反义核酸技术在白血病研究中的进展

１０年来，反义核酸技术发展迅速，涉及医学多个领域。本文述其在白血病发病机制，、化疗耐药机制和逆转、骨髓净化等方面的研究动态，以推进进一步的临床应用。     

反义核酸抗白血病作用研究进展

反义核酸抗白血病作用研究进展袁跃传综述沈素芸审校本文就近年来反义核酸在抗白血病作用方面的研究进展及应用前景作一概述。反义核酸及其作用原理八十年代初Ｍｉｚｕｎｏ等在研究大肠杆菌主要外膜蛋白（Ｏｍｐ）基因表达时，发现其ＯｍｐＣ基因存在一个独立转录单位，它...     

反义核酸技术及其在肿瘤研究中的应用

随着分子生物学的迅猛发展,基因技术已应用于肿瘤研究领域,基因研究领域中反义核酸技术发展迅速。本文综述了反义核酸技术的分类、作用原理,较为详尽的概述了近年来反义核酸技术在肿瘤研究方面的策略及方向,并提出目前该领域存在的问题及反义核酸技术的应用前景。     

反义核酸技术及其在肿瘤研究中的应用

随着分子生物学的迅猛发展，基因技术已应用于肿瘤研究领域，基因研究领域中反义核酸技术发展迅速。本文综速了反义核酸技术的分类、作用原理，较为详尽的概述了近年来反义核酸技术在肿瘤研究方面的策略及方向，并提出目首试领域存在的问题及反义核酸技术的应用前景。     

第二代反义核酸--杂合型反义核酸的研究现状

反义核酸通过序列特异性地与靶mRNA或靶DNA结合而抑制其表达,从而成为理想的、在基因水平调控的治疗制剂。在第一代反义核酸-硫代磷酸酯寡核苷酸的基础上研究第二代反义核酸,其中杂合型反义核酸是最具代表性的一类,本文着重介绍了此类反义核酸的药物设计、作用机制、药代动力学、毒副作用、临床研究及应用前景等。     

第二代反义核酸——杂合型反义核酸的研究现状

反义核酸通过序列特异性地与靶mRNA或靶DNA结合而抑制其表达，从而成为理想的、在基因水平调控的治疗制剂。在第一代反义核酸－硫代磷酸酯寡核苷酸的基础上研究第二代反义核酸，其中杂合型反义核酸是最具代表性的一类，本文着重介绍了此类反义核酸的药物设计、作用机制、药代动力学、毒副作用、临床研究及应用前景等。     

反义核酸技术的现状

本文综述了近年来在肿瘤、病毒感染、血管性疾病和遗传性疾病的反义基因治疗方面取得一些实验结果 ,特别是针对反义核酸技术的作用机制、实验研究及应用前景进行了较为详尽的阐述 ,并提出了这个领域中存在的一些问题。     

PML-RARα反义核酸对早幼粒细胞白血病细胞生长分化的影响

目的：研究ＰＭＬＲＡＲα融合基因的表达对ＮＢ４细胞生长分化作用的影响，探讨ＰＭＬＲＡＲα融合基因与急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）发病间的关系。方法：用反义核酸来封闭ＰＭＬＲＡＲα融合基因的表达并用ＲＴＰＣＲ的方法检测。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ还原试验加以判定，细胞周期应用流式细胞仪进行分析。结果：反义硫代寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）通过封闭ＰＭＬＲＡＲα融合基因的表达能够降低Ｓ期细胞的百分率（５６％降至３７％），继而抑制ＮＢ４细胞生长，促进ＮＢ４细胞的分化，提高其ＮＢＴ还原率。结论：ＡＰＬ特征性的染色体易位ｔ（１５；１７）形成的ＰＭＬＲＡＲα融合基因，与ＡＰＬ的发病有关     

反义核酸技术的现状

本文综述了近年来在肿瘤、病毒感染、血管性疾病和遗传性疾病的反应基因治疗方面取得一些实验结果,特别是针对反义核酸技术的作用机制、实验研究及应用前景进行了较为详尽的阐述,并提出了这个领域中存在的一些问题。     

