右归饮择时使用对肾阳虚大鼠生长激素昼夜节律的影响

目的　探讨右归饮择时用药在肾阳虚证治疗中的意义。　方法　采用放免法 ,以肾阳虚大鼠血清生长激素为指标 ,观察右归饮择时用药的疗效。结果　右归饮择时用药对肾阳虚大鼠症状的改善有一定作用 ,并以卯时用药效果较好。结论　右归饮治疗肾阳虚证应当提倡择时用药。     

择时吸氧对冠心病疗效的影响

冠心病的基本病理生理是心肌供血不足 ,心肌缺氧。氧疗可以提高血氧饱和度 ,保证心脏的氧需求 ,减轻心肌损伤 ,缓解心绞痛 ,减少心律失常。但是不同吸氧方式 ,对冠心病的治疗效果有何影响呢？本研究对这一方面进行探讨。１对象和方法１．１研究对象根据ＷＨＯ标准确诊的冠心病稳定型心绞痛［１］１２０名。其中男８０名 ,女４０名 ,年龄４２～６５（５６．７±３．５）岁。１．２方法选择的患者药物治疗方案一致 ,均采用消心痛、恬尔心、美多心安治疗按住院顺序编号 ,分为 :①高压氧疗组 :每次２．５ｈ ,１０ｄ１次。②指定吸氧组 :在每日三…     

荧光定量RT-PCR检测重楼功能基因表达的差异

目的 检测重楼属植物功能基因表达的差异。方法 通过使用特异性引物和SYBR Green I 结合染料实时荧光定量RT-PCK技术,以管家基因18S rDNA为参照基因,采用相对定量的方法,对重楼属的3个种3部分组织的2个功能基因进行表达差异的研究。结果 两个功能基因包括HMGCoA还原酶基因和鲨烯环氧酶基因在根和茎均高表达于叶,尤以根的表达量最高。结论 成功将KT-PCR技术应用于药用植物的功能基因研究。通过对各种条件的优化探索,建立了准确和简单易行的检测药用植物的功能基因表达的平台。     

实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究

目的研究CXCR4、CTGF、MMP-1、IL-11、MST1R、ETV-1 6种基因在鼻咽癌细胞5-8F与骨共培养前后的表达情况,分析这些基因在鼻咽癌骨转移中的作用。方法采用基于SYBR GREENⅠ法的实时荧光定量RT-PCR检测5-8F细胞与骨共培养前后骨转移相关基因的表达情况。结果5-8F细胞与骨共培养后CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1的表达水平较共培养前差异有显著性(P<0.05),均表达上调;MMP-1、IL-11则差异无显著性。结论实时荧光定量RT-PCR能够敏感、特异地检测出鼻咽癌细胞在与骨组织共培养前后的mRNA的表达变化,方法准确可靠,操作方便;CXCR4、CTGF、MST1R、ETV-1有可能成为判断鼻咽癌骨转移的潜在标志物。     

荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立

目的：构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d／j编码基因mRNA的方法。方法：根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d／i编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-TEasy质粒。质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线。利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种最佳的随机引物用于多基因表达观察。结果：标准曲线有较好的线性(r=0．999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致。用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d／j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致。结论：成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d／j基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法。     

大豆异黄酮对胰岛素抵抗大鼠抵抗素基因表达的影响

目的探讨大豆异黄酮(SIF)改善高脂高蔗糖膳食诱导大鼠胰岛素抵抗(IR)状态的作用及可能机制。方法选用高脂高蔗糖饲料诱导的IR雄性SD大鼠,根据胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组和3个SIF组(50mg/kg·bw、150mg/kg·bw及450mg/kg·bw)。各组给予相应受试物1月后,酶法检测各组动物空腹血糖、放免法检测空腹血胰岛素、酶免法检测血抵抗素含量,实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织抵抗素基因的mRNA水平。结果与模型对照组比较,450mg/kg·bwSIF组能明显降低大鼠肾周脂肪组织抵抗素基因mRNA的表达及血清抵抗素的含量。150mg/kg·bwSIF和450mg/kg·bwSIF组能显著降低空腹血胰岛素水平及IRI。3个SIF组的血糖与对照组比较差异无统计学意义。IRI与血清抵抗素水平存在着明显的正相关(r=0.355,P<0.05)。结论SIF可能具有通过下调抵抗素基因mRNA表达及降低血清含量而提高胰岛素敏感性的作用。     

