应用PCR快速制备细小病毒B19诊断芯片探针

目的 制备细小病毒诊断芯片探针。方法 利用Primer Premier5．0针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物，将PCR产物克隆pMD-18T载体。结果 序列分析显示，PCR产物均为细小病毒B19特异保守基因。结论 利用PCR扩增产物制备诊断芯片探针是一种简便有效的方法。     

应用PCR快速制备细小病毒B19诊断芯片探针

目的制备细小病毒诊断芯片探针。方法利用Primer Premier 5.0针对细小病毒B19基因保守区域设计PCR引物,将PCR产物克隆pMD-18 T载体。结果序列分析显示,PCR产物均为细小病毒B19特异保守基因。结论利用PCR扩增产物制备诊断芯片探针是一种简便有效的方法。     

细小病毒B19的芯片检测方法构建

 目的   运用基因芯片技术构建快速简便检测B19 细小病毒的方法,用于B19 病毒的大规模筛查和早期诊断。方法  利用Oligo6.0和primer5.0 软件分别设计出5 对引物（其中每对引物中的1 个用Cy5 标记）和6 个探针,将探针固定在特制的醛基检测芯片上。分别提取B19 病毒全基因组质粒、患者组血清、正常组血清的DNA,进行不对称扩增,产物与芯片杂交,观察结果;DNA测序验证芯片检测结果的准确性;观察等倍稀释不对称PCR 扩增产物杂交信号的强度变化,检测芯片的灵敏度。结果  电泳结果表明PCR扩增获得的DNA片段和预期表达片段大小一致。芯片杂交结果和DNA测序验证结果完全吻合,芯片杂交信号的强弱会随着DNA浓度的降低而减弱。结论  本研究建立了细小病毒B19的芯片检测方法,该方法并具有较高的灵敏度和特异性。     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的 应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段，并进行克隆、测序分析，制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法 利用Olig06．4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物，纯化PCR扩增产物，扩增后的产物克隆至pMDl8-T载体并进行快速鉴定，提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果 获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明，所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论 利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

用PCR制备检测丁型肝炎病毒基因芯片的探针

目的：制备诊断丁型肝炎病毒(HDV)cDNA基因芯片探针。方法：针对HDV病毒基因保守区域设计聚合酶链反应(PCR)引物，纯化PCR扩增产物克隆，并测序鉴定。结果：序列分析表明，所扩增的片段均属于HDV特异基因。结论：利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便、实用的方法。     

应用PCR快速制备乙型、丁型肝炎病毒诊断基因芯片探针

目的应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段,并进行克隆、测序分析,制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法利用Oligo6.4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物,纯化PCR扩增产物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明,所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。     

人细小病毒B19实验诊断技术研究

目的建立一种快速、准确、特异和定量检测人细小病毒B19的实验检测方法。方法以B19病毒NS1基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,建立对细小病毒B19进行荧光定量检测的实验方法。同时利用荧光定量PCR技术检测本院收集的490例孕妇血清。结果引物与Taqman探针比例为1∶4,镁离子浓度为2.5mmol/L时,反应的本底最低,荧光信号最强。该方法的灵敏度为1.0×101拷贝,有较好的特异性和重复性。检测的490例临床孕妇血清标本,人细小病毒B19DNA阳性为44例,感染率为8.9%(44/490)。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应,能够准确快速定量检测血清中的人细小病毒B19。     

应用RD—PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针

目的：收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法：培养K562细胞，抽提其mRNA，反转录为cDNA，应用限制性显示PCR技术（RD－PCR）分离K562细胞不同组别的产物片段，分别行PCR扩增。结果：制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论：RD－PCR方法适合于基因芯片探针的收集。     

流感及H5N1亚型禽流感病毒液相检测芯片的制备

目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据保守序列,设计针对各基因的简并引物和寡核苷酸探针,制备探针偶联微球,将样本核酸多重PCR扩增产物与微球进行杂交,以Bio-Plex液相芯片检测系统进行芯片检测。结果 该方法可以对甲型流感病毒的NP基因、乙型流感病毒的HA基因以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因同时进行检测,病毒核酸的最低检出量为1pg,检测特异性高。结论 成功构建了甲、乙型流感病毒和H5N1亚型高致病性禽流感病毒液相芯片检测系统,为流感、禽流感的快速检测、诊断奠定了基础。     

