ASE-HPLC法快速测定决明子中大黄酚和橙黄决明素

摘 要 目的：建立快速溶剂萃取（ASE）及HPLC测定决明子中大黄酚和橙黄决明素的分析方法。方法: 利用正交试验对ASE350快速溶剂萃取系统进行提取方法的研究,采用HPLC法同时测定决明子中大黄酚和橙黄决明素的含量。色谱柱为ACE Excel C18 PFP柱(75 mm×2.1 mm,2.5 μm),流动相为乙腈 0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速为0.4 ml·min^-1,检测波长为284 nm,柱温为40℃。结果: 采用甲醇为萃取溶剂、萃取温度为120℃、静态萃取时间为5 min以及循环萃取3次的方法最优,可以很好地提取决明子中大黄酚和橙黄决明素,耗时仅为药典提取方法的1/9。大黄酚和橙黄决明素线性范围为0.73~58.57 μg·ml^-1(r=0.999 7)和1.09~87.29 μg·ml^-1（r=0.999 6),平均回收率分别为102.7%（RSD=0.8%）和98.2%（RSD=1.5%）。 结论:该方法能简便、快速、准确的测定决明子中的大黄酚和橙黄决明素。     

高效液相色谱法测定决明子4种成分含量

目的建立同时测定决明子中4种成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为迪马Dimonsil柱(150 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液(49∶7∶44,V/V/V),等度洗脱,柱温为30℃,检测波长为222 nm,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL。结果进样量线性范围橙黄决明素为0.02464~0.2464μg(r=0.99999),大黄素为0.0174~0.174μg(r=0.99999),大黄酚为0.02956~0.2956μg(r=0.99999),大黄素甲醚为0.016~0.16μg(r=0.99998);平均回收率橙黄决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别为99.41%,99.51%,99.48%和99.24%,RSD分别为0.58%,0.82%,0.95%和0.90%(n=6)。结论该方法可用于决明子质量的综合评价。     

决明降脂灵咀嚼片的质量标准及微生物限度检查

目的建立决明降脂灵咀嚼片的质量标准及微生物限度检查方法。方法采用TLC法,对决明降脂灵咀嚼片中的决明子药材进行定性鉴别;采用《中国药典》2015年版微生物限度检查法对决明降脂灵咀嚼片进行验证实验,并对3批样品进行微生物限度检查;建立HPLC法同时测定决明降脂灵咀嚼片中决明子的有效成分大黄酚和橙黄决明素。色谱柱为Welchrom C18(200mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈~(-1)mL·L~(-1)磷酸溶液,梯度洗脱(0～15min 40∶60,15～30min 40∶60～90∶10,30～40min 90∶10,40～60min 90∶10～40∶60),检测波长为284nm,进样量为10μL,流速为1.0mL·min~(-1),柱温为30℃。结果决明子药材的TLC特征斑点清晰,分离度好,阴性无干扰,专属性较好。3批决明降脂灵咀嚼片微生物计数法适用性实验中,需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数各菌的回收率均在50%～200%范围内,且均未检出大肠埃希菌,验证组可检出大肠埃希菌,证明该验证方法可行。在选定的色谱条件下,大黄酚和橙黄决明素具有良好的分离度和稳定性;大黄酚在0.204～10.200μg·mL~(-1)范围内线性关系良好,回归方程为y_1=86 740x_1+2 179.8,r_1=0.999 9,平均加样回收率为100.15%,RSD值为2.51%(n=6);橙黄决明素在2～80μg·mL~(-1)范围内线性关系良好,回归方程为y_2=77 682x_2+17 104,r_2=1.000 0,平均加样回收率为99.00%,RSD值为1.17%(n=6)。结论实验所采用的定性、定量及微生物限度检查方法简便,专属性强,结果准确可靠,可作为决明降脂灵咀嚼片的质量控制标准及微生物限度检查方法。     