Survivin反义核酸促进紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡

目的　探讨Survivin反义核酸对紫杉醇诱导白血病细胞系HL 6 0细胞凋亡的影响。方法　将已构建成功的Survivin反义核酸真核表达载体pcDNA3 SVVas电转染HL 6 0细胞 ,并筛选转染成功的阳性克隆 ;锥虫蓝拒染法观察Survivin反义核酸与紫杉醇联合应用对HL 6 0细胞增殖的影响 ;细胞计数和MTT实验测定转染细胞对紫杉醇敏感性 ;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡DNA断裂情况 ;核染色检测凋亡细胞的细胞核变化。结果　转染Survivin反义核酸的HL 6 0SVVas细胞增殖明显受抑 ,与HL 6 0neo细胞、HL 6 0细胞进行比较 ,差异具有显著性 (P <0 .0 5 ) ;MTT实验显示 ,紫杉醇对HL 6 0SVVas、HL 6 0neo、HL 6 0细胞的IC50 值分别为 (14 .4± 1.87)ng ml,(31.9± 6 .38)ng ml和 (32 .0± 6 5 2 )ng ml。统计学分析证明差异具有显著性 (P <0 .0 1) ;经琼脂糖凝胶电泳 ,HL 6 0SVVas细胞可见到DNA梯形条带 ,而HL 6 0neo、HL 6 0细胞未见到 ;与HL 6 0neo、HL 6 0细胞相比 ,HL 6 0SVVas的细胞核呈致密浓染。结论　Survivin反义核酸可促进紫杉醇诱导HL 6 0细胞凋亡。     

反义核酸技术研究原癌基因c-myb在造血细胞增殖和分化调控中的作用

原癌基因是一类编码重要调控蛋白的细胞基因,在生理状态下可能不表达或有限制地表达,参与正常细胞的增殖和分化的调控,当静止或低表达的原癌基因被异常激活后,则出现基因结构变化,表达水平异常。这些异常对细胞恶变或维持恶性表型和促进肿瘤细胞的生长具有重要作用。业已发现近50种癌基因,约     

反义核酸基因治疗中电子计算机的辅助设计

本文概述了反义寡核苷酸作为基因治疗药物的状况，归纳了目前对妨碍反义寡核苷酸作为基因治疗药物取得快速进展的主要因素：反义寡核苷酸作为基因治疗药物的有效性；反义寡核苷酸作为基因治疗药物的毒副作用。从细胞和基因水平详细介绍目前对这些影响因素的分析：①反义寡核苷酸未能有效对靶基因的同源基因的鉴别是导致其毒副作用的主要原因。②靶基因的二、三级结构严重影响反义寡核苷酸达到靶位置。③影响反义寡核苷酸的传送和快速退火的问题。也介绍如何使用电子计算机方法对反义寡核苷酸的靶基因做全面分析，即对靶基因的二级结构和同源性分析，并最终设计出反义寡核苷酸，达到降低反义寡核苷酸作为治疗药物的毒副作用，提高治疗的有效性的目的。最后归纳出计算机辅助设计的方法。     

细胞周期素A的特异反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用

目的　探讨细胞周期素A(CyclinA)的特异反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对K5 6 2细胞增殖的调控作用。方法　采用反义技术将CyclinA特异的ASON与K5 6 2细胞共培养后 ,用台盼蓝拒染法绘制生长曲线、并做CFU K5 6 2克隆培养 ,流式细胞术进行A蛋白检测。结果　CyclinA特异的ASON组与正义脱氧寡核苷酸 (SON)组及空白对照组相比 ,能特异地抑制CyclinA蛋白水平的表达 (P <0 .0 1) ;而且当ASON的浓度达到一定程度时 ,K5 6 2细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制 (P <0 .0 1)。结论　ASON能特异封闭CyclinA蛋白水平 ,并能抑制K5 6 2细胞的增殖 ,但有明显的浓度依赖性。     

反义c-myc基因抗L6565白血病作用的研究

小鼠Ｌ６５６５白血病是我国特有的ＴＳＺ实验性白血病／淋巴瘤系统中的实验动物模型之一［１］。我室用Ｌ６５６５白血病小鼠的脾脏细胞悬液以有限稀释法建立了Ｌ６５６５细胞株,在对其早期癌基因进行筛选时,发现ｃｍｙｃ基因过度表达,这提示ｃｍｙｃ的高表达可能与Ｌ６５６５白血病的发生机制有关［２］。为了进一步探索ｃｍｙｃ与Ｌ６５６５白血病发病机制的关系及反义ｃｍｙｃ对其治疗作用,我们针对高表达的ｃｍｙｃ构建了一个含有反义ｃｍｙｃ基因的逆转录病毒载体,观察它对Ｌ６５６５白血病细胞株恶性表型和恶性…     

