全反式维甲酸对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用。方法选择NCI-H446细胞株MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜下观察形态,流式细胞仪进行细胞周期分析。RT-PCR法分析维甲酸受体亚型基因。结果全反式维甲酸诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期。结论全反式维甲酸诱导分化能有效抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞株的增殖,促进凋亡。     

内源性上调pp-GalNAc-T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导NB4白血病细胞分化的机制研究

目的上调PP—GalNAc—T4基因表达抑制全反式维甲酸诱导的NB4白血病细胞分化的机制探讨。方法用全反式维甲酸处理NB4白血病细胞和转染了PP—GalNAc—T4基因的NB4细胞及转染了空载体的NB4细胞,用实时PCR观察这三组细胞的PML—RARα基因表达情况。结果用全反式维甲酸处理转染了pp—GalNAc—T4基因的NB4细胞（NB4-T4细胞株）后,癌蛋白PML—RARα基因表达在NB4一T4细胞株,明显高于未转染PP—GalNAc—T4基因的NB4细胞和转染空载体的NB4细胞（P〈0．01）。结论内源性上调pp—GalNAc—T4后,接着用全反式维甲酸诱导NB4-T4细胞。NB4-T4细胞中PML—RARα基因表达升高,而且NB4-T4细胞没有分化。这些提示,PP—GalNAc—T4可以抑制全反式维甲酸诱导的NB4细胞的分化作用,可能和癌蛋白PML—RARα有关。     

分化调节基因在全反式维甲酸诱导干细胞分化过程中的变化

目的：观察急性早幼粒细胞白血病治疗药物全反式维甲酸（at-RA）诱导P19胚胎癌性干细胞分化过程中分化调节基因的变化。方法：P19细胞来源于小鼠畸胎瘤。未分化P19细胞通过at-RA诱导和悬浮培养4天，聚集形成拟胚体（EB4），继续贴壁培养。于at-RA诱导P19细胞分化过程各时间点，收获细胞总RNA，进行RT-PCR和Real-TimeRT-PCR检测；收获细胞总蛋白用于Western Blot检测；同时收获拟胚体用于免疫组织化学检测。结果：在P19细胞分化过程中，分化调节基因Nanog、Oct4和CoAA mRNA相继迅速降低，继而CoAM、Sox6、MAP2、GFAP的mRNA顺序升高。CoAA基因通过选择性剪切产生两种功能相互拮抗的异构体CoAA和CoAM。在at-RA诱导的P19细胞分化过程中，CoAA和CoAM mRNA的变化为瞬时效应，二者分别于拟胚体形成时达最低点和最高点，并于贴壁培养后又很快回升和下降到分化前水平。mRNA水平变化和蛋白水平变化存在一定差异，但仍可看出CoAM蛋白在EB4显著升高。CoAA主要表达于拟胚体外周细胞，而CoAM则主要表达于拟胚体中央空腔（Cavity）细胞，且中央空腔细胞强烈表达活性Caspase-3。结论：在干细胞分化拟胚体形成时，CoAA基因发生了选择性剪切转换一由CoAA表达为主，转换为CoAM为主要剪切产物。而且在at-RA诱导P19细胞形成的拟胚体中，CoAM的表达部位与凋亡信号通路关键酶Caspase-3一致，二者均表达于拟胚体中央空腔细胞中，而COAA的表达则位于拟胚体的外围。因而，CoAA和CoAM两中异构体在拟胚体中的分布特点及其相拮抗的生理功能，可能参与决定拟胚体中细胞的命运一分化或凋亡。     

前列腺素E2与全反式维甲酸对人急性甲幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖分化的

将人早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４分别与前列腺素Ｅ２，全反式维甲酸单独培养，并与一定逍度比例的上述两物质共同培养，结果发现两在抑制细胞增殖，诱导发化方面具有雷同作用。联合应用可使ＡＴＲＡ的效应浓度比单独应用降低约２０倍。     

全反式维甲酸联合丙戊酸钠诱导白血病细胞分化过程中BRD4表达变化及其作用的研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)联合丙戊酸钠(VPA)诱导HL-60细胞分化过程中BRD4表达调控的分子机制。方法建立ATRA联合VPA诱导白血病细胞株HL-60的分化模型,瑞氏-吉姆萨(Wright-Gimesa)染色观察HL-60细胞形态,流式细胞术检测细胞表面分化抗原的表达,蛋白质印记从蛋白水平检测HL-60细胞经药物诱导24、48、72h后BRD4表达的变化。结果单独应用ATRA或VPA均能够明显抑制白血病细胞生长,诱导细胞分化,倒置显微镜下可观察到HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化,细胞表面的分化抗原表达升高,联合诱导分化模型中细胞表面分化抗原表达升高更明显,两者均有统计学意义,在蛋白水平BRD4的表达逐渐降低,联合诱导分化模型中降低更明显,两者有统计学意义。结论 VPA可以明显的促进ATRA诱导白血病细胞的分化作用,BRD4基因的表达在随着分化程度的加强出现逐渐降低的趋势。     

