大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF—β1基因可增强MMP—2表达

目的 研究转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦ－β１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否;又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ,酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦ－β１的ＭｓＣＭＭＰ－２ｍＲＮＡ蛋白及酶活性变化。结果成功获得稳定过     

转化生长因子β1基因转染人肝癌细胞及其对MMP-2，9表达的影响

目的　通过对人肝癌细胞株 (SMMC 772 1)转染TGF β1基因 ,观察该细胞MMP 2 ,9表达的变化。方法　用电穿孔法进行基因转染 ,并经Westernblot ,Northernblot法作鉴定 ,后分别应用Northernblot,Westernblot法观察该细胞株表达MMP 2 ,9mRNA和MMP 2蛋白的变化。结果　经转染TGF β1基因的细胞株MMP 2mRNA和蛋白表达均高于对照组 ,但MMP 9mRNA表达则没有变化。结论　TGF β1可促进肝癌细胞MMP 2表达 ,表明TGF β1可能在肝癌发生浸润和转移过程中也发挥重要作用     

转染TGF—β1基因对大鼠树突状细胞成熟分化的影响

目的：建立大鼠骨髓DC的分离和体外扩增方法，构建TGF－β1重组质粒并转染DC，检测TGF－β1基因对DC分化成熟的影响。方法：分离大鼠骨髓造血前体细胞，在GM－CSF作用下经手法筛选，纯化、培养并扩增DC。构建TGF－β1－pcDNA3质粒，并以脂质体介导转染DC。以Dil荧光法和免疫细胞化学染色检测转染DC的TGF－β1和RT1B的表达。结果：TGF－β1-pcDNA3质粒可转染未成熟DC并有效抑制DC表面RT1B的表达，并能抑制DC对LPS的反应。结论：TGF－β1基因能有效抑制DC成熟，并诱导机体免疫耐受。     

MMP—2，MMP—9，TIMP—1和TIMP—2在肝癌中原位表达

OBJECTIVE: To explore the expression and clinical prognostic significance of matrix metalloproteinase-2 mRNA (MMP-2 mRNA), tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 mRNA (TIMP-2 mRNA), matrix metalloproteinase-2 protein (MMP-2), matrix metalloproteinase-9 protein (MMP-9), tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 protein (TIMP-1), and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 protein (TIMP-2) in the hepatocellular carcinomas (HCCs). METHODS: Fifty-six specimens of HCCs from 56 patients, who were followed-up, were investigated by in situ hybridization with specific probes for MMP-2, TIMP-2, and by immunohistochemistry with anti-MMP-2, MMP-9 and anti-TIMP-1, TIMP-2 monoclonal antibody. We analyzed the data with chi-square test, spearmans correlation analysis, monovariate Kaplan-Meier plot and multivariate Cox regression analysis. RESULTS: 1. The positive expression of MMP-2mRNA, TIMP-2mRNA, MMP-2 protein, MMP-9 protein, TIMP-1 protein and TIMP-2 protein in the 56 HCCs cases were 48 (85.7%), 35 (62.5%), 44 (78.6%), 41 (73.2%), 30 (53.6%), and 38 (68%), respectively. 2. We found over-expression of MMP-2 mRNA, MMP-2 protein, and MMP-9 protein, but low expression of TIMP-1 protein in the 56 cases of HCCs (P < 0.01, P < 0.05). 3. There was a positive association between TIMP-2mRNA and TIMP-2 protein expression, and between MMP-2 mRNA and MMP-2 protein in HCCs, respectively (r = 0.316, P < 0.05; r = 0.356, P < 0.05). 4. Over-expression of MMP-2 mRNA was positively correlated to the tumor size and TNM classification (r = 0.441, P < 0.001; r = 0.340, P < 0.05), and MMP-9 protein was related to shortened survival (P < 0.05). 5. In both monovariate Kaplan-Meir plot and multivariate Cox regression analysis, the expression of MMP-2 protein and MMP-9 protein were linked to unfavorable prognosis. These results were further confirmed by multivariate analysis in which MMP-2 protein and MMP-9 protein emerged as independent prognostic factors for poor survival regardless of the age, tumor size, tumor grades, TNM classification and expression of MMP-2mRNA, TIMP-2mRNA, TIMP-1 protein and TIMP-2 protein. The hazard ratios of expression of MMP-2 protein and MMP-9 protein were 3.875 and 4.528, respectively. CONCLUSION: The over-expression of MMP-2mRNA, MMP-2 protein and MMP-9 protein and the imbalance between MMP-2 and TIMP-2 play pivotal roles in the degradation of excellular matrix of HCCs. MMP-2 and MMP-9 immunoreactive protein have been closely related to a shortened survival independent of major prognostic indicators in the primary HCC and increase the risk of the patients after the operation.     

