用SPA间接花环试验检测人外周血B淋巴细胞

本文介绍一项检测B淋巴细胞的SPA间接花环试验,其原理是以包被有SPA的牛红细胞作为指示红细胞(ES),使ES同抗人Ig的IgG型抗体(A)结合形成ESA复合物,当SmIg 的B淋巴细胞与ESA反应后,就可以形成SPA间接玫瑰花环。文中对其影响因素作了探讨。此外,将本法与直接免疫荧光(DIF)法同时作平行试验,结果表明本法的敏感性和特异性超过了DIF(P<0.001)。本方法具有许多优点,可替代DIF以检测人外周血B淋巴细胞。     

葡萄球菌免疫球蛋白花环法检测人外周血T淋巴细胞亚群的初步探讨

<正> 用抗人淋巴细胞单克隆抗体检测外周血淋巴细胞亚群的主要方法有免疫荧光法(FIA)、葡萄球菌免疫球蛋白花环法(SACIIg)、间接抗球蛋白红细胞花环法及生物素-抗生物素花环法.它们各有优缺点。本文采用的SACI-Ig花环法是根据葡萄     

DARR和DIF两法敏感性的比较

为检查猪、绵羊及牛的SIg~+淋巴细胞,作者比较了两种方法的敏感性,一是直接抗球蛋白玫瑰花反应(DARR);另一是直接免疫荧光法(DIF)。同时研究了用DARR检查动物B淋巴细胞吋的一些条件。作DARR试验,必须选择适当动物种的     

检测外周血T淋巴细胞亚群四种方法的比较

用单克隆抗体检测外周血T淋巴细胞亚群的方法报道较多,各有特点。为了选择一种适于常规应用的简便、特异性及重复性较好的检测方法,本文以抗人T细胞单克隆抗体OKT_3(抗人全T)、OKT_4(抗人T辅助亚群)和OKT_8(抗人T抑制杀伤亚群)采用抗生物素-生物素-辣根过氧化酶(ABC)法、间接SPA菌(SACI-Ig) 花环法、间接免疫荧光法(IFA)和红细胞花环试验(RT)同时检测人T细胞总数和亚群,并进行比较。现将结果报道如下。     

关于酵母补体花环形成试验影响因素的探讨

B淋巴细胞表面具有多种标志,可用不同的方法予以检测。诸如检测B淋巴细胞表面免疫球蛋白(SIg)的免疫萤光法、测定Fc受体的EA花环、以及检测C_3受体的EAC花环试验、FBC花环试验、酵母补体花环试验等,从不同的角度反映了B细胞的存在及其数量。由于不同种属动物的免疫反应功能不尽相同,为了选择理想的动物模型。根据我们的实验条件采用了比较简易的酵母补体花环法,研究了影响方法准确性的各种因素,并测定了人和六种哺乳类动物的外周血B淋巴细胞正常值,为深入研究免疫反应提供参数。     

某些人淋巴细胞亚群的年龄依赖性变化——自然杀伤细胞活力的变化

大多数研究表明,用E花环检测T细胞数,随年轻人到老年人组而减低,体外对PHA和同种异体细胞反应也如此。但在衰老过程中表面带有免疫球蛋白的B细胞以及具有Fc(EA)受体和C_3b(EAC)受体的细胞数量相对恒定。而见于非T和T细胞两群中的自然杀伤(NK)细胞——Fc受体阳     

活性T淋巴细胞亚群双标记测定方法的研究

本文应用抗HLA-DR抗原的单克隆抗体和由OKT系列单抗致敏的血球试剂,建立了一种荧光-花环双标记法同时检测细胞表面双标志的表达。运用这种双标记法对20例正常人外周血表达DR抗原的活性T淋巴细胞亚群进行了测析,并同时与二步分离法进行了比较,结果表明,二种方法测得的结果无统计学差异。而双标记法具有简便、快速、可靠、不损伤细胞活性、能同时测析细胞表面双抗原和单抗原表达特征等优点,对于一些免疫性疾病的基础与临床研究具有重要的应用价值。     

人淋巴细胞Fc段受体流式细胞仪测定

本文研究了正常人外周血淋巴细胞(PBL)表面IgGFc段受体(FcrR)和IgMFc段受体(FeHR)。细胞荧光标记与常规免疫荧光法不同,以Avidin-Biotin放大体系为荧光载体标记细胞,使对Fc段受体的测定更灵敏和特异。取48名健康成人静脉血,制备单个核细胞。细胞和AggIgG-Biotin(生物素化聚合IgG),IgM-Biotin(生物素化IgM)及Avidin-FITC(结合异硫氰酸荧光黄的Avidin)分二步孵育,用荧光标记淋巴细胞表面FcrR与FcμR。流式细胞仪分析结果显示,正常人FcrR+PBL (X±SD)为36.63±9.07％,FcμR+PBL为12,76±5.39％。我们用自己建立的Fc段受体(FcR)流式细胞仪分析法,对国人淋巴细胞表面FcrR与FcμR的研究,为探索FcR对免疫系统的调节作用,及一些免疫性疾病的发病机理奠定了一定基础。     

