IBMX对成年金黄地鼠视网膜节细胞存活的影响

【目的】探讨玻璃体内注射 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 (IBMX)对切断视神经后视网膜节细胞存活的影响。【方法】用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察各组成年金黄地鼠于视神经切断 5、7、14d后视网膜节细胞的密度。【结果】①正常视网膜节细胞平均密度为 (2 0 0 7± 115 ) /mm2 ;②视神经切断 5、7、14d后 ,视网膜节细胞平均密度分别下降至 :(10 10± 131) /mm2 ,(782± 5 5 ) /mm2 和 (2 14± 30 ) /mm2 ;③给予DMSO/生理盐水的对照组在上述各时间段视网膜节细胞平均密度与单纯视神经切断组结果相似 ;④给予IBMX的实验组在 5、7、14d视网膜节细胞的平均密度分别为 (140 2± 6 9) /mm2 、(1182± 194) /mm2 和 (483± 17) /mm2 ,与视神经切断组和DMSO/生理盐水对照组相比在各时间段上均存在显著性差异 (P<0 0 5 )。【结论】IBMX可提高视神经切断后成年金黄地鼠视网膜节细胞的存活 ,IBMX可能通过提高胞内的cAMP水平而促进视神经切断后视网膜节细胞的存活。     

霍乱毒素及视神经植块对视网膜节细胞存活的影响

目的　探讨霍乱毒素及视神经植块对视神经切断后视网膜节细胞存活的影响。方法　研究采用荧光逆行示踪标记法和定量解剖学技术。结果　 ( 1 )切断视神经 5、7及 1 4天后 ,视网膜节细胞平均密度分别为 1 1 93.8± 94.2 mm2 、846.9± 5 5 .6 mm2 及 2 1 7.5± 40 .3 mm2 。 ( 2 )给予霍乱毒素组在 5d、7d及 1 4d ,视网膜节细胞的密度分别为 1 386.3± 88.0 mm2 ,1 1 96.9± 75 .2 mm2 及 396.3± 72 .4 mm2 ,与切断视经组相比在各时间段差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。 ( 3)玻璃体植入视神经组在 5天、7天及 1 4天视网膜节细胞的密度分别为 1 367.4± 90 .8 mm2 ,1 1 40 .6± 83.5 mm2 及 2 38.8± 37.3 mm2 ,与对照组相比 ,在 5天及 7天组差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而 1 4天组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 ( 4 )联合给予霍乱毒素及视神经植块 ,在 5、7、1 4天视网膜节细胞的平均密度分别为 1 660 .6± 93.1 mm2 ,1 385 .6± 94.1 mm2及 5 5 6.4± 93.1 mm2 ,与神经切断组及单纯给予霍乱毒素或视神经组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　 ( 1 )CTx和视神经植块都分别能促进受损视网膜细胞存活。 ( 2 )联合应用CTx和视神经植块 ,可显著提高受损视网膜节细胞存活     

睫状神经营养因子与视网膜神经节细胞

睫状神经营养因子作为神经营养因子家族中的重要成员,广泛分布于中枢神经系统。视神经与视网膜是中枢神经系统的一部分。视网膜神经节细胞在视觉通路中起着重要的传导作用。睫状神经营养因子作为一种非靶源性神经营养因子,在视网膜神经节细胞的生长发育过程中,起着重要的调控作用;同时睫状神经营养因子对于损伤的视网膜神经节细胞有促进其存活及轴突再生的作用。     

睫状上皮营养因子对氧化损伤RGC-5的保护作用

目的:探究睫状上皮营养因子(CNTF)对过氧化氢所致视网膜神经节细胞(RGC)-5损伤模型的作用。方法:对处于生长对数期的RGC-5予以不同浓度过氧化氢处理不同时间后,根据细胞存活率选择适当的浓度及时间进行造模。造模成功后,予以CNTF进行干预。成功构建携带CNTF基因的慢病毒载体后,将重组慢病毒载体转染的骨髓间充质干细胞(BMSC)与RGC-5共培养。并且由于BMSC可分泌多种神经营养因子,如脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)。RT-PCR检测共培养3d和7d后CNTF和BDNF、GDNF的含量。最后在两种细胞共培养7d后予以过氧化氢损伤,检测细胞存活率。结果:随着过氧化氢浓度及作用时间的增加,细胞存活率随之降低。当过氧化氢浓度为125μmol/L时,达到凋亡高峰,选择该浓度造模。RGC-5与重组慢病毒载体转染的BMSC共培养后,RT-PCR检测发现CNTF和BDNF在培养7d后表达量增多,有统计学意义,而GDNF培养7d后表达量与对照组无统计学差异。当共培养7d后,过氧化氢损伤后检测发现RGC-5存活率增加。结论:CNTF对过氧化氢损伤的RGC-5有保护作用,并且推测在该过程中BDNF同样也发挥了保护作用。     