泽菊降脂片中橙黄决明素和大黄酚的定性鉴别和含量测定

摘 要 目的：建立泽菊降脂片中橙黄决明素和大黄酚的定性鉴别与含量测定方法。 方法: 采用TLC法进行定性鉴别,并采用HPLC法进行含量测定。色谱柱为Wondasil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm ),流动相为乙腈 0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0 ml?min^-1,检测波长为286 nm,柱温为30 ℃,进样量为10 μl。结果: 橙黄决明素和大黄酚的TLC色谱斑点清晰,分离度良好,阴性无干扰;HPLC色谱显示橙黄决明素质量浓度在1.03~25.72μg?mL^-1 (r=0.999 9)、大黄酚质量浓度在0.48~11.92μg?mL^-1(r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.21%、98.85%,RSD分别为0.70%、0.73%(n=9)。结论:本方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于泽菊降脂片中橙黄决明素和大黄酚的定性鉴别与含量测定。     

HPLC测定牛黄解毒片中黄芩苷与大黄酚的含量

目的利用梯度洗脱法,建立一种简便测定牛黄解毒片中黄芩苷和大黄酚含量的高效液相方法。方法色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-CBC8柱（4.6×150mm,5μm）,流动相为乙腈-磷酸缓冲溶液（磷酸0.24%,磷酸氢二钾6.31mmol·L^-1）梯度洗脱,检测波长256nm;流速1.0mL·min^-1。黄芩苷保留时间为4.417min,大黄酚保留时间为14.934min。结果黄芩苷进样量在0.020～1.000μg时呈良好的线性关系（r=0.99987）,大黄酚进样量在0.013～0.650μg时呈良好的线性关系（r=0.99982）;加样回收率分别为99.13%（黄芩苷）,99.33%（大黄酚）,RSD分别为0.59%,0.98%。结论本方法操作简便,灵敏度高,重现性好,分离效果理想。     

大黄虫丸质量标准的提高

目的提高大黄虫丸质量标准。方法通过TLC对大黄虫丸中甘草进行鉴别;采用HPLC法同时测定大黄虫丸中大黄素和大黄酚的含量。结果TLC色谱中均能检出甘草;大黄素在0.0196~0.2352μg范围内呈良好线性关系(r=0.9999);大黄酚在0.0424~1.06μg范围内呈良好线性关系(r=0.9999);平均回收率大黄素为97.5%,RSD=1.48%,大黄酚为101.5%,RSD=1.57%。结论本法准确可靠,简便迅速,可用于大黄虫丸的质量控制。     

高效液相色谱法分析市售决明子药材的蒽醌化合物

目的：建立并优化高效液相色谱（HPLC）法对决明子药材中6种蒽醌化合物的分析方法,对市售决明子（包括伪品）进行含量分析,为决明子的质量控制提供方法。方法：采用HPLC法对决明子中的橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进行分析。比较了不同产地、不同品种、不同贮藏时间决明子中蒽醌含量的差异。结果：钝叶决明、小决明、茳芒决明蒽醌的含量差异明显,不同产地决明子（钝叶决明）在橙黄决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量上存在差异,其中大黄酚的含量差异较大。其中符合《中国药典》2015年版一部决明子项对于大黄酚的含量要求的只有50%;不同贮藏时间是大黄酚含量差异较大的原因。结论：该方法准确、简便、重现性好,可作为决明子质量控制的方法;决明子采收和产地加工对于决明子大黄酚的含量至关重要。     

一测多评法测定决明子中蒽醌苷元类和萘并吡喃酮苷类有效成分含量

目的建立决明子中蒽醌苷元类和萘并吡喃酮苷类有效成分含量的一测多评法。方法采用Sunfire C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),柱温30℃,乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长278 nm和284 nm,测定橙黄决明素与红镰霉素龙胆二糖苷、大黄酚和大黄素甲醚间的相对校正因子,并考察其重现性,比较计算值与测得值的差异。结果红镰霉素龙胆二糖苷、橙黄决明素、大黄酚和大黄素甲醚分别在:0.0503~1.5078、0.3197~9.5899、0.5070~15.2108、0.4027~12.0814μg范围呈良好线性;回归方程分别为:Y=4.95X+2.01(R2=0.9998)、Y=1.03X+0.03(R2=0.9999)、Y=3.98X-0.12(R2=0.9993)、Y=4.81X+0.26(R2=0.9996);用一测多评法对6批决明子中大红镰霉素龙胆二糖苷、大黄酚和大黄素甲醚进行测定,与外标法实测值基本一致。结论该方法可靠,结果准确,可用于决明子的质量控制。     