全反式维甲酸联合细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的 探索全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)在诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞过程中的作用.方法 应用Ficoll分离骨髓中单核细胞,贴壁培养,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含ATRA、bFGF、EGF的条件培养基对培养的细胞向神经细胞诱导分化;采用免疫荧光染色法对分化的细胞进行鉴定.结果 分离培养的贴壁细胞具有典型的BMSCs形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星形胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP) .结论 ATRA联合细胞因子具有诱导BMSCs在体外分化为神经元样细胞的能力.     

急性早幼粒细胞白血病全反式维甲酸诱导分化中的高危并发症及其处理

53例初诊急性早幼粒细胞白血病（APL）采用全反式维甲酸（ATRA）治疗，发生白细胞增多（≥20×109／L）58％（31／53例），维甲酸综合征7．4％（4／54例次）。5例（9．4％）早期死亡，3例有白细胞增多。高白细胞组（高白组）9例并用DA或HA方案化疗。非高白细胞组（非高白组）与高自组的完全缓解（CR）率分别为100％（19／19例）及96．3％（26／27例）。化疗为目前对白细胞增多症主要的针对性治疗，综合性治疗对减低早期死亡仍居重要地位。     

小剂量二烯丙基二硫联合全反式维甲酸对HL-60细胞的生长抑制和诱导分化作用研究

二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抑制肿瘤细胞增殖,调控细胞周期依赖素激酶、信号转导,诱导肿瘤细胞分化、凋亡及影响癌基因与抑癌基因表达的作用。小剂量DADS(1·25mg·L-1)可以抑制JAK1/STAT3信号通路,将HL-60细胞阻滞在G0/G1期,诱导HL-60细胞向粒系分化,其作用与全反式维甲酸(ATRA)相当[1~3]。本实验将探讨小剂量DADS与ATRA联合应用对HL-60细胞的生长抑制及诱导分化效应。1材料和方法参见文献2。2结果2.1DADS与ATRA单独或联合用药对HL-60细胞生长的影响1·25mg·L-1DADS或ATRA对体外培养的HL-60细胞均…     

三氧化二砷诱导NB4细胞的基因表达谱改变

目的：研究三氧化二砷在诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化过程中基因表达谱的改变．方法：通过逆转录方法将经过及未经过三氧化二砷处理的NB4细胞mRNA制备成两种探针,应用Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记这两种探针,随后与包含1003条待研究人类基因的表达谱基因芯片杂交,通过扫描和计算机软件分析,寻找经三氧化二砷作用后表达有差异的基因．结果：NB4细胞在三氧化二砷(0．5μmol／L)作用后3条基因上调,18条基因下调．1条参与蛋白酶体降解途径的基因显著上调,多条与细胞信号传导、RNA加工及蛋白质合成相关基因下调．结论：PSMB6及ITGBI基因的表达改变可能与NB4细胞的凋亡和／或分化有密切关系．     

葛根总黄酮诱导NB4细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨葛根总黄酮(PR)对人早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞株的影响.方法 MTT法检测NB4细胞增殖抑制率;FITC-Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡率;Western blot检测c-Jun氨基端激酶(JNK)、Bcl-2、PARP、半胱天冬酶(Caspase)3蛋白表达的变化.结果 PR呈时间-剂量依赖性抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡;JNK、PARP及Caspase 3的表达与PR浓度呈正相关,而与凋亡抑制蛋白Bcl-2呈负相关.结论 PR可有效诱导NB4细胞凋亡,其作用与JNK信号途径的活化有关.     

HPLC-MS/MS法测定NB4细胞培养液中的全反式维甲酸

目的 建立HPLC-MS/MS法测定NB4细胞培养液中全反式维甲酸的浓度。方法 采用ACQUITY UPLCTM BEH C₁₈（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,以布洛芬为内标,流动相为乙腈-水（含0.1%乙酸）,体积流量为0.2 mL/min,梯度洗脱方式分离全反式维甲酸,同时采用ESI源负离子检测方式,定量分析时的离子反应分别为m/z 299.2→m/z 255.2（全反式维甲酸）和m/z 205.4→m/z 161.3（内标布洛芬）。结果 全反式维甲酸在2.55~255 ng/mL线性关系良好,定量限为2.55 ng/mL,日内精密度RSD ≤ 10.3%,日间精密度RSD ≤ 12.9%。结论 建立的HPLC-MS/MS法可用于测定NB4细胞含维甲酸的培养液中全反式维甲酸的浓度,以及在加入维甲酸代谢阻断剂时全反式维甲酸浓度的变化。     

