内源性促红细胞生成素及促红细胞生成素受体mRNA与新生大鼠脑白质损伤的相关性

目的探讨新生大鼠脑组织内源性促红细胞生成素(EPO)m RNA及EPO受体(EPOR)m RNA水平的变化与脑白质损伤的相关性。方法 10只孕15 d Wistar大鼠,5只腹腔注射脂多糖(300μg/kg)制作宫内炎症致脑白质病变的新生鼠动物模型,另5只腹腔注射等量生理盐水作为对照;孕鼠分娩后各选取18只新生鼠作为实验组和对照组。苏木精-伊红染色评价脑白质损伤情况,实时荧光定量PCR方法检测胼胝体内源性EPO及EPOR m RNA水平,免疫荧光法检测脑室周围白质CD68、胶原纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)水平,比较两组间各指标的差异,以及CD68、GFAP及MBP与EPO m RNA及EPOR m RNA水平的相关性。结果实验组新生鼠脑白质结构稀疏,呈网状改变,脑白质损伤明显;实验组CD68、GFAP及胼胝体EPO m RNA、EPOR m RNA水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P均0.01)。Pearson相关性分析显示,CD68、GFAP与胼胝体内源性EPO及EPOR m RNA水平呈显著正相关(r=0.92~0.95,P均0.01)。结论宫内炎症致脑白质损伤新生鼠内源性EPOR表达增加,可能是EPO对感染所致脑损伤保护作用的基础。     

不同时机应用促红细胞生成素对感染所致新生大鼠脑损伤的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对感染致新生大鼠脑损伤保护作用的最佳应用时机及其相关机制.方法 2日龄(P2)新生SD大鼠按随机数字表法分为4组,分别为对照组(A组)、脂多糖(LPS)感染组(B组)、早期EPO干预组(C组)、晚期EPO干预组(D组).A、B、C组P2新生大鼠连续5d(P2-P6)分别腹腔注射相应药物:等容积9 g/L盐水+等容积EPO空白对照品、0.6 mg/kg LPS+等容积EPO空白对照品、0.6mg/kg LPS+5 000 IU/kg EPO;D组P2新生大鼠连续5d(P2-P6)腹腔注射0.6 mg/kg LPS,P7开始连续腹腔注射5 000 IU/kg EPO 5 d(即P7-P11).A、B2组分别于P2(腹腔注射第1次药物后6h)、P7、P12,各随机数字表法抽取10只新生大鼠取脑,以矢状缝为标志分为左右半脑,右侧脑应用酶联免疫吸附法检测脑组织EPO受体(EPOR)水平,左侧脑应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测EPOR mRNA水平;A、B、C3组于P7随机数字表法选取10只新生大鼠灌注取脑,余续养,4组均于P12灌注取脑,应用免疫组织化学方法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及EPOR的表达,采用HE染色观察各组大鼠脑组织的病理改变.结果 1.HE染色示B组海马锥体细胞界限不清、层次紊乱,细胞数目减少,脑室扩张,周围白质有囊性软化区域形成;EPO干预组较B组病理改变减轻,早期干预组更明显.2.B组较A组EPOR蛋白及mRNA表达增加,随日龄的增加EPOR与EPOR mRNA表达有下降趋势.3.B组MBP表达(107.46±3.65)较A组(146.78±3.13)明显减少(P＜0.05),EPO干预组较B组表达增加,且C组(126.25±4.42)较D组(117.35±3.42)增加更明显(P＜0.05).4.B组GFAP表达(P7、P12分别为141.46±11.92、149.48±13.59)较A组(P7、P12分别为120.63±13.32、119.74±12.48)增加(P＜0.05),P12时EPO干预组表达较B组降低,C组(134.59±12.19)与D组(137.27±13.87)差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EPO对出生后感染所致的脑白质损伤有保护作用,且甲期应用优于晚期,其机制可能与感染可使新生大鼠脑组织EPOR表达增加及EPOR表达随日龄增加而降低有关.     

