牛血清白蛋白键合的液相手性整体柱制备及其蛋白柱载量的研究

蛋白质柱载量的测定对优化蛋白质类手性整体柱的制备条件具有重要意义。采用热引发原位聚合方法制备了聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)-乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)液相整体柱,而后采用环氧法直接键合手性选择剂牛血清白蛋白(BSA),制得高效液相手性整体柱,并且建立考马斯亮蓝(CBB)法测定手性整体柱上的蛋白柱载量。结果显示,BSA最大的柱载量为11.90 mg/g,此时致孔剂组成为环己醇-十二烷醇(65∶35)。将制备的高效液相手性整体柱用于色氨酸和华法林的拆分,色氨酸的两个对映异构体达到基线分离。高效液相手性整体柱的蛋白柱载量与手性拆分的效果呈现正相关。     

埃索美拉唑及其光学异构体的亲和毛细管电泳手性拆分

以牛血清白蛋白为手性添加剂,建立埃索美拉唑对映体杂质检查的亲和毛细管电泳方法,并采用荧光光谱、圆二色光谱法,通过研究埃索美拉唑及光学异构体与牛血清白蛋白作用的热力学参数、焓熵驱动过程及蛋白构象变化对其拆分机理进行探讨。建立的电泳分离条件为:未涂层石英毛细管柱(50 cm×50 μm,有效长度41.5 cm),以pH 8.0的20 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(含250 μmol/L牛血清白蛋白和7%正丙醇)作为运行缓冲液,正向运行电压30 kV,柱温25 ℃,检测波长302 nm,压力进样(5 kPa,5 s)。在优化的实验条件下,埃索美拉唑与其对映体的分离度大于1.8,对映体杂质的最低检测限和定量限分别为0.8和2.0 μg/mL,在2~20 μg/mL浓度范围内线性关系良好;平均回收率为100.4%,RSD小于2.0%。该方法可用于埃索美拉唑原料药的对映体杂质检查。     

牛血清白蛋白手性柱直接拆分亚叶酸钙消旋体

目的:建立牛血清白蛋白手性柱直接拆分亚叶酸钙消旋体的方法.方法:采用高效液相色谱法,使用EC 150/4 RESOLVOSIL BSA-7 (150 mm×4 mm) 手性色谱柱,0.20 mol/L、pH 5.0磷酸盐缓冲液为流动相,对亚叶酸钙消旋体进行拆分,考察了流动相缓冲液浓度、pH值以及柱温对拆分效果的影响.结果:流动相的缓冲液浓度、pH和柱温对亚叶酸钙对映体的容量因子k′,以及分离度Rs,均有较大影响.左旋亚叶酸钙和右旋亚叶酸钙分别在18.5 min和22.6 min出峰,分离度Rs＝1.49.结论:用本方法可以成功拆分亚叶酸钙对映体.     

中性环糊精毛细管电泳法手性拆分氧氟沙星对映体的对比

目的:比较在毛细管电泳中不同中性环糊精(CD)及其衍生物对氧氟沙星对映体的手性拆分能力,并提出可能的手性识别机制. 方法:分别以α-CD,β-CD,γ-CD,HP-β-CD和DM-β-CD为手性选择剂,采用毛细管电泳法研究CD种类及其浓度、分离电压、温度对氧氟沙星对映体分离的影响. 结果:在50 mmol/L磷酸缓冲液(pH 3.0),15 kV分离电压、柱温25℃的基本优化条件下,分别以25 mmol/L DM-β-CD或50 mmol/L HP-β-CD 25 mmol/L γ-CD为手性选择剂,氧氟沙星对映体得到基线分离,分离度(Rs)分别达2.0和1.7. 结论:CD空腔大小和空腔边缘作用对于手性识别有重要选择性,该毛细管电泳法操作简单方便,手性分离效果良好,可用于氧氟沙星对映体药物的分离.     