左心室重建术对左心室重构的影响

目的 探讨左心室重建术对左心室重构的影响.方法 结扎14只普通级杂种犬冠状动脉, 建立左心室室壁瘤模型, 取犬正常心肌组织作为正常组;建模评估后将建模成功的犬平均分为2组, 实验组犬通过左心室重建术 (闭式折叠术) 折叠室壁瘤、重建左心室, 对照组犬则只进行开胸手术;6周后, 采集对照组、实验组犬的非手术区心肌组织, 使用实时荧光定量RT-PCR检测已采集的3个组的心肌组织AT1RmRNA、AT2RmRNA含量, 并通过透射电镜观察各组心肌组织的超微结构.结果 与正常组相比, 实验组和对照组非手术区心肌组织中AT2R mRNA表达显著更高 (P<0.05) , AT1R mRNA的表达显著更低 (P<0.05) , AT2R mRNA/AT1R mRNA比值显著更高 (P<0.05) .相较于对照组, 实验组非手术区心肌组织中AT2R mRNA的表达显著更低 (P<0.05) , AT1R mRNA的表达显著更高 (P<0.05) , AT2R mRNA/AT1R mRNA的比值显著更低 (P<0.05) ;与正常组相比, 实验组和对照组非手术区心肌组织电镜下都有心室重构 (心肌间质内可见胶原蛋白沉着明显, 胶原纤维明显增多) 和心肌损害 (心肌细胞内肌原纤维间隙增大, 细胞质水肿, 线粒体部分嵴断裂) 的超微结构表现;与对照组相比, 实验组的非手术区心肌组织电镜下心室重构和心肌损害程度小于对照组.结论 左心室重建术在一定程度上可以延缓左心室重构的发生, 降低心肌组织的损害程度, 有助于预防心室重构的发生及改善心室重构的预后.     

表达重组干扰质粒对Tca8113细胞c-erbB-2、Bcl-2基因表达干扰作用的实验研究

目的：探讨表达重组干扰质粒（RNAi技术）对人舌鳞癌细胞株（Tca8113）细胞中c-erbB-2、Bcl-2基因表达的干扰效率.方法：按siRNA设计原则设计针对c-erbB-2、Bcl-2基因的Oligo DNA,体外化学合成Oligo DNA,Oligo DNA退火、连接、转化、筛选克隆,构建针对c-erbB-2基因的表达重组RNA干扰质粒（psiC1、psiC2、psiC3）和针对Bcl-2基因的表达重组RNA干扰质粒（psiB1、psiB2、psiB3）,细胞脂质体转染Tca8113细胞,Real-time RT-PCR的标准曲线、扩增曲线和熔解曲线的数据收集处理,采用荧光定量RT-PCR方法检测重组干扰质粒对Tca8113细胞中c-erbB-2、Bcl-2基因表达的干扰效率.结果：实时荧光定量RT-PCR方法检测psiC1、siC2、psiC3质粒脂质体转染后c-erbB-2基因的表达情况结果显示psiC2、psiC3相对于对照组均有不同程度的干扰效果,psiC1相对于对照没有干扰效果.psiC2的干扰程度较大为62.68%,psiC3的干扰程度较小为40.61%.psiB1、psiB3相对于对照组无明显干扰效果,psiB2的干扰程度高达66.20%.结论：针对c-erbB-2、Bcl-2基因的表达重组RNA干扰质粒psiC2（gAgTCCCAACCATgTCAAA）、psiB2（CCgggAgATAgTgATgAA）能有效沉默Tca8113细胞中c-erbB-2、Bcl-2基因的表达.     

中医择时用药疗法初探

对散见于中医古籍中有关择时用药的方法和经验进行了发掘和整理研究,总结了中医择时用药疗法的9种具有一定规律性的倾向性意见。即:温阳补肾药宜平旦服;滋养阴血药宜入夜服;益气升阳药宜午前服;安神镇静药宜临卧服;宣泄利湿药宜五更服;平肝熄风药宜暮时服;发汗解表药宜午前服;截疟方药宜发作前服;驱除肠虫方药宜空腹顿服。     

乌龙丹对慢性脑缺血大鼠松果体钟基因表达的影响

目的初步探讨慢性脑缺血对大鼠睡眠钟基因表达的影响及乌龙丹对其的调控作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、乌龙丹给药组。采用改良式双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,造模3周后,灌胃给药3周,并持续监测各组大鼠体重,应用实时荧光定量PCR检测大鼠松果体钟基因Clock、Bmal1、Per1表达的变化。结果模型组较假手术组Clock mRNA、Per1mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),Bmal1基因表达无显著差异(P>0.05);乌龙丹给药组的Clock基因水平高于模型组(P<0.01),Bmal1基因表达较假手术组降低(P<0.05),Per1无显著变化(P>0.05)。结论慢性脑缺血可能成为睡眠障碍的潜在病因,乌龙丹对慢性脑缺血引起的睡眠障碍有一定的治疗作用。     

常山酮对人急性单核细胞白血病细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的：研究常山酮对人急性单核细胞白血病（THP-1）细胞增殖、凋亡及Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响.方法：取对数生长期的THP-1细胞,分别加入不同浓度的常山酮,CCK-8法检测THP-1增殖率;流式细胞术检测THP-1凋亡情况;实时定量PCR检测Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况.结果：常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,呈剂量依赖关系.常山酮作用后,THP-1细胞内Bax mRNA表达显著升高,而Bcl-2 mRNA表达显著下降.结论：常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax mRNA表达、下调Bcl-2 mRNA表达相关.     

