荧光定量PCR法检测HBV-DNA室内质控物的制备及质控图的应用

目的制备HBV—DNA荧光定量PCR检测室内质控物，建立室内质控管理体系，利用Excel表格进行质控图的绘制。方法取单一浓度HBV—DNA阳性血清，稀释至一定浓度后，分装数管，-70℃保存。连续检测20次，计算均值、标准差和变异系数，绘制质控图，进行室内质控动态监测。结果HBV—DNA室内质控均值的对数值为5．573，标准差为0．244，变异系数为4．4％，稳定性很好，有临床应用价值，质控图利用Excel表格标示出警告限和失控限，有利于动态监控。结论荧光定量PCR方法进行HBV—DNA检测的质控物制备简单，稳定性良好，质控图操作方便，一目了然，适合临床实验室应用和推广。     

CMV-DNA荧光定量PCR检测室内质控物的制备及初步应用

目的制备巨细胞病毒DNA(CMV-DNA)荧光定量PCR检测的室内质控物,并对其临床应用进行初步评价。方法收集一批CMV-DNA阳性尿液标本混合后作为室内质控物,前20次检测采用"即刻法"判断结果是否在质控范围内,20次后采用Levey-Jennings质控图,确定其靶值、标准差和变异系数,对室内质控结果进行判断。结果 107次试验中,前20次根据"即刻法",室内质控结果在控;20次后采用Levey-Jennings质控图,结果在控;60次检测结果的均值为5.41,标准差为0.33,变异系数为6.15%。结论利用混合尿液标本制备CMV-DNA室内质控物,制备方便,测定结果稳定,可以用作本实验室检测CMV-DNA的室内质控物。     

荧光定量PCR法检测HBV—DNA室内质控物的制备及质控图的应用

目的制备HBV—DNA荧光定量PCR检测室内质控物，建立室内质控管理体系，利用Excel表格进行质控图的绘制。方法取单一浓度HBV—DNA阳性血清，稀释至一定浓度后，分装数管，-70℃保存。连续检测20次，计算均值、标准差和变异系数，绘制质控图，进行室内质控动态监测。结果HBV—DNA室内质控均值的对数值为5．573，标准差为0．244，变异系数为4．4％，稳定性很好，有临床应用价值，质控图利用Excel表格标示出警告限和失控限，有利于动态监控。结论荧光定量PCR方法进行HBV—DNA检测的质控物制备简单，稳定性良好，质控图操作方便，一目了然，适合临床实验室应用和推广。     

荧光定量PCR检测HCV-RNA的研究进展

荧光定量PCR(FQ-PCR)是近几年来发展起来的可用于检测丙型肝炎病毒(HCV)感染的一种新手段。现介绍目前常用的荧光定量PCR技术,并通过与常规定性PCR和ELISA法的比较阐明该技术对HCV进行定量检测的临床价值。     

荧光定量PCR测定HBV DNA室内质控方法的探讨

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的室内质控方法。方法统计上海地区PCR实验室HBV DNA常规条件下前20次室内质控数据的不精密度(CV),以测出的均值(x珋±s)绘制质控图,分别采用13s/22s的多规则质控方法和Levey-Jennings单规则质控方法,判断前20次室内质控数据CV分别为≥10%、5%~10%和1%~5%范围内A、B和C 3家实验室的室内质控数据,分别分析其失控检出能力。结果分别采用13s/22s多规则和Levey-Jennings单规则质控方法。当HBV DNA室内质控品低、高两个浓度分别为5×104和5×106IU/mL时,CV为14.96%和12.15%的A实验室均未正确检出失控数据;CV为6.49%和5.00%的B实验室检出2个随机误差引起的失控数据;其CV为4.36%和2.43的C实验室,采用13s/22s多规则质控方法检出3个系统误差引起的失控数据,采用单规则质控方法未检出失控。结论 PCR检测HBV DNA当实验室前20次室内质控数据CV≥10%时,无论采用单规则还是多规则质控方法均不能正确检出失控;实验室应设定自己实验室最低要求的CV,并采用多规则质控方法,以提高系统误差的失控检出率。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA室内质控物的制备及初步应用

