小鼠胚胎干细胞向脂肪细胞分化的分子机制

随着肥胖患者不断增多,通过研究小鼠胚胎干细胞向脂肪细胞分化的分子机制,探讨肥胖发生机制已成为研究热点.研究认为,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)及脂肪细胞决定和分化依赖因子1和类固醇调控元件结合蛋白(ADD1/SREBP-1c)为前脂肪细胞系向脂肪细胞分化的关键转录因子,其他的调节因子如糖皮质激素(GC)、丝裂原活化蛋白激酶P38(P38MAPK)、生长激素(GH)等大多通过这些关键转录因子发挥诱导或抑制作用.     

小鼠胚胎干细胞向脂肪细胞分化的分子机制

随着肥胖患者不断增多,通过研究小鼠胚胎干细胞向脂肪细胞分化的分子机制,探讨肥胖发生机制已成为研究热点。研究认为,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)及脂肪细胞决定和分化依赖因子1和类固醇调控元件结合蛋白(ADD1/SREBP-1c)为前脂肪细胞系向脂肪细胞分化的关键转录因子,其他的调节因子如糖皮质激素(GC)、丝裂原活化蛋白激酶P38(P38MAPK)、生长激素(GH)等大多通过这些关键转录因子发挥诱导或抑制作用。     

血管紧张素Ⅱ对前脂肪细胞分化相关转录因子表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对前脂肪细胞分化过程中转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1表达的调节从而研究AngⅡ调节前脂肪细胞分化可能的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞体外传代培养及诱导分化,用RT-PCR技术检测诱导分化过程中不同浓度AngⅡ处理6d对前脂肪细胞分化相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA表达水平的影响。结果 RT-PCR结果显示,100 nmol/L的AngⅡ处理细胞6 d后,PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的相对表达量与对照组(AngⅡ添加浓度为0 nmol/L)有显著性差异(P<0.05),比对照组相应的转录因子分别增加了48%、50%、43%。结论前脂肪细胞分化过程中AngII能够上调PPARγ、C/EBPα、SREBP1-c/ADD-1 mRNA的表达量,AngⅡ可能通过影响PPARγ、C/EBPα和SREBP1-c/ADD-1的表达来调节前脂肪细胞的分化过程。     

尼克酰胺对小鼠前脂肪细胞增殖及分化影响

目的探讨尼克酰胺(NAM)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响及其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,添加NAM,观察其对细胞增殖及分化的影响,以添加白藜芦醇(Res)作阳性对照,以不添加任何药物为空白对照;用水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖,用染色比色法检测细胞的分化,采用蛋白免疫印记(westernblot)技术检测沉默信息调节因子1(Sirt1)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)位点的蛋白质表达。结果干预48 h后,NAM组细胞相对数量是对照组的1.152倍,NAM+Res组是Res组的1.272倍;NAM组细胞相对脂肪是对照组的1.519倍,NAM+Res组是Res的1.321倍;添加NAM后Sirt1、PPARγ、42和24KDa的C/EBPα蛋白表达水平分别是对照组的0.381、2.107、1.005和1.233倍,NAM+Res组Sirt1、PPARγ、42KDa和24KDa的C/EBPα表达水平分别是Res组的0.421、2.226、2.031和1.544倍。结论 NAM可增加3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,机制可能...     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

调控脂肪代谢及脂肪细胞分化的转录因子研究进展

脂肪代谢及脂肪细胞分化过程中受多种转录因子的调控,本文综述了过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPs)、固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)、GATA2和GATA3以及肝脏X受体α(LXRα)等转录因子调控脂肪代谢及脂肪细胞分化的研究现状,为研究脂肪代谢及脂肪细胞分化的分子机制提供参考。     

甲醛对小鼠骨髓组织中GATA-2和C/EBPα表达的影响

目的 探讨吸入式甲醛暴露对小鼠骨髓组织中转录因子GATA-2和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)在mRNA以及蛋白表达水平的影响.方法 将24只Balb/C小鼠随机分为3组,每组8只,采用仿真式口鼻暴露的方式,暴露于不同浓度的气态甲醛环境中(0、0.5和3.0 mg/m3),每天8h,连续2周.染毒结束后,分别采用反转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)法测定小鼠骨髓组织中转录因子GATA-2和C/EBPαmRNA和蛋白的表达.结果 与对照组相比,转录因子GATA-2和C/EBPα mRNA和蛋白的表达均随甲醛浓度的升高呈下降趋势,且甲醛浓度为3.0 mg/m3时,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高浓度(3.0 mg/m3)甲醛暴露可以抑制小鼠骨髓组织中GATA-2和C/EBPα mRNA和蛋白的正常表达.     

PPARγ在心血管疾病防治中的临床应用探讨

PPARs是一类通过配体将核转录因子成功激活的超家族成员.对于PPARs主要有三种类型,分别为PPARα、PPARβ与PPARγ这三种.PPARγ主要参与的是调节患者体内的糖以及脂质代谢的极其重要的因子,在血管以及心脏阻止中均发挥着至关重要的作用,能够有效调节患者体内的炎症与患者体内的细胞凋亡等.针对心血管疾病采用PPARγ进行预防,显示了非常好的临床效果.本文主要探讨了PPARγ在心血管疾病防治中的临床应用效果.     

