中国两种地方猪种内源性逆转录病毒的亚型分析

目的 对两种中国地方猪种（五指山猪和版纳微型猪近交系）的86头个体进行猪内源性逆转录病毒（PERV）亚型分析。方法 取引物Env A,EnvB和EnvC分别用于鉴定PERV的A,B和C亚型,并对86头个体进行PCR法分析。结果 在所有被检测个体中,77．9％的个体的基因组中 时有PERV的A、B两种亚型,另外22．1％的个体的基因组中则只有PERV的A或B亚型;所有个体的外周血白细胞中均未检测到PERV的C亚型。结论 PERV在中国五指山猪和版纳微型猪近交系的外周血白细胞中只有A、B两种亚型,并且以AB的混合亚型为主。     

四种小型猪内源性逆转录病毒基因研究

目的检测四种小型猪在内源性逆转录病毒基因（PERV）拷贝数上的差异，试图找出不含或含有较低拷贝数的个体或品种。方法采用半定量PCR方法检测了我国四种小型猪内源性逆转录病毒基因的拷贝数。结果州小型猪、五指山猪、西藏小型猪、巴马小型猪的PERV的拷贝数分别是34．12±1696，29．38±13．83，28．71±14．11，27．12±14．43（F=0．614，P=0．609），EnvA的拷贝数分别是9．78±5．48，10．06±5．34，10．23±5．71，10．51±6．23（F=00．044，P=0．988），EnvB的拷贝数分别是24．14±11．26，20．72±8．36，18，35±8．50，17．60±8．65（F=1．512，P=0．221）。尚不能认为四个猪种间PERV、EnvA、EnvB的拷贝数之间的差异具有统计学意义。结论四种常用的小型猪内源病毒负载量较低，表明其用于异种器官移植研究的可行性。     

中国两头乌猪品种内源性逆转录病毒基因研究

目的 对5个中国两头乌猪品种（通城猪、东山猪、沙子岭猪、赣西两头乌猪和金华猪）及3个国外品种（大白猪、长白猪和杜洛克猪）猪内源性逆转录病毒(PERV)的核心蛋白(gag) 基因、多聚酶(pol) 基因、囊膜(env) 基因的三个亚型A、B、C，分别从DNA和RNA水平上进行研究，以发现中国两头乌猪品种在异种器官移植中的资源优势。方法 利用PCR方法在DNA水平上对PERV基因的3个亚型进行鉴定，并通过半定量PCR方法在RNA水平上检测通城猪和大白猪PERV各亚型在心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪、淋巴和脑组织中的表达谱。结果 4个华中两头乌猪种中env-AB型为主要PERV亚型，分别占被测总数的92%～100%。在这4个品种中均没有检测到C亚型，金华猪以及3个国外猪种中均检测到了C亚型，病毒亚型种类也更丰富。半定量PCR实验结果显示gag、pol基因在两个品种9个组织中广泛表达，env-A在通城猪的心、肝、肺、脂肪和淋巴组织中表达量较低，env-B在通城猪的心脏和淋巴组织中表达量较低，而env-B在大白猪的肾脏中表达很低，其他所测8个组织中表达量都较高。结论 通城猪、东山猪、赣西两头乌猪和沙子岭猪可以做为较佳的异种移植候选供体，具有良好的应用前景。     

猪内源性逆转录病毒基因在版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的整合和表达研究

目的 检测猪内源性逆转录病毒（PERV）在猪细胞长期传代过程中的基因整合和表达。方法 通过提取已建立的版纳微型猪近交系（BMI）骨髓问充质干细胞（MSCs）永生细胞系的DNA及细胞总RNA,用PCR、RT—PCR方法检测PERV前病毒gag、pol和env基因的整合和表达,并对PERV的亚型进行鉴定。结果 从原代BMI—MSCs至连续传代到150、180代的BMI—MSCs细胞基因组中都检测到了PERV前病毒DNA的整合及其mRNA的表达．PERV亚型为PERV—A、B型。结论 PERV在BMI近交过程中及猪细胞体外长期传代过程中均未消扔,PFRV基因已经整合入其天然宿主的基因组内并能稳定表达。     

版纳微型猪近交系基因组中内源性逆转录病毒序列拷贝数分析

目的:检测分析版纳微型猪近交系基因组中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)序列的拷贝数,从而为猪源移植物的异种移植筛选理想供者.方法:用PERV的pol,env各亚型基因及envA/C重组体的特异性引物,对4个近交系亚系共50头以及5头欧洲大白猪的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)的基因组DNA进行了实时定量/半定量PCR检测及普通PCR检测.结果:所有版纳猪基因组中可特异扩增出pol,envA,envB片段,其平均拷贝数分别为(24.2±9.4),(13.1±8.4)和(16.4±9.8)个,但近交系不同亚系之间各片段扩增产物量比较差异具有统计学意义(P＜0.01).所有样品中无法扩增出envC片段以及envA/C重组体.结论:版纳微型猪近交系基因组内,PERV的envA、envB和pol序列拷贝数在近交系不同亚系间比较差异有统计学意义,不存在envC和envA/C重组体序列.     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