目的：制备HBV-DNA荧光定量PCR检测的室内质控物,并对其应用价值进行初步评价。方法：留取单-乙肝模式的混合血清样本,并用正常人血清将收集的血清稀释至所需的浓度,用与待检血清相同的仪器、同一品牌的HBV-DNA定量试剂盒进行检测,确定其靶值,计算x^-、s、CV,绘制质控图。结果：自制的室内质控物高低值的变异范围分别为1.10%、1.01%（CV〈5%）,稳定性好。结论：临床实验室可以用单-乙肝模式的混合血清制备HBV-DNA定量检测的质控物,其制备容易,测定结果稳定,有一定的临床实用价值。     

荧光定量PCR室内质控体系的概念及方法

近年来，随着《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》的贯彻实施，以及卫生部临床检验中心对全国各地部分临床基因扩增检验实验室技术验收工作的陆续展开，临床基因扩增检验实验室的质量管理已日益受到广大同行的关注。本文就临床基因扩增检验实验室荧光定量PCR室内质控体系的概念与方法介绍如下。     

荧光定量聚合酶链反应检测库存血浆HBV-DNA及HCV-RNA

目的 调查库存血中HBV-DNA及HCV-RNA的阳性率。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法,对合格库存血浆进行微量汇集池标本(10份×50μl汇集)中的HBV-DNA和HCV-RNA测定,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。结果 250份(分25个汇集池)受检血浆中HCV-RNA阳性1份(0.4％),HBV-DNA阳性2份(0.8％)。结论 荧光定量PCR检测微量血浆汇集池标本法筛查血液病毒核酸是提高输血安全性的一种先进方法。     

一张图多质控物室内质控图的绘制

作为实验室生命的质量控制必须每天认真执行,但需要花费大量的时间和精力去处理质控数据、绘制质控图等.目前国外多用实验室信息系统中质控数据处理功能,自动收集仪器传入系统的数据,自动形成图形,随时可以观察失控情况;国内许多实验室还没有实验室信息管理系统,质量控制数据处理和绘图多用人工,非常费时、费力、易错,而且为保证实验结果更加准确可靠,多数实验室采用双或多质控物进行室内质量控制,这样在绘制质控图时每个项目需要绘两张图,按质量保证措施要求,每天至少要绘50～60质控图,这样更增加了工作量.     

实时荧光定量PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型

目的建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型。用此方法对安徽地区乙肝患者进行检测,了解该地区HBV基因型分布情况。方法首先用实时荧光定量PCR方法对150例安徽地区乙肝患者进行HBVDNA定量检测和分型检测,然后对其中载毒量大于5000IU/mL的113例标本和1例1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL进行测序分型检测,验证所建立方法的准确性,了解安徽地区HBV基因型分布情况。结果150例HBV样本中HBVDNA含量<1000IU/mL30例,分型检测结果均为阴性,对载毒量≥5000IU/mL的样本检出率为97.35%(110/113);对1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL的样本检出率为14.29%(1/7);对全部DNA阳性样本的检出率为92.5%(111/120)。HBV分型检测与HBVDNA测序检测的114例样本中,只要是HBVB基因型、C基因型或B/C混合型,乙型肝炎病毒基因分型检测都能检出来(共111例),其中部分样本经分型检测属于B/C混合基因型,测序结果都是混合基因型中占优势的基因型结果,总体符合率为100%。未能被本法检出的样本共3例,3例样本经测序分型均为D型。120例病毒载毒量≥1000IU/mL乙肝患者中B型病例占51.67%(62/120);C型占29.17%(35/120);B/C混合型占11.67%(14/120)。PCR测序检出为D型3例,占2.5%(3/120)。结论应用TaqMan探针的实时荧光定量PCR方法能快速对我国HBV主要基因型B基因型、C基因型进行检测,结果准确可靠,特异性高。安徽地区的HBV基因型以B型为主,C型次之,亦存在着D型的少数感染病例和B/C的混合感染。     

解脲支原体DNA检测室内质控物的制备及质控方案的设计

目的制备解脲支原体(UU)DNA荧光定量PCR室内质控物,建立室内质量控制体系,对其临床应用进行初步评价。方法分别留取Ct值为24~25(阳性)和32~33(弱阳性)标本和检测结果为阴性的标本,待留取到15mL时充分混匀,按每管150μL分装作为室内质控物。前20次检测采用"即刻法"判断检测结果是否在质控范围内,20次以后绘制Levey-Jennings图,确定靶值、标准差(s)和变异系数(CV),采用Westdard多规则质控方法对自制室内质控物检测结果进行判断。在Unity Real Time(URT)系统中使用质控规则配置操作导出UU-DNA的功效函数图(OPSPecs图),根据OPSPecs图设置质控规则。结果131次实验中,前20次采用"即刻法"判断室内质控物;20次以后采用Levey-Jennings图判断,质控品稳定,质控规则合理。结论用临床分泌物混合液制备UU-DNA检测项目的室内质控物品,制备方法简单,测定结果稳定,可作为实验室检测UU-DNA项目的质控品;依据OPSPecs图设置分子生物学检测项目的室内质控规则简便、实用。     

