汉防己甲素逆转脑胶质瘤耐药性的实验研究

目的研究汉防己甲素对脑胶质瘤细胞耐药性的逆转作用。方法取人脑胶质瘤细胞株U251,在BCNU作用下建立耐药细胞株U251/BCNU,用MTT检测其耐药指数。在汉防己甲素（tetrandrine,TTD）作用后,检测其逆转倍数。结果 BCNU对U251和U251/BCNU细胞的半数抑制率（IC50）分别为12.00μg/ml,228.40μg/ml,耐药指数约为19。加入TTD后,BCNU对U251和U251/BCNU细胞的半数抑制率（IC50）分别为10.23μg/ml,22.87μg/ml,逆转倍数约为10倍。结论 TTD能逆转人脑胶质瘤细胞对BCNU的耐药性。     

DHA复合物抗肿瘤作用的实验研究

[目的]观察DHA复合物(AT158)的抑癌作用。[方法]以H22肝癌细胞的荷瘤小鼠为体内实验模型做三批,以U251星形胶质瘤细胞、SKOV3卵巢癌细胞为体外培养实验模型,研究了AT158在体内和体外对各种癌细胞的抑制作用。[结果]在体内AT158低中高剂量组对22肝癌细胞抑瘤率分别为37.62%,48.55%,58.63%,在体外对U251星形胶质瘤细胞IC50为0.37μg/ml(0.33～0.41μg/ml)、对SKOV3卵巢癌细胞IC50为0.52μg/ml(0.50～0.52μg/ml)。[结论]AT158是具有抑癌作用,具有很高的开发价值。     

败酱草抗病毒有效部位体外抑制呼吸道合胞病毒作用研究

目的 了解败酱草抗病毒有效部位(AP3)体外抑制呼吸道合胞病毒的作用。方法 采用中药煎煮法、乙醇提取法和大孔吸附树脂层析法分离得到抗病毒AP3。采用细胞病变抑制试验,以病毒唑为阳性对照药,观察不同浓度AP3在HeLa细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用,计算药物半数有效浓度(EC_(50))和药物治疗指数(TI)。结果 AP3半数中毒浓度(TC_(50))为11.45mg/ml;抑制呼吸道合胞病毒的EC_(50)为0.0986 mg/ml,TI为116.12;AP3对呼吸道合胞病毒的抑制作用存在量效反应关系;AP3于感染后0、2、4 h加药,有抑制呼吸道合胞病毒活性。结论 败酱草抗病毒AP3在HeLa细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。     

鱼腥草有效成分抗巨细胞病毒的实验研究

目的:研究鱼腥草抗病毒有效部位槲皮素体外抗人巨细胞病毒(HCMV)的作用及其作用机制。方法:用鱼腥草抗病毒有效部位槲皮素配成不同浓度的溶液,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞毒性,槲皮素不同浓度溶液分别作用于被HCMV感染的细胞,通过观察细胞病变效应(CPE),MTT法检测细胞存活率来探讨槲皮素对HCMV感染的细胞治疗作用、对CMV在细胞内增殖的抑制作用及预防作用,从而对其抗病毒机制进行研究。结果:槲皮素的半数中毒浓度(TC50)为4.75mg/ml,对HCMV在细胞内增殖的治疗作用及预防作用的半数有效浓度(EC50)分别为0.30mg/ml和0.25mg/ml,治疗指数(TI)为15.83。结论:槲皮素能明显抑制人巨细胞病毒感染引起的细胞病变效应,CPE抑制率随着药物浓度的增加而增高。     

龙胆抗病毒有效部位RG2-1体外抗RSV作用的实验研究

目的了解龙胆抗病毒有效部位RG2-1对呼吸道合胞病毒（RSV）的体外抑制作用。方法经水提取、二氯甲烷萃取、离心后，得到龙胆抗病毒有效部位RG2-1，并以利巴韦林为阳性对照药物，采用细胞病变抑制实验观察其在Hela细胞中对RSV的抑制作用。结果RG2-1的半数中毒浓度（TC50）为10．66mg／ml^-1，抑制RSV的半数有效浓度（EC50）为0．42mg／ml，治疗指数（TI）为25．38；随着药物浓度的增加，CPE抑制率明显增高，且对RSV的抑制作用存在明显的量效反应关系（P〈0．05）。结论RG2-1在Hela细胞中对RSV具有明显的抑制作用。     

