一例Y染色体长臂大片段缺失患者的缺失定位分析

目的 从分子遗传学角度对1例无精子症患者Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域缺失片段进行定位分析.方法 根据Y染色体遗传物理图谱,采用多重PCR技术扩增Y染色体AZFa区sY84、sY86、sY87,AZFb区sY102、sY117、sY118、sY119、sY115、DYS132、DYS385、sY1015、sY121、sY125、sY127、sY129、sY134,AZFd区sY152,AZFc区sY1258、sY1291、sY254、sY255、sY158、sY1201,Yq末端sY160等24个序列标签位点(sequence tag sites,SIS).结果 所扩增的SIS只有AZFa区sY84、sY86、sY87及AZFb区sY102、sY117、sY118、sY119、sY115、DYS132有特异扩增条带,其余15个STS均未见特异扩增条带.患者Y染色体缺失断裂点位于AZFb区sY115和DYS385之间约8577 bp范围内.为AZFb区部份缺失,AZFd区、AZFc区及Yq末端缺失.结论 用分子遗传学技术进行STS分析可精确标明Y染色体AZF区域缺失片段.     

男性原发不育与DAZ基因家族部分拷贝缺失

目的　分析原发无精症和严重少精症患者 Y染色体无精症因子 C区 (azoospermia factor C,AZFc) DAZ基因 (deleted- in- azoospermia,DAZ)部分拷贝缺失的类型与频率。方法　 PCR扩增 DAZ基因区域的两个序列标签位点 (tag sequence site,STS) s Y5 81与 s Y5 87,用限制性片段长度多态性分析技术(restriction fragment length polymorphism,RFL P)检测 ,未发现 DAZ基因家族全部拷贝缺失的 197例原发无精症和 16 6例严重少精症患者实验组与 2 10名已正常生育男性对照组 ,进行 DAZ基因家族的部分拷贝缺失分析。结果　在实验组中发现 18例无精患者与 10例严重少精患者有 DAZ1/DAZ2共缺失 ,缺失率分别为 9.1%与 6 .0 % ,而对照组中未见部分基因拷贝缺失。实验组与对照组 DAZ1/DAZ2共缺失率差异有极显著性。结论　原发无精和严重少精症存在较高频率的 AZFc区 DAZ基因的部分缺失 ,这可能是中国男性原发不育的病因之一。中国人 AZFc区 DAZ1/DAZ2的共缺失及其缺失率与白人基本一致。应用PCR- RFL P进行 DAZ基因缺失分析可作为 AZF区域微缺失常规筛查后的补充。     

不育男性的AZF检测与Y染色体缺失的对照分析

目的探讨精子发生障碍的男性不育患者AZF缺失与Y染色体缺失的临床意义。方法对616例非阻塞性无精子症或少精子症患者进行AZF的检测,同时观察G显带Y染色体的形态。结果从616例患者中检测出48例患者分别为AZFa、AZFb、AZFc或AZFb+AZFc的微缺失,但显微镜下观察不到Y染色体形态改变。另外4例患者经AZF检测,2例为AZFc+sY160缺失,1例为AZFb+AZFc+sY160缺失,1例为AZFa+AZFb+AZFc+sY160缺失,显微镜下发现Yq部分或完全缺失。25例已育男性的G-显带的Y染色体和AZF也进行对照检测,均未发现AZF的缺失,但其中1例核型分析显示Y染色体长臂部分缺失,但PCR检测仅缺失sY160,即Yq12的缺失。结论Yq11.23上7Mb的缺失在细胞水平不能分辨。q11.23+q12的缺失或仅有Yq12的缺失的Y染色体显微镜下不能区分,但后者不是精子发生障碍的病因。对男性不育精子发生障碍患者,要结合细胞遗传学和AZF分子检测综合判断。     

