应用PCR方法检测头颈部肿瘤病人EB病毒的研究

多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法对一组头颈部肿瘤病人口咽部含氵敕液中Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ进行测定。结果表明：恶性肿瘤如鼻咽癌，恶性淋巴瘤，喉癌，鼻腔鼻窦癌，甲状腺癌等检出阳性率为７４．４７％；良性肿瘤如喉乳头状瘤，甲状腺瘤等检出阳性率为１３．５１％；对照组为鼻、咽、喉慢性炎症病人，仅１例结果阳性（７．１４％）。结果提示：ＥＢＶ可能参与了这些癌肿的发病。     

PCR技术检测大肠肿瘤及肿瘤样病变中EB病毒DNA

目的 探讨人类大肠肿瘤中是否存在疱疹病毒属中ＢＥ病毒的感染，ＥＢ病毒是否参与了肿瘤的致病作用。方法 应用ＰＣＲ方法对１０例大肠良性肿瘤或肿瘤样病变标本和１０例大肠恶性肿瘤病变标本进行ＥＢ病毒ＤＮＡ扩增。结果 在２０例病变标本中，ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性率为１９／２０，所得ＤＮＡ片段为３１１ｂｐ。结论 人类大肠良恶性肿瘤组织及某些称谓癌前病变的组织中存在的ＥＢ病毒感染。致病作用可能和宿主细胞之间基因调控，     

用PCR法探讨EB病毒与胃癌的关系

胃癌组织中ＥＢ病毒的检出率因地区而异。为调查黑龙江地区胃癌ＥＢ病毒核酸的存在情况，我们用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法特异笥扩增本地区经临床病理确诊的胃癌组织中ＥＢ病毒ＥＢＮＡ１基因区域，结果２９例标本中有６例检出ＥＢ病毒ＤＮＡ，且胃癌病理类型均是胃腺癌，提示本地区胃癌特别是胃腺腺的发生与ＥＢ病毒感染密切相关。     

鼻咽癌病人多项免疫功能及EB病毒PCR检测的综合研究

为进一步了解ＥＢ病毒与鼻咽癌的关系,全面综合调查鼻咽癌病人的免疫功能,应用ＰＣＲ方法检测鼻咽病人组织块ＥＢ病毒ＤＮＡ,并对处国咽癌病人血清中ＥＢ病毒（ＥＢＶ－ＶＣＡ／ＩｇＡ）抗体、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、脂质过氧化物降解产物（ＭＤＡ）及数种微量元素含量进行测定。结果：从鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中成功地检测出ＥＢ病毒ＤＮＡ片断。进一步证实了ＥＢ病毒与鼻咽癌的发生有密切关系。并对鼻咽癌病人血清Ｖ     

消化道肿瘤与EB病毒关系的研究

目的探讨EB病毒与消化道肿瘤发生的关系。方法 用双温聚合酶链反应(PCR)扩增出EB病毒Bam W区的121bp DNA片段,对233份消化道肿瘤和83份消化道良性疾病的内镜活捡标本进行了EB病毒DNA检测。结果消化道肿瘤内镜活检组织中EB病毒阳性率为6.44％(15/233),30例癌旁、远离癌灶5cm以上组织和非肿瘤病交均阴性。结论 消化道肿瘤内镜活检组织中EB病毒感染率低,两者关系的进一步研究,有助于EB病毒致瘤机制的阐明。     

48例颈淋巴结转移癌EB病毒PCR检测

应用ＰＣＲ技术检测４８例颈淋巴结转移瘤ＥＢ病毒ＤＮＡ，并与１０例淋巴结反应性增生对照。结果，４８例标本总阳性率为４７．９％，其中１７例经鼻咽部活检为鼻咽癌，７例原发性病灶为鼻咽部的转移性未分化癌均为阳性，２０例转移性腺癌中仅１例阳性，１０例反应性增生淋巴结皆阴性。     

EB病毒与食管癌相关性的研究

目的：探讨EB病毒与食管癌发生的关系。方法：用双温聚合酶链反应(PCR)扩增出EB病毒Barn W区的121bp DNA片段，用此法对89份食管肿瘤和非肿瘤的胃镜活检标本进行了EB病毒DNA检测。结果：食管癌胃镜活检组织中EB病毒阳性率6．3％(3／48)，10例癌旁、远离癌灶5cm以上食管组织和2l例非肿瘤病变均阴性。结论：食管癌活检组织中EB病毒感染率低，两者关系的进一步研究，有助于EB病毒致瘤机制的阐明。     