缺氧缺血后新生大鼠海马组织CA1区脑源性促红细胞生成素的表达

目的观察缺氧缺血（HI）后新生大鼠海马CA1区脑源性促红细胞生成素（EPO）的表达,探讨HI后新生大鼠内源性因素激发海马神经发生上调的可能机制。方法选用144只7日龄SD大鼠,随机分为4组：正常对照组（C组）、单纯缺氧组（H组）、单纯缺血组（I组）、缺氧缺血组（HI组）,每组又分为1h、6h、16h、1d、3d和7d共6个时间点。分别对其行HE染色和EPO免疫组织化学法CA1区脑源性EPO表达。采用SPSS13.0软件进行统计学分析。结果C组各时间点CA1区EPO表达无明显差异（F=1.185P〉0.1）,其余各组各时间点差异显著[F（H组）=33.57,F（I组）=133.6,F（HI组）=69.75Pa〈0.001];HI后16h,海马CA1区脑源性EPO表达达到较高水平,与该组总体比较差异显著（t=13.08P〈0.001）,以后随时间延长逐渐下调;H组、I组、HI组与C组比较差异均有显著意义（q=32.06,23.84,47.12Pa〈0.001）。结论脑源性EPO表达在新生大鼠HI后增加,受低氧影响最明显;EPO表达高峰在缺氧早期,推测低氧、EPO早期高表达可能是参与海马神经发生的内源性因素之一。     

脑源性促红细胞生成素在新生鼠脑缺氧缺血后海马的表达变化

目的 探讨新生鼠脑缺氧缺血后海马CA1区腩源性促红细胞生成素(EPO)的表达,揭示脑缺氧缺血后内源性因素启动海马神经发生的可能机制.方法 7口龄SD新生大鼠结扎左侧颈总动脉并暴露在低氧环境造成新生大鼠缺氧缺血性脑损伤.选用192只大鼠,96只做免疫组织化学染色,96只做免疫印迹Westemblot分析.分别随机分为3组,即正常对照组、单纯缺氧组、缺氧缺血组,每组又分为1 h、6 h、16 h、1 d、3 d和7 d共6个时间点.应用免疫组织化学法和免疫印迹观察海马CA1区脑源性EPO的表达变化.结果 单纯缺氧、缺氧缺血EPO的表达与正常对照组比较,差异均有统计学意义;正常埘照组各时间点EPO的表达差异无统计学意义,单纯缺氧、缺氧缺血后16 h,脑源性EP0表达达到较高水平,与其余时间点比较差异有统计学意义,以后随时间延长逐渐下调.结论 脑源性EPO表达在新生鼠脑缺氧缺血后早期即增加,推测低氧、EPO早期高表达可能是参与海马神经发生的内源性因素之一.     

促红细胞生成素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马MMP-2表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马MMP-2表达的影响及其神经保护作用机制。方法将7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组(HIBD组)、EPO治疗组(EPO组),每组48只;各组大鼠分别在6 h、24 h、3 d、7 d时各处死12只。采用免疫组化及实时荧光定量PCR检测大鼠海马MMP-2蛋白及MMP-2 mRNA的表达。结果免疫组化结果显示,假手术组海马区MMP-2蛋白低水平表达,各时间点差异无统计学意义(P0.05);HIBD组及EPO组的MMP-2蛋白表达均呈增高趋势,且均在7 d时达高峰,每组各时间点的差异有统计学意义(P均0.05);除6 h外,三组间相同时间点MMP-2蛋白表达水平的差异有统计学意义(P均0.05),且7 d时EPO组与HIBD组的差异也有统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,假手术组MMP-2 mRNA呈增高趋势,但各时间点的差异无统计学意义(P0.05);HIBD组在24 h及7 d呈现双峰,且7 d峰值较24 h峰值高,但各时间点的差异无统计学意义(P0.05);EPO组则逐渐升高,各时间点的差异有统计学意义(P均0.05);在不同时间点,HIBD组及EPO组MMP-2mRNA均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P均0.05);24 h时EPO组低于HIBD组,而7 d时则高于HIBD组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 EPO在HIBD恢复期上调MMP-2的表达,这可能是其对HIBD的神经保护作用机制之一。     

