糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中能量代谢相关基因的表达及其意义

目的比较正常大鼠和糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异,探讨糖尿病性心肌病的发病机制。方法(1)实验大鼠分为两组(正常对照组和糖尿病性心肌病组);(2)从心肌组织中抽提mRNA,经逆转录分别用Cy3﹑Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针;(3)cDNA探针与基因表达谱芯片杂交,结果经扫描后并用软件进行统计分析。结果能量代谢相关基因表达水平在糖尿病性心肌病组明显下调。结论能量代谢障碍可能在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。     

糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中S腺苷蛋氨酸合成酶基因的表达及其意义

目的 比较正常大鼠和糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异，探讨糖尿病性心肌病的发病机制。方法 实验大鼠分为两组：对照组和糖尿病性心肌病组。从心肌组织中抽提mRNA，经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记，获得两组动物来源的cDNA探针。cDNA探针与基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果 S腺苷蛋氨酸合成酶的表达水平在糖尿病性心肌病时明显上调。结论 S腺苷蛋氨酸合成酶通过影响糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中高半胱氨酸的含量在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。     

卡托普利对糖尿病性心肌病大鼠心肌组织能量代谢和炎症反应的影响

目的 探讨卡托普利保护心肌组织的作用机制。方法 (1)将糖尿病性心肌病大鼠分为对照组和治疗组,治疗组每天给予卡托普利1.5 mg/kg·b.w.,口服15 w;(2)从动物心肌组织中抽提mRNA,经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针;(3)cDNA探针与基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果 (1)脂肪酸b氧化相关基因、线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)依赖的白三烯B4羟基脱氢酶基因在治疗组中表达明显上调。(2)二甲基精氨酸水解酶基因在干预治疗组中表达明显下调。结论 卡托普利可能通过改善病变心肌的能量供应、抑制炎症反应对糖尿病性心肌病心肌组织起保护作用。     

基因芯片研究糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达

目的：研究正常与糖尿病肾病大鼠肾脏的基因表达谱,大规模分析糖尿病时基因表达水平的变化。方法：（1）实验大鼠分为两组,一组为正常对照组,另一组为糖尿病组;（2）从肾皮质中抽提mRNA,经反转录分别用Cy3,Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针;（3）cDNA探针与Biodoor基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果（1）18．4％的基因表达谱发生明显的变化,其中12条基因在糖尿病时表达量明显下降,而323条基因在糖尿 时表达量明显上升;（2）已报道基因占了差异表达基因总数的18．8％左右,大多数已报道基因在糖尿病时的表达模式与其他作者的报道类似。结论：利用基因芯片技术结合实验动物模型能大规模,高通是地研究糖尿病的基因表达谱,初步筛选出选出疾病相关基因,对进一步阐明疾病在基因水平上的发病机制有十分重要的作用。     

用基因芯片研究卡托普利对糖尿病大鼠肾脏增殖相关基因表达的影响及其意义

目的比较卡托普利干预与非干预糖尿病大鼠之间肾脏增殖相关基因表达的差异,探讨卡托普利在非糖尿病肾病阶段是否可以通过抗增殖对肾脏起保护作用。方法糖尿病大鼠分为卡托普利干预组和非干预组（对照组）。干预组予卡托普利口服15周。干预结束后将大鼠处死,从肾脏皮质抽提mRNA,干预组与对照组逆转录分别用Cy5和Cy3标记,成为两组cDNA探针。cDNA探针与基因芯片杂交,扫描仪扫描,用软件分析Cy5和Cy3两种荧光信号的强度和比值。结果6个。肾脏增殖相关基因在两组问有差异表达。结论卡托普利在非糖尿病。肾病阶段可以抑制增殖,对肾脏起保护作用。     

血小板反应素Ⅰ在糖尿病大鼠心肌组织中的表达及意义

目的：研究血小板反应素Ⅰ（TSP-Ⅰ）在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型心肌组织中的表达，探讨TSP-Ⅰ在糖尿病性心肌病发病机制中的作用。方法：成年Sprague-Dawley雄性大鼠20只，随机分为糖尿病组（DM组）和正常对照组（NC组），DM组用链脲佐菌素诱导产生糖尿病模型，NC组大鼠尾静脉注射pH4．6、0．1mmol／L枸橼酸钠缓冲液。饲养4周后，麻醉处死，取出心脏，制做连续冰冻切片，对2组大鼠心肌组织进行免疫组织化学染色，观察2组TSP—Ⅰ在左心室心肌细胞中的表达差异。结果：DM组大鼠心肌间质纤维增生，心肌间微血管管壁增厚，TSP-Ⅰ表达阳性心肌细胞的数目及其光密度均较NC组明显增加（P〈0．01）。结论：TSP-Ⅰ可能参与了心肌细胞肥大和纤维化以及心肌微血管病变等糖尿病心肌病的特征性病理改变。     