双温聚合酶链反应检测EB病毒

本文应用双温循环聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测鼻咽癌石蜡包埋组织、活检或冰冻组织、患者鼻咽拭子或血液中的ＥＢ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）病毒ＤＮＡ。模板ＤＮＡ制备方法简单，毋需酚提取步骤；双温ＰＣＲ快速（约需１．５ｈ）、灵敏。目前已初步用于临床检验     

聚合酶链反应检测EB病毒DNA在鼻咽癌诊断中的应用

流行病学、血清学和分子生物学的资源证实,爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）感染与鼻咽癌（ＮＰＣ）有密切关系。血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ测定和聚合酶链（ＰＣＲ）检测组织中ＥＢＶ－ＤＮＡ已用于ＮＰＣ的临床诊断。本文评价上述方法在ＮＰＣ诊断中的实用价值。８５例病人双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ（Ｉ）,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ（Ⅱ）;鼻咽活检组织用ＰＣＲ法检测ＥＢＶ－ＤＮＡ－（Ⅲ）和组织     

EB病毒与大肠肿瘤的相关性研究

目的：探讨人类大肠肿瘤组织中是否存在EB病毒感染及EB病毒是否参与了致瘤作用。方法：将130例大肠肿瘤标本分为5个组，其中腺瘤26例，腺瘤伴不典型增生23例，腺瘤癌变22例，结肠癌36例，遗传性非息肉性大肠癌（HNPCC）23例，分别进行免疫组化标记和PCR扩增，结果：130例标本中，免疫组化阳性7例，PCR检测阳性26例例，各组之间差异无显著性（P均＞0．05），结论：人类大肠肿瘤组织中存在EB病毒感染，并有可能参与大肠肿瘤的发病过程，但其作用机制有待进一步探讨。     

PCR方法检测生殖道人乳头瘤病毒

探讨生殖道人乳头瘤病毒对宫颈糜烂的影响及摸索最佳的ＰＣＲ反应条件。方法应用通用引物介导聚合酶链反应法检测宫颈脱落细胞中ＨＰＶ。结果：健康人５０例,宫颈糜烂,患者３４例,ＨＰＶ阳性检出率为分别为２２．０％和４７．２％,两者差异显著。     

鼻咽癌组织中EB病毒EBNA-2型的检测

０　引言　ＥＢ病毒是一种人类疱疹病毒,分为Ａ,Ｂ２型［１］,两者在ＥＢＮＡ２基因编码区的差异最为显著［２］．我们设计了一对扩增ＥＢＮＡ２Ａ和ＥＢＮＡ２Ｂ基因的通用引物,合成并用地高辛标记分别针对Ａ型和Ｂ型扩增片段特异的２种寡核苷酸探针,通过扩增产物与探针的杂交对ＥＢ病毒进行分型检测,并应用该方法来研究不同基因型的ＥＢ病毒与鼻咽癌的相关性．１　材料和方法１．１　细胞株和临床标本　Ｂ９５８细胞,Ａ型ＥＢ病毒转化的绒猴Ｂ淋巴细胞,空军总医院临床分子生物学研究中心细胞工程室保存．ＡＧ８７６细胞,…     

EB病毒BHRF1基因聚合酶链反应扩增及其鉴定

目的：ＢＨＲＦ１的研究对于认识ＥＢＶ有关肿瘤和其它疾病的发病机理、寻找预防、治疗途径有十分重要的意义。方法：以Ｂ９５８细胞ＤＮＡ为模板，设计一对引物，用ＰＣＲ方法扩增ＢＨＲＦ１基因，用目的基因内的两个限制性内切酶位点进行酶切鉴定。结果：扩增产物长５９２ｂｐ，与预期结果一致，两个酶所切下的四个片段长度也与理想值相符。结论：本研究首次采用ＰＣＲ方法，成功地获得完整的ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１基因，从而为该基因的进一步研究和应用奠定基础。     

