乳腺癌蛋白激酶C-β靶向治疗的研究进展

蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)是一族至少包括12种不同亚型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它们的不同功能主要表现在细胞增殖、分化、凋亡、肿瘤发生、血管发生和耐药性等方面[1-2],基于组织表达、亚细胞定位和底物特异性等方面的差异,PKC同工酶表现出不同的生物学行为.     

蛋白激酶C和活化态C激酶1受体蛋白在血管平滑肌细胞泡沫化变中的作用

目的探索血管平滑肌细胞泡沫化过程中活化态C激酶1受体蛋白(RACK1)、蛋白激酶C(PKC)通道蛋白的相关性,抑制PKC的作用后对动脉硬化的效果,为临床上的进一步治疗提供坚实的研究基础和新的治疗靶点。方法使用组织贴块法从SD大鼠的主动脉中提取原代血管平滑肌细胞并进行鉴定;取第3～9代的原代平滑肌细胞分为对照组和不同浓度脂氧化实验组(氧化型低密度脂蛋白ox-LDL处理组),采用高效液相色谱法(HPLC法)测定不同组细胞内胆固醇含量;通过油红O染色测定各组平滑肌细胞泡沫化程度;通过免疫印迹(Western blot)技术检测各组细胞中PKC、磷酸化蛋白激酶C(Cp-PKC)、RACK1、应激活化蛋白激酶(JNK)、磷酸化应激活化蛋白激酶(p-JNK)表达量的变化;加入不同浓度的PKC抑制剂(Calphostin C)处理细胞后检测抑制剂对PKC/RACK1通道及其下游相关蛋白的影响。用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析,多组间比较用单因素方差分析。结果与对照组相比,不同浓度ox-LDL刺激下平滑肌细胞内总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)含量均明显增加,且随着ox-LDL浓度的增加,TC和CE含量逐渐增加,泡沫细胞内的脂滴含量也增加。Western blot检测发现,与对照组相比,实验组中加入ox-LDL刺激后,PKC的活性增强,其活化型受体RACK1和p-JNK的表达量也升高。加入PKC的抑制剂Calphostin C后会抑制平滑肌细胞脂质的蓄积,抑制泡沫细胞的形成,同样也会降低p-PKC、RACK1的表达。结论 ox-LDL可以促进平滑肌细胞的泡沫化变,其作用机制可能与PKC/RACK1的作用有相关性。抑制PKC的作用后细胞内脂质蓄积降低,可以延缓动脉硬化的发生,为临床上治疗动脉硬化提供新的治疗方案。     

枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜细胞基质的影响

目的研究枸杞多糖对高糖环境下肾小球系膜细胞基质的影响。方法将细胞分为空白、正常糖、高糖及不同浓度(200、400和800mg/L)枸杞杞多糖干预共6组,MTT法检测细胞增殖情况,H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平,ELISA法检测细胞蛋白激酶C(PKC)活性,免疫细胞化学法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及纤维连接蛋白(FN)的表达情况。结果高糖组分别与空白组、正常糖组比,其细胞内活性氧的生成和蛋白激酶C活性均显著增加(P<0.05)。枸杞多糖干预组可降低高糖刺激引起的氧化应激水平,抑制细胞过度增殖,同时降低PKC活性(P<0.05),能明显下调TGF-β1和FN的表达(P<0.05)。结论枸杞多糖通过抑制细胞增殖、减少细胞活性氧的生成、抑制蛋白激酶PKC活性、下调TGF-β1和FN的表达,从而抵抗高糖引起的系膜细胞的损伤,达到对肾小球系膜细胞的保护作用。     

三邻甲苯基磷酸酯对人成神经瘤SH-SY5Y细胞内PKC活性及转位的影响

目的研究三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)对人成神经瘤SH-SY5Y细胞蛋白激酶C(PKC)活性和转位的影响。方法以TOCP(0、0.25、0.5、1.0 mmol/L)对人成神经瘤细胞系SH-SY5Y细胞进行染毒,染毒时间为12、24和48 h,用PKC活性检测试剂盒检测PKC的活性,间接免疫荧光术检测PKC在细胞内的定位,荧光倒置显微镜观察结果。结果 1.0 mmol/L TOCP作用SH-SY5Y细胞24 h,PKC的活性最强,并能导致PKC由胞质向胞膜转位。结论 TOCP作用SH-SY5Y细胞后,能激活PKC,增加膜转位。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞波形蛋白影响的体外实验研究