干扰Gnb21l对节律基因mPer1表达的影响

目的研究干扰Gnb211表达对节律基因mPer1表达的影响。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（Phorbol 12-Myristate 13-acetate,PMA）诱导NIH3T3细胞,使其节律基因稳定表达,然后用脂质体介导法将pGenesil-1／Gnb211质粒（实验组）及pGenesil-1／vector质粒（对照组）分别转染入NIH3T3细胞中,采用RT—PCR半定量技术检测不同时间点NTH3T3细胞中Gnb2l1及mPerl mRNA的表达水平的变化情况。结果实验组比对照组的白6221以及roPer1 mRNA的表达量均明显降低（P〈0．05）,但经余弦分析比较两组的mPer1表达周期无明显改变。结论干扰Gnb2l1使节律基因mPer1表达量降低。     

不同摄食模式对小鼠生物钟及脂质代谢基因节律的影响

目的：研究不同摄食模式对ICR小鼠脑内及肝脏生物钟基因表达的影响。方法：将90只雄性ICR小鼠分为自由摄食组、明期摄食组和暗期摄食组,每 组30只,12 h与12 h明-暗交替条件下喂养两周。以4 h为间隔,每组分别在08∶00、12∶00、16∶00、20∶00、0∶00、04∶00时间点各处死5只小鼠取脑和肝脏 ,检测各时间点小鼠脑和肝脏组织内各生物钟及钟控基因的表达。结果：与肝脏相比,脑内节律振荡器更易受摄食方式的影响;且暗期摄食使脑内Cry2、Per1 、Per2的峰值分别下调了81.8%、76.7%、85.9%,对脑内节律振荡器的影响更为显著。而暗期摄食条件下肝脏各生物钟基因的表达模式与自由摄食条件 下相似。此外,与自由摄食组相比,明、暗期摄食条件下,Rev-erbα和Dbp的峰值均明显下调（下调了50%、90.5%和70.6%、64.3%）,且Rev-erbα、 Dbp的表达模式在两种摄食条件下相反。明、暗期摄食条件下,肝脏脂质代谢基因SREBP1-c、PPARα、FAS、CPT的表达模式不同,且明、暗期摄食均下调了 肝脏脂质代谢基因SREBP1-c和PPARα的表达水平（分别下调了81.8%、75.0%和4.75%、79.2%）。结论：改变固有的摄食方式会夹带小鼠脑和肝脏内节 律振荡器,肝脏中各节律振荡器均与摄食（时间）相偶联。     

Per1和Per2基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立

Per1和Per2是时钟基因和抑癌基因，其异常表达与生物体昼夜节律紊乱和对癌症的易感性存在密切联系。与传统mRNA定量方法相比，SYBR Green Ⅰ实时荧光聚合酶链反应具有简便、高效、成本低、准确性高、线性范围广的特点。本文建立了基于SYBR Green Ⅰ实时荧光聚合酶链反应的Per1和Per2基因的定量检测系统，为进一步研究不同疾病状态下时钟基因和昼夜节律的变化打下基础。     

基于阴阳、营卫学说探讨生物钟基因对睡眠昼夜节律的影响

昼夜节律是自然界中普遍存在的生理现象,周期接近于24 h,以CLOCK、BMAL1、PER、CRY等核心生物钟基因的节律性表达为分子基础.大量研究表明,生物钟基因与睡眠关系密切,视交叉上核(SCN)作为中枢时钟启动节律后,形成一系列表达生物钟基因的转录翻译反馈环路(TTFL)调控机体的昼夜节律震荡,在睡眠稳态系统和生物...     

非小细胞肺癌中Per2的表达及其与预后的关系

目的：研究生物钟基因Per2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与预后的关系。方法：采用免疫组织化学染色法检测60例NSCLC组织和20例正常肺组织中Per2的表达,结合临床病理和随访资料进行分析。结果：在NSCLC组织和正常肺组织中Per2的阳性表达率分别为71.7%（43/60）和95.0%（19/20）,差异有统计学意义（P〈0.05）。NSCLC中Per2的表达缺失与分化程度及TMN分期相关（P〈0.05）,单因素分析结果表明Per2的表达状态与NSCLC的预后相关（P〈0.05）,多因素分析结果显示分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况及Per2的表达状态均非影响NSCLC预后的独立危险因素（P〉0.05）。结论：Per2在NSCLC中表达降低,其阴性表达在NSCLC的发生和发展中起重要作用,影响NSCLC的预后。     

