核转录因子κB在急性髓细胞性白血病患者中调控多药耐药基因转录的研究

近年来，发现核转录因子κB（NF—κB）在多种肿瘤细胞中都是组成型活化的，并与肿瘤的耐药有密切关系。MDR1基因编码产物的P-糖蛋白（P—glycoprotein，P—gp）为能量依赖性的运输泵，它能将细胞内的药物泵出细胞外，因此P—gp的过表达能使细胞内药物浓度降低，是引起化疗失败的重要因素之一。荧光染料Rho123可作为底物被P—gp泵出细胞外，造成细胞内荧光分布减少，常被用来检测P—gp离子泵的功能。最近的研究发现NF—κB可以结合于MDR1基因的第一个内含子区域，并且在大     

核转录因子κB与三氧化二砷耐药的关系

目的 研究核转录因子κB与急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞对三氧化二砷(As_2O_3)敏感性降低的关系.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法进行半数抑制浓度(IC_(50))测定以评估细胞对药物的敏感度;免疫细胞化学检测NF-κB p65的核转位;免疫组织化学染色法鉴定核转录因子KB抑制剂MG-132对耐药细胞p-gp表达的影响.结果 对照组比药物处理组的IC_(50)高6.4倍;药物处理组P-gp的表达阳性率为10.17%,对照组的p-gp的表达阳性率为30.43%,两者相比较差异显著(P<0.05).结论 用As_2O_3,治疗APL的同时可能会促进NF-κB p65的核转位和NF-KB的活化.抑制NF-κB的激活有助于增强As_2O_3,对急性早幼粒细胞性白血病细胞的杀伤效应;NF-κB抑制剂MG-132可以明显抑制As_2O_3引起的P-gp的表达以及NF-κB的活化,从而显著提高急性早幼粒细胞性白血病细胞对As_2O-3的敏感性.     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562/A02核因子κB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

核转录因子κB及其抑制基因在自体移植静脉中的表达

目的　研究核转录因子 κB (NF κB)及其抑制因子IκB基因在自体移植静脉中的表达 ,及其在内膜增生中的作用。方法　Wistar大鼠 80只 ,建立自体移植静脉模型 ,术后随机分为 6、2 4h ,3、7d ,2、4、6、8周等 8组 ,于相应时点取材 ,进行病理形态学研究 ,半定量逆转录PCR检测NF κBp6 5mRNA和IκBβmRNA表达的变化 ,原位杂交方法检测NF κBp6 5mRNA表达 ,联合应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测p6 5、IκBα和IκBβ的蛋白质表达。 结果　移植静脉术后 6h即出现p6 5mRNA和IκBβmRNA表达增强 ,基因表达值分别为 16 %± 4 %和 31%± 9% ,与正常静脉比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;p6 5mRNA表达 3～ 7d达高峰 ,术后 3、7d的表达值分别为 37%± 12 %和34%± 10 % ,IκBβmRNA表达则于术后 1～ 2周达到高峰 ,表达值分别为 5 3%± 17%和 4 9%± 10 % ,与其余各时点比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。p6 5蛋白质阳性表达 1周达高峰 32 %± 13% ,IκBα、IκBβ蛋白质术后 2周达高峰 ,阳性率分别为 35 %± 11%和 4 4 %± 13% (P <0 0 1)。IκBα、β蛋白质术后 6～ 2 4h表达量有所降低 ,为正常静脉的 1/3～ 1/2。结论　移植静脉中存在NF κB系统及其抑制因子IκB基因的活化。核转录因子κB可能     

多药耐药基因1与肝癌

目前认为肝癌化疗失败的主要原因与多药耐药有关,而多药耐药基因1(Multi-drug resistance 1gene,mdr1)编码的P-gP蛋白(Permeability-glycoprotein)被认为可能是参与肿瘤多药耐药的主要因素之一.目前的研究发现,mdr1参与肝癌的多药耐药可能与多种机制有关,而且mdr1...     