鼻咽癌病人血浆和外周血白细胞EB病毒DNA定量分析

目的比较鼻咽癌(NPC)病人治疗前后血浆、外周血白细胞Epstein-Barr病毒(EBV)DNA水平的变化及癌组织EBV整合状况,探讨这些变化与NPC临床病理变化的关系.方法对150例初诊NPC病人治疗前后血浆和外周血白细胞、75名正常人血浆和外周血白细胞、49例NPC组织及47例鼻咽慢性炎组织EBV-DNA进行荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)分析.结果 NPC病人治疗前血浆EBV-DNA水平及检出率分别为82 500拷贝/ml(中位数)和92%,均显著高于治疗后(0拷贝/ml,19%)和正常人(0拷贝/ml,12%)(P<0.05),而NPC病人治疗后和正常人血浆EBV-DNA水平和检出率差异均无显著意义(P>0.05).NPC病人治疗前外周血白细胞EBV-DNA水平及检出率(0拷贝/肌动蛋白,24%)与治疗后(0拷贝/肌动蛋白,14%)和正常人(0拷贝/肌动蛋白,16%)三者间差异均无显著意义(P>0.05).NPC病人治疗前、后及正常人血浆EBV-DNA水平与对应外周血白细胞EBV-DNA水平均无显著相关性(P>0.05).EBV-DNA(荧光定量PCR法)和EBER1(原位杂交法)在NPC组织检出率均为100%,显著高于鼻咽慢性炎组织中EBV-DNA和EBER1检出率(分别为40%和0)(P<0.05).NPC组织EBV-DNA水平为27.8拷贝/肌动蛋白(中位值),显著高于鼻咽慢性炎组织(0拷贝/肌动蛋白)(P<0.0001),NPC组织EBV-DNA水平与对应癌组织内EBER1阳性细胞占组织总细胞比率(中位值0.35)有显著正相关性(相关系数r= 0.513)(P<0.0001).NPC病人治疗前血浆EBV-DNA水平随临床TNM分期越晚而显著增高(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中位值分别为2500、32 590、86 000和166 200拷贝/ml)(P=0.004).而NPC治疗前外周血白细胞EBV-DNA水平在TNM各期均为0拷贝/肌动蛋白,差异无显著意义(P>0.05).结论研究结果提示NPC病人血浆EBV-DNA水平是反映NPC肿瘤消长情况的灵敏、可靠的指标,可在分子水平对NPC的TNM分期进行补充.NPC病人血浆EBV-DNA水平与外周血白细胞EBV-DNA水平没有相关性,提示血浆EBV-DNA可能来源于肿瘤细胞的裂解释放,并反映病人体内瘤荷大小.     

PCR方法检测生殖道人乳头瘤病毒

目的：探讨生殖道人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）对宫颈糜烂的影响及摸索最佳的ＰＣＲ反应条件。方法：应用通用引物介导聚合酶链反应法（ＧＰ－ＰＣＲ）检测宫颈脱落细胞中ＨＰＶ。结果：健康人５０例,宫颈糜烂患者３４例,ＨＰＶ阳性检出率分别为２２．０％和４７．２％,两者差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论：ＧＰ－ＰＣＲ方法检测ＨＰＶ具有敏感、特异、便捷、快速、可靠、经济的特点,为病毒感染早期快速诊断及流行病学研究提供了科学的方法。     

儿童外周血EB病毒DNA检测的临床意义

目的探讨Epstein-Barr病毒（EB病毒）DNA检测的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应病毒核酸扩增方法,定量检测儿科以发热为主诉的患儿外周血EB病毒DNA载量。阳性病例进行临床分析和抗病毒治疗观察。结果检测522例间断和/或持续发热患儿,阳性（病毒载量≥50拷贝/ml）102例,阳性率19.5%。病毒载量最高4.44×10^6拷贝/ml,最低4.3×10^2拷贝/ml。阳性病例疾病病种较多。部分阳性病例抗病毒治疗显效。结论静脉血EB病毒DNA检测是可行的实验室诊断方法;儿科以发热为主诉的患儿可能有19.5%左右存在EB病毒感染或隐性感染。EB病毒DNA检测阳性患儿应适当抗病毒治疗并随访。     

系统性红斑狼疮与EB病毒的相关性研究

EB病毒被认为是一个诱发系统性红斑狼疮的重要因素。EB病毒感染B淋巴细胞后表达病毒抗原,某些病毒抗原与自身成份存在序列同源性,因而针对EB病毒的抗体有可能通过交叉反应对自身成份起作用,从而导致系统性红斑狼疮的发生。另外,EB病毒感染导致某些基因表达异常,抑制感染细胞凋亡,表达异常免疫球蛋白,自身抗体大量产生;实验室血清学试验和DNA检测结果都证实EB病毒与系统性红斑狼疮的发生发展存在密切相关性。