昆明小鼠耳蜗内脂肪酸转运蛋白4的表达与分布

目的 探索昆明小鼠耳蜗组织中脂肪酸转运蛋白4 (FATP4)的表达与分布。方法 选取健康成年(10周)昆明小鼠8只(16耳),其中2只(4耳)用于免疫荧光染色,6只(12耳)用于Western blot蛋白检测。通过耳蜗石蜡切片免疫荧光染色检测FATP4在耳蜗内各组织中的表达分布,Western blot蛋白检测耳蜗组织FATP4的表达水平。结果 耳蜗石蜡切片免疫荧光染色提示FATP4主要分布于耳蜗螺旋神经节、蜗轴、支持细胞、内毛细胞、外毛细胞、血管纹的中间细胞,Western blot蛋白检测结果进一步验证了FATP4在昆明小鼠耳蜗表达。结论 本研究初步揭示了FATP4在成年昆明小鼠耳蜗中的表达具有一定的特异性,为进一步研究耳蜗内脂肪酸代谢提供了理论依据。     

噪声诱导豚鼠耳蜗应激蛋白表达的研究

目的：探讨噪声对耳蜗应激蛋白（ＳＰ,亦即ＨＳＰ）的诱导。方法：用免疫组织化学结合图像分析技术检测噪声刺激后豚鼠耳蜗ＨＳＰ７０的表达。结果：在正常状态下耳蜗表达ＨＳＰ７０的部位（Ｃｏｒｔｉ器,螺旋神经节,血管纹,齿间细胞）经１００ｄＢ声强级的白噪声暴露４５ｍｉｎ后,其ＨＳＰ７０的表达均增强,其中以Ｃｏｒｔｉ器和螺旋神经节更明显,Ｐ值均小于０．０１。结论：白噪声对豚鼠耳蜗ＨＳＰ７０表达具有明显的诱导作用。     

噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin31表达的影响

目的观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin31(Cx31)表达的变化。方法选用成年雄性Balb/c小鼠44只,随机分为噪声组和对照组,每组22只。两组小鼠均在实验前检测听性脑干反应(ABR),随后应用声刺激器给予噪声组小鼠高强度白噪声(115dB SPL,6h/d,共2天),并在噪声暴露结束后1h再检测噪声组小鼠ABR。对照组不予噪声刺激。于噪声暴露后4h,每组各取4只小鼠耳蜗做冰冻切片,其余18只小鼠提取耳蜗外侧壁组织总RNA,通过免疫荧光染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx31蛋白的表达,荧光实时定量PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx31mRNA的表达。结果对照组小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx31特异性荧光,血管纹处未见阳性荧光;噪声组小鼠耳蜗外侧壁免疫荧光染色阳性反应较对照组减弱,Cx31mRNA表达量明显低于对照组。结论噪声能下调Cx31在小鼠耳蜗外侧壁组织的表达,Cx31可能参与了噪声性聋的发病机制。     

噪声对豚鼠耳蜗电位及其超微结构的影响

目的观察噪声暴露对豚鼠耳蜗电位和超微结构的影响。方法选用健康杂色豚鼠10只,以右耳为噪声暴露耳,以左耳为对照耳,右耳持续给白噪声100dBSPL2小时。于噪声暴露前及噪声暴露后测量右耳耳蜗电位,并于噪声暴露后取噪声暴露耳和对照耳的耳蜗,应用透射电镜进行形态学的观察。结果噪声暴露后耳蜗微音电位幅度下降并且其非线性特点消失,听神经复合动作电位阈值明显升高;内毛细胞及其下方传入神经末梢空化,外毛细胞溶酶体增多、胞浆内出现空泡。结论噪声暴露不仅引起外毛细胞的损伤,还可以引起内毛细胞及传入神经纤维的损伤。     

噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障通透性的影响

目的研究噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障功能的影响。方法40只豚鼠随机分为正常对照组(20只)和噪声暴露组(20只),噪声暴露组给予声强为115dB SPL白噪声暴露,每天6小时,连续两天,对照组不予噪声暴露。于实验前及噪声暴露后次日对两组豚鼠行ABR检测,第二次ABR检测后对两组豚鼠耳蜗基底膜行鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)染色;用硝酸镧透射电镜和常规透射电镜观察两组豚鼠内耳血迷路屏障通透性和紧密连接的变化;Western blot和免疫组织化学染色观察两组豚鼠耳蜗血管纹和螺旋韧带处claudin-5的表达。结果噪声暴露组豚鼠ABR波Ⅲ反应阈较正常对照组阈移40dB以上,差异有统计学意义(P<0.05);基底膜铺片FITC染色示噪声暴露组底回基底膜毛细胞大量缺失,其余部分毛细胞纤毛排列紊乱并出现融合,而对照组毛细胞排列整齐,其纤毛呈V或W型,两组间外毛细胞计数比较差异有统计学意义(P<0.05);透射电镜下,可见噪声暴露组血管内皮细胞间和边缘细胞间的紧密连接均遭到破坏,细胞间隙增大;硝酸镧透射电镜下,大量镧颗粒从血管腔内渗漏到管腔外的组织间隙,而对照组镧颗粒仅局限于血管腔内;Western blot结果示,两组耳蜗外侧壁血管纹均有claudin-5表达,但噪声暴露组的表达量明显低于正常组;免疫组织化学染色也表明,两组豚鼠耳蜗外侧壁毛细血管内皮细胞、边缘细胞等处均有claudin-5阳性表达,但噪声组表达量显著低于正常组(P<0.05)。结论噪声通过下调紧密连接蛋白claudin-5的表达,破坏细胞间紧密连接,增加豚鼠血迷路屏障的通透性,从而导致内耳微环境的破坏,是噪声性聋可能的发病机制之一。     

噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26表达的影响

目的 观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26(Cx26)表达的变化.方法 成年雄性Balb/c小鼠49只随机分为噪声组(29只)和对照组(20只).实验前两组小鼠检测听性脑干反应(ABR),随后噪声组小鼠给予高强度噪声(115 dB SPL,6小时/天,共2天12小时)暴露,并在噪声暴露后0和7天分别检测ABR.对照组不做任何处理.噪声暴露后4小时,每组取2只小鼠做耳蜗冰冻切片,18只小鼠提取耳蜗外侧壁总RNA.通过免疫组化染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx26蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察缝隙连接蛋白转运相关蛋白--β微管蛋白的表达,荧光实时定量 PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx26编码基因GJB2 mRNA的表达.结果 正常小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx26棕黄色阳性颗粒,血管纹处未见阳性表达;噪声组小鼠耳蜗外侧壁Cx26免疫组化染色较对照组减弱;Cx26编码基因GJB2 mRNA表达量低于对照组,β微管蛋白排列稀疏紊乱,呈条索状排列,但未见明显浓集或断裂.结论 噪声可下调小鼠耳蜗外侧壁Cx26的表达,Cx26可能参与了噪声性聋的发病机制.     

噪声对大鼠耳蜗基底膜凋亡诱导因子表达的影响

目的探讨噪声暴露前后凋亡诱导因子（AIF）在大鼠不同回基底膜外毛细胞的表达差异以及与噪声性聋高频听力易损性的关系。方法40只SD大鼠随机分为正常对照组和噪声暴露组：噪声暴露组给予声强为115dB SPL白噪声暴露,每天2小时,连续3天,对照组不予噪声暴露。分别于噪声暴露前1日、暴露后1、3、7、14日对两组大鼠行ABR检测,最后一次ABR检测后对两组大鼠耳蜗基底膜行鬼笔环肽—异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)染色。West-ern blot和免疫荧光染色法观察两组大鼠耳蜗不同回基底膜处AIF的表达。结果大鼠噪声暴露后与暴露前相比,ABR各频反应阈值于暴露后1天最高,随时间逐渐恢复,14天时趋于稳定,听力低频阈移约10dB,高频阈移有30dB (P<0.05);基底膜铺片FITC染色示噪声暴露组底回基底膜毛细胞较顶回缺失严重,且有纤毛排列紊乱并出现融合,而对照组毛细胞排列整齐,纤毛呈V或W型,两组间外毛细胞计数比较差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果示,在正常情况下,顶回基底膜的AIF表达高于底回,噪声暴露后,AIF顶、底回基底膜表达均较对照组相应部位增高,且顶回较底回更为显著(P<0.05)。结论噪声暴露过程中,AIF在促凋亡的同时更发挥出了氧化还原酶的作用,因而AIF在耳蜗基底膜顶、底回的表达差异,可能是噪声性聋高频听力易损性的分子机制之一。     

未折叠蛋白反应在强噪声致豚鼠耳蜗细胞损伤过程中的作用

目的 探讨未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)标志物葡萄糖调节蛋白78(Bip/GRP78)在强噪声致豚鼠耳蜗细胞损伤中的作用.方法 48只豚鼠随机分为6组,分别为健康对照组(不给噪声暴露)和强噪声暴露后3 h、1 d、4 d、14 d、30 d组,每组8只,噪声暴露的5组豚鼠在...     