小鼠Ehrlich实体瘤局部DNA直接转染TGF—β1基因的研究

研究Ｅｈｒｌｉｃｈ实体瘤局部ＤＮＡ直接转染ＴＧＦ－β１基因的治疗效果,将真核表达载体ｐＳＶＴＧＦ－β１直接瘤周转染Ｅｈｒｌｉｃｈ实体瘤,用原位杂交方法检测靶基因的表达,ＭＴＴ法检测脾脏细胞免疫功能,并观察小鼠生存期及肿瘤生长速度。治疗组肿瘤细胞及瘤周组织有靶基因ｍＲＮＡ表达,脾脏细胞免疫功能高于对照组,肝瘤生长受到抑制,治疗组小鼠生存期较对照组明显延长,ＴＧＦ－β１基因ＤＮＡ直接转染法可以明显抑制     

转化生长因子β1基因转染人肝癌细胞及其对MMP-2，9表达的影响

目的通过对人肝癌细胞株(SMMC-7721)转染TGF-β1基因,观察该细胞MMP-2,9表达的变化。方法用电穿孔法进行基因转染,并经Westernblot,Northernblot法作鉴定,后分别应用Northernblot,Westernblot法观察该细胞株表达MMP-2,9mRNA和MMP-2蛋白的变化。结果经转染TGF-β1基因的细胞株MMP-2mRNA和蛋白表达均高于对照组,但MMP-9mRNA表达则没有变化。结论TGF-β1可促进肝癌细胞MMP-2表达,表明TGF-β1可能在肝癌发生浸润和转移过程中也发挥重要作用。     

重组人转化生长因子β1诱导人肝癌细胞SMMC—7721凋亡

用不同剂量的rhTGF－β1与人肝癌细胞SMMC－7721共同繁育不同时间后,用荧光显微镜进行形态学观察;提取细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳分析电泳条带;用流式细胞仪分析细胞周期变化;用免疫组化法检测bcl－2、c－myc基因表达的变化。结果显示：细胞经rhTGF－β1作用后体积缩小、核染色质固缩或成碎片状;细胞DNA电泳呈典型的“阶梯状”条带;细胞周期分析显示rhTGF－β1先使SMMC－7721细胞停滞在G0／G1期,继而诱发细胞产生凋亡;免疫组化检测发现rhTGF－β1可下调bcl－2和c－myc蛋白的表达。研究表明：rhTGF－β1诱导人肝癌细胞凋亡与G0／G1期阻滞密切相关;bcl－2、c－myc基因产物的下调在rhTGF－β1诱导的细胞凋亡过程中可能起重要的调控作用。     

大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后的表达

目的 将大鼠转化生长因子β1(TGF—β1)基因转染成骨细胞后，研究转基因细胞表达TGF—β1的情况。方法 通过Lipofectamine介导将TGF—β1基因导人大鼠成骨细胞，转染24h后通过SABC法和原位杂交法检测目的基因瞬时表达的情况。采用G418筛选转染细胞2周，获得阳性细胞克隆，用SABC法检测转染细胞稳定表达TGF—β1的情况。结果 转染24h后，成骨细胞就有明显的TGF—β1蛋白和mRNA高表达。G418筛选2周后的转染细胞仍然有较高的TGF—β1表达。结论 TGF—β1基因转染成骨细胞后可获得稳定的高表达，采用细胞因子基因转染成骨细胞进行骨缺损的基因治疗具有可行性。     

芍药苷对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGFβ1 TMP1 MMP2及MMP9的影响

目的：探讨芍药苷对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGFβ1、TMP1、MMP2及MMP9的影响。方法：清洁级Sprague-Dawley大鼠60只,随机分成6组,A组（正常对照组）、B组（模型组）、C1组（芍药苷小剂量组）、C2组（芍药苷中剂量组）、C3组（芍药苷大剂量组）、D组（水飞蓟素对照组）。除正常对照组外,均经皮下注射400mL/L四氯化碳8周,后各治疗组给予不同剂量芍药苷干预8周,阳性对照组给予水飞蓟素干预8周,ELISA法检测大鼠血清TGFβ1、MMP2、MMP9及TMP1。结果：TGFβ1：与B组比较,A组P〈0.01,C1组、C2组、C3组、D组P〈0.05;TMP1：与B组比较,A组P〈0.01,C1组、C2组、C3组、D组P〈0.05;MMP2：与B组比较,A组P〈0.01,C1组、C2组、C3组、D组P〈0.05;MMP9：与B组比较,A组P〈0.01,C1组、C2组、C3组、D组P〈0.05;结论：芍药苷能够通过降低大鼠血清TGFβ1、TMP1、提高大鼠血清MMP2、MMP9而发挥抗肝纤维化作用,并且量效关系明显。     

转化生长因子β_1基因转染对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖调控机理的研究

转化生长因子β_１基因转染对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖调控机理的研究ＡＳｔｕｄｙｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｕｍａｎｌｕｎｇｇｉａｎｔｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆｓｅｎｓｅａｎｄａｎｔｉｓｅｎｓ?..     

