单核细胞增生李斯特菌测试片检测性能研究

目的评价单核细胞增生李斯特菌测试片的检测性能。方法将本实验室研制的单核细胞增生李斯特菌测试片与李斯特菌培养基和国家标准方法进行对比。通过接种单核细胞增生李斯特菌和10种其他标准菌株,评价了测试片敏感性和特异性。使用测试片定量检测单核细胞增生李斯特菌标准菌悬液和15个人工染菌样品,并与李斯特菌培养基进行对比,对结果进行统计分析。定性试验测试了150个自然样品,并与国家标准方法进行对比。结果测试片特异性良好;灵敏度可以达到2 cfu/ml;标准菌悬液和15个人工染菌样品定量检测结果显示,测试片与李斯特菌培养基比较差异有统计学意义(P0.05)。对150个自然样品测试结果与国家标准方法总符合率为96.00%,无假阴性。结论单核细胞增生李斯特菌测试片定量检测标准菌与李斯特菌培养基效果有差异,可用于自然样品中单核细胞增生李斯特菌的快速初筛。     

高特异性单核细胞增生李斯特菌显色培养基性能研究

目的研究不同分离培养基对纯菌及实际样品中单核细胞增生李斯特菌的分离效果。方法根据GB 4789.30—2010单核细胞增生李斯特菌检验方法,比较了本实验室制备的单核细胞增生李斯特菌显色培养基(L.MONO)、PALCAM及4种商品化显色培养基(CHROMagar、厂家Ⅰ、厂家Ⅱ和厂家Ⅲ)的性能。结果 6种培养基的选择性之间差异有统计学意义(P0.01),L.MONO和Ⅲ最好,其次为CHROMagar和厂家Ⅰ,厂家Ⅱ和PALCAM较差。49份样品阳性率为28.57%,L.MONO和厂家Ⅲ检出阳性符合率为100%,无假阳性和假阴性;CHROMagar阳性符合率为92.9%,厂家Ⅰ和厂家Ⅱ阳性符合率最差,PALCAM阳性样品完全检出,但有太多假阳性。结论 L.MONO性能达到甚至更优于CHROMagar,采用特异性更高的水不溶性显色剂可有效避免非特异性菌β葡萄糖苷酶的表达及脂肪沉淀环扩散引起的干扰和假阳性,也能有效解决现有显色培养基制备中配套试剂混匀困难的问题,是一种更为高效的单核细胞增生李斯特菌显色培养基。     

3种选择性分离培养基检测单核细胞增生李斯特菌效果比较

目的为更好地进行食品中单核细胞增生李斯特菌检测工作,使检测工作更加便利、准确和灵敏,保障食品安全,防范食源性疾病的发生,开展此项目的研究。方法参照食品安全国家标准食品微生物检验GB 4789.30—2010单核细胞增生李斯特菌检验和GB 4789.28—2013培养基和试剂的质量要求。结果本次研究选用的3种培养基的3个评价指标(生长率、生长指数、特异性)均符合GB 4789.28—2013中的要求,并且通过实际样品的加标试验进行验证比较,2种显色培养基的检测效果优于PALCAM培养基。结论在实际检测样品中,应根据不同的样品和目的,灵活的选择培养基和培养条件及检测方法,以提高检测的准确性和效率,减少漏检。     

近3年来吉林省食品中沙门菌和单增李斯特菌主动监测及结果分析

目的：了解吉林省高危食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌的污染状况，为国家食品安全监测网提供数据。方法：增菌后，用科玛嘉显色培养基分离，AIP生化板和泰国产血清鉴定。结果：检测生畜肉、生禽肉、非定型包装熟肉制品、生牛奶、淡水鱼、蔬菜共1021件，检出沙门菌102株，检出率10.0％；检测单核细胞增生李斯特菌样品共1181件，检出单核细胞增生李斯特菌169株，检出率14．3％。结论：3年来沙门菌监测结果05年最高，阳性率每年有连续增长趋势。阳性率以生猪肉最高，生鸡肉次之。3年中李斯特菌连续监测阳性率变化，以05年最高，03年次之。生鸡肉阳性率最高，生猪肉次之，生蔬菜少见。     