金雀异黄素对胶质瘤细胞株细胞生长周期影响

目的 研究金雀异黄素(genistein)对人胶质瘤U251MG细胞生长和细胞周期的影响.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度genistein在不同作用时间下对U251MG细胞生长的影响,用流式细胞仪分析细胞周期分布,蛋白免疫印迹( western blotting)技术检测细胞周期素Bl(cyclinBl)和细胞周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)蛋白表达.结果Genistein对胶质瘤细胞生长有明显抑制作用,使细胞生长停滞于G2/M期,并使细胞cyclin B1、CDK1蛋白表达下降(均P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论Genistein对U251 MG细胞生长有明显抑制作用,诱导G2/M期阻滞可能与下调cyclinB1和CDK1蛋白表达有关.     

黄芩水提液体外抗呼吸道合胞病毒实验研究

目的探讨黄芩水提液在体外抗呼吸道合胞病毒（RSV）的作用及其机制,为治疗RSV感染寻找新型药物。方法将中药黄芩制成水提液。运用体外细胞培养技术,以MTT法检测黄芩水提液对Hela细胞的毒性。以利巴韦林（病毒唑）为阳性对照,对黄芩水提液进行体外抗RSV的药效学检测。结果黄芩的50%细胞中毒药物浓度（CC50）为16.32 mg/mL,对RSV的半数有效剂量（EC50）为2.43 mg/mL。黄芩和病毒唑对RSV的抑制作用存在明显的量效关系(P＜0.05)。结论黄芩在体外实验中对RSV有一定抑制作用。     

槐耳清膏对口腔鳞癌细胞SCC-15增殖、凋亡及侵袭能力影响的实验研究

目的:探究将槐耳清膏加入到体外培养的口腔鳞癌细胞SCC-15中是否对其有抑制增殖、侵袭,并诱导其凋亡的作用。方法:采用MTT法分析不同浓度的(0.5、1.0、3.0、5.0、10.0 mg/ml)槐耳清膏加入口腔鳞癌细胞中24 h、48 h后对其的增殖抑制作用。流式细胞仪分析槐耳清膏作用24 h后口腔鳞癌SCC-15的凋亡情况。TRANSWELL法探究口腔鳞癌细胞侵袭能力的变化。结果:槐耳清膏作用于体外培养的口腔鳞癌细胞,对其增殖能力具有显著的抑制作用,与药物浓度存在量效关系并随时间延长作用效果加强。槐耳清膏有促进口腔鳞癌细胞凋亡的作用。培养24 h后,浓度在0.5 mg/mg的槐耳清膏对细胞侵袭能力的影响无统计学意义,1.0、3.0、5.0、10.0 mg/ml的槐耳清膏可以明显减低细胞的侵袭能力,浓度越高抑制作用越明显。结论:槐耳清膏能够降低体外培养口腔鳞癌细胞的增殖及侵袭能力并诱导细胞的凋亡。     

检测肿瘤凋亡和p53再生化合物对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用

目的探讨p53靶向小分子RITA对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。方法基因测序确定实验所用U251和U87细胞中p53基因状态;MTS法检测0μmol/L、1μmol/L、4μmol/L、10μmol/L RITA作用于U251和U87细胞0 h、24 h、72 h、120 h、168 h的增殖情况;qRT-PCR法和Western blot法分别检测抑癌基因p53、p21的mRNA和蛋白质表达水平;计算抑制率和IC50。结果基因测序结果表明实验所用U251细胞表达突变型p53基因而U87表达野生型;RITA对2种细胞的增殖均有显著抑制作用,且对U251的抑制作用更强;5μmol/L RITA作用下,U251中p53、p21表达均显著增加,U87中p21表达增加,p53 mRNA表达变化不明显,但p53蛋白累积显著增加;RITA作用于U251、U87细胞24 h和120 h的IC50分别为123.870μmol/L、776.682μmol/L和2.817μmol/L、7.147μmol/L。结论RITA能有效促进人脑胶质瘤细胞U251和U87中p53和p21基因表达,发挥高效生长抑制作用,且含突变型p53的U251比含野生型p53的U87效果显著。     