新型生物人工肝系统治疗急性肝衰竭犬后猪内源性逆转录病毒传播的实验研究

目的:探讨猪肝细胞为基础的新型生物人工肝(BAL)系统体外灌流后及治疗急性肝衰竭(ALF)犬后猪内源性逆转录病毒(PERV)的传播。方法:构建新型BAL,应用BAL进行体外灌流6h。采用门腔分流及胆总管结扎切断术建立犬ALF模型,应用BAL治疗ALF犬6h。采用PCR检测灌流前猪细胞中PERV原病毒DNA和猪mtDNA,采用RT-PCR检测灌流前后中空纤维管内腔循环液和治疗前后犬血清PERV RNA。结果:猪细胞可检测到PERV原病毒DNA和猪mtDNA,灌流前后中空纤维管内腔循环液和犬血清PERV RNA均为阴性。结论:猪肝细胞为基础的新型BAL体外灌流和用于ALF犬治疗6h后未发现PERV传播。     

猪内源性反转录病毒在中国实验小型猪中的存在与表达

目的对中国实验小型猪中内源性反转录病毒的存在与mRNA的表达进行检测,摸清中国实验小型猪中内源性反转录病毒的携带情况.方法根据已发表的PERV的序列设计并合成了三对引物,分别用于检测PERV核心蛋白基因(gag)、多聚酶基因(pol)及囊膜基因(env)的存在与表达;同时,根据目前通用的env基因分型方法合成了三对用于分型检测的引物env-A、env-B、env-C.应用PCR、RT-PCR扩增的方法,对来自于中国实验小型猪外周血淋巴细胞的DNA和RNA样品进行了检测.结果在6个被检DNA样品中均检出了PERV特异性DNA的存在;同样,在被检RNA样品中均有PERV特异性RNA的表达,且所表达的PERV均为A型和B型,在所有样品中均未检出C型PERV的表达.结论初步表明中国实验小型猪中存在内源性反转录病毒序列,且能以mRNA的形式表达,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础.     

猪皮肤成纤维细胞的培养与鉴定

目的　研究猪内源性逆转录病毒在体内和体外的感染性 ,建立理想的细胞模型 ,为猪一人间跨种移植的生物安全性评价奠定良好的基础。方法　运用组织块培养法、冷胰蛋白酶方法及热胰蛋白酶方法培养猪皮肤成纤维细胞 ,比较 3种方法的优点和缺点。结果　建立了猪皮肤成纤维细胞系组织块培养法优于胰酶法。结论　应用组织块培养法培养猪皮肤成纤维细胞优于胰酶法 ,经济实惠、操作简便、易于掌握 ;并为研究PERV在体内和体外的感染性提供了理想的细胞模型 ,为评估猪一人间跨种移植的生物安全性提供一种新的方法 ;对建立动物克隆生产的皮肤体外培养模式具有重要的参考价值。     

骨痂延长术治疗股骨大段骨缺损

目的：探讨骨痂延长术治疗儿童股骨干大段病理性骨缺损的临床疗效。方法：对39例股骨化脓性骨髓炎导致的大段病理性骨缺损进行双侧、单侧外固定支架或髓内骨痂延长术,术后延长速度2～2．5cm／m。结果：随访时间13～57月,经临床检查与影像学观察显示所有骨缺损均已愈合;骨延长9～31cm,延长率平均49％;延长段愈合指数为30d／cm,骨不连接处愈合时间平均约134d;无骨髓炎复发及再骨折。结论：骨痂延长术治疗股骨化脓性骨髓炎后大段骨缺损是一种疗效确切、手术简单、适应性强,可动态调节肢体长度,减少肢体畸形的方法。     

MMP-3,OPN和TIMP-1在白内障形成中的作用

目的：研究基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1）在白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法测定MMP-3，OPN和TIMP-1在31例前囊下性白内障，28例核性白内障和12例正常晶状体上皮细胞中的表达。结果：MMP-3在前囊下性白内障的表达高于核性白内障、正常晶状体（Χ^2=31．49，34．479；均P=0．000），而在核性白内障与正常晶状体中无明显差剐（f=2．449，P=0．118）；OPN在前囊下性白内障的表达高于核性白内障和正常晶状体（0=29．450，15．889；均P=0．000）；TIMP-1表达在3组晶状体上皮细胞中差异均无统计学意义（P〉0．05）；前囊下性白内障MMP-3和OPN的表达水平相关（r=0．381，P=0.035），而MMP-3和OPN与TIMP-1的表达水平不相关（r=0.121，-0．289；P=0．516，0．114）。结论：MMP-3和OPN的表达增强及MMP-3／TIMP-1的表达失衡可能与前囊下性白内障的形成密切相关。     