胰高血糖素样肽-1对高脂饲养大鼠卵巢生物钟节律的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对高脂饲养大鼠受损卵巢生物钟的治疗作用。方法 Wistar大鼠随机分为普通饲养组、高脂饲养组及高脂饲养+GLP-1干预组;8周后测空腹血糖、胰岛素、胆固醇、甘油三酯、雌二醇、卵泡刺激素、黄体生成素的水平;实时定量PCR检测卵巢相关基因及生物钟基因的表达。结果 GLP-1对高脂饲养大鼠血清生化指标产生一定影响。与普通饲养组相比,高脂饲养组大鼠始基卵泡募集因子抗苗勒氏管激素(AMH)、生长分化因子-9(GDF-9)的表达水平降低(P<0.05),而高脂饲养GLP-1干预组AMH、GDF-9的mRNA的表达明显改善。此外,与普通饲养组相比,高脂饲养组大鼠卵巢生物钟相关基因的表达具有明显变化,而GLP-1可改善高脂饲养对卵巢生物钟相关基因表达的影响。结论 GLP-1对高脂饲养所致的卵巢生物钟受损具有改善作用。     

脑胶质瘤组织中Per1和Per2的表达及临床意义

目的探讨生物钟基因Per1和Per2在人脑胶质瘤细胞和周围正常脑组织中的表达特征。方法采用免疫组化方法检测33例在不同级别的脑胶质瘤和周围正常组织中,生物钟基因Per1和Per2蛋白的表达。结果Per1和Per2在正常脑组织中阳性表达率均为100%;Per1在胶质瘤组织中阳性表达率为84.85%(28/33),Per2在胶质瘤组织中阳性表达率为69.70%(23/33);Per1在胶质瘤Ⅰ-Ⅱ级表达强度高于Ⅲ-Ⅳ级,Per2在胶质瘤Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ-Ⅳ级的表达强度无明显差异。结论生物钟基因Per1和Per2在胶质瘤与正常脑组织存在着阳性表达,Per1表达强度与胶质瘤的恶性程度呈负相关系。     

帕金森病患者外周血白细胞中时钟基因Bmall和Bmal2的表达

目的 研究帕金森病患者时钟基因的表达,探讨帕金森病的分子时钟机制.方法 实验对象为17例帕金森病(PD)患者(9例男性,8例女性)和16例正常人对照(9例男性,7例女性),分别在夜间21:00、00:00、06:00和09:00四个时间点取血样,用实时定量RT-PCR检测时钟基因Bmall和Bmal2的mRNA表达水平.结果 PD患者中,Bmall在21:00、00:00、06:00的表达水平与正常对照差异具有显著性:21:00[(22.17 4±4.09),(51.14±8.31),P=0.003];00:00[(30.30 4±5.45),(100.00 4±24.71),P=0.008];06:00[(19.02 ±3.33),(65.61±14.11),P=0.002].Bma12在21:00、00:00的表达水平与正常对照差异有显著性:21:00[(48.09±7.40),(84.96±9.34),P=0.005];00:00[(65.85±7.88),(100.00±11.78),P=0.025].结论 PD患者的周围分子时钟发生了改变.PD患者时钟基因Bmall和Bma12在外周血的相对表达水平明显减低,为疾病监控和研究疾病对药物的反应性提供分子基础.

Abstract：

Objective To study the expression of clock genes in Parkinson's disease(PD) and also the molecular clock machinery of PD.Methods Seventeen PD patients(nine men,eight women)and sixteen agematched controls(nine men,seven women) were investigated in this study.Bload samples were collected over a 12h span at 21:00,00:00,06:00 and 09:00.Using a real-time PCR assay,the peripheral molecular clock was examined by measuring Bmall and Bmal2 expression in total leukocytes during the dark span(from 21:00 to 09:00)in PD patients and age-matched healthy controls.Results At PD,the relative abundance of Bmall was significantly lower at 21:00,00:00 and 06:00(21:00:(22.17±4.09)vs(51.14±8.31),P=0.003,00:00:(30.30±5.45)vs(100.00±24.71),P=0.008,06:00:(19.02±3.33)vs(65.61±14.11),P=0.002).The relative Bmal2 levels in PD patients were significantly less abundant than controls at 21:00 and 00:00(21:00:(48.09±7.40)vs(84.96±9.34),P=0.005;00:00:((65.85±7.88)vs(100.00±11.78),P=0.025).Conclusion These results suggest that a peripheral molecular clock is altered in PD patients.In addition,the relative abundance of Bmall and Bmal2 was significantly lower in PD patients versus control subjects,which can provide a molecular basis to help monitor disease progression and response to investigational drugs.