卡托普利对糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶基因表达的影响及其意义

目的探讨卡托普利对糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶基因表达的影响及其意义。方法建立糖尿病大鼠模型,分为卡托普利干预组和对照组,15周后处死大鼠,从肾脏皮质抽提mRNA,逆转录分别用Cy5和Cy3标记,成为两组cDNA探针。cDNA探针与基因芯片杂交,扫描仪扫描,用软件进行分析。结果与对照组相比,干预组醛糖还原酶基因表达下调。结论卡托普利可能通过下调醛糖还原酶的表达产生肾脏保护作用。     

自发性糖尿病大鼠心肌物质代谢及细胞增殖相关基因的表达谱研究

目的 研究自发性糖尿病（OLETF）大鼠发生心肌病变后基因表达谱的改变.方法 ①检测糖尿病大鼠与对照组大鼠的心室压,并比较两者的电镜标本;②从心肌组织中抽提纯化总RNA,逆转录合成两组动物的cDNA及cRNA探针,与基因表达谱芯片杂交,扫描并分析统计.结果 ①糖尿病大鼠的-dp/dt max,左室内压峰值明显小于对照组,EDP明显高于对照组;电镜提示糖尿病大鼠存在心肌肌纤维扭曲断裂,线粒体变性,间质增生及血管基底膜增厚;②糖尿病大鼠心肌中调控细胞增殖分化基因上调表达;胰岛素信号通路PI3K调节亚基基因及部分参与糖、脂代谢基因的表达明显下调.结论 糖尿病大鼠存在心肌超微结构改变和心肌舒张功能下降,表达谱中PI3K调节亚基及物质代谢、细胞增殖相关基因表达异常.     

利用基因芯片技术研究电击伤后心肌组织基因表达谱的改变

目的研究电击伤后心肌组织基因表达谱的改变,筛选与心肌电损伤过程相关的差异表达基因.方法将大鼠心脏电击伤3 h后的心肌组织(电击组)和正常心肌组织(对照组),分别提取总RNA,制备Cy5-dCTP和Cy3-dCTP的标记的cDNA探针,并与BioStar-40基因芯片进行杂交.杂交信号经扫描后,计算机分析基因表达情况.结果电击伤后心肌组织中共有71个基因或EST发生差异表达,其中35个基因或EST表达上调,36个基因或EST(expressed sequence tags)表达下调.这些基因涉及凝血、炎症反应、信号转导及机体自稳态等多个方面,此外还有44个基因或EST的功能是未知的.结论利用基因芯片技术初步筛选出与心肌电损伤过程相关的多个差异表达基因,为揭示心脏电击伤的分子机制提供了依据.     

类胰蛋白酶与2型糖尿病心肌病发病机制

目的：通过研究类胰蛋白酶对2型糖尿病心肌病建模成功的Wistar大鼠的影响及可能机制,为进一步治疗糖尿病心肌病提供理论依据。方法：45只雄性Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组（NC组,15只）、2型糖尿病心肌病组（DCM组,15只）、类胰蛋白酶抑制剂组（干预组,15只）。后2组通过高脂高糖饮食加一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导建立糖尿病心肌病大鼠模型,建模成功后,干预组每只大鼠给予0.025%的酮替芬溶液1 mg/kg腹膜腔内注射,2次/d,连续注射8周,NC和DCM两组给予等体积的生理盐水。实验结束后处死全部大鼠,称取体质量、全心重、左心室重量,测定全心指数和左心室重量指数,在光镜下对各组心肌组织进行观察分析,用ELISA检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF-α）,采用Western blot方法测定各组大鼠左心室心肌组织类胰蛋白酶蛋白表达量。结果：全心指数和左心室重量指数：DCM组全心指数及左心室重量指数明显高于NC组（P<0.05）,干预组全心指数及左心室重量指数低于DCM组（P<0.05）。常规HE染色结果显示：与NC组比较,DCM组心肌组织病理变化可见明显的心肌纤维排列紊乱、断裂,心肌细胞肥大,细胞核边缘不清;干预组心肌细胞体积较DCM组有不同程度的缩小,心肌细胞排列规则,断裂现象少见,细胞核大小尚均一。大鼠血清TNF-α水平：DCM组显著高于NC组（P<0.05）,干预组低于DCM组（P<0.05）。类胰蛋白酶相对灰度值比较：DCM组高于NC组（P<0.05）,干预组低于DCM组（P<0.05）。结论：2型糖尿病大鼠心肌组织存在类胰蛋白酶的表达增强,经类胰蛋白酶抑制剂干预后糖尿病心肌病大鼠模型心肌病理改变减轻,类胰蛋白酶的表达降低。类胰蛋白酶表达的增强可能参与糖尿病心肌病的发生。     