白松片对大鼠慢性应激抑郁模型的抗抑郁实验研究

目的：探讨慢性应激抑郁模型大鼠神经生化、神经内分泌的变化及白松片对其的干预作用。方法：60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（NC组）、模型对照组（MC组）、氟西汀对照组（FC组）和白松片治疗组（BST）,每组15只。采用长期轻度不可预见性应激＋孤养复制大鼠抑郁模型,用高效液相色谱仪法检测海马5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量;放射免疫方法测定大鼠血浆促肾上腺皮质素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（CORT）的水平;应用逆转录聚合酶联反应方法测定大鼠下丘脑和大脑皮质CRH mRNA表达水平;免疫组织化学法测定海马脑源性神经营养因子、酪氨酸羟化酶的表达。结果：与NC比较,模型大鼠海马5-HT,GABA含量显著降低;血浆CRH,ACTH,CORT及海马Glu含量增加;脑内CRH mRNA表达显著升高（P〈0．01）;与MC组比,BST组和FC组大鼠海马5-HT,GABA含量升高（P〈0.01,或P〈0.05）;血浆CRH,ACTH,CORT及海马Glu含量降低;脑内CRH mRNA表达下降（P〈0．01）。结论：慢性轻度不可预见性应激可使大鼠神经内分泌、神经生化发生异常改变,白松片对此具有一定调节作用。     

形觉剥夺性近视视网膜细胞的凋亡及c-myc的表达

目的：研究形觉剥夺性近视眼（FDM）中视网膜细胞的凋亡及c-myc蛋白在视网膜的表达。方法：孵化2d的雏鸡，右眼眼睑缝合4，8，12周后检影验光，眼底视网膜照片和光镜观察，TUNEL（TdT-mediated biotin—duTP nick—end labelling，TUNEL）检测及流式细胞术检测视网膜的凋亡细胞，免疫组织化学法及流式细胞术定量测定．c—myc蛋白的表达。结果：12周时缝合眼中出现漆裂纹样眼底改变，视网膜内、外核层发现凋亡细胞，出现明显凋亡峰。8，12周视网膜c-myc蛋白表达高于对照组。结论：鸡眼近视形成伴眼底改变时，视网膜细胞出现凋亡，c—myc在近视视网膜细胞的凋亡过程中发挥重要作用。     

双侧牙槽嵴裂动物模型的建立及对上颌骨生长发育的影响

目的:建立双侧牙槽嵴裂大动物模型,研究其对上颌骨发育的影响。方法:选用8只1 2周龄的同窝实验犬,随机分成正常对照组和实验动物模型组,对实验组的动物采用外科手术的方法建立裂隙程度一致的双侧上颌牙槽嵴裂,术后1 2周处死动物,通过实体标本、三维CT等对两组动物行头颅测量。结果:实验模型组牙槽嵴裂裂隙为(1 0.8 1±0.4 1)mm,其上颌骨长度、前部宽度和前部高度较正常对照组明显缩小(P<0.0 5)。结论:牙槽嵴裂对上颌骨生长发育具有一定的影响。     

CSI在成人靶控输注异丙酚麻醉诱导中的监测及评价

目的：评价麻醉深度指数（cerebral state index,CSI）在靶控输注异丙酚麻醉诱导过程中预测患者麻醉深度的精确程度。方法：40例成人全麻手术患者,ASA（American Society of Anesthesiologists）Ⅰ-Ⅱ级,靶控输注异丙酚诱导,最初血浆靶浓度设置在0．5mg／5min增加0．5mg／L,直至改良清醒镇静（modified observer＇s assessment of alertness／sedation,MOAA／S）评分为0后5min停止。试验中监测患者CSI、平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）、心率（heartrate,HR）、MOAA／S评分、靶控输注系统预测效应部位浓度值。结果：（1）CSI值随MOAA／S评分下降而下降,在MOAA／S评分为0至1,1至2,3至4,4至5时CSI值下降均有统计学意义（P〈0．05）。MAP在MOAA／S评分3至2时下降有统计学意义（P〈0．05）。HR在各级MOAA／S评分时差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）CSI,MAP,HR与MOAA／S评分的等级相关系数分别为0．929,0．421,0．085。CSI,MAP,HR在区分不同MOAA／S评分时的预测概率（prediction probability,Pk）分别为0．94,0．67,0．54。（3）CSI与异丙酚靶控输注预测效应部位浓度存在线性回归关系（决定系数R^2=0．833,P〈0．01）。结论：在成人患者靶控输注异丙酚平稳麻醉诱导状态下,CSI能够准确地区分清醒和麻醉后的不同意识水平,可靠地预测麻醉深度。     