C/EBP同源蛋白功能研究进展

C/EBP(CCAAT enhancer binding protein)同源蛋白(CHOP)通过显性负调控的方式抑制转录因子C/EBP和肝富集转录激活蛋白(LAP)。CHOP是内质网应激介导的细胞凋亡通路中重要的中间信号分子。本文综述了CHOP蛋白的分子特征;CHOP在细胞凋亡,自噬和焦亡中参与的信号通路及调控作用;CHOP在内质网应激引发的缺血再灌注相关的肾脏、肝脏功能损伤、炎症、帕金森、糖尿病、肿瘤等疾病中发挥的重要调控作用,为临床上多种疾病的诊断与治疗提供新的靶点,扩展新的思路。     

PPARγ的信号转导途径

过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）属核激素受体超家族成员，是一类配体激活的核转录因子，有3种亚型PPARα，PPARβ，PPARγ。本文主要综述PPARγ的信号转导途径及其在疾病中的作用。     

PPARγ与多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的研究

PPAR即过氧化物酶体增殖体激活受体 ,是核受体超家族成员之一。PPARγ主要表达于脂肪组织 ,它可以促进脂肪细胞分化、调控多种脂肪细胞分泌的蛋白质因子基因的表达。近年发现PPARγ基因的多态性及对脂肪细胞因子的调控作用与PCOSIR的发生密切相关 ;而噻唑烷二酮类药物激活PPARγ后可以改善PCOSIR的研究结果 ,进一步说明PPARγ的作用可能是PCOSIR多种形成机制中的重要途径之一。     

C/EBPβ蛋白质在新疆汉族子宫颈鳞癌病理分级中的作用

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)在新疆汉族妇女子宫颈鳞癌组织中的表达及病理分级的意义。方法:采用免疫组织化学S-P法对33例子宫颈鳞癌组织、37例慢性子宫颈炎组织中C/EBPβ蛋白质的表达进行检测。结果:新疆汉族妇女子宫颈鳞癌组织与慢性子宫颈炎C/EBPβ蛋白质的表达相比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);不同病理分级的子宫鳞癌组织中,C/EBPβ蛋白质的表达在高分化癌高于中分化癌,中分化癌高于低分化癌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:C/EBPβ蛋白质表达在新疆汉族子宫颈鳞癌不同病理分级表达不同,可能用于子宫颈癌诊断。     

PPARγ与多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的研究

PPAR即过氧化物酶体增殖体激活受体，是核受体超家族成员之一。PPARγ主要表达于脂肪组织，它可以促进脂肪细胞分化、调控多种脂肪细胞分泌的蛋白质因子基因的表达。近年发现PPARγ基因的多态性及对脂肪细胞因子的调控作用与PCOS IR的发生密切相关；而噻唑烷二酮类药物激活PPARγ后可以改善PCOS IR的研究结果，进一步说明PPARγ的作用可能是PCOS IR多种形成机制中的重要途径之一。     

降脂排卵方配合炔雌醇环丙孕酮片对多囊卵巢综合征患者脂质代谢相关因子水平变化的影响

目的探讨降脂排卵方配合炔雌醇环丙孕酮片对多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂质代谢相关因子水平变化的影响。方法选取2014年10月-2017年2月该院97例PCOS患者,按照随机数字表法分为观察组(n=49)与对照组(n=48)。对照组给予单纯西药治疗(炔雌醇环丙孕酮片),观察组给予中西医结合治疗(炔雌醇环丙孕酮片~+降脂排卵方)。对比两组临床疗效,治疗后一般情况(BMI、多毛评分、卵巢体积、促排卵率)、治疗前后脂质代谢相关因子[固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、碱性环螺旋亮氨酸核转录因子(EBP1-c)、过氧化物酶受体γ辅助激活因子(PGC-1α)、核受体超家族转录因子(PPARα)]水平,统计两组治疗期间不良反应发生率。结果与对照组比较,观察组临床疗效更为显著,总有效率[91. 84%(45/49)比72. 92%(35/48)]较对照组高(P0. 05);治疗后,观察组BMI、多毛评分均低于对照组,卵巢体积较对照组小,促排卵率[83. 67%(41/49)比64. 58%(31/48)]较对照组高(P0. 05);治疗前,两组SCAP、EBP1-c、PGC-1α、PPARα水平比较差异无统计学意义(P0. 05),治疗后,两组SCAP、EBP1-c、PGC-1α、PPARα较治疗前均有改善(P0. 05),观察组SCAP、EBP1-c低于对照组,PGC-1α、PPARα高于对照组(P0. 05);两组乳房触痛发生率[10. 20%(5/49)比12. 50%(6/48)]、偏头痛发生率[6. 12%(3/49)比2. 08%(1/48)]、恶心/呕吐发生率[10. 20%(5/49)比4. 17%(2/48)]、皮疹发生率[2. 04%(1/49)比4. 17%(2/48)]比较,差异无统计学意义(P0. 05)。结论给予PCOS降脂排卵方联合炔雌醇环丙孕酮片治疗疗效显著,可有效改善患者症状、体征及脂质代谢相关因子水平,提高排卵率,且具有一定安全性。     