噪声对豚鼠耳蜗基底膜乙酰化组蛋白H2B表达的影响

目的 观察噪声性聋豚鼠耳蜗基底膜毛细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平的变化,探讨组蛋白乙酰化与噪声性听力损失的相关性.方法 成年雄性白色红目豚鼠60只随机分为噪声组和对照组,两组豚鼠分别进行听性脑干反应(ABR)检测后,噪声组给予高强度窄带噪声(122 dB SPL,3小时)暴露,对照组不予任何处理;噪声组于噪声暴露后1小时、3天、7天、14天和21天分别行ABR检测;并以免疫荧光染色和Western blot方法检测两组豚鼠耳蜗基底膜听觉细胞中乙酰化组蛋白H2B的表达水平.结果 噪声暴露后1小时、 3天、7天、14天、21天噪声组豚鼠ABR各频率反应阈均较噪声暴露前及对照组显著增高,且随时间的延长听力逐渐恢复,14天时趋于稳定,达到永久性阈移.免疫荧光染色显示在噪声组豚鼠耳蜗内外毛细胞及Hensen's细胞中乙酰化组蛋白H2B荧光强度较正常对照组减弱,Western blot结果显示噪声组豚鼠耳蜗基底膜中乙酰化组蛋白H2B的表达(H2B-AcK5/β-actin比值为0.310 2±0.083 9)较对照组(0.617 9±0.126)明显下调,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 噪声可导致豚鼠内耳感觉细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平下降,乙酰化组蛋白失衡有可能参与了噪声性聋的发生.     

神经营养因子对噪声引起豚鼠耳蜗外毛细胞损伤的防护作用

目的 定量观察胶质细胞源性神经营养因子(glial cell ine-derived neurotrophic factor,GDNF)和神经营养-3(neurotrophin-3,NT-3)对噪声引起豚鼠耳蜗外毛细胞损伤的防护作用。方法 将微渗透压泵埋置于豚鼠背部,经固定于耳蜗底回鼓阶内的改良微导管将GDNF(100ng/ml)和NT-3(2.5μg/ml)的混合液缓慢注入12只豚鼠左侧内耳,以左侧内耳灌注人工外淋巴液的9只豚鼠为对照,检测噪声暴露后豚鼠听功能和耳蜗外毛细胞形态、数量的变化。结果 噪声暴露10天后,实验组手术耳和非手术耳的脑干诱发电反应阈值低于对照组(P<0.05,p<0.01)。毛细胞表皮板和纤毛肌动蛋白荧光染色计数发现,实验组手术耳和非手术耳的外毛细胞缺失率低于对照组(p<0.001,p<0.01)。毛细胞核荧光染色计数发现,实验组手术耳和非手术耳的外毛细胞核肿胀率低于对照组(p<0.01,p<0.01)。结论 GDNF和NT-3对噪声引起豚鼠耳蜗外毛细胞损伤具有较好的防护作用。     

稳态噪声性听神经损伤后耳蜗内人神经营养素-3基因重组腺病毒的表达与观察

目的观察含有人神经营养素-3(human neurotrophin-3,hNT-3)的重组腺病毒(Ad-NT3)在稳态噪声性听神经损伤后耳蜗内的表达。方法30只听力正常豚鼠暴露于稳态强噪声(130 dB SPL×5 h),3天后经鼓阶外淋巴腔内导入目的基因,24只注射Ad-NT3,6只注射人工外淋巴液作为对照。分别于基因导入后第11、28、56天取材,用免疫组织化学染色方法观察Ad-NT3在耳蜗内的转染。结果基因导入后第11天可见Ad-NT3在耳蜗内成功转染,耳蜗各回均有表达,表达强度在各回基本相等;第28天仍可见Ad-NT3在耳蜗内表达,蜗轴区表达最强,但较第11天表达减弱;56天时未见表达。结论NT-3重组腺病毒能在稳态噪声性听神经损伤后耳蜗内实现高效表达,表达可以持续相当长时间。     