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌。本文对当前检测方法：传统分离技术、显色培养基鉴定技术、数值分类鉴定与新型计数技术、免疫检测技术以及分子检测技术作了简要概述；指出了单核细胞增生李斯特菌传统检测耗时，免疫学检测单克隆抗体制备困难，分子检测易产生假阴性和假阳性等若干问题；最后对检测技术未来的发展作了展望。     

RT-PCR方法检测单核细胞增生李斯特活菌研究

目的:建立单核细胞增生李斯特活菌快速检测技术,解决PCR带来的假阳性问题。方法:采用以mRNA为基础的RT-PCR方法对单核细胞增生李斯特氏菌的hlyA基因进行检测,设计引物,扩增,并作了特异性和灵敏度比较。结果:该引物能较好地扩增单核细胞增生李斯特菌的特异性片断,而对其它的李斯特菌以及常见食源性致病菌无特异性扩增条带;检测的灵敏度纯菌可达到1×104cfu/m l,人工污染样品猪肉、虾肉和牛奶等培养12~16 h,可达4.5 cfu/m l(g)。结论:可以应用该方法对样品中单核细胞增生李斯特活菌进行检测,能较好地解决PCR检测所带来的假阳性问题。     

黑龙江省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染监测

目的为掌握黑龙江省食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况，构建食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染数据库。方法在黑龙江省选取6个具有代表性城市建立监测哨点，定期对6类食品进行采样，检验采用增菌液（LB1、LB2）增菌后，用科玛嘉显色培养基分离，再做相应的生化及API Listeria快速反应板鉴定。结果检测6类760份食品样品，检出单核细胞增生李斯特氏菌（L．m）43株，检出率为5．66％。结论黑龙江省食品均不同程度受到L．m的污染，尤以生畜禽肉、非定型包装熟肉污染严重，淡水产品次之，生食蔬菜少见。     

进口与国产培养基对肉类、海产品中4种致病菌检出率的比较分析

目的：比较肉类、海产品中4种致病菌在进口科玛嘉培养基与国产培养基上的检出率。方法：增菌后分别用科玛嘉显色培养基与国产培养基分离培养4种致病菌。比较检出率。结果：沙门菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上无显著性差异（P〉0.05,2χ检验）,副溶血性弧菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上有显著性差异（P〈0.01,2χ检验）,金黄色葡萄球菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上无显著性差异（P〉0.05,2χ检验）,单核细胞增生李斯特菌在科玛嘉显色培养基与国产培养基上有显著性差异（P〈0.01,2χ检验）。结论：进口科玛嘉显色培养基在副溶血弧菌和单核细胞增生李斯特菌上比国产培养基有较高的检出率,而在沙门菌和金黄色葡萄球菌上的检出率与国产培养基无差异。     

单核细胞增生性李斯特菌研究进展

李斯特菌属（1isteria）现在有2个群7个种，分别是单核细胞增生性李斯特菌（L.monocytogenes，LM）（亦称产单核细胞李斯特菌）、伊氏李斯特菌（L.ivanovii）（亦称绵羊李斯特菌）、英诺克李斯特菌（L.innocua）（亦称无害李斯特菌）、韦氏李斯特菌（L.welshimei）、塞氏李斯特菌（L.seeligeri）、格氏李斯特菌（L．grayi）和莫氏李斯特菌（L．murrayi）。     

部分市售农副产品李斯特菌污染情况调查及耐药性分析

[目的]了解上海市闵行区农贸市场食品中李斯特菌的污染情况及其耐药情况。[方法]按国标方法,采用科玛嘉显色培养基,对食品进行李斯特菌的分离、生化鉴定,改良K-B法进行药物敏感性试验。[结果]320份样品中共检出李斯特菌36株,其中单核细胞增生李斯特菌10株;英诺克李斯特菌株23株,其余3株。10株单核细胞增生李斯特菌,对多粘菌素B和萘啶酸100%耐药,对氨苄西林、头胞噻肟、先锋V号、庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、氯霉素100%敏感。[结论]本地区农贸市场食品存在着李斯特菌的污染,生肉禽类食品中李斯特菌污染比较严重,应加强监督管理;LM存在一定的耐药性,并出现了多重耐药性。     

