转凝蛋白在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨转凝蛋白(transgelin,TAGLN)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及其对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法:选取郑州大学附属肿瘤医院2015年5月至2016年8月收治的97例CRC患者的癌及配对的癌旁组织标本,以及人CRC细胞系SW620、SW480、HC...     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D,SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中,SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中,SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后,细胞E-cadherin的表达增高,N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05）,同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

lncRNA BLACAT1靶向结合miR-29a-3p调控甲状腺癌细胞TPC-1的生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA BLACAT1(lncRNA BLACAT1)调控microRNA-29a-3p(miR-29a-3p)对甲状腺癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能机制.方法:收集2018年06月至2019年03月在我院行甲状腺癌切除术的31例患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织.采用qRT-PCR检测lncRNA...     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

METTL3修饰的RNASEH1-AS1通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin 轴调控结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为

目的：探究甲基转移酶样蛋白3（METTL3）修饰的RNASEH1-AS1 通过BUD13/膜联蛋白A2/ Wnt/β-连环蛋白（BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin）轴调控结直肠癌细胞 SW480 恶性生物学行为的分子机制。方法：选取2022 年6 月至2022 年11月间在复旦大学附属中山医院厦门医院手术治疗的24例CRC患者,收集患者的CRC组织和对应的癌旁组织,用qPCR法检测其中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β mRNA的表达,用Pearson法分析CRC 组织中RNASEH1-AS1表达分别与METTL3和BUD13 表达的相关性。常规培养结直肠癌细胞SW480,分为sh-NC 组、sh-RNASEH1-AS1组、NC 组、 sh-METTL 组 、si-NC 组、si-BUD13 组、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC 组、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2 组、sh-METTL+pc-NC 组、 sh-METTL+pc-ASEH1-AS1组,用Lipofectamine? 2000 转染试剂将sh-NC、sh-RNASEH1-AS1、sh-NC、sh-METTL、si-NC、si-BUD13 、sh-RNASEH1-AS1+pc-NC 、sh-RNASEH1-AS1+pc-ANXA2 、sh-METTL+pc-NC 、sh-METTL+pc-ASEH1-AS1 分别转染 SW480细胞,用qPCR 法检测后SW480 细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 的表达,细胞克隆形成实验检测转染后各组SW480 细胞的增殖能力,FCM术检测转染后各组SW480 细胞的凋亡情况,细胞划痕实验检测转染后各组SW480 细胞的迁移能力,WB法检测转染后各组SW480 细胞中ANXA2、β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1 蛋白表达,RNA免疫沉淀（RIP）法检测RNASEH1-AS1与BUD1、BUD1与ANXA2的靶向关系。结果：数据库CRC数据分析和中国人CRC组织和癌旁组织的qPCR 法检测结果均显示,与癌旁组织相比CRC 组织中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2、β-catenin、GSK-3β 均呈明显高表达（均P<0.01）,且RNASEH1-AS1 表达与METTL3（r=0.698,P<0.01）、BUD13（r=0.784,P<0.01）的表达呈正相关。在结直肠癌各细胞中METTL3、RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2 mRNA均呈高表达（均P<0.05）;敲减RNASEH1-AS1或METTL3后SW480 细胞中RNASEH1-AS1、BUD13、ANXA2表达显著降低（均P<0.05）,而过表达RNASEH1-AS1后上述分子表达明显上调（均P<0.05）;敲减RNASEH1-AS1 或METTL3 可抑制SW480 的增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、 cyclinD1蛋白的表达,促进其凋亡（均P<0.05）,而过表达RNASEH1-AS1 则可促进SW480 增殖、迁移和p-β-catenin、p-GSK-3β、c-Myc、cyclinD1蛋白的表达和抑制其凋亡（均P<0.05）;RNASEH1-AS1通过招募BUD13靶向促进ANXA2的表达（均P<0.05）;过表达ANXA2 可部分逆转敲减RNASEH1-AS1 对SW480 细胞的影响（均P<0.05）。结论：METTL3 修饰的RNASEH1-AS1 通过BUD13/ANXA2/Wnt/β-catenin轴调控SW480细胞的恶性生物学行为。     

lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p促进结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移

