hTERT基因永生化人毛乳头细胞系的转化特征

目的 探讨hTERT基因永生化人毛乳头细胞系是否具有转化特征.方法 采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养.应用RT-PCR 法检测 hTERT mRNA 的表达.采用细胞形态学观察、染色体核型分析、软琼脂克隆形成实验和裸鼠致瘤实验分析转染细胞是否具有转化特征.结果 转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,现已连续传至50代.检测证实转染细胞稳定表达hTERT mRNA,细胞形态与未转染细胞基本相同,染色体核型正常,在软琼脂内不能生长,无裸鼠致瘤性.结论 hTERT基因永生化人毛乳头细胞系基本上是正常细胞而无明显转化特征.     

HBsAg和抗—HBs同时阳性患者的传染性及随访

在1660份HBsAg阳性血清中,112份血清检出抗-HBs(6.75％),HBsAg与抗-HBs同时阳性的血清中,49.1％HBeAg阳性,46％HBV-DNA阳性,提示此种血清近半数具有传染性。对36例HBsAg与抗-HBs同时阳性的慢性HBV感染者进行为期2～30月的随访观察,72％病例抗-HBs仅短暂出现,无一例HBsAg转阴,表明慢性HBV感染患者出现此血清学模式并非预示HBV行将消除。     

人源性治疗性抗体的应用与制备进展

治疗性抗体在疾病的诊断和治疗方面具有重要意义。鼠源性单克隆抗体的临床应用受限于诱导产生人抗鼠抗体、亲和力低和半衰期短等,随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成熟,人源性治疗性抗体飞速发展,在肿瘤治疗、自身免疫性疾病的治疗、感染性疾病的治疗及减轻移植排斥反应、体内定位诊断、免疫调节等方面发挥重要作用。本文综述了治疗性抗体在肿瘤及免疫、移植等疾病中的治疗应用及人源性治疗性抗体的制备。     

永生化人成牙本质细胞样细胞系的建立

目的：建立永生化人成牙本质细胞系．方法：采用脂质体转染法，将人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因导入原代人成牙本质细胞样细胞．培养液加G418筛选约1mo后，抗性细胞克隆形成，滤纸片法转移、扩增并连续培养．检测转染细胞内hTERT的基因整和和表达，初步分析细胞系的生物学特征．结果：hTERT稳定转染入目的细胞，表达mRNA及其蛋白．转染后共获得5个细胞克隆，克隆5b来源的细胞在体外长期连续培养下生长良好，具有较高碱性磷酸酶活性，在转录水平表达成牙本质细胞特异性标志牙本质涎磷蛋白，细胞核型正常．该细胞系至今传代56代，约6mo，命名为hTERThOd-L结论：建立起永生化人成牙本质细胞样细胞系．     

采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库

目的 采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源抗肾癌抗体基因库.方法 分离肾癌患者的外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法 扩增抗体全长Kappa型轻链(LCκ)和重链可变区(VH)基因,分别插入载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOP010,构建轻、重链抗体基因库,然后将轻、重链抗体基因库联合转染293T细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达.结果 成功构建IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库,随机挑选的克隆经DNA序列分析显示轻、重链库的序列正确性达90%(9/10)和80%(8/10),流式细胞仪分析显示来自轻、重链库的上述克隆各有7个可检测到相应基因在293T细胞表面的表达,可表达抗体库库容量高达7.5×1010.结论 IgG1-Kappa型抗肾癌抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,抗体的多样性为下一步筛选特异性抗体奠定良好的基础.     