亲和毛细管整体柱在牛血清白蛋白与奈福泮对映体相互作用研究中的应用

利用胃蛋白酶键合的有机聚合物整体柱在电色谱中对手性药物奈福泮的拆分能力,采用前沿分析法同时对奈福泮的两个对映体与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用情况进行了考察。经过优化后建立的电色谱条件为:胃蛋白酶修饰的聚(甲基丙烯酸环氧丙酯-乙二醇二甲基丙烯酸酯)毛细管整体柱作为分离通道(32 cm×75 μm,有效长度22 cm),运行缓冲液为pH 5.5的15 mmol/L醋酸铵,样品溶剂为pH 7.4的50 mmol/L醋酸铵,运行电压为5.0 kV,电压进样10 kV×6 s,检测波长为215 nm。此时奈福泮两个对映体平台峰彼此完全分离,结合体系中BSA对对映体在电色谱中的分离和检测均无影响,测得两个对映体与BSA的结合常数分别为443和527 L/mol,结合位点数均为1.0,结合位点为Sudlow site Ⅱ。     

对映体的毛细管电泳分离

介绍了对映体药物的毛细管电泳分离方法的研究近况。对于光学异构体的分离，有直接拆分和间接拆分，色谱技术已早被人们所采用，而毛细管电泳法问世不久。本文对直接拆分的四种模式：主客体络合、配体交换络合、手性胶束包合及蛋白质亲合等研究原理和进展进行了讨论；毛细管电泳间接拆分实为柱前衍生化，其关键在于衍生化试剂的选择，而在ＭＥＣＣ中应用的试剂早已被ＨＰＬＣ法中广为采用，故可被参考。毛细管电泳手性拆分尚有许多未     

核壳型磁性APTES-Fe3O4纳米涂层柱的制备及应用

以羧甲基-β-环基糊精(carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM-β-CD)作为手性选择剂,以3-氨基丙基三乙氧基硅烷-四氧化三铁(3-aminopropyltriethoxysilane-Fe₃O₄,APTES-Fe₃O₄)磁性纳米粒吸附于毛细管内壁,在外加磁场下进行手性分离。本研究通过提供外加磁场的方式,将核壳结构的APTES-Fe₃O₄磁性纳米粒涂布于毛细管内壁,制备了一种核壳型磁性APTES-Fe₃O₄纳米涂层柱。此法操作简便,且毛细管涂层重复性好,柱寿命超过80次电泳分析。经0.01 mol/L HCl、0.001 mol/L NaOH、CH₃OH和CH₃CN等冲洗15 min后,涂层未发生明显变化,化学稳定性强。外加磁场去除后,作为涂层的磁性纳米粒可进行回收重复利用。首次将此涂层柱应用于手性药物的毛细管电泳拆分,成功分离了氧氟沙星、普萘洛尔对映体。结果表明,相比于未涂层柱,APTES-Fe₃O₄磁性纳米涂层柱能提高柱效并改善分离效果。实验考察了手性选择剂浓度、缓冲溶液pH、有机相种类及比例、运行电压等电泳条件对分离的影响,优化条件下两种药物分离度分别为1.97和1.93。     

β-环糊精硫酸酯的合成及其在舒必利毛细管电泳拆分中的应用

目的:合成β-环糊精硫酸酯并以其作为毛细管电泳手性添加剂对舒必利进行手性拆分研究.方法:以三氧化硫吡啶复合物作为硫酸酯化试剂合成β-环糊精硫酸酯.以合成的β-环糊精硫酸酯作为手性添加剂利用毛细管电泳对舒必利进行手性拆分.结果:对不同反应温度(60、80、100、120℃)下产物的纯度进行了初步分析,表明在80℃条件下,以吡啶作溶剂、三氧化硫吡啶复合物作为硫酸酯化试剂合成β-环糊精硫酸酯条件易于控制,产物纯度较好.用合成的β-环糊精硫酸酯作为毛细管电泳手性添加剂,采用未涂渍熔融石英毛细管50 μm×58.5 cm (有效长度50 cm),优化选择50 mmol/L Tris缓冲液含1.3% β-环糊精硫酸酯(1% H3PO4溶液调节pH 3.7),温度20℃,操作电压24 kV,正极进样50 mbar×3 s(1 bar=105 Pa),在检测波长214 nm条件下对舒必利的D、L-型对映体进行分离,结果分离度良好(Rs>2.5).结论:探索得到了一条较为稳定的β-环糊精硫酸酯的合成路线,合成的β-环糊精硫酸酯作为毛细管电泳手性添加剂分离舒必利的D、L-型对映体拆分效果较好.     

毛细管区带电泳法拆分盐酸舍曲林对映体

目的:研究影响盐酸舍曲林对映异构体分离的因素,比较不同种类环糊精对盐酸舍曲林对映异构体的手性选择性,建立拆分盐酸舍曲林对映异构体的毛细管区带电泳分离方法.方法:以15 mg/mL 羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)为手性添加剂,采用30 mmol/L四硼酸钠(pH 11)为背景电解质,操作电压为15 kV,柱温为20 ℃,波长为210 nm的条件下,分离了盐酸舍曲林对映异构体.结果:盐酸舍曲林对映异构体在15 min内达到基线分离.结论:阴离子环糊精对盐酸舍曲林对映异构体的手性选择性比中性环糊精高.     