高效液相色谱法测定退障眼膏中4种活性成分的含量

目的建立HPLC法同时测定退障眼膏中的红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷、橙黄决明素-6-O-葡萄糖苷和羌活醇的含量。方法采用Diamonsil C18色谱柱,流动相A:乙腈,流动相B:0.5%冰醋酸溶液,梯度洗脱;流速:0.9 m L·min-1;柱温:30℃,进样量10μL;红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷、橙黄决明素-6-O-葡萄糖苷的检测波长为278 nm,羌活醇的检测波长为310 nm。结果红镰霉素-6-O-β-龙胆二糖苷、决明子苷、橙黄决明素-6-O-葡萄糖苷和羌活醇分别在4.85~97.00μg·m L~(-1)(r=0.9993)、3.92~78.40μg·m L~(-1)(r=0.9999)、5.15~103.00μg·m L~(-1)(r=0.9999)、6.47~129.40μg·m L~(-1)(r=0.9997)与峰面积具有较好的线性关系,平均加样回收率和相应的RSD分别为98.8%(1.7%)、97.4%(1.2%)、98.4%(0.94%)、99.2%(1.4%)。结论该方法可同时测定退障眼膏中多组分,操作简便、准确,可作为退障眼膏的质量控制方法。     

LC-MS/MS法同时测定芪雪浸膏剂中9种成分的含量

目的建立同时测定芪雪浸膏剂中大黄素、毛蕊异黄酮、大黄酸、槲皮素、杨梅素、虎杖苷、金丝桃苷、大黄素甲醚、黄芪甲苷成分的LC-MS/MS方法。方法采用液质联用方法测定;Thermo Hypersil GOLD PFP C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱:0~1 min,25%B;1~5.5 min,25%B~90%B;5.5~9 min,90%B;9~9.5 min,90%B~25%B;9.5~13 min,25%B;流速:0.2 mL·min~(-1);进样量20μL;柱温:30℃;以电喷雾离子源(ESI)正负离子模式将样品离子化,多反应监测(MRM)模式进行测定;喷雾电压(+)4000/(-)3000 V;源内温度200℃;毛细管温度270℃;鞘气(N2)压力20 Arb,辅助气(N2)压力为5 Arb。结果大黄素、毛蕊异黄酮、大黄酸、槲皮素、杨梅素、虎杖苷、金丝桃苷、大黄素甲醚、黄芪甲苷浓度分别在19.88~1988 ng·mL~(-1)(r=0.9990)、20.92~2092 ng·mL~(-1)(r=0.9995)、19.99~1999.4ng·mL~(-1)(r=0.9987)、40.56~4056 ng·mL~(-1)(r=0.9983)、39.68~3968 ng·mL~(-1)(r=0.9974)、20.72~2072 ng·mL~(-1)(r=0.9999)、19.64~1964 ng·mL~(-1)(r=0.9993)、20.04~2004 ng·mL~(-1)(r=0.9998)、20.80~2080 ng·mL~(-1)(r=0.9988)内与峰面积呈良好的线性关系,精密度、稳定性、重复性和加样回收结果均符合方法学测定要求。结论利用建立的方法可同时测定芪雪浸膏剂中9种成分的含量,操作简单、重复性好、准确可靠,能为芪雪浸膏剂的质量控制提供依据。     