促红细胞生成素对新生大鼠感染性脑损伤后神经细胞增生与凋亡的影响

目的 研究促红细胞生成素（EPO）对新生大鼠感染性脑损伤后神经细胞增生与凋亡的影响。方法 2 日龄新生大鼠26 只随机分为3 组：对照组（腹腔注入等量生理盐水）、脂多糖（LPS）组（腹腔注入0.6 mg/kg LPS）及EPO 干预组（腹腔注入0.6 mg/kg LPS + 5 000 U/kg EPO）,各组均连续注药5 d,同时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）（50 mg/kg,Qd,连续5 d）,最后1 次用药24 h 后采用免疫组化方法检测脑组织海马齿状回颗粒下层BrdU 和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达情况。结果 EPO 干预组、LPS组脑组织海马齿状回单位面积内神经细胞数均显著低于对照组（PPP结论 EPO 可促进感染性新生大鼠脑损伤后海马区新生神经细胞的增生并减轻神经细胞的凋亡。     

缺氧缺血后新生大鼠海马组织CAl区脑源性促红细胞生成素的表达

目的 观察缺氧缺血(HI)后新生大鼠海马CAI区脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达,探讨HI后新生大鼠内源性因素激发海马神经发生上调的可能机制.方法 选用144只7日龄SD大鼠,随机分为4组:正常对照组(C组)、单纯缺氧组(H组)、单纯缺血组(Ⅰ组)、缺氧缺血组(HI组),每组又分为1 h、6 h、16 h、1 d、3 d和7 d共6个时间点.分别对其行HE染色和EPO免疫组织化学法CAl区脑源性EFO表达.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 C组各时间点CAI区EPO表达无明显差异(F=1.185 P>0.1),其余各组各时间点差异显著[F(H组)=33.57.F(Ⅰ组)=133.6,F(HI组)=69.75 P.<0.001];HI后16 h,海马CA1区脑源性EPO表达达到较高水平,与该组总体比较差异显著(t=13.08 P<0.001),以后随时间延长逐渐下调;H组、Ⅰ组、Hl组与C组比较差异均有显著意义(q=32.06,23.84,47.12 Pa<0.001).结论 脑源性EPO表达在新生大鼠HI后增加,受低氧影响最明显;EPO表达高峰在缺氧早期,推测低氧、EPO早期高表达可能是参与海马神经发生的内源性冈素之一.     

脑室周围白质软化新生大鼠脑组织ephrin-B3表达及神经细胞凋亡

目的：建立新生大鼠脑室周围白质软化 (periventricular leukomalacia,PVL) 模型,探讨PVL新生大鼠脑组织ephrin-B3 mRNA表达以及神经元凋亡的变化及意义。方法：采用2日龄SD清洁级大鼠,通过结扎右侧颈总动脉并吸入6%氧气4 h建立PVL模型,分别于模型后0,8,24,48,72 h、7 d处死,同时设立相应假手术对照组。脑组织苏木精-伊红染色检测病理变化;DAPI染色检测细胞凋亡,荧光定量RT-PCR检测ephrin-B3 mRNA表达。结果：新生大鼠PVL后,脑白质ephrin-B3 mRNA在缺氧缺血后表达增加,与对照组比较,在8,24,48,72 h和7 d有统计学意义（P<0.05）,脑组织细胞凋亡在缺氧缺血后明显增加,与对照组相比,在8,24,48,72 h有统计学意义（P<0.05）。结论：新生大鼠PVL时,脑白质ephrin-B3 mRNA表达显著增加,脑组织细胞凋亡明显增加,ephrin-B3可能是神经细胞凋亡的重要因素之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（4）：321-323］     