Nrf2及其信号通路相关因子在噪声性聋大鼠耳蜗的表达

目的：研究Nrf2／Keapl－ARE信号通路相关因子核因子2（nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2）、超氧化物歧化酶1（superoxide dismutas 1,SOD1）、血红素加氧酶1（heme oxygenase－1,HO－1）在噪声致聋大鼠耳蜗的表达变化。方法 SD大鼠30只,随机分为噪声组15只和正常对照组15只。正常对照组不给予噪声暴露,噪声组动物给予连续12小时115 dB SPL的稳态白噪声暴露,分别于噪声暴露后1、3、7天对两组动物进行ABR和DPOAE检测,并于噪声暴露7天后取耳蜗组织运用RT －PCR技术及 Peggy Sue微量蛋白检测技术检测 Nrf2、SOD1、HO －1的表达。结果噪声暴露后1、3、7天,噪声组大鼠ABR反应阈均高于正常对照组（P＜0．05）,噪声组DPOAE幅值较正常组明显下降（P＜0．05）;噪声暴露后7天,噪声组大鼠耳蜗Nrf2、SOD1、HO －1的mRNA表达（1．11±0．05、1．45±0．12、1．15±0．03）上调,高于正常对照组（1．00±0．02、1．10±0．12、0．92±0．08）,差异均有统计学意义（P＜0．05）。Peggy Sue微量检测系统检测结果显示噪声组Nrf2及SOD1、HO －1蛋白含量均高于正常组（P＜0．05）。结论强噪声暴露后,SD大鼠耳蜗Nrf2基因表达和蛋白含量升高,Nrf2／Keapl－ARE信号通路下游抗氧化酶SOD1、HO －1基因表达和蛋白含量也随即上调,此改变可能对噪声引起的耳蜗内氧化应激损伤有一定的保护作用。     

Survival of Partially Differentiated Mouse Embryonic Stem Cells in the Scala Media of the Guinea Pig Cochlea

The low regenerative capacity of the hair cells of the mammalian inner ear is a major obstacle for functional recovery following sensorineural hearing loss. A potential treatment is to replace damaged tissue by transplantation of stem cells. To test this approach, undifferentiated and partially differentiated mouse embryonic stem (ES) cells were delivered into the scala media of the deafened guinea pig cochlea. Transplanted cells survived in the scala media for a postoperative period of at least nine weeks, evidenced by histochemical and direct fluorescent detection of enhanced green fluorescent protein (EGFP). Transplanted cells were discovered near the spiral ligament and stria vascularis in the endolymph fluid of the scala media. In some cases, cells were observed close to the damaged organ of Corti structure. There was no evidence of significant immunological rejection of the implanted ES cells despite the absence of immunosuppression. Our surgical approach allowed efficient delivery of ES cells to the scala media while preserving the delicate structures of the cochlea. This is the first report of the survival of partially differentiated ES cells in the scala media of the mammalian cochlea, and it provides support for the potential of cell-based therapies for sensorineural hearing impairment.     

干细胞移植治疗噪声性和药物性聋的比较实验研究

目的：比较耳蜗干细胞移植治疗噪声性聋豚鼠和药物性聋豚鼠模型的效果。方法选用清洁级健康成年纯白红目豚鼠120只,建立噪声性聋模型耳蜗干细胞移植组、噪声性聋模型空白对照组、药物性聋模型耳蜗干细胞移植组、药物性聋模型空白对照组,每组30只;向噪声性聋模型耳蜗干细胞移植组和药物性聋模型耳蜗干细胞移植组耳蜗分别注入耳蜗干细胞悬液10μl,向噪声性聋模型空白对照组和药物性聋模型空白对照组耳蜗分别注入10μl 生理盐水。于术后7、28、56 d 进行 ABR 检测并进行免疫荧光观测 Nestin 阳性细胞数和 MyosinⅦA阳性细胞数。结果在噪声性聋和药物性聋耳蜗干细胞移植组的耳蜗鼓阶处观测到 Nestin 阳性细胞和 MyosinⅦA 阳性细胞,但噪声性聋干细胞移植组的 Nestin 阳性细胞和 MyosinⅦA 阳性细胞数量多于药物性聋干细胞移植组;耳蜗干细胞移植后噪声性聋和药物性聋组 ABR 反应阈均下降,但术后28天和56天噪声性聋干细胞移植组ABR 阈值分别为52．61±5．14和40．39±4．59 dB SPL,低于药物性聋干细胞移植组（分别为66．39±4．77和60．41±4．17 dB SPL）。结论耳蜗干细胞移植对于噪声性聋豚鼠模型的治疗效果优于药物性聋豚鼠模型。     

