牛磺酸对锰致线粒体损伤保护作用

目的研究牛磺酸对锰致大鼠海马线粒体超微结构改变及氧化损伤的保护作用。方法 W istar大鼠80只随机分为对照组、染锰组、牛磺酸预防组、牛磺酸治疗组,连续染毒12周后制备海马线粒体,电镜扫描超微超微结构变化,测定线粒体活性氧簇(ROS)变化;体外制备成年健康大鼠的海马线粒体并与锰、牛磺酸孵育,观察ROS变化。结果染锰致线粒体空泡化、嵴消失,牛磺酸可改善线粒体的超微结构损伤;体内染锰后染锰组海马线粒体ROS为(170.1±6.1),明显低于对照组(182.2±5.5)和牛磺酸预防组(207.0±6.0),高于牛磺酸治疗组(150.2±3.8),差异均有统计学意义(t=3.63,t=11.61,t=6.31,P<0.05);线粒体体外染锰后染锰组ROS为(2 139.2±24.9),明显高于对照组(650.7±12.0)、牛磺酸预防组(1 734.5±20.7)和牛磺酸治疗组(1 477.3±14.8),差异均有统计学意义(t=137.23,t=37.31,t=61.01,P<0.05)。结论牛磺酸可改善染锰损伤的大鼠海马线粒体超微结构;体外实验结果表明,用牛磺酸预防和治疗染锰大鼠均能明显降低其ROS。     

牛磺酸对染锰大鼠海马神经毒性的影响

目的探讨牛磺酸对锰致大鼠海马神经毒性的影响。方法无特定病原体级SD雄性大鼠36只随机平均分成3个组:对照组、染锰组、牛磺酸预防性干预组(牛磺酸组)。对照组腹腔注射0.9%的生理氯化钠溶液;染锰组每天腹腔注射氯化锰溶液15 mg/kg,连续12周;牛磺酸组染锰的同时给予牛磺酸干预,染锰剂量和方法与染锰组一致,牛磺酸剂量为200 mg/kg,每周3次,连续12周。最后一次注射后24 h处死大鼠,切取海马,透射电镜观察各组神经元超微结构并检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果①从第4周开始到实验结束,染锰组、牛磺酸组同期体重均比对照组低,差异具有统计学意义(P<0.05);染锰组与牛磺酸组相比,从实验第10周后染锰组体重显著低于牛磺酸组(P<0.05),各组动物同期平均进食量无明显差异;②透射电镜观察,对照组海马神经元形态规则,染锰组海马神经元发生凋亡的形态学变化,线粒体等细胞器严重受损。牛磺酸组接近正常海马神经元的形态,胞质内各细胞器形态、结构基本正常;③染锰组MDA含量比对照组明显增加(P<0.05),SOD活力显著下降(P<0.05)。牛磺酸组MDA含量与对照组比差异无显著性,且比染锰组显著下降(P<0.05);SOD活力比对照组低(P<0.05),与染锰组相比有所恢复,但差异无统计学意义。结论牛磺酸可以抵抗锰致海马神经元的凋亡,降低MDA产量,并使SOD活力有所恢复。     

保健食品耐缺氧功能体外评价方法建立

目的将小鼠大脑皮质神经元的缺糖/缺氧模型用于耐缺氧保健食品的体外评价。方法采用血清药理学方法制备含牛磺酸复合制剂的小鼠血清,观察其对缺糖缺氧损伤神经元的乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及细胞生存率的影响,并与小鼠急性脑缺血性缺氧实验结果比较。结果中、高剂量含牛磺酸复合制剂小鼠血清组LDH活力分别为(5.97±0.85)、(5.68±1.55)U/(g.prot),低于空白血清对照组的(8.27±1.54)U/(g.prot)(P<0.05);低、中、高剂量含牛磺酸复合制剂小鼠血清组SOD活力分别为(6.83±0.65)、(6.95±0.68)、(7.55±0.82)U/(mg.prot),高于空白血清对照组的(5.57±0.89)U/(mg.prot),细胞生存率分别为90.06%、89.04%、91.92%,高于空白血清对照组的75.74%(P<0.05);牛磺酸复合制剂低、中、高剂量组小鼠急性脑缺血性缺氧存活时间分别为17.3、19.5、18.2 s,比纯水对照组的15.5 s长(P<0.05)。结论含有某保健食品的小鼠血清对神经元缺糖/缺氧损伤具有保护作用;小鼠大脑皮质神经元的缺糖/缺...     