促红细胞生成素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠水通道蛋白4表达的影响

目的探讨不同剂量促红细胞生成素(EPO)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织水通道蛋白4(AQP-4)表达的影响。方法选取7日龄SD大鼠100只。随机分为假手术组、对照组、EPO低剂量组、EPO中剂量组、EPO高剂量组,每组20只。假手术组仅分离右颈总动脉,不作缺氧缺血(HI)处理,也不给予药物。EPO低剂量组、EPO中剂量组、EPO高剂量组和对照组分离右颈总动脉并结扎,后置于80 mL·L-1氧气和920 mL·L-1氮气2 h制备新生大鼠HIBD模型。EPO低剂量组、EPO中剂量组、EPO高剂量组在HI后0 h、1 d、3 d、5 d分别腹腔注射EPO 1 000 IU.kg-1、2 500 IU.kg-1、5 000 IU.kg-1,对照组和假手术组腹腔注射等体积9 g.L-1盐水。每组随机取10只于HI后3 d、7 d处死。应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术检测其脑组织AQP-4表达的变化。结果 1.与对照组3 d时[(42.60±4.82)个]比较,假手术组、EPO低剂量组、EPO中剂量组、EPO高剂量组AQP-4阳性细胞数明显少[(26.60±4.67)个、(36.60±3.97)个、(20.80±7.90)个、(23.00±9.60)个],EPO中剂量和EPO高剂量组较EPO低剂量组明显少,差异均有统计学意义(Pa<0.05),假手术组、EPO中剂量组、EPO高剂量组组间比较差异均无统计学意义(Pa>0.05);2.与对照组7 d时[(46.20±5.07)个]比较,假手术组、EPO中剂量组、EPO高剂量组AQP-4阳性细胞数仍明显减少[(16.80±4.65)个、(33.20±4.38)个、(25.60±7.63)个],EPO高剂量组较EPO中剂量组、EPO中剂量组较EPO低剂量组少,差异均有统计学意义(Pa<0.05)。EPO低剂量组、EPO中剂量组、EPO高剂量组HE染色显示脑组织的病理损伤程度低于对照组。结论EPO可下调HIBD新生大鼠AQP-4表达,从而有效减轻脑水肿,发挥神经保护作用,且呈剂量依赖效应,中剂量、高剂量作用强于低剂量。     

促红细胞生成素对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1表达影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1（Drp-1）表达的影响。方法 81只SD大鼠,分为假手术组、对照组和EPO组,每组各27只。EPO组、对照组采用单侧输尿管结扎并剪断建立肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎和剪断;EPO组予EPO皮下注射;假手术组和对照组给予等量生理盐水皮下注射。各组于术后7、14和21 d取动脉血分离血清检测血肌酐和尿素氮水平。取梗阻侧肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,观察肾脏病理学变化。用免疫组化方法检测肾组织Drp-1的表达。结果 ①EPO组各时点血清肌酐和尿素氮水平显著低于对照组（P<0.01）,但高于假手术组（P<0.05）。②EPO组各时点肾组织病理改变较对照组明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均低于对照组（P均<0.05）,但高于假手术组（P<0.05）。③EPO组肾组织的Drp-1表达显著低于对照组（P<0.05）,但高于假手术组（P<0.05）。结论 Drp-1在大鼠肾间质纤维化肾组织中表达增加,参与肾脏纤维化过程;EPO可以通过抑制Drp-1表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。     

吸入高浓度氧对大鼠肺泡发育过程促红细胞生成素受体的影响

目的 探讨大鼠肺泡发育阶段促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)的动态变化以及吸入高浓度氧对EPOR的影响.方法 将48只新生Wistar大鼠生后12 h内随机分为空气组和高氧组.高氧组将动物置于自制密闭氧箱中,持续输入氧气,FiO2=0.85±0.02.在实验3,7和14 d每组随机选取8只处死,采集标本.采用HE染色观察肺组织病理改变,放射状肺泡计数评价肺泡化程度,免疫组织化学法检测肺组织血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)及EPOR表达,PT-PCR及Western blot法检测肺组织EPOR基因和蛋白表达.结果 高氧组3 d时肺毛细血管扩张、充血,7 d时肺泡体积增大、数量减少,14 d时肺泡数量及毛细血管进一步减少.空气组RAC值随日龄增长而增加,与空气组相比,高氧组7 d时RAC值降低[(6.85±104):(7.33±1.0),P＜0.01],差异在14 d更显著[(6.20±1.58):(9.07±0.69),P＜0.001].空气组PECAM-1表达随日龄增长逐渐增强,高氧组7 d和14 d PECAM-1表达较空气组明显减弱[(15.14±1.51):(31.47±2.43),(11.04±1.76):(41.41±3.83),P＜0.001].空气组EPOR染色在生后3 d最强,随日龄增长逐渐减弱,与空气组相比,高氧组各时点EPOR表达均明显减弱[(1.62±0.04):(1.82±0.06),P＜0.05;(0.48±0.01):(1.10±0.07),(0.39±0.04):(0.87±0.03),P＜0.001].空气组EPOR mRNA表达在生后3 d最强,高氧组各时点EPOR mRNA表达较空气组明显减弱[(0.87±0.07):(1.1±0.17),(0.18±0.07):(0.36±0.08),P＜0.01;(0.14±0.05):(0.36±0.09),P＜0.001].结论 EPOR可能在正常肺泡发育过程发挥调节作用,吸入高浓度氧导致的肺泡及血管发育阻滞可能与EPOR及PECAM-1蛋白表达减弱有关.