两种定量测定丙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应方法比较

目的：观察荧光定量聚合酶链反应（PCR）PE5700测定丙型肝炎病毒RNA的准确性。方法：所用临床评价血清盘由36份血清组成,其中包括1个5倍倍比稀释系列（7份）、9份阴性血清和20份阳性血清。使用临床评价血清盘比较2种测定方法的重复性、线性和临床样本符合情况。结果：实时荧光定量方法和全自动PCR－ELISA内标法检测系统的线性回归系数分别为0．9732和0．9995。全自动PCR酶联免疫附（ELISA）内标法检测系统不同含量的样本批内变异系数（log10)均比实时荧光定量方法低。临床样本的检测实时荧光定量方法与全自动PCR－ELISA内标法检测系统的相关系数为0．845,结论：实时荧光定量方法具有良好的线性和重复性,同时与全自动PCR－ELISA内标法检测系统有良好的相关性。     

国产HCV核酸扩增荧光定量试剂盒的溯源与单位统一的研究

目的确定中国SFDA批准上市销售的国产HCV RNA扩增荧光定量试剂的量值X(copies/ml,lg)与标准物质的参考值Y(IU/ml,lg)之间的换算公式.方法用人AB型血清将WHO第二代HCV RNA国际标准品(编号:96/798)配制成不同浓度的样本7份,7份标准品的浓度分别为100 000、50 000、25 000、10 000、5 000、2 500、1 000 IU/ml.采用国内3种HCV RNA荧光定量试剂的2个不同的批次检测这7份不同浓度范围的标准品,每个批次重复测定4次.检测方法采用实时荧光定量PCR.结果 HCV RNA荧光定量试剂盒的量值X与标准品参考值Y之间的关系,试剂A:Y=0.902 0 X+0.284 9,R2=0.953 3,P＜0.01,n=56;试剂B:Y=0.875 7 X+0.562 4,R2=0.956 5,P＜0.01,n=56;试剂C:Y=0.843 8 X+0.560 5,R2=0.945 8,P＜0.01,n=56.结论 3种试剂的量值与标准品参考值之间的换算公式不同,提示3种试剂的量值应进行更严格的溯源.3种试剂的换算公式能将其量值初步标准化,使不同试剂的量值之间具有可比性,为HCV感染的临床诊断和治疗监测初步提供统一的HCV RNA载量检测标准.     

乙肝表面抗原定量检测的室内质控建立

目的 建立乙肝表面抗原(HBsAg)定量检测的室内质控。方法 分别留取单-乙肝模式的混合血清样本，同时与Abbott公司提供HBsAg质控品比较，选取合适的乙肝模式及HBsAg滴度作为室内质控品。结果 HBsAg在高、中、低滴度时的CV值分别为3.96％、3．31％、2．87％，Abbott公司提供的HBsAg室内质控品的CV值为3．01％。结论 临床实验室可以用单-乙肝模式的混合血清建立HBsAg的室内质控。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司LightCycler仪器和国产达安试剂,PCR酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBASAmplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBVDNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0.890。结论应用国产试剂配合LightCycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂,PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

两种方法检测HCV-RNA的结果分析

目的比较两种方法检测丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的结果。方法逆转录套式定性PCR(RT-nestedPCR)和荧光定量PCR对288例抗-HCV阳性的丙型肝炎患者血清标本进行HCV-RNA检测。结果288例抗-HCV阳性血清标本有248例RT-nested-PCR结果阳性,阳性率为86.1%(248/288);226例荧光定量PCR检测HCV-RNA>103拷贝/ml,检出率为78.5%(226/288),两种检测结果的阳性符合率为85.9%(219/255)。同时,29例标本定性结果阳性,定量结果<103拷贝/ml;7例标本定性结果阴性,定量结果>103拷贝/ml,差异具有统计学意义(χ2=12.25,P<0.01)。结论两种方法检测HCV-RNA,可以提高检测的灵敏度,为临床治疗提供依据。