用的出现可能与CCL23受体CCR1表达升高有关。     

凝血酶对牛主动脉内皮细胞组织因子活性的影响及其与PKC传？…

目的 探讨凝血酶对内皮细胞组织因子（ＴＦ）活性的刺激作用及其与人蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）传导系统的关系。方法 传代培养新生牛主动脉血管内皮细胞，取刺激或未受刺激的第４－８代细胞冻融液测定共ＴＦ活性。结果 体外培养的血管内皮细胞在静息状态下ＴＦ活性极低（４．２０±１．１９）与对照组相比，凝血酶的刺激使内皮细胞ＴＦ活性明显升高（ｎ＝８，Ｐ〈０．００１），且呈剂量依赖性关系（ｒ＝０．７８，Ｐ〈０．０５）和时     

干扰素-α对 U937细胞的促凋亡和抗增殖作用及其机制

为了研究干扰素α对白血病细胞U937细胞的抗增殖作用及其机制，用不同浓度的干扰素仪（500U／L、1000U／L、2000U／L、3000U／L、4000U／L）对U937细胞作用不同时间（0、12、24、36和48小时），用MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率，RT-PCR方法分析cyclin E mRNA的表达。结果表明：不同浓度的干扰素α处理细胞后，U937细胞生长明显受抑，2000U／L干扰素α能引起细胞凋亡，凋亡率为25．28％-70．54％（P〈0.01），细胞周期相关基因cyclin E mRNA表达降低；干扰素α对U937细胞的抑制率，呈浓度-时间依赖性。结论：干扰素α对U937细胞有明显抗增殖和促凋亡作用，此结果将为干扰素-α在白血病临床治疗方面的应用提供有力的实验证据。     

Urokinase receptor is a multifunctional protein: influence of receptor occupancy on macrophage gene expression.

Binding of urokinase to the glycolipid-anchored urokinase receptor (uPAR) has been implicated in macrophage differentiation. However, no biochemical markers of differentiation have yet been directly linked to uPAR occupancy. As extensive changes in proteolytic profile characterize monocytic differentiation, we have examined the role of uPAR occupancy on protease expression by differentiating phagocytes. Antibodies to either urokinase or to uPAR that prevent receptor binding inhibited induction of cathepsin B in cultured monocytes and both cathepsin B and 92-kD gelatinase mRNA and protein in phorbol diester-stimulated myeloid cells. Mannosamine, an inhibitor of glycolipid anchor assembly, also blocked protease expression. Anti-catalytic urokinase antibodies, excess inactive urokinase, or aprotinin had no effect, indicating that receptor occupancy per se regulated protease expression. Antibodies to the integrins CD11a and CD29 or to the glycolipid-anchored proteins CD14 and CD55 also had no effect. Protease induction was independent of matrix attachment. Antibodies to urokinase or uPAR affected neither the decrease in cathepsin G nor the increase in tumor necrosis factor-alpha in phorbol ester-stimulated cells. These data establish that uPAR is a multifunctional receptor, not only promoting pericellular proteolysis and matrix attachment, but also effecting cysteine- and metallo-protease expression during macrophage differentiation.