胃癌组织核转录因子κB p65蛋白表达与肿瘤多药耐药性的关系

目的 分析胃癌组织中核转录因子κB（NF-κB）p65蛋白表达与肿瘤多药耐药性（MDR）的关系,并探讨其意义。方法 选取2013年1-12月在河北医科大学第四医院外三科手术切除并经病理证实的68例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织。采用免疫组化（SP）法检测胃癌组织及癌旁组织NF-κB p65、P-gp、Bcl-2、Bax蛋白表达;采用体外药物敏感实验（MTT法）检测胃癌组织细胞对氟尿嘧啶（5-FU）、长春新碱（VCR）、紫杉醇（PTX）、奥沙利铂（L-OHP）、表阿霉素（eADM）的体外化疗药物敏感性。结果 胃癌组织NF-κB p65、P-gp、Bcl-2蛋白强表达率均高于癌旁组织,Bax蛋白强表达率低于癌旁组织,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织NF-κB p65与P-gp蛋白表达呈正相关（rs=0.321,P=0.008）,NF-κB p65与Bax蛋白表达呈负相关（rs=-0.333,P=0.006）,NF-κB p65与Bcl-2蛋白表达无直线相关关系（rs=0.231,P=0.058）。在胃癌组织中,5-FU、PTX对NF-κB p65强表达者肿瘤细胞抑制率低于弱表达者,差异有统计学意义（P＜0.05）;5-FU、PTX、L-OHP对P-gp强表达者肿瘤细胞抑制率低于弱表达者,差异有统计学意义（P＜0.05）;5-FU、PTX、eADM对Bcl-2强表达者肿瘤细胞抑制率低于弱表达者,差异有统计学意义（P＜0.05）;5-FU、L-OHP、eADM对Bax强表达者肿瘤细胞抑制率高于弱表达者,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌组织中NF-κB p65表达增高,其可能通过调控P-gp、Bax蛋白表达而参与胃癌MDR。     

解毒化瘀药对白血病K562/A02耐药细胞mdr1耐药基因、核因子κB信号影响的研究

目的:探讨解毒化瘀药含药血清对白血病K562/A02细胞mdr1耐药基因、核因子κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)信号基因表达的影响。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测解毒化瘀药含药血清处理后K562/A02细胞mdr1基因的表达;Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果:解毒化瘀药含药血清能够降低K562/A02耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,降低mdr1耐药基因的表达。结论:解毒化瘀药对K562/A02细胞的耐药逆转作用可能是通过阻断NF-κB信号通路,影响mdr1耐药基因的表达起作用的。     

急性白血病患者多药耐药基因MDR1的表达及临床意义的研究

目的探讨急性白血病(AL)患者多药耐药基因MDR1的表达和化疗敏感性的关系.方法应用实时荧光定量RT-PCR技术测定45例初治AL患者MDR1水平的表达. 结果耐药组MDR1阳性表达(56.52%)明显高于敏感组(13.64%),P＜0.01,两组差异显著,有统计学意义.结论 MDR1基因表达是AL临床耐药的因素之一.     

白血病细胞多药耐药基因表达与化疗耐药关系的研究

目的 研究ｍｄｒｌ基因表达与临床化疗的关系。方法 选择４４例白血患者和５例正常对照者，运用ＲＴＰＣＲ方法检测ｍｄｒｌ基因表达，同时评估患者对化疗的反应。结果 白血病患者初治组ｍｄｒｌ阳性表达率为７８．９％，缓解组为５５．６％，难治复发组为９３．３％，对照组无一人表达；ｍｄｒｌ阴性及低度表达者中有８２．４％的人达到ＣＲ，而ｍｄｒｌ中、高度表达者中仅３７．０％的人达到ＣＲ。结论ｍｄｒｌ基因表达增高与化     