食品中单增李斯特菌国标定量方法实验室验证结果与分析

目的对食品中单增李斯特菌国标定量方法进行实验室验证。方法将单增李斯特菌标准菌株活化,经一系列稀释后染菌样品。再用单增李斯特菌国标定量方法讨论稿中平板计数和MPN法检测样品中单增李斯特菌浓度。使用3种分离培养基鉴定,对比检测效果,确定检出限。结果平板计数法的检出限为100CFU／250ml和10CFU／250ml。MPN计数法的检出限为10CFU／250ml和1CFU／250ml。平板计数法中科玛嘉单增李斯特菌显色培养基检出限低于PALCAM分离培养基,而MPN计数法中,3种分离培养基鉴定结果一致。结论平板计数法和MPN计数法均适合于食品中单增李斯特菌定量检测,MPN计数法灵敏度更高。平板计数法中科玛嘉单增李斯特菌显色培养基普遍优于PALCAM分离培养基,3种培养基都适合MPN计数法,鉴定符合率高。科玛嘉和ALOA上生长典型菌落较PALCAM容易判别。     

食品中单核细胞增生李斯特菌污染及耐药状况调查

目的:了解吉林省市售八类食品中单增李斯特菌的污染状况和耐药现状。方法:采集市售八类食品样品,采用显色培养基,API及BAX分离鉴定,K-B法药敏实验。结果:1251份样品共检出单增李斯特菌74株,总检出率为5.9%。主要在熟肉制品(17.0%)和凉拌菜(9.1%)。74株菌株对氨苄西林、青霉素、庆大霉素、卡那霉素全部敏感。头孢噻肟、新霉素耐药率达50%以上。其次为恩氟沙星(35.1%)、环丙沙星(33.8%)和诺氟沙星(25.6%)。结论:吉林省市售八类食品中尤其是熟肉制品和凉拌菜中单增李斯特菌污染和耐药现象严重。应高度重视并加强污染状况及耐药性监测,保证食品安全和人类健康。     

Evaluation of effects of primary and secondary enrichment for the detection of Listeria monocytogenes by real-time PCR in retail ground chicken meat

A SYBR Green I based real-time PCR assay with inlA-specific oligonucleotide primers was developed for easy and rapid detection of Listeria monocytogenes in a model food that usually has a high incidence of contamination with this pathogen. Results with pure cultures and artificially contaminated chicken meat samples indicate that the PCR assay was highly specific and sensitive. The melting point analysis of the 160 bp amplified DNA fragment was different for L. monocytogenes isolates of the two major phylogenetic divisions of the species, 1 and 2. The assay was then used to survey retail ground chicken meat for contamination with L. monocytogenes. Thirty-seven samples were enriched according to the United States Department of Agriculture culture assays to detect L. monocytogenes on meat. The use and efficiency of PCR assay was examined following both primary and secondary enrichments, which were also plated on chromogenic agar for enumeration of L. monocytogenes and nonpathogenic Listeria spp. to investigate the discrepancies between culture and PCR. Overall, L. monocytogenes was detected in 75% of the samples. Primary enrichment yielded detection rates of 70% and 37% for culture and PCR, respectively. The corresponding rates for secondary enrichment were 54% and 70%, respectively. Test sensitivity is therefore influenced by the type of enrichment and is probably related not only to the limited growth of L. monocytogenes in the primary enrichment media (false-negative PCR results), but also to the high populations of nonpathogenic Listeria spp. in the secondary enrichment broths (false-negative culture results). The main challenge of rapid PCR-based detection of L. monocytogenes from food is the poor sensitivity of primary enrichment media. The improvement of enrichment conditions may help increase assay sensitivity.     

