蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞膜电位的影响

目的观察蝎毒多肽(APBMV)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株细胞膜电位的影响.方法细胞经培养传代,分组处理.空白对照组加生理盐水,其他3组分别加入浓度为8,12和16mg/L的APBMV.采用玻璃微电极细胞内记录法测定CNE-2Z细胞膜电位,MTT法观察APBMV对CNE-2Z细胞的毒性作用.结果CNE-2Z细胞经APBMV处理48h后,细胞膜负电位(13.00±3.58)mV明显小于空白对照组(23.00±8.21)mV,P<0.01,细胞膜呈去极化状态;CNE-2Z细胞代谢MTT的能力下降,显示明显的毒性反应.结论APBMV可能具有膜毒素的作用,通过降低CNE-2Z细胞膜电位,继而影响肿瘤细胞的增殖.     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的 :观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV)对CNE 2Z细胞生长周期和p5 3表达的影响。方法 :采用流式细胞仪双标法。结果 :APBMV处理CNE 2Z细胞 48h后 ,进入S期的细胞明显减少 ,处于G1期和G2期的细胞明显增多 ,APBMV 16mg/L处理CNE 2Z细胞 48h后 ,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为 5 9.7%、32 .3 %和 7.9% ,空白对照组的百分比分别为 5 3 .3%、45 .2 %和 1.5 % ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1)。空白对照组CNE 2Z细胞P5 3蛋白 2 4h和 48h表达量处于较高水平 (2 7.2 3± 0 .93)和 (31.6 7± 1.75 ) ,经APBMV处理 2 4h或 48h后 ,P5 3蛋白表达量明显下降 ,与空白对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :APBMV能够阻止CNE 2Z细胞周期的移行 ,并抑制抑癌基因p5 3的表达     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对CNE-2Z细胞生长周期和p53表达的影响.方法采用流式细胞仪双标法.结果APBMV处理CNE-2Z细胞48h后,进入S期的细胞明显减少,处于G1期和G2期的细胞明显增多,APBMV16mg/L处理CNE-2Z细胞48h后,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为59.7%、32.3%和7.9%,空白对照组的百分比分别为53.3%、45.2%和1.5%,二者比较差异有显著性(P<0.01或P<0.001).空白对照组CNE-2Z细胞P53蛋白24h和48h表达量处于较高水平(27.23±0.93)和(31.67±1.75),经APBMV处理24h或48h后,P53蛋白表达量明显下降,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论APBMV能够阻止CNE-2Z细胞周期的移行,并抑制抑癌基因p53的表达.     

蝎毒抗癌多肽的研究进展

蝎毒抗癌多肽(antineoplastic polypeptide from Buthusmartensu venom,APBMV)是从东亚钳蝎蝎毒中提取分离的抗肿瘤有效部位,对人食管癌、胃癌、喉癌、鼻咽癌及直肠腺癌细胞株等有显著的细胞杀伤和细胞毒性作用,对肝癌、肺癌等有确切的疗效.     

注射用蝎毒抗癌多肽热稳定性研究

目的：热稳定性实验,可望为蝎毒抗癌多肽（ＡＰＢＭＶ）粉针的生产、运输、储存和使用提供更科学的理论依据。方法：利用紫外分光光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳等法,测定了ＡＰＢＭＶ制剂的热稳定性。结果：在５０℃～８０℃的范围内,随着加热时间延长,样品Ａ２８０吸收度逐渐升高,聚丙烯酰胺凝胶电泳主色带逐渐变浅,但ｐＨ值、水溶性及外观色泽无明显改变。结论：根据上述结果,注射用ＡＰＢＭＶ在４℃下有效期暂定为５ａ。     

蝎毒和蝎毒多肽对家兔血小板聚集的影响

目的观察蝎毒多肽(PSV)和蝎毒(SV)对家兔血小板聚集的影响。方法麻醉家兔,颈动脉取血制备富含血小板血浆,分别加入PSV和SV,用CHRON0-IDG 540VS双通道血小板聚集仪测定二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集作用。结果PSV对血小板聚集具有明显的抑制作用,且呈明显的量效关系,当PSV的浓度在10．0～15．0mg／ml时,血小板聚集受抑制最为显著;SV对血小板聚集受其剂量及作用时间影响很大,但总的趋势为较低浓度时促进血小板聚集,较高浓度时则抑制血小板聚集。结论PSV对血小板聚集起抑制作用,且呈明显的量效关系;SV对血小板聚集的影响在高浓度和低浓度时产生的效应相反,推测由于SV成分较为复杂,各成分之间互相作用机制还需深入研究。     