重组人β—防御素基因在COS—7细胞的转染表达

为探索建立持续稳定表达ｈＢＤ－２的哺乳类动物工程细胞的可能性,作者研究构建真核重组表达载体ｐＣＭＶ．ｔａｇ２Ｂ／ｈＢＣ－２以进行ＣＯＳ－７细胞转染表达实验。将本室克隆获得的ｈＢＤ－２全长ｃＤＮＡ片段插入带有报告基因的真核表达质粒ｐＣＭＶ．ｔａｇ２Ｂ构建出ｈＢＤ－２的重组表达载体ｐＣＭＶ．ｔａｇ２Ｂ／ｈＢＤ－２,并经ＤＮＡ测序证明ｈＢＤ－２ｃＤＮＡ片段的插入方向和其全长ｃＤＮＡ的碱基组成顺序均准确无误。通过脂质体转染法将ｐＣＭＶ．ｔａｇ２Ｂ／ｈＢＤ－２导入ＣＯＳ－７细胞。ＲＴ－ＰＣＲ法和免疫印迹法分别从ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平检测到被转染的ＣＯＳ－７细胞系能有效表达ｈＢＤ－２。     

转染外源性转化生长因子β1基因对兔髓核细胞凋亡的影响

①目的探讨转染转化生长因子β1(hTGF-β1)基因对兔髓核细胞凋亡的影响,为活化椎间盘细胞功能、预防椎间盘组织退变提供依据.②方法取成年新西兰大白兔5只,将外源性hTGF-β1基因直接注射于L3～4 椎间隙,以注射同样剂量磷酸缓冲液的L4～5作为实验对照.术后3周取出相应椎间盘组织,利用TUNEL免疫荧光组织化学方法观察髓核细胞凋亡情况.应用Vidas图像分析系统进行免疫阳性细胞半定量分析.③结果注射hTGF-β1基因的椎间盘凋亡细胞数明显少于对照组,测得OPTDM值分别为0.002±0.001、0.159±0.041,二者差异有显著性(t=27.83, P<0.01).④结论转染hTGF-β1基因可以明显减少兔椎间盘髓核细胞凋亡的发生.     

低氧对肺血管周细胞转化生长因子TGF—β1 mRNA及蛋白表达的影响

应用细胞培养、核酸分子原位杂交、免疫细胞化学、图像分析技术研究低氧对肺血管周细胞转化生长因子ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ及蛋白表达的影响,探讨低氧条件下肺血中细胞增殖、向平滑肌样细胞分化的机制。结果发现低氧（Ｈ）组周细胞内ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ及蛋白表达量分别是常氧（Ｎ）组的１．３５倍和１．２３倍,差异均有显著意义（均为Ｐ〈０．０１）。研究表明,低氧可促进肺血管周细胞ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ及蛋白表达增高     

TGF—β1参与全反式维甲酸对大鼠肾脏系膜细胞MMP—2表达的调节

目的 研究全反式维甲酸（ATRA）对于大鼠肾脏系膜细胞表达MMP－2的影响以及转化生长因子－β1在这一过程中的作用。方法 采用Northern blot、Western blot和Zymography法检测ATRA对培养大鼠肾脏系膜细胞MMP－2mRNA、蛋白分泌及酶活性表达变化;ATRA对系膜细胞表达TGF－β1的作用,以及TGF－β1至ATRA调节MMP－2表达的影响。结果 证实ATRA可增加培养大鼠肾脏系膜细胞的MMP－2mRNA表达、MMP－2蛋白分泌和增强MMP－2酶活性。ATRA也可引起TGF－β1多肽呈剂量依赖型增加。反义TGF－β1几乎可以完全阻断活性TGF－β1的分泌。经反义TGF－β1转染的系膜细胞在10^-6mol/L ATRA作用下,其表达MMP－2mRNA的水平不发生变化,但是加入抗TGF－β1抗体时,在10^-6mol/L ATRA作用下系膜细胞表达MMP－2呈剂量依赖型下降。结论 ATRA可上调培养大鼠系膜细胞的MMP－2mRNA、蛋白分泌和MMP－2酶活性的表达;TGF－β1参与ATRA对MMP－2表达的调节,并为ATRA调节MMP－2作用所必需。     