Abstract：

Objective Oxygen toxicity is thought to be a major contributing factor in the pathogenesis ofbronchopulmonary dysplasia (BPD). Animal experiments reveal that erythropoietin (EPO) may have protective effects against hyperoxic lung injury, but the mechanisms remain unknown.The aim of this study was to evaluate effects of hyperoxia on erythropoietin receptor expression in lung development of neonatal rats.Methods Several litters of Wistar pups were pooled together within 12 hours after birth and randomly divided into two groups (n = 24 in each ): air-exposed control group and hyperoxia-exposed group. In hyperoxia-exposed group, the rats were exposed to 85% oxygen. Pups ( n = 8 ) from each group were sacrificed on postnatal days 3, 7, and 14.The pulmonary histologcal and morphometric changes were observed after hematoxylin-eosin (HE) staining under light microscope. Radical alveolar counts ( RAC )were compared between the two groups to evaluate the differences of aveolarization. Expressions of platelet endothelial cell adhesion molecule-1 ( PECAM-1 ) and erythropoietin receptor (EPOR) in lung tissue were measured by immunohistochemistry.Expressions of EPOR mRNA and EPOR protein were measured by RTPCR and Western blotting. Results In hyperoxia-exposed group, there were a few inflammatory cells infiltration in interstitium on day 3 and inflammatory response worsened on day 7. Alveolar and capillary hypoplasia and interstitial fibrosis were evident on day 14.RAC increased in air-exposed control group along with the age in days. RAC decreased from day 7 in hyperoxia-exposed group compared with air-exposed control group [( 6.85 ± 1.04 ) vs.( 7.33 ± 1.0 ), P ＜ 0.01], which was more evident on day 14 [( 6.20 ±1.58 ) vs.(9.07 ± 0.69 ), P ＜ 0.001].Expression of PECAM-1 protein increased in air-exposed control group along with the age in days.But in hyperoxia-exposed group, it decreased on day 7 and 14 [( 15.14 ±1.51) vs.(31.47 ±2.43),(11.04 ± 1.76)vs.(41.41 ±3.83),P＜0.001]compared with air-exposed control group.Expression of EPOR on day 3 in air-exposed control group was the strongest and weakened gradually with the increase of postnatal days.Expression of EPOR in hyperoxia-exposed group decreased on day 3 and became more evident on day 7 and day 14 compared with air-exposed control group [( 1.62 ±0.04) vs.(1.82±0.06), P＜0.05;(0.48 ±0.01)vs.(1.10±0.07), (0.39±0.04) vs.(0.87±0.03 ) ,P ＜0.001].Expression of EPOR mRNA on day 3 in air-exposed control group was the strongest and was decreased significantly in hyperoxia-exposed group compared with air-exposed control group at all time points [(0.87±0.07)vs.(1.1±0.17),(0.18±0.07)vs.(0.36±0.08),P＜0.01;(0.14±0.05)vs.(0.36 ± 0.09 ), P ＜ 0.001]. Conclusions EPOR may participate in the modulation of normal lung development.Depressed expression of EPOR and PECAM-1 may be involved in the pathogenesis of alveolar and capillary hypoplasia induced by hyperoxia.     