牛磺酸对锰致大鼠前额皮质神经毒性损害的干预研究

目的 探讨牛磺酸对锰致大鼠前额皮质神经毒性损害的干预作用.方法 取SD雄性大鼠104只,分为4组:(1)空白对照组:腹腔注射等容量生理盐水.(2)染锰组:每天腹腔注射氯化锰溶液15 ms/ks,连续3个月.(3)牛磺酸预防性干预组:染锰剂量和方法与染锰组一致;腹腔注射牛磺酸溶液200 mg/kg,与染锰同时进行,每周3次,连续3个月.(4)牛磺酸治疗性干预组:染锰剂量和方法与染锰组一致;在连续染锰3个月后停止染锰,再给予腹腔注射牛磺酸,每周3次,连续注射3个月.观察大鼠前额皮质神经元的细胞凋亡并检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 (1)锰对大鼠前额皮质的神经元有诱导凋亡的作用,染锰组凋亡率[(20.2±4.3)%]明显高于对照组[(1.8±2.1)%],差异有统计学意义(P<0.05).牛磺酸预防性干预和治疗性干预后,细胞凋亡率下降,与染锰组相比,差异有统计学意义(P<0.05).(2)染锰组MDA含量较对照组升高,SOD活力较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与染锰组相比,牛磺酸预防性干预组SOD活力增加,MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在体内锰通过氧化应激诱导神经细胞凋亡;牛磺酸抑制锰对神经元凋亡的诱导,通过抗氧化而发挥抗锰神经毒性的作用.     

牛磺酸对染铅大鼠海马一氧化氮合酶活力的影响

目的　探讨牛磺酸拮抗铅损害学习记忆能力的作用。方法　采用NADPH d组织化学法 ,研究饮用含不同剂量铅 (0 .0 11、0 .110g L)的水和含不同剂量牛磺酸 (5、10g kg)的饲料喂养的大鼠海马一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元数量的变化。结果　 10g kg的牛磺酸饲料能明显增加染铅大鼠海马CA1区和齿状回NOS阳性神经元的数量。低铅水高牛磺酸饲料组NADPH d阳性神经数量在CA1区为 5 1.80± 4 .6 8,在齿状回为 4 7.4 0± 4 .2 0 ,较低铅水普通饲料组的CA1区 (4 1.2 0± 5 .32 )和齿状回 (39.87± 3.81)明显增多 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　牛磺酸对铅损害学习记忆能力有较明显的拮抗作用。     

蛋氨酸胆碱对染铅大鼠海马神经元影响

目的 探讨蛋氨酸胆碱对刚断乳SD大鼠铅染毒后海马神经元形态及超微结构损伤的改善作用.方法 40只SPF级SD雄性大鼠随机分为5组:空白组、染铅组、蛋氨酸胆碱组、铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组,4和8周后分别麻醉动物,尾尖采血,原子吸收法测血铅含量;心脏灌注内固定,取海马做石蜡切片、硫堇染色观察海马神经元形态结构,戊二醛再固定,透射电镜观察超微结构.结果 铅染毒4、8周后,染铅组大鼠血铅含量分别升高至(274.85±19.51)、(294.32±11.00)μg/L,与染铅组比较,铅+高剂量蛋氨酸胆碱组血铅含量(187.25±16.02,192.68±14.17)μg/L明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);硫堇染色和透射电镜结果显示,4周时海马神经元无明显改变;8周时CAI区神经元有缺失、坏死,细胞数量由每3个视野(光镜400×)(306.00±43.05)个减少至(234.86±20.88)个,且超微结构发生改变,蛋氨酸胆碱干预后形态和结构均得到改善,且存在剂量-效应关系.结论 铅对海马神经元形态和结构损伤出现较晚,蛋氨酸胆碱可改善铅染毒大鼠海马神经元的形态和结构损伤.     