特发性无精子症及少弱精子症患者Y染色体AZF微缺失筛查分析

目的探讨特发性无精子症及少弱精子症不育男性与Y染色体AZF微缺失的关系.方法用双重PCR技术对63例患者(无精于症41例,少弱精子症14例,严重少精子症8例)进行Y染色体AZFa、AZFb、AZFc、SRY的微缺失筛查.同时对26例无精于症患者行睾丸活检、组织学评估.结果63例中AZF微缺失7例,缺失率为11.1%.其中无精子症5例,严重少精子症2例.AZFc缺失4例,AZFb缺失2例,AZFb AZFc缺失1例,未发现AZFa区缺失.63例及对照组30例SRY基因扩增均阳性.26例无精子症患者行睾丸活检、组织学检查,无1例精子发生正常.结论Y染色体微缺失,特别是AZFc区DAZ基因的微缺失,是引起无精子和严重少弱精子等生精障碍而致男性不育较为重要的遗传学因素.     

生殖激素水平在男性不育患者Y染色体微缺失中的研究

目的筛查严重少精子症和无精子症患者Y染色体AZF区域微缺失的发生情况,探讨Y染色体微缺失患者生殖激素的水平。方法对195例严重少精子症和80例无精子症患者进行Y染色体无精子因子（azoospermia factor,AZF）微缺失分析,同时用化学发光法测定生殖激素水平。结果275例患者中发生AZF微缺失患者21例,检出率为7．6％,其中少严重精子症15例,无精子症6例。21例AZF微缺失情况：AZFa区缺失3例;AZFb＋c＋d区缺失4例;AZFc＋d区缺失¨例;AZFd区缺失3例。Y染色体AZFb＋C＋d区缺失患者的卵泡刺激素（FSH）值（46．2±10．3）mIU／mL显著高于无Y染色体缺失患者（17．6±15．2）mIU／mL和AZFa区、AZFc＋d区、AZFd区缺失患者（15．8±5．7）mIU／mL,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论在无精与严重少精症患者中Y染色体的微缺失以AZFc区和AZFd区缺失最为常见,Y染色体AZFb＋c＋d区缺失是引起高卵泡刺激素的重要原因之一。     

男性不育患者中Y染色体微缺失与生殖激素水平的相关性分析

目的筛查严重少精子症及无精子症患者Y染色体AZF区域微缺失的发生情况,探讨Y染色体微缺失患者与生殖激素水平的关系。方法对138例男性不育患者(其中无精子症患者86例,少精子症患者52例)进行Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)微缺失分析,同时用化学发光法测定生殖激素水平。结果 138例患者中发生AZF微缺失患者7例,检出率为5.04%,其中严重少精子症3例,无精子症4例。7例AZF微缺失情况:AZFb区缺失3例;AZFb+c区缺失4例。Y染色体AZFb区缺失患者的卵泡刺激素(FSH)值(53.36±41.59)m IU/m L及AZFb+c区患者的卵泡刺激素(FSH)值(39.16±20.14)m IU/m L显著高于无Y染色体AZF区缺失患者(13.7±10.62)m IU/m L,Y染色体AZFb区缺失患者的促黄体生成素(LH)值(19.41±12.52)m IU/m L及AZFb+c区患者的促黄体生成素(LH)值(16.66±6.78)m IU/m L显著高于无Y染色体AZF区缺失患者(6.29±3.94)m IU/m L,Y染色体AZFb区缺失患者的睾酮(T)值(1.75±0.75)ng/m L及AZFb+c区患者的睾酮(T)值(3.80±1.99)ng/m L显著低于无Y染色体AZF区缺失患者(5.53±1.90)ng/m L,差异具有统计学意义(P0.05)。结论在无精子症及严重少精子症患者中Y染色体微缺失以AZFb区与AZFc区缺失最为常见。Y染色体AZFb+c区缺失是与FSH、LH和睾酮水平变化密切相关。     