十味疏风通窍颗粒的质量标准研究

目的建立十味疏风通窍颗粒的质量标准。方法采用TLC法对颗粒中黄芪、甘草进行定性鉴别,并用HPLC-ELSD法测定颗粒中黄芪甲苷的含量。结果在TLC色谱中均能检测出黄芪甲苷和甘草,阴性无干扰。黄芪甲苷浓度范围在60.06μg·m L^-1~300.30μg·m L^-1之间呈良好的线性关系（R=0.9999）。平均加样回收率为99.44%,RSD为1.50%（n=6）。结论该方法专属性强,灵敏度高,重复性好,可用于十味疏风通窍颗粒的质量标准控制。     

反相高效液相色谱法测定退黄合剂中黄芩苷的含量

目的建立反相高效液相色谱法测定退黄合剂中黄芩苷的含量。方法采用Luna 5μm C18（2）110A（250×4.60mm,5micron）色谱柱;流动相：0.3%磷酸溶液-甲醇（52∶48）;流速：1.0m L·min^-1;检测波长为277nm;进样量10μL。结果黄芩苷浓度在17.74μg·m L^-1~88.68μg·m L^-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999;黄芩苷平均回收率为99.7%,RSD为0.45%（n=9）。结论本方法简便、准确、专属性强,可用于测定退黄合剂中黄芩苷的含量。     

HPLC法测定酒石酸唑吡坦口腔崩解片的含量

目的建立酒石酸唑吡坦口腔崩解片含量测定的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为AlltimaC8柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1mol·L-1醋酸铵溶液(60∶40);流速为1.0mL·min-1;检测波长310nm。结果线性范围为20～200μg·mL-1,r=0.9999,平均回收率为99.92%,RSD=0.32%(n=15)。结论本法灵敏度高,重现性好,结果准确、可靠。     

高效液相法同时测定复方二氯醋酸二异丙胺注射液两组分的含量

目的建立了用HPLC测定复方二氯醋酸二异丙胺注射浪中二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠两种组分的含量。方法色谱柱为GracesmartRP18柱（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为缓冲液（磷酸二氢钠15．6g,加水900mL使溶解,加乙腈100mL,加10％四丁基氢氧化铵50mL,混匀,用稀磷酸或1mol·L^-1氢氧化钠溶液调节pH值至6．5,加四氢呋喃65mL）,流速为1．0mL·min^-1,检测波长为205nm。结果二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠的线性范围分别为20～60μg·mL^-1（r=0．9999）和19～57μg·mL^-1（r=0．9999）,平均回收率和RSD分别为100．6％。0．37％和101．4％,0．90％。结论该方法简便、准确、快速,能消除干扰,可用于测定复方二氯醋酸二异丙胺注射液中二氯醋酸二异丙胺和葡萄糖酸钠的含量。     

HPLC法同时测定宣木瓜中五种有机酸和原儿茶酸的含量

目的建立同时测定宣木瓜药材中五种有机酸(莽草酸、苹果酸、柠檬酸、绿原酸、咖啡酸)和原儿茶酸的含量测定方法。方法采用HPLC法,Phenomenex luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A:0.5%磷酸二氢铵溶液(磷酸调节pH值至2.40);流动相B:乙腈进行梯度洗脱;检测波长:214 nm;流速:1.0 mL·min-1;进样量:10μL;柱温:30℃。结果莽草酸、苹果酸、柠檬酸、绿原酸、咖啡酸五种有机酸和原儿茶酸的线性范围分别为:0.049 5～0.371 g·L-1(r=1.000 0),0.066 3～0.358g·L-1(r=0.988 9),0.067 5～0.352 g·L-1(r=0.995 7),0.009 9～0.080 2 g·L-1(r=0.991 0),0.008 81～0.062 2 g·L-1(r=0.992 1),0.010 1～0.090 2 g·L-1(r=0.993 3),平均加样回收率分别为:97.2%(RSD=2.0%)、99.6%(RSD=4.1%)、101.0%(RSD=1.6%)、98.4%(RSD=2.3%)、99.5%(RSD=2.1%)、101.0%(RSD=1.4%)。结论该实验建立了同时测定木瓜中五种有机酸和原儿茶酸的HPLC检测方法,操作简便,可靠,灵敏度较高,具有较好的重复性和稳定性,可用于宣木瓜药材的质量控制。     