抗人BPI抗体对猪源BPI体外生物活性的增强作用

目的：确认抗人杀菌性／通透性增加蛋白（Bactericidal/permeability increasing protein,BPI)多克隆抗体和单克隆抗体对猪源BPI杀菌及结合内毒素活性的增强作用。方法：采用肉汤培养法测定BPI在有或无抗人BPI抗体存在情况下猪源BPI对大肠杆菌J5的杀菌率变化；采用鲎基质显色法测定BP1与抗体孵育30min后其结合内毒素能力的改变。结果：抗人BPI多克隆抗体和单克隆抗体加入后，猪源BPI的杀菌活性不仅不降低，反而增加，而抗体本身并不具有杀菌性，非抗BPI抗体也无此效应；同时抗人BPI多克隆抗体和单克隆抗体可增加猪源BPI的结合内毒素活性。结论：抗人BPI多抗或单抗不仅能增加猪源BPI的杀菌活性，而且能增加其结合内毒素活性。     

抗HBsAg人源噬菌体抗体重链基因的序列分析

应用噬菌体抗体库技术筛选抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体重链基因，并用基因序列分析技术对其进行序列分析。结果：筛选出抗ＡＢｓＡｇ人源噬菌体抗体并发现其重链基因序列与人免疫球蛋白重链基因序列同源性可达９５％以上，且与人免疫球蛋白第Ⅲ家族的框架区基因序列同源性均可高达９７％。结论：筛选的抗ＨＢｓＡｇ人源噬菌体抗体的重链基因属于人免疫球蛋白基因第Ⅲ家族成员。     

重组人源细胞珠蛋白单抗制备及检测方法建立

目的 制备重组人源细胞珠蛋白(recombinant human Cytoglobin,rhCygb)单克隆抗体,并建立检测该蛋白双抗体夹心ELISA法,为下一步研究rhCygb药代动力学做准备.方法 用纯化的rhCygb免疫BALB/c小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法获得抗rhCygb的单克隆抗体杂交瘤细胞,间接E...     

抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备和纯化

目的制备并纯化前期工作建立的杂交瘤细胞株C5所分泌的抗人肺鳞癌单克隆抗体,为研究该单抗对应肺癌相关抗原的生物学功能奠定基础.方法常规培养前期工作建立的C5杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化培养,ELISA法检测培养上清,挑选检测阳性细胞继续克隆化培养,直至3次检测亚克隆均呈阳性.收集阳性培养上清,利用Protein A-sepharoseCL-4B亲和层析法纯化抗体,Western-Blot法对纯化后的抗体进行鉴定.结果得到了来源相同的亚克隆杂交瘤细胞株,克隆阳性率达100%.成功纯化出了目的单克隆抗体,并证实纯化产物系目的单抗,纯化后的C5杂交瘤细胞单克隆抗体重链分子量约为75 kDa.结论成功纯化出抗人肺鳞癌单克隆抗体,该单抗可能在肺癌的早期诊断、靶向治疗和肿瘤疫苗的研制等方面具有重要意义和潜在应用价值.     

南通市乙肝疫苗接种后免疫应答影响因素分析

目的:探讨乙肝疫苗接种人群免疫应答状况和保护性抗体衰减影响因素。方法:采用多阶段分层随机抽样的方法,对全市1~59岁人群共3 630例进行乙肝血清流行病学问卷调查,并用酶联免疫吸附试验检测HBsAg、抗-HBs和抗-HBc。结果:检测3 619例,抗-HBs阴性者1 996例(55.15%)。多因素非条件Logistic回归模型提示,年龄、性别、免疫次数和免疫年限与乙肝疫苗免疫应答的效果存在密切联系。结论:乙肝疫苗接种后免疫应答随着时间的推延呈现削减状态,推行乙肝疫苗的加强免疫策略和成人的补种工作应该是今后乙肝防治工作的重点。     

1例接种乙肝疫苗后偶合颅内出血病例的报告分析

宝安区发生 1例接种乙肝疫苗后偶合颅内出血的罕见病例。现报告如下。1　事发经过患儿 ,男 ,2 0 0 3年 5月 7日出生 (在家旧法接生 ,足月顺产 ,出生体重 2 80 0g)。家长自诉该婴儿于 5月2 9日 10∶30左右 ,在宝安区某计免接种门诊右臂三角肌注射 0 5ml乙肝疫苗 (北京生物制品所生产 ,批号2 0 0 2 0 4 0 10 8,失效期 2 0 0 4年 6月 ,由深圳市疾病预防控制中心采购 ) ,当天 15∶0 0时发现注射局部不能自行止血 ,伴低热 (T38℃ ) ,未作任何处理。第 2d情况未见好转 ,还出现烦躁、呕吐。以“新生儿黄疸、出血”行查收入区人民医院治疗。2　诊…     