慢性中度铅中毒对幼兔海马组织的影响

目的 探讨慢性中度铅中毒对幼兔海马组织的影响.方法 16只离乳(45 d)雄性健康新西兰幼兔,数字表法随机分为空白组和染铅组,每组8只,染铅组喂含5 mg·kg-1·d-1醋酸铅的饲料,持续6周,建立慢性中度铅中毒幼兔模型.用原子吸收分光光谱仪测定血铅,海马组织经微波消解后,用电感耦合等离子体质谱仪测铅,光学显微镜(简称光镜)和电子显微镜(简称电镜)观察海马的组织结构和超微结构,免疫组织化学法分析海马组织CA1区锥体细胞膜上的N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NR1)、亚单位2A(NR2A)和亚单位2B(NR2B)的蛋白表达.结果 染铅组的血铅(μg/L)和海马铅(ng/g)显著升高[染铅组血铅(428.63±9.46)μg/L,空白组血铅(66.38±3.93)μg/L,t血铅=100.08,P＜0.01;染铅组海马铅(44.57±2.03)ng/g,空白组海马铅(21.20±1.53)ng/g,t海马铅=26.05,P＜0.01];海马湿重(g)和海马湿重系数(‰)显著降低[染铅组海马湿重(0.735±0.012)g,空白组海马湿重(0.808±0.010)g,t海马湿重=12.97,P＜0.01;染铅组海马湿重系数(0.458±0.004)‰,空白组海马湿重系数(0.476±0.005)‰,t海马湿重系数=7.87,P＜0.01];CA1区NR1和NR2A阳性表达率降低[染铅组NR1阳性表达率(37.44±2.05)%,空白组NR1阳性表达率(41.81±2.50)%,tNR1=3.82,P＜0.01;染铅组NR2A阳性表达率(21.97±1.08)%,空白组NR2A阳性表达率(25.48±1.30)%,tNR2A=5.89,P＜0.01];光镜和电镜下观察到海马组织神经元和胶质细胞的组织结构和超微结构改变.结论 慢性中度铅中毒损伤幼兔的海马组织,海马组织形态和NMDA受体亚单位蛋白表达发生改变.     

牛磺酸对染锰大鼠纹状体单胺类神经递质的影响

[目的]探讨不同剂量牛磺酸对锰染毒大鼠纹状体神经递质的影响。[方法]取SD健康雄性大鼠156只,随机分为对照组,10、15、20 mg/kg 3个剂量的染锰组和9个牛磺酸干预组,牛磺酸干预剂量分别为100、150、200 mg/kg;每组12只大鼠。对照组腹腔注射等量生理盐水;染锰组腹腔注射Mn Cl2,每天1次,连续12周;牛磺酸干预组与相应剂量的染锰组相同处理染毒,并在每周二、四、六腹腔注射Mn Cl2后再腹腔注射牛磺酸进行干预,共12周。开颅分离出大鼠纹状体,应用高效液相色谱法测定牛磺酸、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量,采用石墨炉原子吸收法和紫外比色法分别测定锰含量和单胺氧化酶(MAO)活性。[结果]各锰染毒组[(2.61±0.73)、(2.75±0.37)、(2.98±0.52)μg/g]和牛磺酸干预组[(2.52±0.74)、(2.42±0.70)、(2.57±0.40)、(2.56±0.46)、(2.51±0.51)、(2.66±0.75)、(2.82±0.98)、(2.88±0.56)、(2.86±0.91)μg/g]大鼠纹状体锰含量均高于对照组[(0.60±0.20)μg/g],差异均有统计学意义(均P0.05)。20mg/kg染锰组牛磺酸含量[(712.68±128.69)μg/g]较对照组减少,差异具有统计学意义(P0.05)。染锰组大鼠纹状体DA、5-HT水平[DA分别为(6284.63±1243.94)、(6173.54±826.68)、(6014.21±636.48)μg/g,5-HT分别为(172.22±23.79)、(166.39±42.73)、(164.82±43.43)μg/g]均低于对照组[(7814.91±1284.63)μg/g和(251.34±51.26)μg/g](均P0.05);150、200 mg/kg牛磺酸干预10 mg/kg染锰组大鼠纹状体DA和5-HT水平显示增加效果(P0.05)。染锰组大鼠纹状体MAO活性[分别为(14.65±1.89)、(16.45±1.13)、(17.05±1.86)U/(h·mg)]均高于对照组[(12.64±1.10)U/(h·mg)](均P0.05);各牛磺酸干预组(除100 mg/kg牛磺酸干预10 mg/kg染锰组外)MAO活性均比同剂量染锰组降低(均P0.05)。[结论]锰可致大鼠纹状体部分牛磺酸耗竭,MAO活性增高,DA和5-HT水平降低,牛磺酸在一定程度上对锰诱导的大鼠纹状体神经递质下降有保护作用。     

牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡

目的观察牛磺酸对锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡的拮抗作用。方法体外皮层神经细胞至最佳生长状态时进行实验。细胞随机分7组,即对照组、染锰组(低、中、高剂量0.2,0.6,1.0mmol/L)、干预组(染低、中、高浓度锰同时分别给予1.5mmol/L牛磺酸干预)。各组处理24h后终止培养,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞术(FCM)定性、定量检测神经细胞凋亡的变化。结果1.TUNEL显示染锰后神经细胞呈现典型的凋亡形态学变化,牛磺酸对中浓度锰有一定的拮抗作用;2.FCM结果表明牛磺酸能拮抗锰诱导的神经细胞凋亡。结论牛磺酸对锰所致体外培养的皮层神经细胞的凋亡有保护作用。     

脑源性神经营养因子对高糖培养的大鼠海马神经元的保护作用

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对高糖培养的大鼠海马神经元存活的保护作用.方法 无血清体外培养的方法获得新生SD乳鼠海马神经元,分为正常组,高糖组及高糖BDNF组.用免疫荧光细胞化学的方法标记微管相关蛋白(Map2)检测培养的海马神经元的纯度和形态,用PI/Hoechest33342染色的方法检测神经元的存活率.结果 大鼠海马神经元在高糖培养条件下存活率下降,易坏死或凋亡,存活率正常组:(96.11±1.63)％;高糖BDNF组:(93.47±2.43)％;高糖组:(76.29±6.74)％.高糖导致的大鼠海马神经元凋亡可以被BDNF抑制.结论 BDNF对高糖导致的大鼠海马神经元坏死或凋亡具有保护作用.     

锰对皮层神经元胞浆游离钙离子浓度的影响

目的探讨皮层神经元胞浆游离钙离子浓度在锰(Mn)神经毒性作用中的变化。方法分离新生Wistar乳大鼠的皮层神经细胞进行体外培养,细胞生长至最佳状态时,予以分组处理。实验分染锰组和未处理组,染锰组分别与含低、中、高浓度氯化锰(MnCl_2·4H_2O)的培养液共培养,氯化锰的浓度分别为0．2、0．6、1．0mmol/L。未处理组则为正常培养的皮层神经细胞。各组处理24h后终止培养,钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后上激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度,以表示游离钙离子浓度,并用图像分析技术进行处理。结果氯化锰处理后引起皮层神经元胞浆游离钙离子不同程度的超载,中、高浓度锰组神经元的胞浆游离钙离子浓度明显高于低浓度锰组及未处理组,细胞钙离子荧光像素荧光强度增高且呈剂量依赖性,中、高浓度锰组分别为(131．1±16．7)、(183．2±22．9)；低浓度锰组为(84．6±10．2),差异有统计学意义(P＜0．05)。结论钙离子超载与锰的神经毒性有关,且钙离子超载与锰浓度呈剂量-反应关系。     

牛磺酸对锰染毒大鼠纹状体活性钙调素含量的影响

目的利用锰染毒大鼠模型,探讨不同剂量牛磺酸对不同剂量锰染毒大鼠纹状体活性钙调素(CaM)含量的影响。方法选取SD健康雄性大鼠,随机分为对照组、锰染毒组(10、15、20 mg/kg 3个剂量组)和干预组(按正交实验设计分9个组)。干预时间结束后,比较各实验组大鼠纹状体活性钙调素含量的变化。结果10 mg/kg锰染毒组的活性CaM含量比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),各锰染毒组随着染毒剂量的加大,活性CaM含量呈下降趋势。干预组中的牛磺酸剂量为150、200 mg/kg时,对10 mg/kg锰染毒大鼠纹状体活性CaM含量有调节作用,差异有统计学意义(P<0.01)。结论锰可影响大鼠纹状体活性钙调素含量,且其影响与锰染毒剂量有关。     