促红细胞生成素对高氧肺损伤炎症反应病理过程的影响

目的 氧化应激损伤是导致新生儿支气管肺发育不良的一个重要原因.促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)具有抗氧化、抗感染、抗凋亡及促进血管生成等多种作用.本研究旨在探讨EPO在新生鼠高氧肺损伤炎症反应病理过程中的作用机制.方法 将新生大鼠生后12 h内随机分组:Ⅰ.空气对照,Ⅱ.空气+重组人促红细胞生成素(human recombinant erythropoietin,rhEPO),Ⅲ.高氧对照,Ⅳ.高氧+小EP0.Ⅲ、Ⅳ组暴露高浓度氧中(FiO285%),Ⅱ、Ⅳ组于生后0 d和2 d给rhEPO 1200 U/kg背部皮下注射,Ⅰ、Ⅲ组给等量生理盐水注射.在生后第3,7和14天采集标本.采用血细胞分析仪检测血红蛋白、红细胞压积和血小板;生化法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavage fluid,BALF)总蛋白及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量;RT-PCR法检测巨噬细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、中性粒细胞趋化因子-1(cytokine-inducedneutrophil chemoattractant-1,CINC-1)mRNA表达.结果 Ⅲ组3 d肺组织可见炎症反应,7 d为著,14 d肺泡结构简化,间质呈不同程度纤维化.Ⅳ组7 d炎性渗出和浸润较Ⅲ组减轻,14 d肺泡发育改善,生存率提高,且未发生红细胞和血小板增多.Ⅳ组各时点BALF总蛋白及MPO含量较Ⅲ组明显降低[(0.41±0.04)g/L vs.(0.48+0.06)g/L,P<0.05;(0.53±0.06)g/L vs.(0.74±0.08)g/L,P<0.001;(0.49±0.05)g/L vg,(0.56±0.09)g/L,P<0.05],[(48.2±3.9)单位/L vs.(55.8±6.8)单位/L,P<0.05;(56.8±6.1)单位/L v8.(71.6±7.0)单位/L,P<0.001;(53.1±7.1)单位/Lvs.(61.4±6.3)单位/L,P<0.05].与I组相比,MCP-1 mRNA和CINC.I mRNA在Ⅲ组表达增强,7 d达峰值[(0.90±0.38)、得.(0.20±0.04),P<0.001;(1.15±0.20)、rs.(0.25±o.05),P<0.001],Ⅳ组MCP-1 mRNA和CINC-1 mRNA表达较Ⅲ组减弱[(0.22±0.04)vs.(0.29±0.05),P<0.01;(0.63±0.06)vs.(0.90±0.38)P<0.05;(0.29±0.04)vs.(0.44±0.05),P<0.001],[(0.30±0.06)vs.(0.48±0.06),P<0.01;(0.73±0.07)vs.(1.15±0.20),P<0.001;(0.44±0.07)vs.(0.54±0.09);P<0.01],二者变化与BALF MPO含量呈正相关(r=0.391,P<0.05;r=0.701,P<0.01;r=0.600,P<0.01;r=0.471,P<0.01;r=0.789,P<0.01;r=0.588,P<0.01).结论 rhEPO可减轻高氧肺损伤肺组织炎细胞浸润、微血管和内皮细胞损伤,提高动物生存率;rhEPO可抑制高氧肺损伤炎症反应过程MCP-1和CINC-1 mRNA表达,提示rhEPO抗炎作用机制与MCP-1和CINC-1 mRNA有关.     

促红细胞生成素对窒息新生大鼠心肌细胞凋亡及内质网应激相关蛋白的影响

目的：研究促红细胞生成素（EPO）对窒息新生大鼠心肌细胞凋亡及内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和C/EBP同源蛋白（CHOP）的影响。方法：120只新生7日龄Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组、窒息组和EPO组,每组40只。制备新生鼠常压窒息模型;EPO组于造模后立即给予rhEPO 500 U/mL（10 mL/kg）腹腔注射,其余两组接受同剂量的生理盐水。各组在造模完成后2 h、6 h、12 h、24 h和48 h分别取8只大鼠采集心脏血及心肌组织,测定血清心肌酶肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）水平,检测心肌细胞凋亡情况及心肌组织GRP78、CHOP蛋白的表达。结果：与假手术组和EPO组相比,窒息组各时间点血清心肌酶CK和LDH升高,凋亡细胞增多,GRP78、CHOP表达上调（P<0.01）;上述各指标在EPO组的表达水平亦高于假手术组（P<0.01）;窒息后24 h心肌组织CHOP蛋白与心肌细胞凋亡指数AI呈正相关（r=0.942,P<0.01）。结论：EPO可能通过调节内质网应激相关细胞因子GRP78、CHOP,减少心肌细胞凋亡从而发挥对新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的保护作用。     

促红细胞生成素对早产儿脑损伤神经行为的影响

目的 探讨重组人类基因促红细胞生成素(EPO)对早产儿脑损伤保护作用及临床疗效.方法 将42例发生脑室周围白质软化(PVL)脑损伤的早产儿(男25例,女17例)随机分为EPO治疗组(22例)和常规治疗组(20例),治疗组于生后3～5 d予以EPO治疗4周.所有患儿于纠正胎龄40周进行新生儿行为神经检测(NBNA),随诊至6个月,定期行头颅影响学检查、脑电图检查,3、6个月时分别进行发育商(DQ)测定.结果 治疗组患儿NBNA评分及DQ评估均明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05).结论 EPO能促进神经系统损伤修复,对脑损伤的早产儿神经行为发育有促进作用,可改善预后.

