组蛋白去乙酰化酶抑制剂用于放疗增敏的分子机制研究进展

放射治疗是目前临床上最常用的治疗癌症的手段之一,但其仍存在辐射剂量高、正常组织不良反应大,以及肿瘤细胞的放疗耐受等缺点。因此,寻求安全有效的放疗增敏剂以提高肿瘤细胞对辐射的敏感性一直是放疗研究的热点。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)是一类表观遗传学修饰...     

腺病毒介导的P21WAF1/CIP1基因诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的：应用重组腺病毒载体介导的P21^WAF1/CIP1基因转染血管平滑肌细胞（VSMC），探讨P21^WAF1/CIP1基因对平滑肌细胞凋亡的诱导作用。材料与方法：P21^WAF1/CIP1的重组病毒载体转染体外培养的猪主动脉平滑肌细胞，应用RT－PCR检测外源性P21^WAF1/CIP1基因的表达，并通过细胞形态、原位细胞凋亡分析、流式细胞仪和细胞生长曲线等方法观察P21诱导VSMC凋亡，抑制VSMC增殖的情况。结果：P21^WAF1/CIP1基因的重组腺病毒载体可以有效地转入平滑肌细胞中，诱导平滑肌细胞凋亡，并能显著地抑制平滑肌细胞增殖。结论：外源性P21^WAF1/CIP1基因转移可以诱导平滑肌细胞凋亡，显著地抑制平滑肌细胞增殖。     

乏氧对人肺腺癌细胞A549细胞周期阻滞和p53表达的影响

据报道，细胞周期阻滞与放射敏感性有着十分密切的关系，乏氧可诱导细胞周期阻滞，并可导致肿瘤细胞出现G0/G1阻滞，并认为乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 a1pha，HIF-1α)是乏氧诱导细胞周期G0/G1阻滞的必需元件，但作用机理及对细胞周期阻滞的影响程度目前尚不清楚。p53作为抑癌基因，是影响细胞周期调控机理的重要基因。     

曲古抑菌素A抑制肿瘤细胞增殖及提高p21基因表达

目的:探讨组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人肿瘤细胞的杀伤作用和机制.方法:选用3种人肿瘤细胞株,即白血病细胞株HL-60、非小细胞肺癌细胞株A549、乳癌细胞株MCF-7,采用MTT法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态;用流式细胞仪定量分析肿瘤细胞增殖周期的改变;用半定量RT-PCR法测定细胞周期相关基因p21的表达.结果:TSA能有效抑制肿瘤细胞的增殖,呈剂量依赖性;在接近各细胞IC50浓度的TSA作用下,可使肿瘤细胞主要阻滞在G2/M期,而S期细胞明显减少;TSA作用48 h内即可引起细胞周期相关基因p21的表达显著增强.结论:TSA在体外能有效抑制多种人肿瘤细胞的生长,具有广谱抗肿瘤效应;其抗肿瘤生长机制可能是通过细胞周期阻滞和上调p21基因表达水平实现的.     

CyclinD1、p21WAF1、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin D1、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系。方法选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析。结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8%、40.5%、65.4%及80.0%,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0%、11.5%、0.0%、6.3%,P<0.005)。相关分析显示,cyclin D1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(P=0.001)呈正相关。生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差。Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关。Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(P=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素。结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值。     

CyclinB1、p34cdc2在X射线诱导的K562细胞G2期阻滞中的作用

细胞周期调控是机体维持细胞增殖有序性及基因组稳定性的关键 ,它的失控是肿瘤发生的重要原因之一 ,故细胞周期调控已成为近年来生命科学研究的热点课题。在包括理化因素在内的各种ＤＮＡ损伤因素作用下 ,ＤＮＡ受损伤的细胞通常通过细胞周期阻滞来赢得足够的修复时间 ,不能修复的则通过凋亡去除。细胞周期阻滞包括Ｇ1 、Ｇ2 期阻滞 ,Ｇ1期阻滞受ｐ5 3、ＷＡＦ1等基因的调控 ,而在缺失ｐ5 3基因的Ｋ5 6 2细胞中[1 ] ,Ｇ2 期阻滞则占有主导地位。笔者在采用中等剂量电离辐射作用于Ｋ5 6 2细胞时发现 ,Ｋ5 6 2细胞被诱导发生Ｇ2 期阻滞 ,因Ｇ2…     