可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的:研究可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白在小鼠淋巴细胞活化、增殖和周期中的作用.方法:选择有效剂量为500 μg/L Jagged 1/Fc嵌合蛋白(Jagged 1/Fc),以活体染料/羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激下评价淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析Jagged 1/Fc对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色检测Jagged 1/Fc对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期变化的影响;利用荧光标记的mAb双染技术观察Jagged 1/Fc对T细胞早期和中期活化标志CD69和CD25表达的影响.结果:Jagged 1/Fc对ConA刺激或非刺激的CD3 细胞CD69和CD25的表达无明显影响,对ConA或PDB加Ion刺激或非刺激的淋巴细胞的增殖指数也无明显影响,导致非刺激的淋巴细胞sub-G0期细胞百分比增高,S期细胞百分比降低,但并不影响PDB加Ion诱导的淋巴细胞各期的变化.结论:这些结果提示500 μg/L Jagged 1/Fc对小鼠淋巴细胞活化和增殖无明显作用,对PDB加Ion刺激的淋巴细胞周期也无明显影响,但能促进未受刺激的淋巴细胞凋亡,使细胞停滞于GO/G1期,阻止其进入S期.     

人T淋巴细胞亚群的集落形成——集落细胞和集落抑制细胞的特征

目前PHA诱导人T淋巴细胞在半固体琼脂培养基中形成集落来研究入T淋巴细胞的增殖能力已得到普遍确认。本文进一步介绍了用这种方法获得的T淋巴细胞集落(TLC)中集落细胞和集落抑制细胞的特征。首先将常规方法分离得到的MC、ERFC以及FcR~-和FcR~ E-RFC分别在含SRBC、2-巯基乙醇、FCS及人B血清的半固体琼脂培养基中培养,结果MC、ERFC及FcR~-E-RFC的集落形成率为1—2％。进一步运用OXEA(人7 SIgG)花环形成技术检测E-RFC集落细胞表面的Fc受体,发现多数集落细胞无Fc受体,FcR~ 细胞极少。将FcR~ E-RFC与FcR~-E-RFC共同培养后发现FcR~-细胞的集落形成被抑     

淋巴细胞亚群的表面标志

人的T淋巴细胞有着能结合红细胞(E)的受体,B淋巴细胞无这种受体,但易测出免疫球蛋白(Ig)成分。还有两种受体:一种能与Ig的Fc分段起作用(Fc受体),一种能结合激活了的补体的某些成分(C受体),但这两种受体在T、B细胞上的相对分布还不确知。Bankhurst等人实验指出:小部分T细胞也可测出Fc受体(8%)及C受体(4％),而B细胞单有表面Ig者也仅少数,而大部分是Ig和C受体同时存在;还有相当多的淋巴细胞缺乏典型的T或B细胞标志,而具有Fc受体、C受体,或二者兼具。     

用间接抗球蛋白花环试验检测人外周血T细胞及其亚群的初步探讨

<正> 用单克隆抗体检测人T细胞亚群常用间接免疫荧光方法(简称荧光法)。除一般实验室不一定配备荧光显微镜外,有时又因荧光较弱且易退减使结果多少带有主观性。为此,本文探索抗鼠球蛋白花环试验(简称花环法)以检测已与单克隆抗体结合的T细胞及其亚群,同时与间接荧光方法进行比较。     

hdll1~(ext)-Fc融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的 :构建人dll1ext(humandelta like1extracellularregion) Fc融合蛋白的真核表达载体pEF BOSneo hdll1ext Fc,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :从人脑cDNA文库中PCR扩增人delta like1胞外段 ,通过DNA重组构建真核表达载体 pEF BOSneo hdll1ext Fc。瞬时转染COS 7细胞 ,应用RT PCR、细胞免疫荧光技术和双抗体夹心ELISA ,检测融合蛋白的表达。结果 :成功地构建了真核表达载体 pEF BOSneo hdll1ext Fc。以重组载体转染COS 7细胞后 ,RT PCR结果显示delta like1胞外段与IgG1Fc在mRNA水平正确拼接 ;细胞免疫荧光染色呈阳性反应 ;夹心ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达。结论 :成功地扩增了人delta like1胞外段 ,构建了 pEF BOSneo hdll1ext Fc真核表达载体 ,并在COS 7细胞中获得表达 ,为下一步研究奠定了基础     

IgE的Fc受体表达调节

根据IgE Fc 受体(FcεR)对IgE 的亲和性不同,将FcεR 区分为高亲和性FcεR_1(存在于肥大细胞、嗜硷细胞表面)和低亲和性FcεR_2(存在于嗜酸细胞、巨噬细胞、T/B淋巴细胞表面)。作者的研究证明FcεR_2不仅与变态反应性疾患有关,也与淋巴细胞活化机制有关。FcεR_2在细胞表面可被未知的蛋白分解     