毛细管区带电泳分离特布他林对映异构体

目的 :考察毛细管区带电泳法 (CZE)中各种因素对β-环糊精衍生物分离肾上腺素类药物特布他林的影响。方法 :采用 CZE对特布他林的手性分离进行研究。未涂渍熔融石英毛细管 5 0μm× 5 8.5 cm (有效长度 5 0 cm ) ;温度 2 0℃ ,操作电压 2 0k V,正极进样 5 k Pa× 3s,检测波长 2 0 4 nm。β-环糊精的两种衍生物作为手性添加剂。结果 :2 ,3,6 -三甲基 -β-环糊精为手性选择剂时使特布他林得到了基线分离 ,羧甲基 -β-环糊精为手性选择剂时却不能得到基线分离。特布他林在三甲基 -β-环糊精环境下 ,分离度随 p H变小逐渐增大 ,p H在 2 .5～ 4 .0范围内变化明显 ;而在羧甲基 -β-环糊精环境下分离度随 p H变化不明显 ,且当 p H>5 .5时特布他林不能分离。环糊精体积分数从 0 .4 %～ 1.6 %时 ,环糊精与特布他林形成的复合体随环糊精的增加而增加 ,使该手性物质更容易拆分。结论 :β-环糊精的类型、浓度以及缓冲液的 p H是影响特布他林手性拆分的主要因素 ;肾上腺素类药物特布他林能得到完全分离     

HPLC手性固定相法拆分恩替卡韦光学异构体

建立恩替卡韦5个光学异构体的高效液相色谱拆分方法。采用Chiralpak AD-H手性柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）在正相条件下进行同时拆分,流动相为正己烷-异丙醇-乙醇-二乙胺（70∶6∶24∶0.1）,流速为0.5 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。色谱条件的优化过程中,考察了流动相组成及比例、酸碱添加剂、流速、柱温等因素对恩替卡韦异构体分离的影响。在所建立的条件下,恩替卡韦5个光学异构体分离良好,分离度依次为1.923,4.498,4.573和2.143。该方法简单快速、重复性好,适用于恩替卡韦原料药的光学异构体检查。     

CHIRALCEL OD—RH手性柱直接拆分吲达帕胺对映体

目的采用新型反相手性色谱柱CHIRALCEL OD—RH阿维素3,5－二甲基苯基氨基甲酸酯涂敷在5μm硅胶上）,建立吲达帕胺对映体的反相高效液相色谱拆分方法,为研究吲达帕胺手性对映体药代动力学提供基础。方法在CHIRALCEL OD—RH柱上,考察了流动相组成、流速和柱温对吲达帕胺手性对映体拆分的影响。结果以水-乙腈（1：1,V/V）为流动相,流速0．5ml·min^-1,柱温20℃,在CHIRALCEL OD—RH手性柱上成功拆分吲达帕胺对映体。结论吲达帕胺对映体在CHIRALCEL OD-RH手性柱上获得基线拆分。     

反相高效液相色谱法拆分醋酸棉酚对映异构体

目的建立醋酸棉酚的手性分析方法,用于拆分产物光学纯度的测定。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Chiralcel OD-RH手性柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为pH3.5磷酸三乙胺缓冲溶液-乙腈(体积比30∶70),流速为1.0 mL/min;检测波长为225 nm。结果醋酸棉酚消旋体在此条件下分离度为5.3。该方法用于手性拆分得到的光学对映体的光学纯度测定,对映体过量百分比(ee)在98%以上。结论本方法分离度、精密度和稳定性好,可用于一类抗肿瘤新药左旋(-)-醋酸棉酚原料药的合成反应监测、有关物质检测,及相关制剂的定量分析、有关物质检测,结果准确可靠。     

硫酸氢氯吡格雷异构体的手性拆分及其限量检查

采用卵类黏蛋白手性固定相键合硅胶(Ultron ES-OVM)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),建立手性固定相HPLC直接拆分硫酸氢氯吡格雷对映异构体和位置异构体的方法,并通过对溶质计量置换保留模型、热力学参数、熵焓驱动过程及影响色谱行为的因素等内容进行研究,对手性拆分过程进行探讨。经优化,确定色谱条件为：流动相0.02 mol/L磷酸二氢钾-乙腈(80∶20),流速0.8 mL/min,检测波长220 nm,柱温30 ℃。硫酸氢氯吡格雷的对映异构体和位置异构体之间的分离度均大于1.6;S-硫酸氢氯吡格雷、R-硫酸氢氯吡格雷及其各自位置异构体的定量限分别为0.115,0.102,0.118,0.106 mg/L,在0.33～20.68,0.63～40.20,0.32～20.20,0.31～19.28 mg/L浓度范围内线性关系良好;按外标法计算,加样回收率在98.2%～101.7%之间;RSD小于2.0%。经方法学验证,该方法可用于硫酸氢氯吡格雷异构体杂质含量测定。     