应用干扰RNA慢病毒技术抑制人脑胶质瘤细胞中红细胞生成素受体mRNA的表达

目的探讨重组红细胞生成素受体(EPOR)干扰RNA慢病毒抑制人脑胶质瘤细胞中EPOR mRNA的表达情况。 方法选择人脑胶质瘤U251细胞株和人胚肾293T细胞株为研究对象。利用RNA干扰技术构建重组EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,进行病毒包装、病毒收集、病毒滴度检测后,感染人脑胶质瘤U251细胞,选择最佳MOI值;采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)检测U251细胞和感染重组EPOR干扰RNA慢病毒的U251细胞EPOR mRNA相对表达量,并计算重组EPOR干扰RNA慢病毒对于U251细胞EPOR mRNA表达的干扰效率。 结果①本研究成功构建重组EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,并测定其病毒滴度为1×10¹⁴TU/L。②MOI值为100的重组EPOR干扰RNA慢病毒感染U251细胞的荧光蛋白表达量最高,MOI值为1的荧光蛋白表达量最低。③重组EPOR干扰RNA慢病毒对于U251细胞的干扰效率为69%,并使EPOR mRNA表达明显受到抑制。 结论成功构建重组EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,使U251细胞的EPOR mRNA相对表达量明显降低,为后续EPOR转录水平变化的相关研究奠定实验基础。     

蒿甲醚对人结直肠癌细胞的毒性和放疗增敏作用的 研究

摘要:目的　探讨蒿甲醚对人结直肠癌细胞株HCT116及HT29的细胞毒性和放射增敏作用。方法　采用MTT法检测蒿甲醚对人结直肠癌细胞株HCT116及HT29的细胞毒性。克隆形成实验检测蒿甲醚对人结直肠癌细胞株HCT116及HT29的放射增敏作用,多靶单击模型拟合HCT116及HT29细胞的剂量存活曲线,计算蒿甲醚对HCT116及HT29细胞的放射增敏比,评价其放射增敏效果。结果　蒿甲醚对HCT116及HT29细胞作用24 h、48 h、72 h的IC50分别为:HCT116:300 μg/ml、270 μg/ml、170 μg/ml;HT29:280 μg/ml、250 μg/ml、200 μg/ml。蒿甲醚对HCT116及HT29细胞在平均致死剂量的放射增敏比（SERD0）分别为1.31和1.25。结论　蒿甲醚对人结直肠癌细胞株HCT116及HT29的细胞毒性作用呈剂量和时间依赖性,并可对人结直肠癌细胞系HCT116及HT29有放射增敏作用。     

金雀异黄素对U251MG的抑制作用及对癌基因表达的影响

[目的]探讨金雀异黄素(Genistein)对胶质瘤细胞株U251MG增殖的影响及可能的作用机制。[方法]用MTT比色法观察不同浓度Genistein在不同作用时间下对U251MG细胞增殖的影响,并通过流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测p53(突变型)、c-erbB1、c-myc、cyclinD1蛋白表达。[结果]当Genistein在达到一定浓度或(和)一定时间后,对U251MG细胞增殖均有不同程度的抑制作用,且呈时间剂量依赖性。U251MG细胞经Genistein作用48h后,p53(突变型)、c-myc基因蛋白表达均较对照组明显下降(F=25.766,P﹤0.01;F=22.974,P﹤0.01),且呈剂量依赖性,而c-erbB1、cyclinD1基因蛋白表达无明显变化(F=0.984,P﹥0.05;F=2.416,P﹥0.05)。[结论]Genistein对U251MG细胞的增殖有明显的抑制作用,其抗肿瘤的机制可能与p53(突变型)和c-myc蛋白表达降低有关。     