注射用蝎毒抗癌多肽热稳定性研究

热稳定性实验,可望为蝎毒抗癌多肽粉针的生产,运输、储存和使用提供更科学的理论依据。方法利用紫外分光光谱,聚丙烯酰胺凝泳等法,测定了ＡＰＢＭＶ制剂的热稳定性。结论根据上述结果,注射用ＡＰＢＭＶ在４℃下有效期暂定为５ａ。     

蝎毒抗癌多肽对肝癌小鼠免疫功能的影响

目的：观察蝎毒抗癌多肽（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｆｒｏｍＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉｖｅｎｏｍ,ＡＰＢＭＶ）对肝癌Ｈ２２带瘤小鼠ＮＫ细胞活性,外周血白细胞计数,淋巴细胞增殖,迟发型超敏反应和血清溶血素水平的影响。方法：将接种Ｈ２２细胞２４ｈ后的带瘤小鼠随机分为４组,每组１０只：空白对照组（等体积生理盐水,腹腔注射）,５Ｆｕ组（５Ｆｕ１０ｍｇ·ｋｇ－１）,ＡＰＢＭＶ组（ＡＰＢＭＶ００３ｍｇ·ｋｇ－１,腹腔注射）,ＡＰＢＭＶ＋５Ｆｕ组（ＡＰＢＭＶ００３ｍｇ·ｋｇ－１＋５Ｆｕ１０ｍｇ·ｋｇ－１,腹腔注射）,连续给药５ｄ。给药期间及给药后对带瘤小鼠进行相应的处理,观察经治疗后Ｈ２２带瘤小鼠上述指标的变化。结果：ＡＰＢＭＶ组及ＡＰＢＭＶ＋５Ｆｕ组带瘤小鼠的ＮＫ细胞活性和ＤＮＣＢ诱导的皮肤迟发型超敏反应明显增强,淋巴细胞转化指数明显增高,与对照组及单用５Ｆｕ组相比有显著差异（Ｐ＜００５或Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．００１）;ＡＰＢＭＶ单独应用使带瘤小鼠白细胞计数显著提高（与对照组相比Ｐ＜００１）,５Ｆｕ组白细胞计数明显减少（与对照相比Ｐ＜００１）,ＡＰＢＭＶ与５Ｆｕ联合应用     

弓形虫对HPB-ALL细胞及CNE-2Z细胞增殖的影响

目的：探讨弓形虫对HPB—ALL细胞及CNE-2Z细胞增殖的影响。方法：取培养至对数生长期的HPB—ALL细胞和CNE-2Z细胞分别接种于96孔培养板中,加入不同浓度（1×10^4、2×10^4、4×10^4、8×10^4、16×10^4／mL）的弓形虫速殖子作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：弓形虫对HPB—ALL细胞增殖抑制率依次为14％、20％、33％、38％和39％,除第1组外,其余4组的吸光度值与对照组比较．差异均有统计学意义（P〈0．05）,且实验3、4、5组吸光度值与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;弓形虫对CNE-2Z细胞增殖抑制率分别是4％、9％、16％、20％和23％,其中实验4、5组吸光度与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：弓形虫逮殖子对体外培养的HPB—ALL细胞和CNE．2z细胞增殖有不同程度的抑制作用．     

白藜芦醇对鼻咽癌细胞株 CNE-2Z 增殖和凋亡的影响

目的　探讨白藜芦醇 (resveratrol,Res)对鼻咽癌细胞株 CNE- 2 Z增殖和凋亡的影响。方法　采用 MTT法检测 IC50 值 ,流式细胞术、Hoechst 332 5 8/PI荧光染色和 DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡。结果　不同浓度Res分别处理细胞 2 4 ,4 8和 72 h,其 IC50 值分别为 (10 9.2± 7.5 ) ,(83.6± 6 .0 ) ,(5 4 .3± 2 .8) μmol/L,各 IC50 值间比较差异显著 (P<0 .0 1)。2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μm ol/L Res分别处理细胞 2 4 h后 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组经流式细胞术和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,荧光染色可见典型的凋亡形态学改变 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组可见明显的 DNA梯带。结论　 Res可通过诱导 CNE- 2 Z细胞株凋亡而抑制其增殖。     

氯通道ClC-3反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞CNE-2Z周期的影响

目的 研究ClC-3氯通道对鼻咽癌细胞CNE-2Z周期的影响.方法 利用反义技术抑制细胞内ClC-3的表达,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率, MTT法检测细胞增值能力,流式细胞仪测定细胞周期分布.结果 ClC-3反义寡核苷酸剂量依赖性抑制鼻咽癌细胞的增值,胞内ClC-3的表达下调使细胞周期进程明显受到影响,细胞停滞于Gl期,而ClC-3反义寡核苷酸对细胞存活率没有影响.结论 CNE-2Z细胞内ClC-3的表达下调可阻滞细胞于Gl期而使细胞增值受到抑制.提示氯通道ClC-3参与了鼻咽癌细胞CNE-2Z的细胞周期调控.     