目的：进一步探索环境雌激素双酚A（BPA）影响大鼠睾丸支持细胞波形蛋白（Vimentin)的机理。方法：采用支持细胞体外原代培养，免疫组织化学以及mRNA原位杂交技术分析了BPA对支持细胞Vimentin及其基转转录，参与Vimentin降解的蛋白激酶C（PKC）表达的影响。结果：BPA使支持细胞拉长，支持细胞在体外系统中良好地表达Vimentin，BPA使其基因转录抑制，PKC在支持细胞中不表达。结论：环境雌激素BPA通过抑制基因转录而干扰Vimentin合成，从而影响支持细胞骨架的正常形成，导致细胞形态改变，PKC不直接干扰支持细胞Vimentin代谢。     

蛋白激酶C对生殖细胞及受精过程的影响

蛋白激酶C（PKC）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是细胞内多种信号转导通路的重要成分,参与细胞周期的调控、生长、增殖、分化与凋亡等多种生理过程。研究证明,PKC亚型存在于精子和卵母细胞中,参与受精过程。因此,了解PKC的生理作用对探讨弱精子症发生的分子机制、卵母细胞成熟及受精过程具有重要意义。     

蛋白激酶C对生殖细胞及受精过程的影响

蛋白激酶C(PKC)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是细胞内多种信号转导通路的重要成分,参与细胞周期的调控、生长、增殖、分化与凋亡等多种生理过程。研究证明,PKC亚型存在于精子和卵母细胞中,参与受精过程。因此,了解PKC的生理作用对探讨弱精子症发生的分子机制、卵母细胞成熟及受精过程具有重要意义。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与精子活动力

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,激活后可参与调节细胞生长、发育、分化、凋亡等一系列生命活动。MAPK转导通路的一些组成部分,如细胞因子:白细胞介素6(IL-6)、成纤维细胞生长因子(FGF);蛋白激酶C(PKC);细胞外信号调节激酶(ERK)和p38及底物精子微管蛋白等直接或间接调节精子的活动力。MAPK信号通路的研究对探讨弱精子症发生的分子机制,寻求弱精子症新治疗途径有意义。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与精子活动力

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)属于丝/苏氨酸蛋白激酶,激活后可参与调节细胞生长、发育、分化、凋亡等一系列生命活动.MAPK转导通路的一些组成部分,如细胞因子:白细胞介素6(IL-6)、成纤维细胞生长因子(FGF);蛋白激酶C(PKC);细胞外信号调节激酶(ERK)和p38及底物精子微管蛋白等直接或间接调节精子的活动力.MAPK信号通路的研究对探讨弱精子症发生的分子机制,寻求弱精子症新治疗途径有意义.     

蛋白激酶C在苯并(a)芘致内皮细胞HSP70基因表达改变中的作用

[目的]研究蛋白激酶C(PKC)信号途径在苯并(a)芘(BaP)影响热休克蛋白70(HSP70)基因表达中的作用。[方法]离体培养猪主动脉内皮细胞，不同浓度BaP(0、0．1、0．5、1、5、10μmol／L)染毒24h，并以12-十四酸佛波酯-13乙酸盐(PMA)和抑制剂Staurosporine于不同时问点进行干预，以Western-blot法检测各组细胞HSP70表达的变化。[结果]BaP抑制HSP70表达；PKC的激动剂(PMA)可完全或部分消除BaP对HSP70的抑制作用，而这种作用可迅速被PKC的抑制剂(Staurosporine，STP)所阻断。[结论]BaP可能通过抑制内皮细胞PKC活性而抑制HSP70的表达。     

蛋白激酶C在乳腺癌组织中的表达

目的观察蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)同工酶在乳腺癌组织中的表达状况,探讨癌细胞信息传递的分子生物学机制。方法应用半定量RT-PCR检测了31例乳腺癌组织与12例癌旁正常乳腺组织中PKC-βΙmR-NA表达;应用Western blot检测以上组织中PKC-βΙ蛋白表达。结果乳腺癌组织中PKC-βΙmRNA与蛋白表达均高于癌旁正常乳腺组织(P<0.001)。结论乳腺癌组织中存在PKC-βΙ同工酶过度表达,它可能介导乳腺癌细胞分化的信号转导过程。     