紫草素诱导生殖系肿瘤细胞凋亡的研究

目的:观察新疆紫草素对生殖系肿瘤细胞的体外增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:由新疆紫草提取萘醌色素,制备微乳液,并加至人宫颈癌细胞系HeLas3和卵巢肿瘤细胞系OVCAR-3的体外培养中,共育24～72h。人胚肾HEK293和成纤维细胞系NIH3T3作为对照。MTT法测定细胞增殖。流式细胞术和TUNEL法分析细胞凋亡。结果:紫草素对HEK293和3T3的体外72h增殖无影响;但明显抑制宫颈癌以及卵巢肿瘤细胞系的生长;这种抑制作用呈现共育时间和药物浓度的依赖性。半数抑制浓度为2.58～0.19μg/ml。药物与卵巢肿瘤细胞系共育24h,肿瘤细胞凋亡明显增加,超过20%。结论:新疆紫草素诱导生殖系肿瘤细胞凋亡,从而抑制其体外增殖。     

异甘草素对小儿脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究异甘草素对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 取对数生长期人脑胶质瘤U251细胞,用不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)异甘草素处理,每个浓度设5个复孔.异甘草素处理24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FoxM1 mRNA的表达水平.结果 U251细胞经过浓度为0、10、20、40、60、80μmol/L的异甘草素处理24h、48h及72h后,细胞增殖均不同程度地受到抑制.在相同作用时间,不同浓度之间细胞增殖情况比较差异有统计学意义(F值分别为38.5、98.9、108.1,均P＜0.05);在相同异甘草素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h)细胞增殖情况比较差异均有统计学意义(F值分别为11.4、20.8、43.1、53.9、30.4,均P＜0.05).不同浓度异甘草素作用于U251细胞24h后,随着异甘草素浓度的增加,细胞凋亡率增加(F=120.3,P＜0.05).不同浓度异甘草素处理U251细胞48h后,FoxM1 mRNA相对表达量分别为(71.2±5.1)％、(54.6±3.3)％、(35.4±4.1)％、(20.8±4.0)％,比较差异有统计学意义(F=83.5,P＜0.05).结论 异甘草素体外可有效抑制U251细胞的增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与下FoxM1基因的表达有关.     

单壁碳纳米管对血管外膜成纤维细胞的毒性作用

目的 探讨不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对原代培养大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)的毒性作用,为SWCNTs的毒理学及生物安全性研究提供参考.方法 将SWCNTs制成颗粒悬液,设9个剂量组(0.80、1.60、3.20、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/ml)对原代培养...     

硫普罗宁注射液干预大鼠肝星状细胞致肝纤维化形成作用的研究

目的 探讨硫普罗宁注射液抗肝纤维化的作用及其机制。方法 肝星状细胞的分离采用胶原酶循环灌流法。硫普罗宁注射液（25mg／ml、50mg／ml、100mg／ml、200mg／ml、400mg／ml）作用不同时间（24h、48h、72h）后，采用MTT法OD值检测细胞活化增殖情况。硫普罗宁注射液（200mg／m1）作用24h和48h后，流式细胞术检测细胞增殖周期。采用溴乙锭／吖啶橙荧光染色法结合显微镜下形态学观察及流式细胞术检测硫普罗宁注射液对活化的肝星状细胞凋亡的影响。结果 硫普罗宁注射液各浓度组OD值较对照组明显降低（P〈0.05），硫普罗宁注射液200mg／ml组作用24h和48h流式细胞术检测出C2-M期的细胞数均明显高于正常对照组（P〈0．01），硫普罗宁注射液各浓度组荧光染色法和流式细胞术均未检测到肝星状细胞凋亡。结论 硫普罗宁注射液主要是通过抑制肝星状细胞增殖的C2-M期而产生抗肝纤维化作用的。     