HPLC法测定氨酚比林注射液含量及有关物质

目的建立氨酚比林注射液含量及有关物质测定方法。方法采用Agela Venusil MP-C18色谱柱,紫外与DAD检测器,流动相为乙腈-0.02mol.L-1的醋酸铵（15∶85）,流速为1.0mL·min^-1,检测波长：242nm;有关物质：257nm。结果对乙酰氨基酚在20.008~200.08μg·mL^-1范围内具有良好的线性关系（r=0.9999）,平均回收率为100.8%（n=6）,RSD=0.9%;安替比林在25.432-254.32μg·mL^-1范围内具有良好的线性关系（r=0.9999）平均回收率为100.6%（n=6）,RSD=0.5%。结论本方法专属性强、准确度高、重现性好,可用于氨酚比林注射液质量控制。     

HPLC法测定胃力康颗粒中盐酸小檗碱的含量

目的采用高效液相色谱法测定胃力康颗粒中盐酸小檗碱的含量。方法Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,乙腈∶0.033mol·L-1磷酸溶液(40∶60)为流动相;流速:1.0mL·min-1;检测波长:265nm,柱温:30℃。结果盐酸小檗碱浓度在2.54～12.70μg·mL-1之间线性关系良好,平均回收率97.46%,RSD=2.4%。结论该方法简单、可靠、专属性强,可用于胃力康颗粒的质量控制。     

离子色谱法同时测定乳酸钠林格注射液各组分的含量

目的建立采用抑制型离子色谱法测定乳酸钠林格注射液中氯化钠、氯化钾和氯化钙含量的方法。方法色谱条件为IonPacCS12A色谱柱（4mm×250mm）,淋洗液为25mmol·L^-1甲烷磺酸溶液,流量1．0mL·min^-1;抑制器为CSRS 3004mm self-Regenerating Suppressor;抑制电流74mA;电导检测器。结果氯化钠、氯化钾和氯化钙线性范围分别为2．076～207．6μg·mL^-1（r=0．9999）、2．144-214．4μg·mL^-1（r=0．9999）和3．260～326．0μg·mL^-1（r=0．9999）,回收率分别为100．2％、100．9％和99．4％。结论本方法准确、简便,可用于乳酸钠林格注射液的质量控制。     

HPLC法测定通宣理肺颗粒中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量

目的：建立通宣理肺颗粒中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱含量的高效液相色谱测定方法。方法：色谱柱为SymmetryC18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇-0．1％磷酸（含0．1％三乙胺）（7：93）,流速1．00mL／min,检测波长210nm,柱温30℃,选样量10μL。结果：盐酸麻黄碱在4．46～89．20μg／mL浓度范围内与峰面积线性关系良好,r=0．9995（n=6）,平均回收率为100.7％,RSD为1.6％（n=9）;盐酸伪麻黄碱在2．11-42．20μg／mL浓度范围内与峰面积线性关系良好,r=0．9999（n=6）,平均回收率为100．7％,RSD为1．5％（n=9）。结论：本测定方法简便,结果准确,灵敏度高,重复性好,可用于通宣理肺颗粒的质量控制。     

UPLC法测定养血清脑颗粒中咖啡酸和阿魏酸的含量

目的建立同时测定养血清脑颗粒中咖啡酸和阿魏酸含量的方法。方法采用ACQUITY UPLC系统,使用ACQUITY BEH C18（2.1mm×100mm,1.7μm）色谱柱,流动相为0.1%乙酸水溶液-甲醇,梯度洗脱,流速0.4m L·min^-1,检测波长325nm,柱温为40℃。结果咖啡酸质量浓度在0.484~24.20ng·m L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9996）,平均回收率为101.7%（RSD=1.64%,n=6）;阿魏酸质量浓度在1.102~55.10ng·m L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9997）,平均回收率为100.1%（RSD=1.83%,n=6）。结论建立的方法简便、准确、重复性好,可用于养血清脑颗粒的质量控制,且不同批次养血清脑颗粒中2种酚酸含量基本一致。