荧光金逆行标记评价视神经切断后视网膜节细胞存活率

目的：利用荧光金逆行标记评价视神经切断后视网膜节细胞（RGCs）的存活率。方法：将SD大鼠20只随机均分为4组，正常对照组和视神经切断后5d、7d和1dd组。用荧光金逆行标记和定量解剖学技术观察正常对照组和视神经切断后5d、7d和14d组RGCs的密度。结果：正常对照组RGCs呈放射状分布，边界清晰，可见明显细胞突起，无渗漏现象；视神经切断组RGCs随时间延长而减少，细胞分布不均匀，并且可见吞噬死亡细胞碎片和从死亡细胞渗漏的荧光金的小胶质细胞。正常对照组左眼与右眼RGCs密度差异无统计学意义（P〉0．05）；视神经切断后RGCs进行性减少，切断后5d、7d和14d组左眼RGCs密度均明显低于正常对照组（P〈0．01），视神经切断后5d、7d和14d存活率分别为53％、38％和13％。结论：荧光金逆行标记是评价视神经切断后RGCs存活率有效的方法。     

睫状神经营养因子对视神经损伤修复作用的研究

目的：观察睫状神经营养因子（CNTF）能否促进视神经（ON）损伤后在原中枢神经环境中再生,为临床救治提供理论依据和新的治疗途径。方法：选用成年日本青紫蓝兔22只,其中随机抽取两只做正常对照,不做任何处理;其余20只为实验组,构造视神经中度损伤模型（中号显微血管夹于视神经后3 mm处夹持20 s）。于损伤后即时、3 d、7 d、14 d各时间点给予右眼（实验眼）玻璃体腔内注射CNTF 2μl（1μg/μl）,左眼（对照眼）于同等时间点注射等量双蒸水。于损伤后3 d、7 d、14 d、28 d分别取实验眼和对照眼视神经行常规HE染色观察视神经组织学变化;免疫荧光检测观察生长相关蛋白-43（GAP-43）在视神经的表达;同时将动物实验眼及对照眼于损伤前、损伤后即刻及处死前进行视觉诱发电位（F-VEP）检查以观察兔视功能变化情况,采用SPSS 13.0统计学软件包对数据进行统计学分析。结果：HE及免疫荧光检测实验组组织学变化明显好于对照组;F-VEP检查可见视神经损伤后即时闪光视觉诱发电位波形几近熄灭。伤后1周,两组潜伏期基本恢复至损伤前水平,振幅恢复缓慢,组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;2周以后两组间比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：睫状神经营养因子对视神经损伤有修复作用,可促进视神经轴突在原中枢环境中的再生。     

睫状神经营养因子对大鼠视神经不全损伤后轴浆运输的影响

目的探讨睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠视神经(optic nerve, ON)中度不全损伤后轴浆运输的影响.方法成年雌性Wistar大鼠50只,用无创血管夹于球后1.5 mm钳夹ON 10 s,造成ON中度损伤,于伤后即刻、伤后1、2、4和8周CNTF治疗组玻璃体腔内注射人重组睫状神经营养因子(rhCNTF)2 μg,对照组注射等量双蒸水.分别在不同的时间(1、2、4、8和12周)应用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)观察ON不全损伤后顺行轴浆运输的变化.结果伤后1～2周在损伤点后HRP顺染纤维度骤然下降,于上丘均未见HRP显色;伤后4周ON及上丘顺染密度逐渐增强至8周达高峰,对照组ON损伤远端顺染纤维度恢复至正常的12.87%,而治疗组至31.86%.两组间于ON损伤远端和上丘HRP顺染密度均有非常显著性差异(P<0.01).结论 CNTF可改善ON不全损伤后轴浆运输状况,促进ON结构的恢复.     