反义核酸封闭H-2Kd基因对鼠淋巴因子激活杀伤细胞活性的影响

目的 观察反义寡核苷酸封闭鼠淋巴细胞H-2Kd基因后,对其表达的影响及淋巴因子激活杀伤细胞(LAK)的活性改变,探讨淋巴细胞Ⅰ类主要组织相容性抗原(MHC-Ⅰ)在肿瘤免疫中的作用。方法 将人工合成的H-2Kd起始区反义寡核苷酸作用于小鼠脾LAK,流式细胞仪检测作用前后H-2Kd的表达率。噻唑蓝法检测H-2Kd表达降低的LAK对肿瘤杀伤活性。结果 反义寡核苷酸(15μmoL/l)组H-2Kd蛋白的表达率由90.1％±4.4％下降至79.8％±2.5％(P<0.01),H-2Kd降低的LAK杀伤活性明显降低,对K562的杀伤活性由82.3％±3.1％降到60.2％±6.7％(P<0.01),对H22细胞株的杀伤活性由67.4％±2.8％降到53.2％±8.1％(P<0.01)。结论 反义寡核苷酸能够抑制小鼠LAK表面H-2Kd的表达,但不影响LAK增殖活性,因而可导致鼠LAK对同种及异种肿瘤细胞的杀伤活性降低。     

c-myb基因反义寡核苷酸对K562细胞作用的研究

为研究慢性髓细胞白血病(ＣＭＬ)反义核酸的治疗效果,我们以ＣＭＬ细胞株Ｋ562为实验对象,研究ｃｍｙｂ基因硫代磷酸反义寡聚脱氧核苷酸对Ｋ562细胞的作用,现将结果报告如下。材料和方法1　细胞株　Ｋ562细胞由福建省医学科学研究所提供。培养条件:含体积分数为15%灭活胎牛血清(Ｇｉｂｃｏ)及50ＩＵ/ｍｌ青霉素、50μｇ/ｍｌ链霉素的ＲＰＭＩ1640完全培养液(ｐＨ72～74),置37℃、体积分数为5%ＣＯ2、完全饱和湿度培养箱中培养。2　反义寡核苷酸的合成　反义寡聚脱氧核苷酸是由本所合成,为防核酸酶降解,采用二硫化四乙基秋兰姆(ｔｅｔｒａｅ…     

bcr—ab反义寡核苷酸治疗慢性髓细胞性白血病的研究进展

自体造血干细胞移植是治疗慢性髓细胞性白血病（ＣＭＬ）是一种重要方法,近几年来ｂｃｒ－ａｂｌ反义寡核苷酸在ＣＭＬ的治疗尤其是自体骨髓移植的体外净化方面取得了很大进展,提供了治疗白血病及其他恶性肿瘤的新方法。     

反义寡核苷酸技术体外抑制慢粒细胞增殖的实验研究

反义寡核苷酸技术体外抑制慢粒细胞增殖的实验研究黄一微，谢毅，卢珊慢性粒细胞白血病（慢粒）是髓系干细胞起源的慢性白血病，该细胞仍保留有分化、成熟的特性，并能行使正常造血细胞的基本功能。随着化疗手段的进步，患者的平均生存期从单药治疗时的３０～４５个月，增...     

血管内皮生长因子121反义核酸抑制人胰腺癌细胞体外促血管生成能力

目的:探讨VEGF121反义核酸对体外培养胰腺癌细胞促血管生成能力的影响,以期通过抑制VEGF引起的肿瘤血管生成来达到抑制肿瘤生长的目的。方法:将稳定转染有VEGF反义核酸pcDNA3-ASVEGF121的胰腺癌细胞系BxPC-3在体外条件下培养,采用免疫组化检测肿瘤细胞表面VEGF及Flk-1表达水平。通过测定ECV-304生长曲线检测培养液上清对血管内皮细胞生长的影响。通过培养液上清体外血管生成试验检测肿瘤细胞体外促血管生成能力。结果:VEGF反义核酸转染BxPC-3细胞后,肿瘤细胞表面VEGF蛋白水平受到明显抑制,VEGF受体Flk-1表达水平上调。对血管内皮细胞ECV-304的促生长作用减弱。体外血管生成试验显示VEGF反义核酸能抑制肿瘤细胞体外促血管生成能力。结论:人反义VEGF121能显著抑制胰腺癌细胞表面的VEGF表达,抑制肿瘤细胞体外促血管生成能力。