维生素A酸诱导分化的人早幼粒白血病细胞系HL-60的呼吸爆发功能

借助于自旋捕集剂DMPO,用电子自旋共振波谱仪直接定量检测了经维生素A酸(RA)诱导的人早幼粒白血病细胞HL—60受12—O—十四烷酰—佛波醇13—醋酸酯(TPA)刺激引起氧消耗爆发性增加(呼吸爆发)时主要产生的活性氧—羟基自由基(·OH).诱导分化的细胞产生·OH的量随刺激剂TPA在反应体系中量的增加(50～400 ng)而增高,并和RA诱导时间相关,在诱导d3达峰值,和硝基蓝四氮唑(NBT)还原反应及细胞生长曲线的时间过程一致.同时用自旋探针CTPO和TEMPOL及加宽剂Crox现察到RA诱导分化的HL—60细胞呼吸爆发过程中消耗细胞外介质中的氧.同样实验条件下,未经诱导的HL—60细胞不具有呼吸爆发功能,而人多形核白细胞(PMN)呼吸爆发时也消耗细胞外介质中的氧,检测到的活性氧自由基主要为超氧化物阴离子(O_2)。     

全反式视黄酸促进胚胎神经干细胞诱导分化的研究

目的本研究观察全反式视黄酸（atRA）对于体外分离培养的胚胎神经干细胞（ENSCs）生长增殖和诱导分化的作用及其可能的分子机制。方法分离培养孕15dSD大鼠（E15 d SD Rattus）海马回ENSCs,采用不同组合成分的神经干细胞培养基培养ENSCs,利用MTF法检测其对于ENSCs存活和增殖的影响;采用不同组合成分的神经细胞诱导分化培养基培养ENSCs,利用细胞免疫荧光染色法鉴定ENSCs及atRA对于其诱导分化的影响。结果MTT实验结果表明,atRA^＋组、atRA^-组和DMSO组均出现ENSCs的增殖效果,而对照组则没有明显的增殖现象,其中atRA^-组最明显,DMSO组次之,atRA^＋组最弱。AtRA^＋组与atRA^-的ENSCs经过诱导分化后产生的神经细胞类型有较明显差异,并且atRA组处理产生的神经元是对照组的3倍左右。结论atRA能够抑制ENSCs的增殖,并且抵消神经生长因子对于ENSCs的促进有丝分裂作用,atRA还可以促进ENSCs定向诱导分化为神经元。     

All-trans retinoic acid induced differentiation of rat mammary epithelial cells cultured in serum-free medium

Retinoids are applied to not only cancer prevention but also cancer chemotherapy by stimulating differentiation of cells. We studied differentiation inducing effect of all-trans retinoic acid (ATRA) by studying proportion of high dense fractions of stem-like cells and the size of S phase fraction in cell cycle. From mammary organoids obtained from 7- to 8-week old F344 female rat mammary gland, we cultured rat mammary epithelial cells (RMEC) and treated physiological doses of 10⁻⁶, 10⁻⁷, and 10⁻⁸ M ATRA from the first day and then cultured for 4, 7, and 14 days. After that, immunostaining was performed using peanut agglutinin (PNA) and anti-Thy-1.1 monoclonal antibody (Thy-1.1) that can be used as markers of differentiation. We separated four different cell subpopulations by flow cytometry: cells negative to both reagents (B-), PNA-positive cells (PNA+), Thy-1.1-positive cells (Thy-1.1+), and cells positive to both reagents (B+). We observed continuous decreases of high dense fractions of stem-like cells (PNA+ subpopulations) for 14 days and as much decreases as high doses of ATRA, which were thought to be proportional to doses of ATRA. We labeled RMEC with bromodeoxyuridine and investigated cell cycle fractions that went through S phase. We observed a tendency of decrease of S phase fraction with time in culture, which is though to be related to continuous decreases of PNA+ subpopulations and inhibitory role of ATRA on cell cycle. These results suggest that physiological doses of ATRA could stimulate differentiation of RMEC and convert stem-like RMEC to differentiated cells in SFM for a relatively long period of 14 days.     