基因芯片技术在胰腺癌相关基因研究中的应用

目的　应用基因芯片技术比较胰腺癌组织与正常胰腺组织基因表达谱的差异 ,以寻找新的诊断指标和治疗位点。方法　将 12 80 0 0个人类全长基因的PCR产物点样在特殊处理后的玻片上制备基因芯片。采用逆转录的方法分别将Cy5 dUTP标记胰腺癌组织mRNA、Cy3 dUTP标记正常胰腺组织mRNA以制备探针。将每一标本的混合探针与芯片杂交 ,用ScanArray 30 0 0荧光扫描仪扫描荧光信号。应用ImaGene3.0软件分析、计算每点的Cy5和Cy3信号值。以Cy5 /Cy3比值的自然对数绝对值 >0 .6 9为标准 ,筛选差异表达基因。结果　在所检测的 6例胰腺癌标本中 ,共有 5 4个基因有差异表达 ,其中胰腺癌组织中表达上调基因 32个 (包括基因库中已登录基因 2 4个 ) ,表达下调基因 2 2个 (包括基因库中已登录基因 15个 )。结论　基因芯片技术为阐明胰腺癌特异基因表达谱提供了强有力的工具。     

常染色体显性遗传多囊肾差异表达基因的研究

目的:应用表达谱芯片研究常染色体显性遗传多囊肾病(ADPKD)与正常肾组织基因表达的差异,探讨此病的致病因素及可能的治疗途径.方法:等量的人正常肾和ADPKD肾组织的mRNA分别用Cy3和Cy5逆转录荧光标记,制作cDNA探针,混合后与4 096点人cDNA表达谱芯片进行杂交,ScanArray4000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,数字化处理和分析后比较两种组织基因表达谱的差异.RT-PCR法验证其中4条基因表达水平.结果:在ADPKD肾组织与正常肾组织中存在463条差异表达基因,其中206条基因在多囊肾组织中高表达,特别是细胞周期素D2(cyclin D2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)、成纤维细胞活化蛋白基因等;257条基因在多囊肾组织中低表达,特别是蛋白磷酸酶1A、酸性磷酸酶1基因等.RT-PCR法验证的4条基因表达水平与芯片结果相一致.结论: ADPKD病理改变可能与细胞周期蛋白、MMPs以及各种生长因子相关基因的上调有关,钙调素抑制剂和MMPs抑制剂可能会对其有一定的治疗作用.     

用cDNA表达阵谱分析原癌基因和抑癌基因在胃癌中的表达

目的：从基因水平了解正常胃和胃癌组织原癌基因和抑癌基因表达的分子机制。方法：从正常胃和胃癌组织中提取、纯化mRNA，逆转录合成cDNA，荧光标记后与H80D型芯片杂交，扫描后筛选出表达差异的原癌和抑癌基因。结果：在195条原癌及抑癌基因中，13条存在表达差异，其中6条(3．1％)表达上调，7条(3．6％)表达下调。结论：应用该方法识别出的原癌和抑癌基因对胃癌的诊断和治疗具有潜在的价值。     

基因芯片检测耐PHT点燃鼠脑突触可塑性基因的表达

目的:探索与鼠同源的人类已知基因在苯妥英钠耐药和非耐药癫痫鼠脑中的差异表达,了解难治性癫痫形成(PHT)机制。方法:建立耐药和非耐药组癫痫大鼠模型,成功后,处死动物,取出脑组织,常规抽提,逆转录生成PHTmRNAcDNA后,应用含有条人类基因的表达谱芯片,检测两者间基因表达谱的差异。4096cDNA结果:发现耐和治疗有效癫痫PHTPHT鼠与神经元突触可塑性有关的基因有条存在差异表达。18结论:突触可塑性增强可能是难治性癫痫形成的重要原因。     

应用基因芯片筛选人高、低转移肺巨细胞癌细胞株差异表达基因的初步探讨

目的应用基因芯片探讨人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95D和95C的基因表达差异,筛选肺癌转移相关基因。方法提取人高转移肺巨细胞癌细胞株95D和人低转移肺巨细胞癌细胞株95C的mRNA并反转录为cDNA,分别用Cy5-dUTP和Cy3-dUTP进行标记后与基因芯片杂交,然后用Scan Array 3000扫描仪及Im aGene3.0软件处理杂交信号得到95D和95C的表达差异基因。对部分有差异表达的基因进行RT-PCR分析鉴定。结果在被检测的人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95D和95C中,共有466条基因出现表达差异,其中具有同一GenBank ID号的Doub le基因共108对,包括上调基因47对,下调基因61对。有表达差异的F ln29、RUVBL2、C14orf3等基因RT-PCR结果与基因芯片一致。结论多基因参与了肺癌的转移过程,基因芯片技术是筛选肺癌转移相关基因的有效方法。