1011例男性不育患者Y染色体无精子症因子微缺失的筛查与临床表型分析

目的 探讨四川地区近6年不育男性Y染色体无精子症因子(azoospermia factor,AZF)微缺失的发生率、缺失类型及其与临床表型的关系.方法 应用多重PCR方法对713例非梗阻性无精症和298例重度少精症的男性进行Y染色体AZF微缺失分析.结果 AZF总体缺失率为10.48％ (106/1011),其中非梗阻性无精症患者缺失率为11.08％ (79/713),重度少精症患者缺失率为9.06％ (27/298).AZFa与AZFb完全缺失者均表现为无精症.AZFc缺失为最常见缺失类型且具有多种表型,占60.38％,其中37.50％的缺失者精液中有成熟精子.2例AZFb和1例AZFb-c部分缺失者精子密度呈轻度下降.结论 AZFc区是Y染色体AZF微缺失的缺失热点,AZFa或AZFb缺失者以及部分AZFc缺失者均表现为无精症.本研究进一步明确了AZF缺失基因型与表型的关系,证实Y染色体AZF微缺失检测对诊断男性不育具有重要的价值.     

男性染色体异常三例

例1 男，27岁，结婚3年未育。患者表型、智力正常。双侧睾丸小，阴茎小，精液检查3次均为无精。Y染色体无精子因子（azoospermia factor，AZF）区域微缺失筛查：采用多重PCR技术对AZF区4个亚区的8个序列标签位点（sequence tagged sites，SP3）位点：AZFa区sY84、sY86，AZFb区sY127、sY134、sY129，AZFc区sY254、sY255，AZFd区sY152及性别决定基因（sex-determining region of Y，SRY）基因扩增，未发现缺失。外周血染色体G显带分析核型为46，X，inv（Y）（q12；p12）。其妻妇科及染色体检查无异常。     

Klinefelter综合征患者Y染色体AZF微缺失分析

目的观察Klinefelter综合征患者Y染色体AZF微缺失发生情况。方法12例Klinefelter综合征患者ICSI/IVF等辅助受孕前进行睾丸细针穿刺吸液细胞学检查及Y染色体AZF微缺失分析。确定8个实验用序列标签位点（STS）,分别是：sY84、sY86、sY127、sY134、sY152、sY153、sY254、sY255,并以X/Y连锁锌指蛋白基因（ZFX/Y）为内对照进行多重PCR筛查AZF微缺失。结果睾丸细针穿刺吸液细胞学检查显示,3例（25.0%,3/12）可见到极少量形态较完整的精子及各级生精细胞、精子细胞,7例（58.3%,7/12）仅见少量生精细胞及精子细胞,2例（16.7%,2/12）仅见支持细胞,未见生精细胞及精子。12例Klinefelter综合征患者共检测出AZF微缺失2例分别为AZFa＋AZFc区缺失和AZFb＋AZFc区缺失;对照组32例样本未检出AZF基因微缺失。KS患者AZF微缺失检出率与对照组比较有显著差异（χ^2=5.587,P=0.018）。结论Klinefelter综合征患者存在Y染色体长臂AZF微缺失,缺失率为16.7%。     

广州地区不育男性Y染色体无精子因子微缺失的筛查

目的探讨Y染色体无精子因子(azoospermia factor,AZF)区域微缺失与原发无精、严重少精症之间的关系。方法采用多重聚合酶链反应技术对广州地区103例原发无精子症、72例原发严重少精症患者及60名正常生育男性进行AZFa、AZFb、AZFc3个区域微缺失分析。结果60名正常生育男性未发现Y染色体AZF区域微缺失,175例生精障碍患者中发现AZF微缺失19例,总缺失率为10.9%。其中11例无精症患者和4例少精症患者的缺失发生在AZFc区域,缺失率为8.6%;1例无精症患者和2例少精症患者发生AZFb、AZFc双重缺失,缺失率为1.7%;1例无精症患者发生AZFa、b、c3个区域同时微缺失,缺失率0.6%。生精障碍组与正常生育男性组比较Y染色体AZF区域微缺失率差异具有统计学意义(P<0.01)。结论Y染色体AZF区域微缺失是引起男性无精、少精子症的重要原因之一,对原发无精、少精子症患者在单精子注射之前进行微缺失筛查是必要的。     