睫状神经营养因子研究进展

睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor,CNTF）自70年代发现以来备受重视,最早由Helfand等在1976年发现,1984年Barbin等从鸡睫状神经元提取获得,并于1989年获得CNTFcDNA,是一种在体外能促进鸡胚睫状神经元存活的蛋白质,属白细胞介素26（inter-leukin26,IL26）细胞因子家族成员。CNTF具有多种功能,能促进多种神经细胞的存活,是第1个被发现的能维持在体和离体脊髓运动神经元的存活及突起生长的神经营养因子。CNTF可诱导多种神经细胞分化,     

视网膜铺片小胶质细胞2种染色计数方法的比较

目的 比较2种视神经损伤后行视网膜铺片小胶质细胞染色计数方法的准确性.方法 取Long Evans大鼠6只,荧光金经双侧上丘及外侧膝状体逆行标记视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs),7d后制作视神经钳夹伤模型.钳夹伤后2周麻醉处死大鼠,将大鼠灌注固定后取眼球剥离完整视网膜,置于4％多聚甲醛中后固定2h,3只大鼠行视网膜铺片对荧光金标记的小胶质细胞进行计数,其余3只在视网膜固定后运用CD11b单克隆抗体免疫组化双重标记小胶质细胞后再行铺片计数.结果 视神经损伤后,活化的小胶质细胞吞噬了死亡RGCs碎屑而被荧光金着色,联合小胶质细胞免疫组化的染色方法能够更加清楚地在视网膜铺片上分辨出活化的小胶质细胞和存活的RGCs,荧光金标记与双重标记小胶质细胞的计数分别为(240.0±7.9)、(406.0±9.1)个/mm2.结论 运用荧光金联合免疫组化双重标记小胶质细胞能够较为准确地对视神经损伤后活化的小胶质细胞进行计数,是研究小胶质细胞更准确有效的染色方法.     

心肾同治法对糖尿病大鼠视网膜神经营养因子的作用

目的探讨心肾同治法指导下所创密蒙花复方对糖尿病大鼠视网膜病变神经功能损伤的保护机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、密蒙花复方组。通过链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。连续灌胃给药90 d,分别于第30、60、90天检测各组大鼠视网膜电生理指标,第90天时HE染色观察视网膜形态改变、TUNEL法检测视网膜神经节细胞凋亡及PCR、Western blot检测脑源性神经营养因子(BDNF)、视网膜睫状神经营养因子(CNTF)mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠视网膜电图振荡电位(OPs)波幅及b波波幅降低,视神经功能下降,差异具有统计学意义(P0.01)。模型组视网膜神经节细胞肿胀,排列紊乱,数目减少,BDNF和CNTF mRNA及蛋白表达下降。密蒙花复方组与模型组比较,OPs、b波波幅升高(P0.01),视网膜神经节细胞凋亡数目减少,视网膜BDNF和CNTF mRNA及蛋白表达升高。结论密蒙花复方可通过调节视网膜神经营养因子BDNF和CNTF表达水平对糖尿病大鼠视网膜病变神经功能损伤起到保护作用。     

银杏叶提取物对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞结构及功能的保护作用

目的： 探讨腹腔注射银杏叶提取物（Ginkgo biboba extract,EGb 761）对豚鼠视神经横断伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell, RGC）形态及功能的保护作用。 方法： 75只白化豚鼠随机等分为正常对照组、假手术组、模型组、生理盐水组和EGb 761组。分离暴露豚鼠的右眼视神经并于球后1.0 mm处进行横断造模,正常对照组不作任何处理,假手术组仅分离暴露视神经。生理盐水组和EGb 761组分别于实验开始前1周每日腹腔注射1次相应体积生理盐水和EGb 761（100 mg/kg）,术后继续给药4周。术后第4天,各组随机处死3只豚鼠,采用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end-labeling, TUNEL）法检测RGC凋亡;分别于术后第14和28天进行图形视网膜电图（pattern electoretinogram, PERG）检查;摘取眼球作组织病理学检查并计数视网膜垂直经线RGC数目。 结果： 术后第4天,正常对照组、假手术组和EGb 761组均未见TUNEL阳性RGC,模型组和生理盐水组均见有TUNEL阳性RGC。术后第14和28天,模型组和生理盐水组RGC数目均少于正常对照组和假手术组（P〈0.05）,EGb 761组少于正常对照组和假手术组（P〈0.05）,但显著多于模型组和生理盐水组（P〈0.05）;术后第14和28天,EGb 761组PERG的N95振幅较模型组和生理盐水组高（P〈0.05）,与模型组和假手术组相近（P〉0.05）。RGC数目与N95振幅呈正相关（r=0.859, P=0.001 5）。 结论： 腹腔注射银杏叶提取物EGb 761能抑制豚鼠视神经横断后的RGC凋亡,对RGC的结构和功能具有保护作用。     