Abstract：

Objective To study the clinical curative and protective effects of erythropoietin (EPO)on treating the premature infants with brain damage. Methods Forty-two premature infants with periventricular leukomalacia were divided into the EPO treatment group (n = 22) and control group (n = 20). From postnatal day 3 to 5 ,the EPO treatment group received EPO for 4 weeks. Neonatal behavioral neurological assessments (NBNA) for all infants were performed separately in 40 weeks after correcting gestational age. All infants were followed up until 6 month after birth, MRI and electroencephalogram were performed. The developmental quotient(DQ) was evaluated at the age of 3 and 6 months. Results The NBNA scores of EPO group in 40 weeks and DQ were significantly higher than those of control group (P ＜ 0.05). Conclusion EPO can rehabilitate the damaged neurological system of premature infants with brain damage. Early EPO therapy can promote development of the neurobehavioral and improve prognosis.     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经干细胞的影响

目的探讨外源性促红细胞生成素(Epo)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经干细胞的影响以及Epo的神经保护机制。方法72只新生7日龄Wistar大鼠随机分为对照组、HIBD组和干预组,每组24只。结扎大鼠右侧颈总动脉和8%低氧暴露2h制备新生大鼠HIBD模型。对照组仅游离右侧颈总动脉,不予结扎和缺氧处理。干预组大鼠缺氧缺血后立即腹腔注射重组人促红细胞生成素(rh-Epo)5000IU/kg,每天1次,连用3d。HIBD组大鼠缺氧缺血后连续腹腔注射等量生理盐水3d。每组随机取8只分别于术后4、7、14d处死。应用免疫组化方法和计算机图像分析技术检测不同时点海马齿状回巢蛋白(nestin)标记阳性细胞的变化。结果各时点HIBD组nestin阳性细胞数较对照组增加(P<0.05);各时点干预组nestin阳性细胞较对照组和HIBD组均增加(P<0.05)。3组大鼠海马齿状回区nestin阳性细胞数均于术后7d达高峰。结论早期给予rh-Epo可促使新生鼠HIBD后海马齿状回区nestin表达增加,促进神经干细胞的增殖再生,在HIBD后神经再生、修复中发挥一定的保护作用。     

慢性病贫血患儿肿瘤坏死因子α、白介素6与红细胞生成素的关系

目的　探讨小儿慢性病贫血 (ACD)血清红细胞生成素 (EPO)水平与肿瘤坏死因子α(TNF α)、白介素 6 (IL 6 )的关系以及体外重组TNF α(rhTNF α)对EPO产生的影响。方法　住院患儿6 0例 ,其中ACD组 2 0例 ,慢性病无贫血组 (NA) 19例 ,缺铁性贫血组 (IDA) 2 1例。TNF α、IL 6采用ELISA方法检测 ,EPO应用化学发光法测定 ,对人肝癌细胞株HepG2进行体外培养 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)半定量方法 ,探讨rhTNF α对EPO生成的影响。结果　三组患儿血清EPO水平差异有显著性 (F =4 4 6 8,P <0 0 1) ,ACD患儿血清EPO水平高于NA患儿 ,但在相同Hb值时 ,ACD患儿EPO低于IDA患儿。三组患儿血清TNF α水平差异有显著性 (F =2 5 12 ,P <0 0 1) ,血清TNF α水平 ,ACD组高于NA组和IDA组 ;三组患儿血清IL 6水平差异有显著性 (F =13 2 6 ,P <0 0 1) ,血清IL 6水平ACD组高于NA组和IDA组。ACD患儿血清TNF α及血清IL 6与EPO无相关性 (r=- 0 35 ,P >0 0 5 ;r=- 0 0 5 ,P >0 0 5 )。体外实验中 ,rhTNF α抑制低氧状态下EPOmRNA的表达 ,且随着rhTNF α剂量的增大而对EPO抑制作用增强 (F =6 4 2 0 ,P <0 0 1)。结论　ACD患儿EPO虽存在代偿性增高但代偿生成不足 ,是小儿ACD的发病原因之一 ;血清TNF α、IL 6与EPO     