视黄酸诱导胃腺癌细胞凋亡并上调P21／WAF1基因表达

目的 研究视黄酸（RA）对胃腺癌MGC－803细胞的作用及有关机制。方法 以荧光显微镜、透射电镜和电泳技术检测细胞凋亡,免疫组化检测细胞P21／WAF1蛋白表达。结果 RA处理的MGC－803细胞发生凋亡特征性的改变：细胞皱缩,核染色质凝集,边移,沿核膜内缘分布,呈帽形或半月形,亦可见凋亡小体的产生;基因组DNA沿核小体之间断裂,电泳得到凋亡特征性的DNA梯带;细胞P21／WAF1蛋白表达显著增高。结论 RA诱导胃腺癌MGC－803细胞凋亡与其上调P21／WAF1基因表达有关。     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中的作用

目的 探讨ｐ２１在电离辐射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞中的作用。方法 采用Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｐ２１ＷＡＦ１ ｍＲＮＡ水平的变化;采用流式细胞术检测ｐ ２１蛋白表达及细胞周期的变化。结果 ４．０ＧｙＸ射线照射后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈＧ１期ＥＬ－４细胞百分数明显高于假照射组：ｐ２１ＷＡＦ１ｍＲＮＡ水平从照射后１ｈ开始升高,４ｈ达峰值,持续至照后１２ｈ;ｐ２１ｘ蛋白表达在照射后２～４８ｈ明显增高。结论 ４．０ＧｙＸ射线照射可诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞,ｐ２１在电离辐射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞中起重要作用。     

辐射对Jurkat细胞P21蛋白及ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响

目的 探讨电离辐射对Jurkat细胞P21蛋白和ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响.方法 采用流式细胞术(FCM),检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后Jurkat细胞中P21蛋白表达的变化.采用实时定量PCR技术,分别检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后4和24 hd'鼠胸腺及脾细胞中p21基因表达的变化.结果 不同剂量X射线照射后12和24 h,Jurkat细胞中P21蛋白表达在0.5～4.0 Gy范围内均随剂量的增大而升高(t=-24.23～-3.96,P<0.05),6 Gy时均出现表达下降(t=-11.19、-14.50,P<0.05);与假照射组相比,在0～6.0 Gy照射后4和24 h,小鼠胸腺及脾细胞中p21基因的相对表达量均随剂量增大逐渐增加(t=-29.96～8.80,P<0.05);并于6.0 Gy时达最高(t=-11.84～-3.42,P<0.05),仅胸腺细胞1 Gy照射后4 h除外(t=-3.42,P>0.05).结论 x射线能诱导P21蛋白及基因表达增加,并在一定剂量范围内存在良好的剂量-效应关系.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ionizing radiation on the expression of P21 protein in Jurkat cell line and p21 gene in thymocytes and splenocytes of mice.Methods Flow cytometry (FCM)was used to analyze the expression of P21 protein in Jurkat cells at 12 and 24 h after irradiation to 0,0.5,1.0,2.0,4.0,and 6.0 Gy.Real-time PCR was used to detect the expression of p21 gene in thymocytes and splenocytes of mice at4 and 24 h after irradiation to 0,0.5,1.0,2.0,4.0,and 6.0 Gy.Multi-staining was used to analyze the micronucleus rates of Rct in bone marrow.Results The expressions of P21 protein were increased in a dose-dependent manner during 0.5-4.0 Gy(t=-24.23--3.96,P<0.05),but decreased at 6.0 Gy at 12 and 24 h post-irradiation(t=-11.19,-14.50,P<0.05).The expressions of p2 1 gene in both thymocytes and splenocytes of mice were increased in dose-dependent manner in the range of 0-6.0 Gy(including 6.0 Gy)(t=-29.96-8.80,P<0.05),and reached to the peak at 6.0 Gy at 4 and 24 h post-irradiation(t=-11.84--3.42,P<0.05),except thymocytes at 4 h and 1.0 Gy post-irradiation(t=-3.42,P>0.05).Conclusions The expressions of P21 protein and p21 gene could be increased by X-ray irradiation.which shows good dosedependent manners in certain range of dose.     

cAMP-PKA参与辐射诱导p27Kip1蛋白的表达调控

目的 研究电离辐射反应中p27^kip1表达调控机理。方法 将p27^kip1蛋白编码全长基因克隆导入原核表达载体pGEX4T-2，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后再经GSTSephrose 4B柱亲和层析、纯化，获取的GST-p27^kip1融合蛋白作为磷酸化底物，并进行体外磷酸化检测。结果 PKA具有磷酸化p27^kip1蛋白的功能，该反应能被PKA的特异性抑制剂H89所抑制；照射后细胞内源性的PKA对p27^kip1的磷酸化程度减弱。结论 cAMP-PKA在电离辐射诱导细胞周期检查点蛋白p27^kip1表达降低的调控机理中起到主要作用。     