转化生长因子β1在CIN和宫颈癌的表达及其临床意义

目的探讨转化生长因子β_1在宫颈癌发生发展中的意义。方法应用免疫组化SABC技术对正常宫颈、宫颈上皮肉瘤样病变(CIN)Ⅱ～Ⅲ、宫颈浸润癌上皮细胞或癌细胞和细胞外基质中TGFβ_1的表达进行分析。结果 TGFβ_1在正常宫颈上皮细胞、CIN上皮细胞、宫颈浸润癌细胞表达的阳性率分别为100％、54.4％、27.6％(P<0.05),TGFβ_1在正常宫颈、CIN、宫颈浸润癌的细胞外基质表达的阳性率分别为36.4％、63.6％、86.2％(P<0.01)。结论 TGFβ_1在CIN上皮细胞和宫颈癌细胞中表达的明显减少,提高TGFβ_1的缺乏可能是宫颈癌恶性转化的早期标志,细胞外基质中(TGFβ_1)增多对宫颈癌的浸润和转移具有重要的意义。     

转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达

目的：构建人转化生长因子β2的真核表达载体pcDNA3.1( )/TGF-β2,检测其转染骨髓基质细胞后的表达。方法：用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF-β2全长cDNA,该基因片段两端设计了Nhe I和Xho I限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将TGF-β2的cDNA构建到真核表达载体pcDNA3.1( )上,酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术,将所构建的载体导入从骨髓中分离培养的基质细胞中,体外单层培养。分别于转染后24h和4周利用RT-PCR和Western-Blotting方法检测目的基因的表达情况。结果：经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,PCR获得的片段与GenBank中登记的TGF-β2 cDNA序列完全相同。pcDNA3.1( )/TGF-β2酶切片段的长度与理论大小相符。转染后不同时期的骨髓基质细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到TGF-β2的表达。结论：pcDNA3.1( )/TGF-β2真核表达载体构建成功,在骨髓基质细胞内可获得短暂和长期表达。     

保肝复功水煎剂对大鼠肝纤维化TGFβ1、TIMP1、MMP1表达的影响

目的:为了探讨保肝复功水煎剂抗肝纤维化的作用机理。方法:通过四氯化碳致小鼠肝损伤模型,利用基因芯片技术研究TGFβ1、MMP1及TIMP1在肝组织中的表达情况。结果:保肝复功水煎剂干预性治疗使实验组大鼠肝组织MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调。结论:保肝复功水煎剂在肝组织中具有明显使MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调的作用,从而促进了胞外基质的降解,抑制发挥肝纤维化的作用。     

反义核酸抑制TGF—β1表达及对肝纤维化调节的研究

反义核酸抑制ＴＧＦ┐β１表达及对肝纤维化调节的研究博士生论文摘要ＳｔｕｄｙｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＴＧＦ┐β１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏ┐ｇｅｎｅｓｉｓｂｙａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡ梁志清何振平...     

人转化生长因子基因重组克隆及高效表达

目的　克隆人转化生长因子（ＴＧＦβ１） 基因并且在大肠杆菌中表达。方法　从人的血小板中抽提总ＲＮＡ,经逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 得到全长ＴＧＦβ１ ｃＤＮＡ,将其克隆于表达质粒ｐＢＬＭＶＬ２ 中,构建了在ＰＬ 启动子控制的含有ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ重组子,转化到大肠杆菌ＲＲ１ 菌株中,进行温敏诱导表达。结果　表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳染色后,显示其相对分子质量为１２ ．５ ×１０３ ,计算机灰度扫描分析,表达产物约占全菌蛋白的２０％ 左右,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 分析证实,表达产物为ＴＧＦβ１ ,细胞实验显示其具有一定的生物活性。结论　在大肠杆菌中表达出具有活性的人ＴＧＦβ１ 。这为我们下一步研究其功能和临床应用打下了基础。     

TGF-β1和MMP2对大鼠胰腺坏死后再生作用的研究进展

急性胰腺炎是指胰腺及其周围组织被胰腺分泌的消化酶自身消化的化学性炎症。按病理组织学及临床表现 ,分为急性水肿型胰腺炎与急性出血坏死型胰腺炎两种。急性出血坏死型胰腺炎病情发展迅猛 ,死亡率高 ,其发病机理尚未完全阐明[1] 。近年来有关细胞因子在急性胰腺炎发病中的作用已受到重视 ,有研究认为血液中细胞因子浓度与急性胰腺炎病理类型有关 ,但尚未取得一致意见。大剂量注射精氨酸可以损害胰腺造成胰腺坏死 ,常应用这一原理制成急性胰腺炎实验动物模型 ,依据转化生长因子 β1(TGF β1)和基质金属蛋白酶 2 (MMP2 )的生物学特性 ,…