无精子症和少精子症患者中Y染色体相关基因AZF缺失的检测

目的探讨A;ZF缺失与男性无精子症、少精子症之间的关系,方法采用多重PCR方法,对95例汉族无精子症和少精子症患者的A;ZF区4个STS位点:A;ZFa亚区的sY86、A;ZFb亚区的sY127、A;ZFc亚区的sY254和sY255进行了缺失检测。用PCR-SSCP方法对其中的53例作了sY254点突变检测。并对DA;Z基因在人不同组织的表达进行了研究。结果 5例无精子症患者同时具有位于A;ZFc亚区中DA;Z基因的sY254和sY255位点缺失。53例患者未见sY254有点突变。只在睾丸组织中检测到DA;Z基因的表达。结论部分汉族无精子症患者可能与A;ZFc的缺失有关。     

Identification of new breakpoints in AZFb and AZFc

Microdeletions in AZFa, AZFb and AZFc regions lead to differentpatterns of male infertility, from severe oligozoospermia tonon-obstructive azoospermia. Intrachromosomal homologous recombinationmechanisms were already identified in patients with simultaneousmicrodeletions in the AZFb and AZFc regions. Ten patients withatypical AZFb and AZFc deletion patterns were studied. The definitionof those microdeletions and the fine characterization of therespective breakpoints were performed using sequence taggedsites/single nucleotide variants-PCR and DNA sequencing. Y-chromosomehaplogroups were determined to establish a putative associationwith the patterns obtained. Seven deletion patterns were identified,P5/terminal (30%; 3/10), P5/P1 distal (20%; 2/10), IR4/distal-P2,IR2/proximal-P1, IR4/distal-P1, P4/terminal and complete AZFb/cdeletion (10%; 1/10). Breakpoint sequence analysis suggeststhat only in one patient the P5/P1 distal deletion pattern wasdue to a homologous recombination mechanism. Sequence alignmentof the other deletion patterns suggest that they have resultedfrom non-homologous recombination mechanisms.     

Association of partial AZFc region deletions with spermatogenic impairment and male infertility

Background: Complete deletions of the AZFc region in distal Yq are the most frequent molecular genetic cause of severe male infertility. They are caused by intrachromosomal homologous recombination between amplicons—large, nearly identical repeats—and are found in 5–10% of cases of azoospermia and severe oligozoospermia. Homologous recombination may also generate different partial deletions of AZFc, but their contribution to spermatogenic impairment has not been confirmed.

Methods: In this study we analysed the prevalence and characteristics of different partial AZFc deletions and their association with spermatogenic failure. We studied 337 infertile men with different spermatogenic impairment and 263 normozoospermic fertile men using AZFc specific sequence tagged site markers and DAZ specific single nucleotide variants.

Results: We identified 18 cases of partial AZFc deletions in the infertile group (5.3%) and one case in the control group (0.4%). Seventeen deletions had the "gr/gr" pattern, one the "b2/b3" pattern, and one represented a novel deletion with breakpoints in b3 and b4 amplicons. Partial AZFc deletions were associated with different spermatogenic phenotypes ranging from complete azoospermia to only moderate oligozoospermia.

Conclusions: Together with published data, our analysis of DAZ gene copy suggested that the contribution of the different deletions to male infertility varies: only partial AZFc deletions removing DAZ1/DAZ2 seem to be associated with spermatogenic impairment, whereas those removing DAZ3/DAZ4 may have no or little effect on fertility. These data show that, beside complete AZFc deletions, specific partial deletions represent a risk factor for male infertility, even if with different effect on spermatogenesis.

     

男性不育患者Y染色体的AZF基因微缺失分析

目的探索男性不育患者Y染色体AZF基因微缺失的发生情况，为男性不育的临床诊断和治疗提供科学依据。方法应用PCR方法对36例无精或严重少精患者AZF基因的SY84、SY127和SY254进行检测分析。结果在36例患者中发现16例发生AZF基因的微缺失，均为三个基因区段不同组合的缺失。其中涉及AZFa或AZFb缺失的各8例，涉及AZFc缺失的有14例。结论AZF基因的微缺失与某些男性不育密切相关。AZFc缺失可能是男性不育中无精子、严重少精子的主要病因之一。     