冠心病患者外周血炎症相关指标及ox-LDL和ox-LDL抗体的检测及其临床意义

目的：检测不同类型冠心病及非冠心病患者炎症相关指标可溶性CD40配体（sCD40L）、中性粒细胞胶原酶-8（MMP-8）、妊娠相关性血浆蛋白-A（PAPP—A），脂质过氧化和自身免疫指标氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）、氧化型低密度脂蛋白抗体（ox—LDLAb）水平，探讨其与急性冠脉综合征的相关性。方法：酶联免疫吸附法测定109例冠心病患者（包括急性心肌梗死组36例，不稳定心绞痛组38例，稳定心绞痛组35例）和非冠心病对照组36例外周血sCD40L，MMP-8，PAPP—A，ox—LDL和ox-LDLAb浓度。结果：急性冠脉综合征（包括急性心肌梗死和不稳定心绞痛）患者外周血中sCD40L，MMP-8，PAPP-A，ox-LDL和ox—LDLAb水平均高于稳定心绞痛患者（P〈0．05）和非冠心病对照患者；急性冠脉综合征中急性心肌梗死患者和不稳定心绞痛患者以上各指标水平的差异无统计学意义（P〉0．05）；与对照组相比，稳定心绞痛组各指标水平除PAPP—A外均高于对照组（P〈0．05）。各指标对于急性冠脉综合征都有一定的诊断价值（ROC曲线下面积0．7～0．9）。结论：外周血sCD40L，MMP-8，PAPP—A，ox-LDL和ox-LDLAb水平升高，参与了急性冠脉综合征的发生，可作为动脉粥样硬化斑块不稳定的血清学标志。     

雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞基因表达谱的作用

目的：应用cDNA芯片研究雄黄作用多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞后对其基因表达的影响。方法：应用包含4096条人类基因的cDNA表达谱芯片,检测雄黄作用于RPMI8226细胞前及48h后基因的表达。结果：在mRNA水平上,164条基因显著改变,53条基因上调,111条基因下调。结论：雄黄作用RPMI8226细胞株后可引起一系列基因改变,许多基因涉及了多发性骨髓瘤的发病机制,其中BTG1,TXNIP及ALK1基因可能与RPMI8226细胞的分化和凋亡有密切关系。     

血糖对血管内皮功能的影响及相关影响因素的分析

目的：比较新诊断糖耐量异常（IGT）、2型糖尿病（T2DM）患者和正常对照血管内皮依赖性舒张功能（FMD）并探讨不同血糖水平时FMD的影响因素。方法：新诊断IGT和T2DM患者119人根据血糖高低分为3组：IGT组34人、DM1组（空腹血糖7～9mmol／L）52人、DM2组（空腹血糖9～10mmol／L）33人及正常对照组（NC）25人。所有受试者均进行血糖、血脂、胰岛素、糖化血红蛋白的检测,随后肱动脉超声检查评价FMD。结果：IGT组、DM1组、DM2组及NC组间FMD的差异有统计学意义（P=0．008）。偏相关分析显示FMD与胰岛素抵抗指数（HOMA—IRI）、血糖差值（DPG）、空腹血糖（FPG）、餐后血糖（PPG）呈高度负相关（P〈0．01）,与HbA1c呈负相关（P〈0．05）;多元逐步回归分析显示与FMD有关的入选因子,在IGT组为WHR和HOMA—IRI;DM1组为HOMA—IRI,PPG和DPG;在DM2组为FIG和HOMA—β。结论：新诊断IGT和T2DM患者FMD与血糖尤其是血糖的波动相关;不同血糖水平时FMD的影响因素不同。     

手助腹腔镜活体取肾的临床观察

目的：探讨手助腹腔镜活体供肾切取肾移植的可行性和优越性。方法：对6例亲属供体采取手助腹腔镜活体左肾切取,均经腹膜后途径。观察并记录肾切取手术时间、供肾热缺血时间、患者移植肾功能恢复情况及供者的康复情况。结果：供肾切取手术时间平均150min;热缺血时间平均3．5min,移植肾恢复灌注后排尿时间平均82s。供者术后1月内恢复正常生活。6例受者随访3个月,尿量和肾功能均在正常范围。结论：手助腹腔镜活体供肾切取术易于掌握、手术时间短;供肾热缺血时间短;供者痛苦小、术后恢复快,是临床值得推广应用的一种供肾切取方法。