多药耐药基因MDR1的转移与表达研究

为建立逆转录病毒介导的多药耐药基因MDR1转移体系,用脂质体转染法将复制缺陷型道病毒载体HaMDR导入鼠源单向型包装细胞GP＋E86;收集单向型逆病毒上清并重复转导双嗜型包装细胞,获得高满度病毒生产细胞PA317／HaMDR。结果：鼠源单向型与双嗜型病毒生产细胞的滴度分别为6．2×105CF/ml和8．5×105CFU／ml,无辅助病毒产生;聚合酶链反应分析证实两种生产细胞均整合有MDR1基因并能持续表达mRNA;流式细胞术与MTT法显示,转移有MDR1基因的包装细胞可高效表达功能性P一糖蛋白,使耐药水平较母株提高12－198倍。该研究为将MDR1基因导入造血于细胞莫定了基础。     

鼻咽癌放射敏感性与MDR1基因多态性的关系

目的 探讨多药耐药基因(MDR1)多态性(21外显子G2677T和26外显子C3435T)与鼻咽癌放射敏感性差异的相关性.方法 对59例行根治性放疗的鼻咽癌病人,采用DNA限制性片断长度多态性法测定其MDR1 G2677T、C3435T和两者的单体型,并用基因测序法验证.结果 C3435T CC基因型放射敏感性显著高于CT和TT基因型(p=0.026);G2677T GG基因型行根治性放疗的疗效优于GT和TT基因型,但差异无显著性;携带有2677G-3435C单体型的病人放射敏感性显著强于其他单体型携带者(P=0.017).结论 MDR1 G2677T和C3435T多态性可能是鼻咽癌根治性放疗疗效的影响因素之一.     

慢性粒细胞白血病细胞株伊马替尼耐药与MDR1基因表达相关性探讨

目的 探讨慢性粒细胞白血病细胞株伊马替尼耐药与MDR1基因表达相关性.方法 采用Real-time PCR检测MDR1 mRNA表达,Western-blot检测P-gp蛋白表达,MTS法检测细胞药物敏感性.结果 耐伊马替尼细胞株K562/G01MDR1的mRNA表达明显上调,P-gp表达明显上调,维拉帕米能部分逆转K562/G01细胞株对伊马替尼的耐药.结论 MDR1基因参与伊马替尼耐药机制,P-gp抑制剂能改善伊马替尼临床疗效.     

细胞色素氧化酶P4504B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系

目的:探讨细胞色素氧化酶P450(CYP)4B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析和直接测序分析,分别检测152例膀胱癌患者和150例非肿瘤同期住院患者CYP4B1的各个常见突变基因位点,分析基因突变对膀胱癌发病的影响。结果:膀胱癌组CYP4B1 C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型频率高于对照组(χ2=8.266、16.218和15.347,P<0.05);不同病理分级及临床分期膀胱癌患者间CYP4B1各突变基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CYP4B1C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型者更易患膀胱肿瘤。     

肾移植中他克莫司的血药浓度与多药耐药基因多态性的关系

目的探讨肾移植术后患者的多药耐药基因（MDR1）外显子21（exon21）和26（exon26）的基因多态性对免疫抑制剂他克莫司（FK506）血药浓度的影响。方法采用聚合酶链反应（PCR）和限制性内切片段多态性（RFLP）的方法对86例肾移植术后的患者进行MDR1基因分型。使用酶联免疫吸附法（ELISA）测定患者在术后不同时间的FK506血药浓度。比较不同基因型之间FK506血药浓度与每公斤体重的剂量比值的差异。结果在86例患者中,exon21中GG型为26个（30．2％）,GT型为35个（40．7％）,1Tr型为25个（29．1％）;exon26中CC型为26个（30．2％）,CT型为37个（43．0％）,1Tr型为23个（26．8％）。MDR1 exon26 C3435T与MDR1 exon21 G2677T之间存在着明显的连锁不平衡。GG型患者的比值明显低于CT型和TT型患者,而GT型患者又低于TT型患者,差异均具有统计学意义（均P〈0．05）;同样CC型患者的比值明显低于CT型和TT型患者,而CT型患者又低于TT型患者,差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论在肾移植患者中MDR1基因多态性与FK506血药浓度具有相关性。GG型和CC型患者拟取得相似的血药浓度要比GT或TT型和CT或TT型患者服用更高剂量的FK506。了解患者的MDR1基因型,有利于肾移植术后FK506个体化应用。     