多种小儿疾病患者外周血T细胞亚群的检测结果

<正> 本文应用抗人CD单克隆抗体(McAb)致敏的红细胞花环法检测10余种小儿疾病患儿外周血T淋巴细胞亚群,结果如下: 实验方法 一、按常规静脉采血,分离淋巴细胞,并配成     

转染FcγRⅡb1基因纠正SLE患者B细胞的过度活化

目的观察转染FcγRⅡb1基因能否纠正SLE患者B细胞的过度活化。方法构建人FcγRⅡb1基因真核载体,通过电穿孔转染SLE患者B细胞。分别采用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]和抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)2种抗体刺激B细胞,同时以正常人B细胞作对照。采用分光光度计检测激活B细胞胞内[Ca2+]i反应,3H-TdR掺入法检测B细胞的增殖能力,ELISA法检测B细胞分泌抗体的功能。结果分别以F(ab’)2anti-μ和IgG anti-μ激活SLE患者B细胞后,细胞内[Ca2+]i反应、cmp值及IgG分泌量的比值均显著低于正常人(P0.01),通过转染FcγRⅡb1基因后,这些比值均显著提高(P0.01或P0.05)。结论转染FcγRⅡb1基因能有效纠正SLE患者B细胞过度的活化、增殖及抗体分泌。     

可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对CD4~＋CD25~＋T细胞分化的作用

目的:探讨可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对小鼠淋巴细胞CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)分化的作用.方法:利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)双染技术结合流式细胞术(FCM)观察不同时间Jagged1/Fc融合蛋白及不同浓度Jagged1-Notch信号通路抑制剂DAPT对小鼠淋巴细胞表面分子CD4和CD25表达的影响.通过Luminex蛋白液相芯片技术检测Jagged1/Fc作用下T细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)的表达水平.结果:浓度为1 000 μg/L时,Jagged1/Fc在第1、 3、 5天均能增强淋巴细胞表面CD4,CD25的表达,以第3天的增强作用最为明显(P<0.01);DAPT浓度从2 μmol/L逐渐增至16 μmol/L时,对CD4、 CD25表达的抑制作用逐渐增强,以16 μmol/L DAPT的抑制作用最为明显,呈剂量依赖关系(P<0.01,r=0.96),而Jagged1/Fc能够逆转DAPT对CD4,CD25表达的抑制;Jagged1/Fc能够促进淋巴细胞培养上清中TGF-β表(P<0.01).结论:可溶性Jagged1/Fc融合蛋白可能参与诱导小鼠淋巴细胞向CD4+ CD25+ Tr分化.     

传染性心内膜炎患者的血清对淋巴细胞Fc花环形成的抑制作用

许多传染病患者循环中存在免疫复合物。传染性心内膜炎(IE)是循环中存在免疫复合物的传染病之一。Morito等曾应用抑制淋巴细胞Fc花环形成的方法检测免疫复合物。带Fc受体的淋巴细胞可与IgG包裹的红细胞形成花环,存在免疫复合物时可抑制其形成。本文报道应用致敏鸡红细胞(EA)花环抑制试验检测传染性心内膜炎患者血清中的免疫复合物。从9例IE患者采取血清标本,其中6例血培养阴性,但有IE的临床和回声心动图证据。3例培养阳性,其中2例致病菌为金黄色葡萄球菌,1例为不动细菌。9例患者都在抗菌素治疗以前采集血清,其中5例在治疗结束时再次采取血清,同时采集34名健康     

抗人淋巴细胞T8抗原样McAb的研制和初步鉴定

用杂交瘤技术,将经人外周血E花环阳性细胞免疫小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合后,产生一分泌IgG_1亚型McAb杂交瘤株。其所分泌抗体经微量放射免疫测定及间接免疫荧光法分析,表明它只能与T细胞系、76％的胸腺细胞及22％的外周血T淋巴细胞反应,不与其它各种不同细胞反应。将此抗体所识别入外周血T淋巴细胞亚群与抗Leu-2a识别T8~+细胞、抗Leu-3a识别T4~+细胞比较,发现此抗体与抗Leu-2a识别同一群细胞。此抗体能从T细胞表面沉淀出30KD(还原条件)或78KD(非还原条件)分子,并完全阻断FITC标记抗Leu-2a与T细胞的结合,说明此抗体是识别T8抗原样的McAb。     

CD_(23)及其功能

CD_(23)是人类B 淋巴细胞表面的一种分化抗原,是一种分子量为45KD 的蛋白质。最初证明是B 淋巴细胞上低亲和力的IgE Fc受体(FcεR)。最近有人研究发现它与T 淋巴细胞来源的低分子量的B 细胞生长因子(BCGFlow)活化B 细胞的信号传递有关。目前越来越多的实验表明CD_(23)具有多种功能,在控制B 细胞活化和调节IgE 方面起重要作用。