p47phox向胞膜移位调节高糖导致的内皮细胞内活性氧升高

目的探讨在高浓度葡萄糖刺激下NADPH氧化酶亚单位p47phox调节内皮细胞内活性氧升高的机制。方法Ⅱ型胶原酶法分离人脐静脉内皮细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧的生成量,western blotting和免疫荧光分别检测细胞内p47phox蛋白的表达和其细胞内的定位。结果高浓度葡萄糖刺激HUVECs内活性氧的升高;NADPH氧化酶抑制剂DPI及apo-cynin抑制高糖导致的活性氧升高;高糖刺激状态下p47phox蛋白表达量并不增加,它由胞质向胞膜移位,DPI和apocynin抑制p47phox移位。结论 p47phox通过向胞膜移位调节高浓度葡萄糖导致的HUVECs内NADPH氧化酶源性的活性氧升高。     

晚期氧化蛋白产物诱导内皮细胞产生活性氧

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对内皮细胞产生活性氧的影响及机制。方法 体外用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备AOPP-BSA,以内皮细胞株ECV304为内皮细胞模型,用VICTOR1420多标记分析系统动态检测细胞氧化2,7-二氢二氯荧光素(DCFH)产生的荧光量,间接反映活性氧的产生量。结果 AOPP能诱导内皮细胞产生活性氧。活性氧的产生量随BSA氧化程度的升高和AOPP-BSA浓度的增加而增多。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen和NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理细胞,可分别将AOPP-BSA诱导产生的活性氧抑制65%和29%。结论 AOPP能够诱导内皮细胞产生活性氧,其部分机制可能与NADPH氧化酶激活有关。     

晚期氧化蛋白产物诱导内皮细胞产生活性氧

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对内皮细胞产生活性氧的影响及机制。方法体外用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备AOPP-BSA．以内皮细胞株ECV304为内皮细胞模型，用VICTOR 1420多标记分析系统动态检测细胞氧化2，7-二氢二氯荧光素(DCFH)产生的荧光量，间接反映活性氧的产生量。结果AOPP能诱导内皮细胞产生活性氧。活性氧的产生量随BSA氧化程度的升高和AOPP—BSA浓度的增加而增多。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen和NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理细胞，可分别将AOPP—BSA诱导产生的活性氧抑制65％和29％。结论AOPP能够诱导内皮细胞产生活性氧，其部分机制可能与NADPH氧化酶激活有关。     

低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究

目的观察低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞一氧化氮(NO)与活性氧(ROS)变化的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12为研究对象,将实验分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、低糖组(2.8mmol/L葡萄糖)、无糖组(0mmol/L葡萄糖)。分别用2.8、0mmol/L葡萄糖干预HUVEC-12细胞,经过1、2、4、12h后,硝酸还原酶法测定NO产量,化学比色法测定一氧化氮合成酶(NOS)活性,Dihydroethidium荧光探针法测定细胞内ROS水平。结果与正常对照组相比,低糖组与无糖组NO水平降低(P<0.01),NOS活性下降(P<0.01),细胞内ROS水平升高(P<0.01),均呈剂量依赖关系。同一浓度组内随着时间的延长,内皮细胞NO水平、NOS活性进一步降低(P<0.01),ROS水平进一步升高(P<0.05),各指标都具有浓度和时间依赖性。结论低糖可导致内皮细胞功能障碍,NO水平降低,NOS活性下降,其机制可能与低糖导致内皮细胞氧化应激损伤有关。     

晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导单核细胞分泌肿瘤坏死因子

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对单核细胞分泌肿瘤坏死因子(TNFα)的影响及可能机制.方法 以THP-1和人外周血单核细胞为单核细胞模型,与用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA共同培养,用ELISA法检测培养上清TNFα的释放量,用VICTOR Wallac1420多标记分析系统检测细胞氧化2,7-二氢二氯荧光素产生的荧光量反映活性氧的产生量:用抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC),NADPH氧化酶抑制剂apocynin和P38磷酸化抑制剂SB20380预处理细胞,探讨AOPP诱导单核细胞分泌TNFα的可能机制.结果 AOPP-BSA能诱导单核细胞TNFα的分泌和细胞内活性氧(ROS)的产生.用PDTC预处理细胞,可以清除AOPP-BSA诱导产生的ROS,同时抑制TNFα的分泌.用apocynin抑制NADPH氧化酶及用SB20380抑制P38磷酸化均能有效地抑制AOPP-BSA诱导的TNFα分泌.结论 AOPP可能通过激活单核细胞NADPH氧化酶,释放ROS,使P38磷酸化,导致TNFα的分泌.     

晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导单核细胞分泌肿瘤坏死因子

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对单核细胞分泌肿瘤坏死因子(TNFα)的影响及可能机制。方法 以THP-1和人外周血单核细胞为单核细胞模型，与用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA共同培养，用ELISA法检测培养上清TNFα的释放量，用VICTOR Wallac 1420多标记分析系统检测细胞氧化2，7-二氢二氯荧光素产生的荧光量反映活性氧的产生量；用抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)，NADPH氧化酶抑制剂apocynin和P38磷酸化抑制剂SB203580预处理细胞，探讨AOPP诱导单核细胞分泌TNFα的可能机制。结果 AOPP-BSA能诱导单核细胞TNFα的分泌和细胞内活性氧(ROS)的产生。用PDTC预处理细胞，可以清除AOPP-BSA诱导产生的ROS，同时抑制TNFd的分泌。用apocynin抑制NADPH氧化酶及用SB203580抑制P38磷酸化均能有效地抑制AOPP-BSA诱导的TNFα分泌。结论 AOPP可能通过激活单核细胞NADPH氧化酶，释放ROS，使P38磷酸化，导致TNFα的分泌。     

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响

目的观察抗人血管内皮生长因子（VEGF）发夹状核酶对人脐静脉内皮细胞ECV304生物学特性的影响。方法将抗人VEGF发夹状核酶（RZ）基因构建的pcDNA3.1＋/RZ转染ECV304细胞,经G418筛选后,用RT-PCR法鉴定RZ基因在ECV304细胞中的转录,用MTT法和流式细胞仪检测转染前后ECV304细胞增殖活力和细胞周期,ELISA法检测细胞上清VEGF的表达水平。结果RZ基因在ECV304细胞中获得转录,它不改变细胞增殖活力和细胞周期,但能明显下调VEGF的表达。结论抗人VEGF发夹状核酶能够显著抑制ECV304细胞VEGF的表达,为进一步开展核酶的肿瘤基因治疗提供了实验依据。     

NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中的作用

目的：研究在高浓度葡萄糖刺激状态下,人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内活性氧的主要来源。方法：Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧的生成,RT-PCR及Western blot检测细胞内NADPH氧化酶4（NOX4）的表达。结果：高糖处理HUVECs后细胞内ROS升高、NOX4表达明显上调;NOX抑制剂DPI能够抑制NOX4表达的上调和细胞内ROS的升高。结论：高糖处理HUVECs时细胞内ROS升高主要来源于NOX4。     

阿托伐他汀对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制

目的 探讨阿托伐他汀（atorvastatin,Atv）对高糖环境下人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其可能的机制.方法 人脐静脉内皮细胞株低糖（5.6 mmol/L）培养贴壁后随机分为正常组（NG）、渗透压对照组（OS）、高糖组（HG）、高糖＋不同浓度药物组（HG＋0.1、1.0、10.0 μmol/L Atv）,药物培养24 h后应用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平,Western blot法检测细胞中SIRT1蛋白表达水平.结果 与正常组相比,高糖组细胞增殖减少,药物干预可改善高糖对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用,呈浓度依赖性.高糖环境下,细胞内ROS生成显著增加,SIRT1蛋白表达明显降低.阿托伐他汀可以上调高糖环境下SIRT1的表达水平,降低高糖诱导的ROS的表达增加水平,具有浓度依赖性.结论 阿托伐他汀可以对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的氧化损伤,其可能的机制与升高内皮细胞SIRT1的表达有关.     

地塞米松诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：观察地塞米松对人脐带静脉血管内皮细胞( ECV304)增殖的影响。方法：采用细胞凋亡的荧光检测法（Heochst 33342）检测地塞米松对脐静脉血管内皮细胞（ECV304）的形态学改变, MTT 法观察地塞米松对ECV304增殖的抑制作用,流式细胞仪术检测地塞米松引起的ECV304凋亡率改变。结果：较高剂量（100umol/L）地塞米松对脐静脉血管内皮细胞增殖起抑制作用,并诱导其凋亡。结论：地塞米松具有比较明显的抑制血管内皮细胞增殖的作用。地塞米松抗血管生成的机制可能与其抑制血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。