微波辐照对培养血管内皮细胞Nrf2的磷酸化作用

目的 研究微波辐照对参与抗氧化应激反应调节的转录因子（Nrf2）的磷酸化作用。方法 培养的ECV304细胞接受微波辐照，辐照后2，4，8，24h进行指标测定。用免疫共沉淀-放射自显影法测定Nrf2磷酸化水平；用Western blot、r-^32P-ATP标记液闪法分别测定蛋白激酶C（PKC）表达量和活性。结果 微波辐照后2，4，8h，Nrf2磷酸化水平比未辐照细胞明显增强（P〈0．05），4h达到峰值，24h回复到正常水平；同时PKC的蛋白表达量在辐照后2，4，8h也比对照细胞明显增加，PKC的活性在这一时段比对照分别增加了36％，93％，47％（P〈0．05）。辐照后24h，PKC含量和活性均下降到正常水平。辐照后PKC含量和活性变化与Nrf2磷酸化水平的变化在时效上有一致性。结论 微波辐照可引起培养血管内皮细胞Nrf2磷酸化水平在一定时段内增强，该过程与PKC激活有关。     

卵母细胞成熟过程中蛋白因子的表达和作用

近年来，随着辅助生育技术的日益发展，卵细胞成熟的分子调控机制愈来愈受到人们的重视，其中成熟刺激因子(MPF)、丝裂原激活蛋白激酶家族（MAPK）、蛋白激酶C(PKC)、cAMP/蛋白激酶A(cAMP/PKA)等蛋白因子在卵母细胞成熟过程起着重要的作用。现就这些因子在卵母细胞成熟过程中的表达和调控研究进展作一综述。     

葡多酚对体外培养肝细胞PKC表达影响

目的体外观察葡多酚（GPC）对小鼠肝细胞蛋白激酶C（PKC）表达的影响。方法将正常小鼠肝细胞加入不同剂量GPC共同培养后，用免疫细胞化学法检测各组肝细胞PKC表达；四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测各组肝细胞的增殖活性。结果109mg／LGPC组肝细胞内PKC阳性表达率和细胞增殖活性分别为34．24％和0．654±0．062，经统计学X^2检验和t检验，与正常对照比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC表达。提高肝细胞增殖活性。     

瓦斯爆炸伤大鼠脑组织蛋白激酶CαmRNA与c-fos基因表达的关系

目的探讨蛋白激酶CαmRNA(PKCαmRNA)与c-fos基因蛋白(c-fos)的表达在瓦斯爆炸致大鼠脑损伤时的变化规律.方法建立瓦斯爆炸伤大鼠实验模型.采用原位杂交技术测定大鼠脑组织蛋白激酶CαmRNA,采用免疫组化染色法测定c-fos基因蛋白.结果PKCαmRNA与c-fos对照组大鼠脑组织均有少许表达.大脑皮质、海马PKCαmRNA 24 h、48 h及72 h组的表达明显增强,且48 h达高峰(P＜0.01);脑皮质、海马c-fos基因蛋白0.5 h表达开始有明显增加,4 h达高峰,以后强度逐渐降低,第5日基本恢复正常.结论瓦斯爆炸伤致脑组织缺血缺氧可促进脑神经细胞蛋白激酶CαmRNA的表达,PKCαmRNA可调节c-fos基因的表达,二者均参与了神经细胞的损伤过程.     

3β-羟类固醇脱氢酶对邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯处理细胞后诱导型一氧化氮合酶和蛋白激酶C信号通路的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP)对MCF-7细胞中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号通路相关基因及蛋白表达的影响以及3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)基因在此过程中的作用。方法 用浓度为0.00~0.40 mmol/L的DEHP分别染毒MCF-7细胞、3β-HSD沉默细胞和3β-HSD高表达细胞24 h,检测细胞中iNOS/PKC相关基因表达水平的变化;应用信号通路抑制剂处理后再进行DEHP染毒,荧光定量PCR和免疫印迹法检测MCF-7细胞中iNOS/PKC相关基因和凋亡基因表达水平的变化。结果 DEHP染毒MCF-7细胞,iNOS、PKCα在基因和蛋白表达水平均高于对照组;与同一染毒剂量的MCF-7细胞比较,3β-HSD沉默细胞中iNOS、PKCα mRNA表达水平降低;而3β-HSD高表达细胞中iNOS、PKCα mRNA表达水平升高。应用iNOS 抑制剂(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)50 μmol/L处理后,DEHP染毒组iNOS、Bax、Caspase-3、Caspase-8表达下调;PKCα抑制剂(chelerythrine chloride,CHE) 0.20 μmol/L处理后,DEHP染毒组PKCα表达下调;而各抑制剂处理组中与对照组比较无明显降低的基因,其变化趋势与未加抑制剂处理的染毒组无显著差异。结论 DEHP引起的毒性作用可能与iNOS/PKC信号通路有关,3β-HSD对iNOS/PKC信号通路相关基因的表达有一定作用。     