Reversal of Adriamycin Resistance in Human Mammary Cancer Cells by Small Interfering RNA of MDR1 and MDR3 Genes

Resistance to antineoplastics is still the major cause of the failure of chemotherapy in cancer patients[1]. RNA interference (RNAi) is a conserved cellular mechanism in which double-stranded RNA silences the correspond-ing homologous cellular gene effectively and specificity. RNAi has a great potential of application in the reversal of drug resistance of tumor[2]. MDR1 and MDR3 are the two ATP binding cassette transporter genes. MDR3 is the second member of the human p-gp family next …     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

MDR1 and MDR3 Genes and Drug Resistance to Cisplatin of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between MDR1 and MDR3 gene and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells. Two siRNAs (MDR1, MDR3) which specifically targeted MDR1 and MDR3 genes were transfered into A2780/DDP cells. Then double staining with Annexin- V-FITC/PI was used to detect cell apoptosis by the flow cytometry (FCM). A2780/DDP cell viability was determined by MTT. MDR1 and MDR3 mRNA were assessed by RT-PCR. Caspase-3 protein was detected by Western blotting. Transfection of MDR1 and MDR3 siRNA into A2780/DDP cells failed to reverse the drug-resistance of A2780/DDP cells to cisplatin (P>0.05). No significant differ- ence in the apoptosis efficiency was observed between the MDR1 and MDR3 siRNA, pSuppressor- Neo vector transfection cells and untreated cells (P>0.05). In the presence of cisplatin of different concentrations, the viability of A2780/DDP cells was not significantly decreased after the transfection. No changes in MDR1 and MDR3 mRNA were found in MDR1 and MDR3 siRNA-transfected A2780/DDP cells. As compared with pSuppressorNeo and untreated groups, no significant difference existed in the expression of MDR1 and MDR3 mRNA (P>0.05). The expression of caspase-3 protein in MDR1 and MDR3 siRNA transfected A2780/DDP cells was not significantly increased. It is con- cluded that multidrug resistance induced by cisplatin in ovarian carcinoma cell lines is not due to overexpression of MDR1 and MDR3 gene. The drug resistance of ovarian carcinoma cells to cisplatin is not mediated by P-glycoprotein.     

MDR1 and MDR3 genes and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells

Summary To investigate the relationship between MDR1 and MDR3 gene and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells. Two siRNAs (MDR1, MDR3) which specifically targeted MDR1 and MDR3 genes were transfered into A2780/DDP cells. Then double staining with Annexin-V-FITC/PI was used to detect cell apoptosis by the flow cytometry (FCM). A2780/DDP cell viability was determined by MTT. MDR1 and MDR3 mRNA were assessed by RT-PCR. Caspase-3 protein was detected by Western blotting. Transfection of MDR1 and MDR3 siRNA into A2780/DDP cells failed to reverse the drug-resistance of A2780/DDP cells to cisplatin (P>0.05). No significant difference in the apoptosis efficiency was observed between the MDR1 and MDR3 siRNA, pSuppressorNeo vector transfection cells and untreated cells (P>0.05). In the presence of cisplatin of different concentrations, the viability of A2780/DDP cells was not significantly decreased after the transfection. No changes in MDR1 and MDR3 mRNA were found in MDR1 and MDR3 siRNA-transfected A2780/DDP cells. As compared with pSuppressorNeo and untreated groups, no significant difference existed in the expression of MDR1 and MDR3 mRNA (P>0.05). The expression of caspase-3 protein in MDR1 and MDR3 siRNA transfected A2780/DDP cells was not significantly increased. It is concluded that multidrug resistance induced by cisplatin in ovarian carcinoma cell lines is not due to overexpression of MDR1 and MDR3 gene. The drug resistance of ovarian carcinoma cells to cisplatin is not mediated by P-glycoprotein.