内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白及Caspase-12在癫(癎)性脑损伤大鼠中的表达及促红细胞生成素对其影响

目的 在建立氯化锂-毛果芸香碱癫(痫)持续状态模型的基础上,观察内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-12的表达变化,探讨促红细胞生成素(EPO)产生脑保护作用的可能机制.方法 21 ～30 d SD大鼠96只随机分为对照组(n=32)、氯化锂-毛果芸香碱癫(癎)组(n=32)及EPO干预组(n=32),每组按6h、24 h、48 h、72 h时间点又分为4个亚组,每亚组8只.观察各组大鼠的行为学变化,用免疫组织化学法检测各时间点各组大鼠CHOP及Caspase-12的表达水平.结果 氯化锂-毛果芸香碱癫(痫)组大鼠海马区CHOP的表达水平明显增加,6h开始增加,24h达到高峰,后逐渐下降,至72 h仍高于对照组,与对照组同一时间点比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05);氯化锂-毛果芸香碱癫(痫)组大鼠海马区Caspase-12的表达水平在6h开始增加,48 h达到高峰,72 h开始下降,但仍高于对照组,与对照组同一时间点比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).EPO干预组海马区CHOP及Caspase-12的表达较同一时间点氯化锂-毛果芸香碱癫(癎)组均下降,差异有统计学意义(Pa＜0.05).结论 CHOP和Capase - 12在癫(癎)发作后表达明显增加,提示内质网应激机制在癫(癎)性脑损伤的发生发展中具有重要作用;EPO可能通过内质网应激机制产生脑保护作用.     

Interleukin-3, interleukin-6, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and erythropoietin cord blood levels of preterm and term neonates

The cascade of known haematopoietic growth factors controlling granulomonopoiesis and erythropoiesis includes interleukin-3 (IL-3), interleukin-6 (IL-6), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), and erythropoietin (EPO). Elevated endogenous IL-3 and IL-6 cord blood levels in infection-free premature and mature neonates may reflect their possible role for expansion of haematopoietic progenitor cells, granulocytes and monocytes. Within the erythroid lineage a synergistic action of IL-3, IL-6 and EPO can be assumed. To identify the regulatory role in fetal haematopoietic expansion cord blood plasma levels of these haematopoietic growth factors were assessed in 19 premature and 20 mature infants using commercial enzyme-linked immunosorbent assay and enzyme-amplified sensitivity immuno assay test kits. Peripheral blood IL-3, GM-CSF and EPO were studied in 5 and 10 premature infants respectively. Compared with cord blood levels we found a decline in EPO levels but no decrease of IL-3 and GM-CSF during the 1st month of life. We conclude that postnatal decrease in plasma burst-promoting activity levels in preterm infants is mainly explained by low postnatal EPO levels.     

脐血单个核细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠促红细胞生成素蛋白及少突胶质祖细胞的影响

目的 探讨脐血单个核细胞(UCBMC)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑促红细胞生成素(EPO)蛋白及少突胶质祖细胞的影响。方法 7 日龄健康 Sprague-Dawley 新生大鼠40只随机分为正常对照组、HI组、UCBMC对照组和HI+UCBMC组,每组10只。采用经典Rice法制成HIBD模型,造模24 h后,正常对照组和HI组经侧脑室注入2 μL PBS,UCBMC对照组和HI+UCBMC组经侧脑室注入3×106 UCBMC。移植后7 d,采用EPO/DAPI与NG2/DAPI免疫荧光双标法观察损伤侧室管膜下区(SVZ)EPO蛋白及少突胶质祖细胞的变化,并进行相关性分析。结果 移植后7 d,HI+UCBMC组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于UCBMC对照组(均P<0.05)、HI组及正常对照组(均P<0.01),UCBMC对照组NG2+DAPI+及EPO+DAPI+细胞数均显著高于正常对照组和HI组(均P<0.01),正常对照组NG2+DAPI+细胞数显著高于HI组(P<0.01)。HI+UCBMC组NG2+DAPI+细胞数与EPO+DAPI+细胞数呈正相关(r=0.898)及直线回归(β=1.4604,P<0.01)。结论 UCBMC可促进HIBD新生大鼠少突胶质祖细胞的表达,其机制与EPO蛋白的表达增加相关,从而修复脑白质损伤。