目的： 探讨lncRNA SNHG10在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响与可能的机制。 方法： 收集2018年1月至2019年12月在河南省人民医院行根治性结直肠癌切除术的78例患者的癌组织及对应癌旁组织标本,采用qPCR法检测结直肠癌组织、结直肠癌细胞（SW480、SW620、HT-29和LoVo）及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA SNHG10和miR-532-3p的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系及在组织中表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SNHG10和miR-532-3p间的靶向关系。向SW620细胞中转染si-SNHG10或miR-532-3p mimic或共转染si-SNHG10+miR-532-3p inhibitor,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用WB法检测E-cadherin,N-cadherin和vimentin蛋白表达水平变化。 结果： SNHG10 在结直肠癌组织和细胞中呈高表达（P<0.05 或 P<0.01）,其表达水平与TNM分期和远处转移有关（均P<0.05）;miR-532-3p在结直肠癌组织和细胞中呈低表达,其表达水平与TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关（P<0.05或P<0.01）,SNHG10和miR-532-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.225, P=0.048）。双荧光素酶报告基因实验证实SNHG10靶向调节miR-532-3p的表达。下调 SNHG10 或上调 miR-532-3p 的表达后,SW620 细胞的侵袭和迁移能力显著降低（P<0.01）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平降低（均P<0.05）。抑制miR-532-3p表达后,敲低lncRNA SNHG10表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转（均P<0.05）。 结论： lncRNA SNHG10在结直肠癌中高表达并与TNM分期和远处转移相关,lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p表达并通过EMT途径影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。     

LINC01089通过调控miR-27 a-3p/TET1轴抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移

目的:本研究旨在探究胰腺癌中长链非编码RNA 01089(LINC01089)/miR-27a-3p/TET1轴在胰腺癌进展中的作用及其机制.方法:通过GEPIA数据库分析LINC01089在胰腺癌中的表达及其与预后的相关性.使用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC01089、miR-27a-3p、TET...     

lncRNA SNHG14通过靶向miR-433-3p调控甲状腺癌SW579细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA SNHG14对甲状腺癌SW579细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:收集2017年10月至2018年12月青海省人民医院收治的20例甲状腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本,用qPCR检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中SNHG14与miR-433-3p的表达;根据转染物的不同,将SW579细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG14组(转染si-SNHG14)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)、si-SNHG14+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG14与anti-miR-NC)和si-SNHG14+anti-miR-433-3p组(共转染si-SNHG14与anti-miR-433-3p)。MTT法、FCM、Transwell实验分别检测转染后SW579细胞的增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率、迁移及侵袭能力的改变;利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG14是否可结合miR-433-3p,qPCR法检测SNHG14与miR-433-3p之间的相互调控关系。结果:S...     

lncRNA HOTAIR通过miR-519d-3p/CCND1 分子轴促进乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为

目的：探究lncRNA HOTAIR/miR-519d-3p/CCND1 分子轴对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法：收集2017 年3 月至2019 年2 月南昌市第三医院乳腺外科手术切除的乳腺癌患者的乳腺癌组织及配对癌旁组织各50 例,qPCR检测癌及癌旁组织中HOTAIR 的表达水平,乳腺正常上皮细胞及乳腺癌细胞系中HOTAIR 和miR-519d-3p 的表达水平。将乳腺癌SKBR3 细胞分为NC 组、si-HOTAIR 组、miR-519d-3p mimics 组,miR-519d-3p mimics+pcHOTAIR 组、miR-519d-3p mimics+pcCCND1 组和si-HOTAIR+pcCCND1 组,CCK-8 法检测各组SKBR3 细胞增殖能力、Transwell 检测细胞侵袭和迁移能力、Western blotting 检测SKBR3 细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 以及CCND1 表达水平。双荧光素酶报告基因检测HOTAIR 和miR-519d-3p 以及miR-519d-3p 和CCND1 的靶向关系。结果：HOTAIR在癌组织以及乳腺癌细胞系中呈高表达,且在SKBR3 细胞系中表达最高。敲降HOTAIR可显著抑制SKBR3 细胞增殖、侵袭和迁移,并显著增加E-cadherin 的表达水平、降低N-cadherin 和Vimentin的表达水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测显示,HOTAIR 靶向下调miR-519d-3p 的表达,miR-519d-3p 靶向下调CCND1 的表达。敲降HOTAIR可增强miR-519d-3p 对CCND1 的下调作用,抑制SKBR3 细胞EMT、增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。结论：敲降HOTAIR可抑制SKBR3 细胞增殖和转移,其机制是通过调控miR-519d-3p/CCND1 分子轴实现的。     

miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞的恶性生物学行为

目的：探索miR-149-3p 对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其机制。方法: HeLa 细胞随机分为5组：未转染(HeLa)组、mimic-scramble 组、miR-149 mimic 组、FOXP3 过表达(pc-FOXP3)组、共转染(mimic+pc-FOXP3)组,Mimicscramble为miR-149 mimic 的阴性对照随机序列。荧光素酶实验验证miR-149-3p 与FOXP3 的靶向结合关系。实时定量PCR(qRT-PCR)检测HeLa 细胞中miR-149-3p 表达及FOXP3 的mRNA水平,Western blotting 检测FOXP3 的蛋白水平。CCK-8 检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell 实验检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。结果: 荧光素酶实验显示miR-149-3p可靶向结合FOXP3。与未转染组相比miR-149 mimic 组miR-149-3p 表达升高、FOXP3 mRNA水平下降(P<0.01),而且miR-149mimic 组FOXP3 蛋白水平低于未转染组(P<0.01)、pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平降低(P<0.01)。miR-149 mimic 组细HeLa 胞增殖倍数低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组细胞增殖倍数高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组细胞增殖倍数下降(P<0.01);miR-149 mimic 组HeLa 细胞凋亡率高于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组细胞凋亡率低于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3组细胞凋亡率上升(P<0.01);miR-149 mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降(P<0.01)。结论：miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,同时促进细胞凋亡。     