利用寡核苷酸芯片检测SARS病毒

目的：利用寡核苷酸芯片检测SARS病毒。方法：根据序列Blast比对分析结果，设计逆转录不对称PCR扩增引物和寡核苷酸检测探针。采用Trizol试剂从人静脉血中提取总RNA，经过逆转录和不对称PCR扩增得到的PCR产物与排列有寡核苷酸探针的芯片杂交，杂交后的芯片经激光共聚焦扫描分析。结果：SARS阳性样品与寡核苷酸芯片杂交后出现阳性杂交信号，具有不同二级结构的寡核苷酸探针杂交信号强度不一。结论：寡核苷酸芯片适于快速准确、平行大量地检测SARS病毒。     

B19微小病毒70-mer寡核苷酸探针的设计

目的　设计B19微小病毒诊断基因芯片的寡核苷酸探针。方法　以微小病毒B19为例 ,利用BLAST软件对其序列进行比对并获得特异序列 ;利用软件Oligo 6设计特异性高、Tm值接近、长度均一的寡核苷酸探针。 结果　获得 12条 70 mer寡核苷酸探针 ,用于芯片打印及病毒检测。结论　利用BLAST系统和生物学软件Oligo 6可简便而有效地设计诊断芯片探针     

我国人细小病毒B19VP1和VP2部分基因序列测定及变异分析

目的 探讨B19病毒中国株的基因变异。方法 采用长片段聚合酶链反应技术，从中国再障患儿血清中扩增HPVB19-XA2株的VP1独特区基因和VP1/VP2基因片段，进行核苷酸序列分析。结果 B19-XA2株的VP1独特区和VP1/VP2连接区基因大部分区域核苷酸序列被测定，其与国外Au株基因核苷酸序列比较，有4个核苷酸突变，并引起编码的2个氨基酸改变。结论 我国B19病毒VP1基因独特区和VP1/VP2连接区基因序列与Au株相比有变异。     

人细小病毒B19中国株VP1蛋白独特区基因片段序列变异分析

目的 研究B19病毒中国株独特区VP1的基因变异。方法 采用聚合酶链反应技术（PCR）从两侧中国再生障碍性贫血患儿血清中扩增VP1独特区基因片段，将其与PUC19连接，酶切鉴定筛选阳性克隆后测序分析。结果 从一个患儿的血清中扩增出约480bp目的片段，并成功构建PUC19－VP1质粒，测序结果显示，与国外已发表的Wi株VP1独特区序列相比，有2处核苷酸发生改变，并可致所编码的氨基酸变化。结论 中国B19病毒VP1独特区有变异。     

人细小病毒B19 NS1片段全长的克隆及表达

目的 :克隆人细小病毒B1 9非结构蛋白 1 (NS1 )全长基因 ,构建重组表达载体并诱导表达。　方法 :利用聚合酶链反应 (PCR)和分子克隆技术 ,从我科保存的B1 9阳性标本XA2 0中扩增NS1片段全长 ,构建NS1 pGEM T easy克隆载体并测序分析 ,测序证实序列正确后亚克隆于pQE30表达载体中 ,并转化至M1 5感受态菌中 ,经IPTG诱导可表达 770 0 0的融合蛋白。　结果 :成功克隆了人细小病毒B1 9NS1全长基因 ,构建了融合蛋白NS1 pQE30的重组表达质粒 ,表达的融合蛋白经 1 2 %SDS PAGE电泳证实为 770 0 0。　结论 :获得人细小病毒B1 9NS1全长基因及原核表达产物 ,对进一步研究NS1的生物学活性及其单克隆抗体的制备有重要意义。     

用PCR方法检测献血员的B_(19)病毒感染情况

目的：研究人微小病毒Ｂ１９在献血员中的感染情况。方法：采用ＰＣＲ技术对５００份献血员血清标本进行检测。结果：发现一例Ｂ１９病毒ＤＮＡ阳性，并用Ｋｏｃｈ设计的引物扩增标本和用ＨａｅⅢ，ＰｓｔⅠ和ＳｔｙⅠ酶切分析都证实为人微小病毒Ｂ１９。结论：国内献血者中有Ｂ１９病毒携带者。血液和血液制品有可能污染有Ｂ１９病毒。这个情况值得进一步研究。