Protective Effect of Paeoniflorin against Optic Nerve Crush

In order to evaluate the efficacy of traditional paeonia extract paeoniflorin against optic nerve crush, 16 Brown Norway rats were divided into two groups at random, with 8 rats in each group. In paeoniaflorin-treated group, 2 mg paeoniaflorin （total volum： 1 mL） was injected into rat＇s peritoneum one time a day for a period of 8 days. Rats in untreated group were given a single dose of vehicle. The optic nerve was crushed by a special forceps for 30 s in the left eye and a sham procedure was performed in the right eye on the 2nd day after the first injection. The retrograde fluorogold labeling of ganglion cells was conducted 5 days after optic nerve crush. The whole retina was flat-mounted thereafter. The ganglion cells that survived the crush were counted under fluorescent microscope by using an automatic counting software. As compared with the contralateral eye, the survival rate of ganglion cells in the left eye increased from 40.22% to 64.53% with a significant difference found between them （t=2.55, P=0.023）. The results suggested that the paeonia extract paeoniflorin possessed a protective effect against optic nerve crush.     

丙泊酚干预对大鼠视神经损伤的影响及机制研究

目的探讨大鼠视神经损伤后丙泊酚干预对损伤视神经及视网膜神经节的影响及机制。方法 SD大鼠67只,随机取20只为正常组,不予任何处理。余行视神经钳夹法造模,造模成功42只纳入实验。随机分为:模型对照组和丙泊酚组,各21只/组。造模后4 d,以TUNEL法检测大鼠视网膜和视神经细胞凋亡,造模后7 d,RT-PCR、Western-blot检测视网膜和视神经节细胞组织Caspase-3、BCL-2基因和蛋白表达。造模后14 d,行闪光视觉诱发电位检测,处死大鼠取眼球,观察各组大鼠视网膜和视神经的病理形态,行视网膜神经节细胞计数。结果造模后4 d,丙泊酚组视网膜神经节细胞凋亡数量明显低于模型对照组(P0.05),造模后7 d与模型对照组相比,丙泊酚组Caspase-3的表达显著降低(P0.05);BCL-2的表达显著升高(P0.05)。造模后14 d,荧光金阳性RGC数:模型对照组最少,丙泊酚组较多,正常组最多,且各组之间差异有统计学意义(P0.05)。丙泊酚组大鼠闪光视觉诱发电位伏期较模型对照组大鼠短(P0.05)、波幅明显高于模型对照组(P0.05)。结论丙泊酚干预通过减少大鼠视神经钳夹后RGCs的凋亡,降低视网膜Caspase-3的表达,升高BCL-2的表达,对视神经损伤起到保护作用。     

大鼠阴茎海绵体神经侧支解剖及其对勃起功能的影响

目的 探讨大鼠阴茎海绵体神经（CN）侧支对阴茎勃起的作用及对建立CN损伤动物模型的影响.方法 36只3～5月龄雄性SD大鼠,其中6只在外科显微镜下详细解剖盆腔神经节及其分支;另30只大鼠随机分成三组：Ⅰ假手术组,Ⅱ双侧CN主支切断组和Ⅲ双侧CN主支和侧支均切断组.分别于术后7d和30 d皮下注射阿朴吗啡,观察0.5 h内阴茎勃起情况.然后,在大鼠阴茎海绵体内注射神经示踪剂荧光金,5d后取大鼠盆腔神经节,冰冻切片后荧光显微镜下观察.结果 在前列腺背侧叶表面,盆腔神经节向尿道膜部方向发出CN主支和数根极为细小的分支.术后7d,Ⅰ组勃起次数为2.0±0.7,而Ⅱ、Ⅲ组大鼠无勃起反应;术后30d,Ⅲ组仍无勃起反应,Ⅱ组大鼠勃起次数0.9±0.7,但仍低于Ⅰ组（2.8±0.6）（P＜0.05）.荧光显微镜下计数,Ⅱ组盆腔神经节中可见较多荧光金阳性着色细胞,而Ⅲ组只可见极少数荧光金阳性着色细胞（P＜0.01）.结论 大鼠盆腔神经节发出的细小分支中含有对阴茎勃起有部分支配作用的CN侧支,建立大鼠CN损伤阴茎勃起功能障碍（ED）动物模型时应考虑CN侧支的影响.     