电离辐射对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外表达血管内皮生长因子的影响

目的 探讨电离辐射对人鼻咽癌细胞体外表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 人鼻咽癌细胞株CNE-2Z置RPMI 1640培养液培养,实验分为两组,剂量梯度组分别给予2、4、6、8、12、16 Gy电离辐射;时间梯度组给予6 Gy照射;收集细胞上清液,双抗体夹心ELISA法测定VEGF表达水平.结果 与阴性处理细胞比较,人鼻咽癌细胞株CNE-2Z体外接受不同剂量辐照后,VEGF表达明显增高,且具有剂量依赖性和时程依赖性.结论 电离辐射能诱导人鼻咽癌细胞VEGF高表达,这可能是临床肿瘤抗辐射的机制之一.     

姜黄素对人鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞骨架的影响

目的:观察姜黄素对鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞骨架的影响,探讨姜黄素对鼻咽癌细胞直接杀伤作用的可能机制。方法:用考马斯蓝染色和图像分析方法检测不同浓度姜黄素作用24 h后CNE-2Z细胞骨架的染色变化;用免疫组织化学方法观察表皮生长因子受体(EGFR)、增殖细胞核抗原(PCNA)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Tubulin-β在各组细胞中的表达情况;运用RT-PCR方法检测不同浓度姜黄素作用后的CNE-2Z细胞中EGER的表达水平。结果:CNE-2Z细胞在10μmol/L姜黄素处理后细胞体积有所增大,随后姜黄素浓度升高细胞骨架染色逐渐降低(P<0.01);不同浓度的姜黄素可抑制CNE-2Z细胞中EGFR、PCNA、PI3K和Tubulin-β的表达,并使EGFR mRNA在CNE-2Z细胞中的表达下调。结论:姜黄素可能通过下调EGFR影响细胞骨架,从而起到直接杀伤鼻咽癌细胞CNE-2Z的作用。     

塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z生长的影响

目的 探讨塞来昔布与吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)联合应用对人鼻咽癌CNE-2Z细胞株生长的影响及其可能机制.方法 实验分为对照组(不含任何药物)、塞来昔布组(含塞来昔布50μmol/L)、PDTC (含PDTC 50μmol/L)组和塞来昔布+PDTC (含塞来昔布、PDTC均为25μmol/L)组.细胞抑制率以四甲基偶氮唑蓝实验方法检测;CNE-2Z细胞周期以流式细胞仪检测;用免疫细胞化学染色法检测核因子(NF)-κB和环氧合酶(COX)-2蛋白的表达;用Western-blot方法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3蛋白表达.结果 塞来昔布、PDTC单独作用及塞来昔布+PDTC联合作用于鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h、48 h、72 h细胞的生长均受到抑制(P<0.05),二药联合组与单独用药组比较,细胞的生长抑制率差异有统计学意义(P<0.05).塞来昔布+PDTC联合用药作用于细胞48 h后G0/G1期细胞比例明显高于塞来昔布组和PDTC组,抑制效果更显著(P<0.05).免疫细胞化学染色显示塞来昔布+PDTC组NF-κB、COX-2的表达明显低于单独用药组(P<0.05).Western-blot实验示联合用药组Caspase-3蛋白表达高于单独用药组(P<0.05).结论 Cox-2抑制剂塞来昔布联合PDTC能够显著抑制人鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖,其机制可能是通过降低COX-2、NF-κB表达,增强Caspase-3蛋白表达来实现.     

温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z的放射增敏作用

目的：探讨温和性高温是否对鼻咽癌细胞系CNE-2Z具有放射增敏作用。方法：CNE-2Z细胞随机分4组：对照组、单纯加热组、单纯照射组和联合处理组。采用平板克隆形成实验观察各温度（39．5℃、41．5℃、43．5℃、45．5℃）对CNE-2Z细胞的放射增敏作用,Western Blotting检测核转录因子κB（NF—κB）的表达。结果：实验所采用的4种高温均显示出对鼻咽癌细胞系CNE-2Z的放射增敏作用。其存活分数SF2值按顺序排列为SF2．37℃〉SF2．395℃〉SF2-415℃〉SF2.43℃〉SF2,45.55℃。NF—κB的表达,从第40分钟起逐渐增加,至第4小时达最高。结论：温和性高温对鼻咽癌细胞系CNE-2Z具有放射增敏作用。在41．5℃、1h作用下,放射诱导的NF—κB的细胞核内表达受抑,可能是增敏CNE-2Z对射线作用的机制。