中药地锦草乙醇提取物体外抑制胃癌细胞增殖活性及机制研究

目的:探讨地锦草乙醇提取物(EEEH)对人胃癌(GC)细胞BGC823、MGC803、SGC7901及AGS增殖活性的抑制作用及机制。方法:采用蒸馏和冻干技术制备EEEH,用不同浓度的EEEH(62.5、125、250和500μg/m L)处理GC细胞,并设置溶剂对照组和空白对照组。采用MTS法检测胃癌细胞存活率;采用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率和周期分布;采用Western blot法检测胃癌细胞增殖、凋亡以及周期相关蛋白的表达水平。结果:MTS细胞增殖实验结果显示,与对照组相比,随着地锦草乙醇提取物浓度增加,GC细胞的增殖能力逐渐减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,62.5、125和250μg/m L的EEEH处理GC细胞MGC803和AGS 24 h后,与对照组相比,GC细胞的凋亡率显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05),并且AGS细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期(P均<0.05);Western blot检测结果显示,与对照组相比,经EEEH处理过的胃癌细胞中增殖相关蛋白PCNA以及抗凋亡相关蛋白BCL-2和BCL-XL的蛋白表达水平显著降低,促凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3出现明显的活性裂解片段,表明经EEEH处理后胃癌细胞凋亡活性增强,差异均有统计学意义(P<0.05),而caspase-9的蛋白表达水平并无明显变化。结论:EEEH能够抑制GC细胞增殖,其机制可能与EEEH诱导细胞凋亡和周期阻滞有关。     

中药地锦草乙醇提取物体外抑制胃癌细胞增殖活性及机制研究

目的：探讨地锦草乙醇提取物（EEEH）对人胃癌（GC）细胞BGC823、MGC803、SGC7901及AGS增殖活性的抑制作用及机制。方法：采用蒸馏和冻干技术制备EEEH，用不同浓度的EEEH（62.5、125、250和500 μg/mL）处理GC细胞，并设置溶剂对照组和空白对照组。采用MTS法检测胃癌细胞存活率；采用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率和周期分布；采用Western blot法检测胃癌细胞增殖、凋亡以及周期相关蛋白的表达水平。结果：MTS细胞增殖实验结果显示，与对照组相比，随着地锦草乙醇提取物浓度增加，GC细胞的增殖能力逐渐减弱，差异均有统计学意义（P < 0.05）；流式细胞术检测结果显示，62.5、125和250 μg/mL的EEEH处理GC细胞MGC803和AGS 24 h后，与对照组相比，GC细胞的凋亡率显著增加，差异均有统计学意义（P < 0.05），并且AGS细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期（P均 < 0.05）；Western blot检测结果显示，与对照组相比，经EEEH处理过的胃癌细胞中增殖相关蛋白PCNA以及抗凋亡相关蛋白BCL-2和BCL-XL的蛋白表达水平显著降低，促凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3出现明显的活性裂解片段，表明经EEEH处理后胃癌细胞凋亡活性增强，差异均有统计学意义（P < 0.05），而caspase-9的蛋白表达水平并无明显变化。结论：EEEH能够抑制GC细胞增殖，其机制可能与EEEH诱导细胞凋亡和周期阻滞有关。     

lncRNA SNHG11通过吸附miR-193a-5p促进NSCLC细胞A549的恶性生物学行为

目的：探讨lncRNA SNHG11对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能机制。方法:qPCR检测人胚肺细胞HEL-1和NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11和miR-193a-5p的表达水平,向A549细胞中转染SNHG11小干扰RNA(si-SNHG11)、miR-193a模拟物（miR-193a mimic）或miR-193a抑制剂（miR-193a inhibitor）后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室和细胞划痕实验检测对细胞侵袭和迁移的影响,WB法检测对细胞增殖抗原Ki67、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达的影响,双荧光素酶报告实验验证lncRNA SNHG11与miR-193a-5p的靶向关系。结果：与人胚肺细胞HEL-1相比,NSCLC细胞A549、H1299、HCC827中lncRNA SNHG11均呈高表达、miR-193a-5p呈低表达（均P<0.05）;沉默lncRNA SNHG11可抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移,降低细胞中Ki67和Cyclin...