Protective effect of paeoniflorin against optic nerve crush

Summary In order to evaluate the efficacy of traditional paeonia extract paeoniflorin against optic nerve crush, 16 Brown Norway rats were divided into two groups at random, with 8 rats in each group. In paeoniaflorin-treated group, 2 mg paeoniaflorin (total volum: 1 mL) was injected into rat’s peritoneum one time a day for a period of 8 days. Rats in untreated group were given a single dose of vehicle. The optic nerve was crushed by a special forceps for 30 s in the left eye and a sham procedure was performed in the right eye on the 2nd day after the first injection. The retrograde fluorogold labeling of ganglion cells was conducted 5 days after optic nerve crush. The whole retina was flat-mounted thereafter. The ganglion cells that survived the crush were counted under fluorescent microscope by using an automatic counting software. As compared with the contralateral eye, the survival rate of ganglion cells in the left eye increased from 40.22% to 64.53% with a significant difference found between them (t=2.55, P=0.023). The results suggested that the paeonia extract paeoniflorin possessed a protective effect against optic nerve crush. This project was supported by the Natural Sciences Foundation of Hubei Province (No. 2007ABA135).     

CNTF对视神经损伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：研究睫状神经营养因子（CNTF）对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响。方法：采用中号显微血管夹建立视神经中度损伤模型后,取左眼作为治疗组,在即时、1、37、d时分别向玻璃体腔内注入2μl（1μg/μl）CNTF溶液;取右眼作为实验对照组,同治疗组在每个时间点向玻璃体腔内注入2μl双蒸水。于伤后1、3、71、4 d时分别做HE染色、原位末端标记法（TUNEL）检测。结果：光镜下观察治疗组细胞形态明显好于实验对照组。TUNEL显示凋亡RGCs数随视神经损伤时间延长而变化（P〈0.05）。伤后1 d,治疗组和实验对照组凋亡RGCs数两组间相比较无统计学意义（P〉0.05）。伤后3、7、14 d时治疗组的凋亡RGCs数明显比实验对照组少（P〈0.05）。结论：玻璃体腔内注射外源性CNTF可以减少RGCs的凋亡,对视神经中度损伤后RGCs具有明显保护作用。     

纳米微囊缓释VEGF促血管化修复大鼠周围神经缺损的研究

目的评价应用纳米微囊缓释VEGF促血管化及其修复周围神经缺损的效果。方法化学去细胞神经内显微注入纳米微囊缓释VEGF,修复大鼠15mm坐骨神经缺损为实验组（A组）,对照组为化学去细胞神经显微注入VEGF组（B组）和化学去细胞神经移植组（c组）,比较A、B、c组血管化时间。术后12周,检测肌电图、小腿三头肌湿重、神经微血管密度及再生轴突计数,评价其修复周围神经缺损的效果。结果术后,A组神经中心血管化的时间为7d,B、C组为13d。术后12周,A组神经传导速度、动作电位波幅、小腿三头肌湿重,微血管密度和神经轴突再生密度高于B、c组。结论纳米微囊缓释VEGF促进去细胞神经血管化,有利于神经轴突再生和功能恢复。     

大鼠坐骨神经切断后谷氨酰胺合成酶在脊髓后角内的表达变化

目的观察坐骨神经切断后不同时间点脊髓后角内谷氨酰胺合成酶（GS）的表达，探讨GS对神经元的保护机制。方法48只SD大鼠随机分为实验组（n=40）和对照组（n=8），其中实验组右侧坐骨神经切断，大鼠手术后分别存活1、3、7、14和21d（每时间点8只大鼠）。免疫组织化学方法检测脊髓后角内GS的表达变化。结果GS主要表达于神经胶质细胞胞体内。坐骨神经切断后GS表达开始增多，7d时GS表达最显著，之后GS表达下降，实验组各时间点与对照组相比具有统计学意义（P〈0．05），而实验组双侧后角相比无统计学意义（P〉0．05）。结论坐骨神经切断后脊髓后角内GS表达升高，这可能是GS对神经元保护作用的反应。     

OCT检测视网膜神经纤维层厚度在青光眼诊断中的应用进展

青光眼是一组具有特征性视神经损害和视野缺损的不可逆性致盲眼病,其病理损害基础是视网膜神经节细胞(RGC)及其轴索的损害。视网膜神经纤维层厚度(RNFL)反映了RGC轴突的数量,通过测量其厚度,可以在活体间接了解RGC的存活。光学相干断层扫描(OCT)是一种新的横截面成像技术,分辨率高,因而能对RNFL进行精确的测量。这个应用将在青光眼的诊断和随访中发挥重要的临床应用价值。