杨梅素抑制H460人肺腺癌细胞增殖及细胞外信号调节激酶通路作用

目的研究杨梅素(myricetin)对人肺癌H460细胞的增殖抑制作用、及其作用途径。方法以人肺腺癌系H460细胞为离体研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的杨梅素对H460细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC50);Western blot法检测杨梅素对蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平及cyclinD1蛋白表达的影响;流式细胞术检测细胞周期。结果杨梅素对H460细胞具有明显的抑制作用,随着杨梅素浓度的增加,细胞的生长抑制率明显升高,杨梅素作用72h的IC50值为60μg/ml。流式检测发现,杨梅素可明显降低G2/M期H460细胞比例,明显增加G0/G1和S期比例,高剂量(60、90μg/ml)杨梅素处理下,H460细胞无法进入G2/M期。蛋白印迹检测证实,杨梅素干预明显抑制ERK磷酸化、下调Cyclin D1表达水平。结论杨梅素剂量依赖性抑制H460细胞增殖与其抑制细胞进入G2/M期有关,ERK-Cyclin D1途径可能在杨梅素细胞周期调控中发挥重要作用。     

Antiamoebic coumarins from the root bark of Adina cordifolia and their new thiosemicarbazone derivatives

In continuation of our search for potential antiamoebic agents from folklore Indian medicinal plants, we found that the benzene and ethyl acetate extracts from the root bark of Adina cordifolia exhibited strong antiamoebic activity with IC(50) values of 2.92 and 2.50 microg/ml, respectively. Bioassay-guided fractionation of benzene and ethyl acetate extracts led to the isolation of 7-hydroxycoumarin (umbelliferone 1) and 7-beta-D-glucosylcoumarin (skimmin 2), respectively. Umbelliferone 1 was converted into 7-acetoxycoumarin 1a, which on treatment with aluminium chloride afforded 7-hydroxy-8-acetylcoumarin 2a. A new series of thiosemicarbazones 3a-e of 7-hydroxy-8-acetylcoumarin with different thiosemicarbazides were synthesized. Umbelliferone was also converted into its methoxy derivative (7-methoxycoumarin 4). Subsequently, all the compounds were assessed for antiamoebic activity against HM1:IMMS strain of Entamoeba histolytica. Umbelliferone and skimmin were found to possess a very good activity with IC(50) values of 6.38 and 4.35 microM/ml, respectively. The activity drastically increased on converting compound 2a into its thiosemicarbazone derivatives 3a-e with IC(50) values ranging between 1.06 and 4.46 microM/ml. Compounds 3b,c and e with IC(50) values of 1.49, 1.56 and 1.06 microM/ml, respectively, exhibited even higher antiamoebic activity than the standard drug metronidazole (IC(50)=2.62 microg/ml). The activity of 7-methoxycoumarin (IC(50)=8.92 microM/ml) was less than umbelliferone. Compounds 3b, c and e were tested for toxicity using H9c2 cardiac myoblasts cell line. The compounds exhibit >80% viability at 3.125-200 microg/ml. It is apparent from these results that umbelliferone and skimmin may be a useful lead for the development of new antiamoebic drugs.     

The Effect of Garlic Extract on Expression of INFγ And Inos Genes in Macrophages Infected with Leishmania major

Background

The study was aimed to show the effect of molecular mechanism of Aqueous Garlic Extract (AGE) on expression of IFNγ and iNOS genes in Leishmania major.

Methods

Leishmania major promastigotes (MRHO/IR/75/ER) were added to the in-vitro cultured J774 cell line, the cells were incubated for 72 hours. Various concentrations of garlic extract (9.25, 18.5, 37, 74, 148 mg/ml) were added to the infected cells. MTT assay was applied for cellular proliferation. After 72 hours of incubation, supernatants were collected and total RNA was extracted from the infected cells. The express of IFNγ and iNOS genes were studied by RT-PCR method.

Results

The colorimetric MTT assay after 3 days of incubation showed cytotoxic effect of garlic extract with an IC50 of 37 mg/ml. In addition, IFNγ and iNOS genes expression by RT-PCR indicated that garlic extract lead to over expression of these genes in J774 cell line infected with L. major.

Conclusion

Garlic extract exerts cytotoxic effect on infected J774 cell line. In addition, the hypothesis that garlic can improve cellular immunity with raising the expression of IFNγ and of iNOS genes confirmed.