全自动微生物磁珠分选系统检测单核细胞增生李斯特菌效果研究

目的:研究全自动微生物磁珠分选系统对食品中单增李斯特氏菌的检测效果。方法:取400份自然样品,用磁珠分选系统和国标法对样品进行对比检测。结果:全自动微生物磁珠分选系统相较国标法对自然样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出率有一定程度提高。结论:全自动微生物磁珠分选系统简单易用,标准化程度高,可以和国标检测方法相结合以提高单增李斯特氏菌的检出率。     

显色培养基快速检测沙门菌效果的研究

目的:评价显色培养基对沙门菌的检测效果,探讨显色法在实际应用中的可行性。方法:本实验室研制的沙门菌(Salmonellasp.)显色培养基HKSal与经典培养基SS、DHL琼脂和国外两种同类商品化显色培养基(ZWSalI和ZWSa-lII)作对比,分别对19株质控菌、40种人工污染样品和45种实际样品进行检测。结果:3种显色培养基均具有良好的选择性及特异性;在对7株质控菌、人工污染样品和实际样品检测中,HKSal、ZWSalI和ZWSalII沙门菌显色培养基与经典培养基SS和DHL可以达到相近的检测限和灵敏度。HKSal沙门菌显色培养基对某些沙门菌的灵敏度比ZWSalII沙门菌显色培养基更高。结论:本实验室研究试制的显色培养基HKSal与国外其它的两种显色培养基一样,都具有较好的检测效果,可大大提高沙门菌的检测效率,在实际应用中具有较大的应用价值。     

食品中单增李斯特菌PCR检测方法建立与评价

目的建立单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）快速、敏感、特异的PCR诊断方法。方法采用聚合酶链式反应技术（PCR）特异性扩增单核细胞增生李斯特菌溶血素基因（hlyA），并评价该方法的特异性与敏感性。结果在706bp处出现nuc基因的目的片断，只有单增李斯特菌的目的片段获得扩增，其他菌种扩增均呈阴性；该方法可以检测到3．3ng／L的DNA。结论PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便。为食品中单增李斯特菌的快速检测提供了新的手段。     

新型的LMX肉汤对单增李斯特菌的检测效果评价

目的评价一种新型的快速单增李斯特菌(LMX)肉汤对单增李斯特菌的增菌效果。方法对目标菌株的灵敏度、生长率、选择性及生化反应等几个方面进行测试,根据测试结果来判断新型培养基的增菌效果。结果新型培养基与国标推荐方法中使用的培养基的增菌效果相当。结论此液体培养基可以作为单增李斯特菌的快速检测用增菌液。     

秦皇岛市首次从豆制品等食品中检出单核细胞增生李斯特菌

[目的]对秦皇岛市食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况进行监测与分析。[方法]用LB增菌液增菌后,接种青岛海博显色培养基进行分离,动力试验、溶血实验及API生化鉴定。[结果]从120份食品中检出单核细胞增生李斯特菌9株,总检出率为7.5%,其中从豆制品中检出2株,检出率为20%,速冻米面食品中检出4株,检出率为20%,水产品中检出3株,检出率为15%,其他样品未检出。[结论]我市首次从豆制品水产品速冻米面食品中检出单核细胞增生李斯特菌,且超市食品中该菌污染严重,应对超市食品进行重点监测。     

单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测技术研究

目的建立快速检测单增李斯特菌的PCR-ELISA方法,将其应用于人工污染的食物样品检测。方法根据GenBank数据库资料,应用分子生物学软件DNAMAN6.0和Primer Premier5.0,以单增李斯特菌的致病基因hlyA为基础,选用PCR引物,应用地高辛标记试剂盒,获得单增李斯特菌特异的地高辛标记片段。根据PCR目的片段序列,设计特异性捕获探针,建立了单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测方法。应用该方法对不同血清型的单增李斯特菌食品分离株进行了检测,并将PCR方法与PCR-ELISA方法对人工污染单增李斯特菌的牛奶样品的检测敏感性进行了比较。结果应用单增李斯特菌特异的PCR-ELISA方法完成检测约需6h。该方法对单增李斯特菌分离株检测的结果,与国家食源性疾病检测网的鉴定结果100%符合。经过12h的增菌培养,PCR-ELISA方法最低可从25ml样品中检出1CFU,检测敏感性为传统PCR方法的10～100倍。结论建立了单增李斯特菌PCR-ELISA快速检测方法。该方法敏感性高、特异性强、可靠性好,对于提高食源性疾病预警、预测能力,增强检测的时效性和准确性,具有推广应用价值。