Andrographolide inhibits growth of acute promyelocytic leukaemia cells by inducing retinoic acid receptor‐independent cell differentiation and apoptosis

Objectives The growth inhibiting potential of andrographolide was evaluated in three acute promyelocytic leukaemia cell line models (HL‐60, NB4 and all‐trans retinoic acid (ATRA)‐resistant NB4‐R2). Methods In elucidating the mechanisms of growth inhibition, a special emphasis was placed on assessing the induction of differentiation and apoptosis by andrographolide in the primary acute promyelocytic leukaemia NB4 cells. Key findings The compound was 2‐ and 3‐fold more active in inhibiting the growth of HL‐60 and NB4‐R2 cells compared with NB4 cells, respectively. At IC50 (concentration at which growth of 50% of the cells (compared with medium only treated control cells) is inhibited; 4.5 μM) the compound exhibited strong cell‐differentiating activity in NB4 cells, similar to ATRA (IC50 1.5 μM). In the presence of a pure retinoic acid receptor antagonist AGN193109, the growth inhibition of NB4 cells by ATRA was reversed, whereas the activity of andrographolide was not affected. This clearly suggested that andrographolide's cell differentiating activity to induce growth inhibition of NB4 cells most likely occurred via a retinoic acid receptor‐independent pathway. At higher concentration (2 × IC50), andrographolide was an efficient inducer of apoptosis in NB4 cells. Conclusions Taken together, these results suggest andrographolide and its derivatives, apparently with a novel cell differentiating mechanism and with ability to induce apoptosis, might be beneficial in the treatment of primary and ATRA‐resistant acute promyelocytic leukaemia.     

维甲类化合物R8607对人急性早幼粒白血病NB4细胞的分化及其作用机理

目的　研究维甲类化合物R8607对人急性早幼粒白血病NB4细胞的分化诱导作用及其作用机理。方法　采用NBT还原能力和细胞形态的方法观察R8607对NB4细胞功能和形态的分化作用,采用竞争性结合的方法测定R8607和维甲酸受体的结合能力并用流式细胞术观察其对细胞周期移行的影响。结果　R8607有抑制NB4细胞的生长并能使细胞的功能和形态发生分化的作用; 对维甲酸受体的3个亚型α,β,γ均有结合作用并将NB4细胞周期移行阻断在G₁期。结论　R8607通过维甲酸受体的调节通路将NB4细胞阻断在G1期并诱导细胞发生功能和形态的分化。     

维甲酸脂质体在小鼠体内的药物动力学及组织分布

目的考察2种全反式维甲酸(ATRA)脂质体静脉给药后在小鼠体内的药物动力学和组织分布。方法分别采用不饱和豆磷脂(SPC),以及SPC与聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)以一定比例混合的混合物为膜材,利用乙醇注入法制备全反式维甲酸普通脂质体和长循环脂质体,静脉注射后采用HPLC法测定小鼠血浆及各组织中的药物浓度。结果普通脂质体和长循环脂质体的AUC分别是以游离药物给药组的2.58倍和5.00倍,t1/2分别由2.66 h延长至3.74 h和6.39 h,脂质体在肝中分布显著增加。结论2种ATRA脂质体能够延缓药物释放,增强药物靶向性。     

五氧化二砷体外对NB4细胞增殖及程序化死亡作用的研究

目的：探讨五氧化二砷（As2O3)对急性早幼粒白血病（APL）细胞NB4增殖及细胞程序化死亡的影响。方法：用细胞生长曲线，集落培养，流式细胞仪检测，DNA电泳，bcl-2蛋白和P53蛋白表达等方法观察NB4细胞增殖，凋亡和癌基因表达情况。结果：As2O5能显著地抑制NB4细胞增殖和细胞生长活力，诱导NB4细胞程序化死亡，下调p53,bcl-2蛋白表达，并能抑制造血祖细胞集落形成。结论：As2O5对APL细胞NB4具有较强的抑制和诱导凋亡作用，可能成为治疗APL有效的药物之一。     

白藓碱单用及联合全反式维甲酸对急性髓性白血病细胞的分化治疗作用

目的探索白藓碱单用及联合全反式维甲酸(ATRA)对急性髓性白血病细胞(AML)的分化治疗作用。方法不同浓度的白藓碱单独或联合ATRA作用于3株不同AML亚型的细胞株(NB4、U937和HL60),利用细胞计数考察细胞增殖抑制情况;通过PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡;检测细胞表面抗原CD11b和细胞核形态考察细胞分化;RT-PCR和Western blotting法观察细胞分化相关转录因子CEBPβ和PU.1的m RNA和蛋白水平。结果白藓碱单用及联合ATRA均能明显诱导AML细胞发生分化,表现为抑制细胞增殖、增加细胞表面CD11b的表达,使细胞核形态出现马蹄形甚至分叶形;白藓碱单用及联合ATRA均能在m RNA水平和蛋白水平上增加分化相关转录因子CEBPβ和PU.1的表达。结论白藓碱能够单独或协同ATRA诱导不同AML亚型细胞发生分化,并且其诱导分化作用可能是通过调控分化相关转录因子CEBPβ和PU.1引起的。