CHIRALPAK AD-RH手性柱直接拆分普罗帕酮对映体

目的：建立普罗帕酮对映体的反相高效液相拆分方法,为研究普罗帕酮手性异构体药代动力学提供依据。方法：在Chiralpak AD-RH柱上,考察流动相pH值、流速、乙腈比例、缓冲盐浓度、柱温对普罗帕酮手性异构体拆分的影响。结果：以20mmol/L磷酸盐缓冲液（pH8.5）-乙腈为流动相,流速0.5mmol/L,柱温25℃,在Chiralpak AD-RH手性柱上成功拆分普罗帕酮对映体。结论：普罗帕酮对映体在Chiralpak AD-RH手性柱上获得基线拆分。     

盐酸西布曲明对映体的毛细管电泳手性拆分

目的：以磺化-β-环糊精（S-β-CD）作为手性选择剂,用毛细管区带电泳法对手性药物盐酸西布曲明进行了拆分研究.方法：考察了背景电解质溶液的pH值、S-β-CD的浓度、缓冲液浓度及电压等对分离的影响.结果：在背景电解质为含5％S -β-CD的15 mmol/L磷酸-三乙醇胺（H3 P04-TEA）（pH 4.0）体系,电压30 kV,温度为16℃,检测波长为223 nm条件下,盐酸西布曲明可以得到良好分离,分离度为5.6.结论：该方法可用于盐酸西布曲明的拆分,具有快速、便捷、准确性好等优点.     

使用手性冠醚的高效毛细管电泳法研究伯胺类药物的手性分离

目的　采用HPCE法拆分伯胺类药物对映异构体。方法　缓冲液 2 0mmol/LTris 0 .1%H3 PO4(v/v)(pH 2 .0 6 ) +18 冠 6 四甲酸 (18C6H4) ;检测波长 2 10nm。结果　 8种伯胺类药物得以拆分。结论　缓冲液中添加手性冠醚的HPCE法能较好地拆分伯胺类药物。     

固相萃取－高效液相色谱手性流动相添加剂法测定血浆中氧氟沙星对映体

目的：建立固相萃取-高效液相色谱法（high performance liquid chromatogoraphy,HPLC）拆分及测定血浆中氧氟沙星对映体的方法。方法：以L-异亮氨酸为配合剂,Cu2＋为配合离子,采用HPLC手性流动相添加剂法测定血中氧氟沙星对映体的含量。色谱柱为ODS—BP柱（250mm×4．6mm,5μm）,内标物为环丙沙星,流动相为手性添加剂溶液（含1．31g／LL-异亮氨酸和0．80g／LCuSO。）-甲醇（81．5：18．5）,激发波长为330nm,发射波长为504nm,流速为0．8mL／min。其中,应用C18固相萃取小柱萃取血浆中的氧氟沙星。结果：在经过优选的色谱条件下,对映体可以良好分离,分离度达到1．5以上;S-（-）-与R-（＋）-氧氟沙星的线性范围均为0．08～20μg／mL（r分别为0．9945和0．9947）,最小检测限均为4ng／mL,平均萃取回收率分别为89．77％和88．07％,平均回收率分别为97．19％和98．39％,日内RSD分别为2．9％和3．0％,日间RSD为2．0％和2．2％。结论：该法血样处理简单,干扰小,灵敏度高,精密度好,可以作为对血浆中左、右旋氧氟沙星分别测定的方法。     

高效毛细管电泳法分离八种含氨基手性药物的对映体

目的 采用HPCE法拆分八种含氨基手性药物对映异构体。方法 液中添加18－冠－6－四甲酸－18－Crown-6-(COOH)4（18C6H4），并且对18C6H4的浓度、缓冲液的pH值和浓度以及柱温等影响分离的因素作了系统的研究；检测波长210nm。结果 八种含氨基手性药物对映体得以拆分。结论 缓冲液中添加手性冠醚的HPCE法能较好地拆分伯胺类药物。