鼻T/NK细胞淋巴瘤雌激素受体和p53蛋白表达研究

目的探讨鼻T/NK细胞淋巴瘤雌激素受体（ER）和p53蛋白（P53）表达及相关性。方法采用SP免疫组化法,对比检测30例观察组鼻T/NK细胞淋巴瘤患者、15例对照组鼻腔鼻窦鳞癌和15例正常组鼻粘膜慢性炎症组织中ER和P53表达情况。结果观察组ER和P53阳性表达率分别为30.00%和50.00%,与对照组20.00%和53.33%比较差异无显著性（P〉0.05）,但与正常组无表达比较均有显著意义（P〈0.05或P〈0.01）。观察组ER在胞浆的表达率77.78%,P53全部表达于胞核,ER和P53同时表达率为20.00%,ER和P53表达缺乏明显相关性（P〉0.05）。结论 ER和P53的表达可以作为鼻T/NK细胞淋巴瘤的诊断指标之一。     

辐射诱导人细胞系CEM、外周血单个核细胞DNA修复基因hHR21sp的表达研究

目的：研究辐射对人T淋巴细胞白血病细胞系（CEM）、外周血单个核细胞的hHR21^sp基因转录表达水平的影响及意义。方法：分别对人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和正常人外周血单核细胞在UV或γ辐射后不同时间提取细胞总RNA,通过RT－PCR与hHR21^sp基因特异引物杂交,以β-actin为内参照射像密度扫描检测人T淋巴细胞白血病细胞系CEM、单核细胞DNA修复基因表达,结果：UV－辐射、γ－辐射后早期（3－6h）, 人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和淋巴细胞hHR21^sp基因的表达水平明显增加,照射后6hhHR21^sp基因的表达水平增加最多且UV辐射更明显,在晚期（9h)降低。比较人细胞系CEM和淋巴细胞两者hHR21^sp基因的表达水平,γ辐射（3Gy)后淋巴细胞对hHR21^sp基因表达高于人细胞系CEM,且表达增加时间较长,达9h;而人细胞系CEM受到γ辐射后早期表达增加,在6－9h后表达降低,结论：人T淋巴细胞白血病细胞系（CEM）和人淋巴细胞的DNA修复基因hHR21^sp基因在一定剂量辐射（UV、γ辐射）范围内其表达水平随辐射剂量增加而诱导表达水平增高,且对UV辐射更敏感,提示hHR21^sp基因在人细胞系CEM细胞和人单核细胞在照射损后表达增加,可能是促进单核细胞损伤修复的原因之一。     

人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备

目的 制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)选择性剪接新亚型NRDRBl多克隆抗体,为NRDRBl的功能研究奠定基础.方法 扩增NRDRBl开放阅读框,重组入Gateway原核表达系统pDEST14,并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达,制备NRDRBl包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原,经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性.结果 NRDRB1在大肠杆菌B121-AI中高效表达,回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清.血清效价为1∶2 000,对NRDRB1蛋白的检测极限是6.40g.纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论 NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础.     

应激引起大鼠脑卒中时脑组织细胞与机体防御基因的表达差异

目的探讨应激引起大鼠脑卒中时细胞与机体防御基因的表达差异以及在发病学中的意义。方法应用冷刺激加高盐饮食复合刺激因素作用于Wistar大鼠,诱发大鼠高血压脑卒中作为模型,应用抑制性差减克隆技术对卒中样发作鼠和正常对照鼠脑的差异基因进行筛选。经过两轮杂交后,产生的克隆均为脑卒中鼠脑组织特异表达的序列。每组随机挑取288个克隆,进行测序及GenBankBlast生物信息分析。结果两组共有456个可用序列,经对每个与已知基因高度同源的序列以功能为参照进行分类,发现大鼠卒中后脑组织细胞与机体防御基因表达明显下调(P<001),卒中组的288个克隆中未发现运输蛋白/膜转运及应激反应相关基因的表达。结论脑组织运输蛋白/膜转运及应激反应相关基因的表达发生改变,可能是脑卒中发生的分子机制之一。