某部队官兵个体噪声暴露水平的测量与分析

目的：调查某坑道施工部队作业官兵的个体噪声暴露水平及超标人群工种的分布。方法按照部队施工情况,将官兵分为9个工种,使用个人声暴露计分别测量该部队官兵8小时等效声级（LAeq.8h）,按照《军事作业噪声容许限值及测量》（GJB 50A-2011）标准评价官兵噪声暴露水平是否超标。结果此坑道官兵的LAeq.8h波动在76.5～109.2 dB（A）,平均值88.90 dB（A）,其中台车操作手、破碎机操作手、强噪声工（暴露于各种机械噪声）、卡车操作手、装载机操作手、挖掘机操作手、喷杆工、装料工、弱噪声工（不常暴露于各种机械噪声环境）的LAeq.8h的平均值分别为103.37、88.97、91.00、85.45、90.32、89.72、86.53、81.60、83.10 dB（A）。结论除了弱噪声、装料人员,其他工种均已超过军事作业噪声容许限值85 dB（A）。在此坑道施工的官兵应加强噪声防护,以避免噪声性耳聋发生。     

Follow-Up of Auditory-Evoked Potentials and Temporary Threshold Shift in Subjects Developing Noise-Induced Permanent Hearing Loss1

The effects of auditory fatigue, using a temporary threshold shift (TTS) paradigm, on cochlear microphonics (CM) and on auditory brainstem-evoked potentials (ABEP), were studied in normal-hearing subjects during the development of permanent threshold shift (PTS). Behavioral threshold shifts were accompanied by different effects on CM and on ABEP, as PTS was gradually induced by occupational noise. Measures of the effect of increasing stimulus rate (ISR) on ABEP revealed decreased latency shifts during auditory fatigue. ABEP proved useful in early detection of changes in the auditory system, resulting from exposure to noise. In addition, this study further supports the suggestion that TTS acts as a peripheral attenuator of the effect of ISR on the central auditory pathway.

On a étudié les effets de la fatigue auditive sur le microphonique cochléaire (MC) et les réponses du tronc cérébral (RTC) en utilisant le déplacement temporaire du seuil (DTS), sur des sujets normo-entendants, pendant le développement du seuil de déplacement permanent. Les changements dans les seuils subjectifs sont accompagnés d'effets différents sur le MC et les RTC. L'accroissement du rythme de stimulation (ARS) réduit les changements de latence durant la fatigue auditive. Les RTC permettent de détecter précocement les changements auditifs dus au bruit. Cette étude suggère en outre que le DTS interviendrait comme un atténuateur périphérique des effets de l'ARS sur les voies auditives centrales.     

Acute Treatment of Noise Trauma with Local Caroverine Application in the Guinea Pig

Intense sound stimulation may result in excessive glutamate release from the inner hair cells, resulting in binding to the post-synaptic glutamate receptors and leading to neuronal degeneration and functional impairment. In this study we investigated the therapeutic effect and time window of caroverine, an N-methyl-D-aspartate and α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptor antagonist, on noise-induced hearing loss. Guinea pigs were exposed to one-third octave band noise centered at 6.3 kHz (110 dB sound pressure limit) for 1 h. One or 24 h after noise exposure, caroverine was applied to the round window membrane. Auditory brainstem responses were recorded at regular time intervals. It was shown that caroverine could significantly decrease hearing impairment after noise trauma when applied 1 but not 24 h after noise exposure.     

银杏叶提取物对噪声致大鼠螺旋神经节损伤的保护作用

目的探讨银杏叶提取物对大鼠噪声暴露后螺旋神经节损伤的保护作用。方法将36只SD大鼠分为三组：正常对照组（正常组）、生理盐水＋噪声暴露组（噪声组）、银杏叶提取物＋噪声暴露组（用药组）,每组12只。后两组大鼠每天暴露于110dBSPL白噪声中6h,连续10天,且于噪声暴露开始每天分别腹腔注射生理盐水和银杏叶提取物10ml/d。所有大鼠均于实验前和实验第10天检测听性脑干反应（auditory brainstem response,ABR）,并于第二次测试ABR后处死动物,检测耳蜗组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量,并用透射电镜观察耳蜗螺旋神经节细胞的超微结构变化。结果实验后噪声组和用药组的ABR阈值均高于正常组,但用药组显著低于噪声组,差异有统计学意义;用药组SOD活性较噪声组明显增加、MDA含量较噪声组显著降低,差异有统计学意义;用药组耳蜗螺旋神经节损害明显轻于噪声组。结论银杏叶提取物对大鼠噪声暴露后螺旋神经节细胞的损害具有保护作用。