蛋白激酶C信号通路在温石棉致肺成纤维细胞的细胞周期和凋亡改变中的作用

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）信号通路与温石棉致人胚肺成纤维细胞（HEPF）的细胞周期及细胞凋亡改变的联系。方法 流式细胞技术测定PKC的抑制剂或激活剂对温石棉处理兔肺泡巨噬细胞（AM）的培养上清液致HEPF的细胞周期和凋亡改变的影响。同时设立空白对照、正常对照（不加粉尘的AM）、阴性对照（标准TiO2)和阳性对照（标准SiO2）。结果 温石棉处理AM的上清液刺激HEPF增殖时,HEPF的G／M期细胞百分比为7．2％,高于各对照组,而细胞凋亡百分率为3．5％,低于各对照组,差异均有显著性（P＜0．01）。PRKC抑制剂C25H24N4O2使温石棉所致HEPF增殖时的S期细胞百分比由37．8％减少到27．3％,凋亡百分率由3．5％增加到22．7％,差异均有显著性（P＜0．01）,而PKC激活剂PMA能使此S期细胞百分比增加。结论 温石棉所致HEPF增殖时的细胞周期变化与其上游PKC信号通路有关,PKC抑制剂和激活剂主要是作用 于S期DNA的合成和诱导细胞凋亡。     

铝暴露对大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型影响

目的通过研究慢性铝暴露大鼠海马蛋白激酶Cγ亚型（PKCγ）的蛋白和mRNA表达的变化，观察大鼠海马CA1区长时程增强（LTP）形成，探讨铝暴露对学习记忆机制的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠，以含有不同浓度A1Cl3的水进行饲养。3个月后，测量大鼠海马LTP，用改良的Takai法测定PKC活性的变化，蛋白印迹（Westernblotting）法检测PKCγ的蛋白表达；RT-PCR检测PKCγ的mRNA表达。结果（1）各染铝组PKC活性与对照组比较均降低，差异有统计学意义（P〈0.01）；（2）各染铝组PKCγ蛋白表达与对照组比较有降低趋势（P〈0．05）；（3）各染铝组PKCγmRNA表达与对照组比较均降低（P〈0．05），0．2％与0．4％，0．6％组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢性铝暴露影响大鼠海马PKCγmRNA和PKCγ蛋白表达。使PKC活性降低。导致LTP的下降，从而影响学习记忆的功能。     

糖尿病性视网膜病变治疗药研发阔步前行

糖尿病性视网膜病变（DR）是糖尿病最常见和最严重的并发症之一，目前对DR发病机制的研究多集中在蛋白质非酶糖基化终未产物的堆积，蛋白激酶C（PKC）激活，氧化应激学说，细胞因子的作用，肾素-血管紧张素及内皮素系统的异常等方面，这几种发病机制相互联系，近年来，研究人员基于这些机制进行了DR治疗药物的开发，取得了一系列的成果。[编者按]     

葡多酚对小鼠肝细胞蛋白激酶C和增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法每日给小鼠经口灌胃不同剂量的GPC,30天后取肝组织,用MTT法测各组小鼠肝细胞的增殖活性水平,免疫组化的方法检测各组PKC和PCNA的表达。结果高剂量GPC组PKC和PCNA阳性表达率分别为47.62%和82.76%,阴性对照组则分别为6.42%和32.62%,经χ2检验,差异有显著性(P<0.05)。各组肝细胞的PKC和PCNA阳性表达率随GPC剂量的增高而增高。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC的表达,提高肝细胞增殖活性。