中国人原发无精与严重少精症Y染色体AZF区域微缺失的分子流行病学研究

目的 明确与中国人原发无精和严重少精症密切相关的Y染色体无精症因子(azoospermia factor，AZF)区域微缺失位点及其缺失特点，为开展中国人AZF微缺失基因诊断提供理论依据。方法 采用多重聚合酶链反应技术，针对实验组134例原发无精、118例原发严重少精症患者与对照组210名已正常生育男性，进行AZFa、AZFb、AZFe三个区域共15个序列标签位点(sequence tag site，STS)的微缺失分析。结果 对照组在所有15个STS位点中均未发现缺失，实验组STS位点缺失涉及到13个STS位点，分别是：AZFa区的sY84、sY86，AZFb区的sYl21、sYl23、sYl24、sYl27、sYl34、sYl33，AZFc区的sYl52、sY242、sY254、sY255、sYl57。在5例无精患者中发现AZFa区STS位点缺失，缺失率为2．0％，在7例无精与3例少精患者中发现AZFb区STS位点缺失，缺失率为4．0％，在14例无精与18例少精患者中发现AZFc区STS位点缺失，缺失率为12．7％。统计学分析提示实验组与对照组13个STS位点缺失率差异有极显著性。结论所确定的AZF区域13个STS位点缺失与中国人原发无精和严重少精密切相关，未发现上述STS位点缺失的群体多态现象；中国人原发无精和严重少精症AZF区域微缺失的频率、分布、缺失热区与白人基本一致；所选择的13个STS位点可作为中国人原发无精与严重少精症AZF区域微缺失基因诊断筛查的候选位点。     

AZFc区gr/gr及DAZ基因拷贝缺失与原发性男性生精障碍的相关性研究

目的探讨Y染色体AZFc区gr/gr缺失及DAZ基因拷贝缺失与男性生精障碍的相关性。方法运用PCR与PCR-RFLP检测技术,对252例正常生精男性,430例原发性生精障碍男性患者进行Y染色体AZFc区gr/gr缺失及DAZ基因拷贝缺失分析。结果正常生精男性组gr/gr缺失率为5.2%,原发性生精障碍组gr/gr缺失率为10.2%,P=0.021,差异有统计学意义;正常生精男性组DAZ1/DAZ2基因拷贝共缺失率为2.0%,原发性生精障碍组中DAZ1/DAZ2基因拷贝共缺失率为7.0%,P=0.004,差异亦有统计学意义;正常生精男性组DAZ3/DAZ4基因拷贝共缺失率为3.2%,在生精障碍组中DAZ3/DAZ4基因拷贝的共缺失率为3.3%,P=0.954,差异无统计学意义。结论在原发性男性生精障碍患者中存在较高频率的gr/gr缺失及DAZ1/DAZ2基因共缺失,提示gr/gr缺失及DAZ1/DAZ2基因拷贝的共缺失是男性不育的高风险因子。     

无精和严重少精子症患者Y染色体的微缺失

目的 检测我国无精和严重少精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点,及其与睾丸病理学类型的关系.方法 取584例无精子症和80例严重少精子症患者精液中细胞或外周血白细胞,裂解提取DNA,用4组多重聚合酶链反应检测分布于AZFa、AZFb、AZFc区,包括欧洲男科学会和欧洲分子遗传学质量控制体系推荐的6个位点在内的共15个序列标签位点(sequence tagged site,SIS)的缺失.对部分有Y染色体微缺失患者进行睾丸细针抽吸活检,检查睾丸病理学类型.结果 584例无精子症患者中,共有66例(11.3%)发生Y染色体微缺失,各区发生率构成比由高到低依次为:AZFc区48例(72.7%),AZFb+c区9例(13.6%),AZFa+b+c区4例(6.1%),AZFb区3例(4.5%),A2Fa区2例(3.0%).80例严重少精子症患者共有10例发生Y染色体微缺失(12.5%),均为AZFc区缺失.AZFc区缺失患者(19例)睾丸病理学类型多样化;AZFb+c区或AZFa+b+c区缺失患者(7例)睾丸病理学类型为唯支持细胞综合征或生精阻滞于精原细胞.结论 Y染色体微缺失在我国的发生情况与其他国家大多数报道基本一致,跨区大缺失对精子发生造成严重影响.