球松素对C3H10T1/2细胞成脂分化的抑制作用研究

目的探讨山核桃叶提取物球松素对小鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化的影响。方法 MTS法检测不同浓度球松素处理的细胞成活率以界定适宜的浓度范围;油红O染色法结合异丙醇萃取法定性和定量分析球松素对细胞成脂分化的影响;GPO-PAP酶法检测球松素处理后细胞中甘油三酯含量的变化;荧光定量PCR和Western blot分别检测成脂分化中C/EBPα、PPARγ、FABP4 mRNA和相关蛋白的表达水平。结果 30μmol/L、50μmol/L球松素对细胞成脂分化有明显的抑制作用,且能显著减少甘油三酯堆积;10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L球松素能明显抑制PPARγ、C/EBPαmRNA表达;5μmol/L、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L球松素能明显降低FABP4 mRNA表达;50μmol/L球松素能明显降低PPARγ、C/EBPα和FABP4蛋白表达。结论山核桃叶提取物球松素对C3H10T1/2细胞成脂分化具有抑制作用,可能与调控PPAR信号通路和相关基因表达有关。     

C/EBPα基因对子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的作用分析

目的:探索CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)基因对HeLa细胞增殖和定向迁移的影响。方法:用MTT方法检测C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组对HeLa细胞增殖的影响。用Transwell侵袭转移模型评价He-La细胞的迁移情况。其中,不同上室中分别加入C/EBPα基因重组质粒转染组、空质粒转染组和未转染组的HeLa细胞,下室中加入含20%FBS的培养基。结果:C/EBPα基因重组质粒转染组、转染空质粒组和未转染HeLa细胞组的吸光度值分别为0.21±0.01、0.24±0.01和0.24±0.02,重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验发现重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组相比,细胞迁移能力减弱,细胞穿膜数分别为12.0±2.2、39.0±3.2和39.6±2.6,重组质粒转染组与空质粒转染组和未转染HeLa细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:C/EBPα基因能抑制子宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移能力。     

PPAR-γ及其配体在人体细胞的分子研究

PPAR -γ ,即PeroxisomeProliferator -activatedreceptor -gam ma(过氧化物酶体增殖物激活受体 ) ,因最初在脂细胞的分化中发现 ,故又称脂激活转录因子。对细胞生长、分化以及炎症、凋亡具有重要影响 ,与心血管疾病、糖尿病及肿瘤细胞的生长密切相关。近年来 ,对PPAR -γ及其配体的研究较多 ,但多为实验动物研究 ,其在人体细胞的作用机制及效应、应用等研究尚有限 ,本文就其研究近况作一综述。1　PPAR的作用机制1.1　PPAR的结构和分布　PPAR核受体超家族成员包括PPARα、PPARβ(又称为PPARδ或NCU -1)、PPARγ(包括γ1、…     

维生素E上调高脂饲料型肥胖大鼠白色脂肪组织过氧化物酶体增殖剂激活受体γ mRNA表达

<正>过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)是唯一在脂肪组织中高水平表达的转录因子,也是前脂肪细胞分化过程中重要的调节因子。PPARγ可促进脂质的氧化代谢,降低血脂浓度,并改善2型糖尿病患者的胰岛素敏感性。高脂膳     

PPARγ基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果鉴定

目的 构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰的真核表达载体,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,并鉴定其干扰效果.方法 选择设计2条针对小鼠PPARγ基因的干扰靶序列,构建真核表达载体PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,以PCR鉴定并进行序列分析.证实质粒构建成功后,转染小鼠3T3-...     

不同PUFAs调节脂肪细胞脂联素和PPAR γ的剂量反应关系

目的探讨不同类型多不饱和脂肪酸(PUFAs)调节3T3-L1脂肪细胞脂联素及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的剂量反应关系和效应差异。方法不同浓度(0、25、50、100、200、400μmol/L)二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、α-亚麻酸(α-ALA)、花生四烯酸(AA)及亚油酸(LA)处理3T3-L1脂肪细胞24h,实时荧光定量PCR法测定脂联素及PPARγ基因表达水平,Western blot法测定二者蛋白水平,ELISA法测定脂联素分泌水平。结果 50~200μmol/L浓度范围内,n-3PUFAs上调脂联素及PPARγ基因表达,DHA作用最显著(P0.05);400μmol/L呈现显著抑制效应。100μmol/L时,n-3 PUFAs上调脂联素及PPARγ蛋白表达(P0.05);仅DHA促进脂联素分泌(P0.05),n-6PUFAs呈现抑制效应。结论 PUFAs在一定浓度范围内提升脂联素及PPARγ基因表达,高浓度作用时呈现抑制效应。n-3PUFAs更能促进脂联素、PPARγ蛋白合成,并促进脂联素分泌。不同类型PUFAs对PPARγ的不同作用,可能是其对脂联素的调节产生差异的重要原因。