牛磺酸对海马神经细胞的营养和保护作用

目的 :　利用无血清培养的新生大鼠原代海马神经细胞 ,观察牛磺酸 ,谷氨酸和过氧化氢对神经细胞损伤的保护作用。方法 :　用含不同剂量牛磺酸的培养基培养神经元 ,动态观察神经细胞的生长情况以了解牛磺酸对神经细胞的营养作用 ;不同剂量牛磺酸与神经细胞预孵育 2 4 h后 ,分别加入损伤剂 (谷氨酸和过氧化氢 ) ,观察神经细胞存活数及乳酸脱氢酶的漏出率的变化 ;并且利用双波长荧光分光光度计观察谷氨酸对神经细胞内钙稳态的改变及牛磺酸的拮抗作用。结果 :　牛磺酸能促进体外培养的海马神经元的生长 ,并延长其存活时间 ;而且能剂量依赖性地拮抗过氧化氢和谷氨酸引起的神经细胞存活数下降及乳酸脱氢酶漏出率增高 ;牛磺酸还可抑制谷氨酸引起的升钙作用。结论 :　牛磺酸能促进神经细胞的生长 ,对谷氨酸和过氧化氢引起的细胞损伤均有明显的保护作用。     

牛磺酸对幼鼠脑神经保护作用和机制研究

目的　观察牛磺酸 (Tau)对幼鼠脑神经的保护作用 ,并对其可能机制进行探讨。方法　用 0 .1 μmol/L亚硒酸钠与不同浓度的 Tau共同加入到原代培养 2 d的新生小鼠大脑皮质神经元中 ,用 MTT检测和 DNA片段琼脂糖凝胶电泳法分析其保护性作用 ;并选用健康清洁级、断乳SD雌鼠 3 2只 ,按体重随机分为 4组 ,分别饲予补充不同水平 Tau的实验饲料 ,观察对照组及补充Tau组幼鼠脑发育及代谢的影响。结果　 1 .Tau可明显提高神经元的存活率 ;2 .一定浓度的 Tau可阻断或部分阻断由亚硒酸钠诱导的典型 DNA梯型 ;3 .Tau可促进脑细胞的增殖活性 ,增加脑重 ;4.补充 Tau能明显提高脑 Tau积累、蛋白质和 ACh E水平 ,且有一定的剂量反应关系。结论　补充 Tau具有较强的神经保护作用 ,可能是通过改变某些蛋白质即某些基因的表达而实现的。     

牛磺酸对铅染毒大鼠大脑皮层NOS和nNOS神经元数量的影响

目的 探讨牛磺酸拮抗铅损害中枢神经系统的作用,研究牛磺酸拮抗铅的剂量-效应关系。方法 采用黄递酶（NADPH-d）组织化学和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）免疫组织化学方法,研究饮用含不同剂量醋酸铅（0．02,0．2g／L）饮水和饲喂含不同剂量牛磺酸（5,10g／kg）饲料的大鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元数量的变化。结果 牛磺酸能明显增加铅染毒大鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元的数量。结论 牛磺酸对铅损害中枢神经系统有较明显的拮抗作用,并且存在一定的剂量-效应关系。     

牛磺酸联合锌对急性缺氧小鼠大脑皮层NOS活力和nNOS蛋白表达的影响

目的观察牛磺酸和锌对急性缺氧小鼠大脑皮层一氧化氮合酶(NOS)和神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的变化,探讨牛磺酸和锌抗脑缺氧的作用机制。方法复制小鼠急性缺氧模型,采用NADPHd组织化学和nNOS免疫组织化学方法,研究不同处理实验组急性缺氧小鼠皮层NADPHd和nNOS阳性神经元数量的变化。结果硫酸锌组小鼠标准缺氧耐受时间比生理盐水组延长33.06%,而牛磺酸+锌组小鼠标准缺氧耐受时间比硫酸锌组延长26.83%(P<0.05);硫酸锌组小鼠皮层NADPHd和nNOS阳性神经元的数量比生理盐水组明显减少,而牛磺酸+锌组小鼠皮层NADPHd和nNOS阳性神经元的数量比硫酸锌组明显减少(P<0.05)。结论急性缺氧时牛磺酸联合锌能够明显延长耐缺氧时间,其机制是通过降低皮层NOS活性和减少nNOS蛋白表达而发挥其抗脑缺氧作用。