成人乙肝疫苗接种成功率与疫苗接种剂量的关系分析

目的通过对成人乙肝疫苗接种资料统计分析,了解成人乙肝疫苗接种成功率与乙肝疫苗剂量的关系,为今后乙肝疫苗接种工作提供可靠依据。方法对2005-2008年甘肃省疾病预防控制中心疫苗接种室成人乙肝疫苗接种情况（接种程序、剂量）及接种成功率进行统计分析。结果对成人进行20μg组（酵母）乙肝疫苗按程序接种,免疫成功率高于10μg组（酵母）乙肝疫苗接种成功率。结论成人接种乙肝疫苗首选20μg组（酵母）乙肝疫苗并按程序接种,或10μg程序接种失败后,进行20μg组（酵母）乙肝疫苗按程序重新接种。     

Post vaccination antibody titres of hepatitis B surface antigen (anti-HBs) in a mixed cohort of health care workers

BackgroundHepatitis B (HepB) is an important vaccine preventable infection among healthcare workers (HCWs). Vaccination against Hep B virus, remains the foremost preventive approach. This study aims to measure the antibody titres to Hep B surface antigen (anti-HBs) in a mixed cohort of HCWs. It also aims to study the association between time since vaccination and the anti-HBs titres thus evaluating the duration of seroprotectionMethodsA total of 200 HCWs, including nursing students (n = 112), nursing staff (n = 49), laboratory technicians (n = 30) and doctors (n = 9) who had received all three doses of the Hep B vaccine and met the inclusion criteria of having taken all three doses of vaccine were included in this study. Anti-HBs titres were estimated by bioMérieux mini VIDAS® automated immunoassay based on the principle of enzyme-linked fluorescence assay.ResultsTwo hundred subjects aged 19 to 52 years were included in the study; mean age was 27.29 ± 0.568 years. Duration since vaccination in the study cohort was ≤ 5 years in 149 (74.5.0%), 6–10 years in 20 (10.0%) and >10 years in 31 (15.5%) subjects. Postvaccination antibody titres were > 100 mIU/ml in 85.0%, 10-100 mIU/ml in 11.0% and ≤ 10 mIU/ml in 3.5%. There was a decline noted in antibody titres as duration after vaccination increased. Increasing age was associated with falling protective titres.ConclusionThe study revealed that majority of the HCWs had adequate anti-HBs titres and were protected after vaccination.     

Impact of thimerosal-related changes in hepatitis B vaccine birth-dose recommendations on childhood vaccination coverage

Context  In July 1999, the longstanding preference to begin hepatitis B vaccination of all US infants at birth was temporarily suspended because of concerns about exposure to mercury contained in the vaccine preservative thimerosal. The suspension was lifted in September 1999 when preservative-free hepatitis B vaccine became available. Objective  To determine the effects of changes in recommendations regarding administration of a hepatitis B birth dose on vaccination coverage. Design, Setting, and Participants  Cohort analysis of vaccination status of 41 589 US children born before, during, and after the recommendation to suspend the birth dose. Main Outcome Measures  Association between birth cohort and age at receipt of hepatitis B vaccine dose 1, and receipt by 19 months of age of all recommended vaccines. Results  The proportion of US infants who received dose 1 of hepatitis B vaccine at birth declined from 47% among those born 7 to 12 months before the suspension to 11% among those born during the suspension. Birth-dose coverage remained significantly lower in the year after the suspension was lifted (23% in the first 6 months and 33% in months 7-12). Coverage with 3 doses of hepatitis B vaccine by 19 months of age declined from 88% among those born 7 to 12 months before the suspension to 81% among those born during the suspension and 85% among those born in the 6 months after the suspension, but returned to baseline levels for those born 7 to 12 months after the suspension was lifted. These reductions represent 750 000 fewer newborns vaccinated during 2000 compared with 1998, and an excess 182 000 children undervaccinated for hepatitis B at 19 months of age compared with 1998 coverage levels. Coverage with other recommended vaccinations did not decline over this time. Conclusions  Reductions in hepatitis B vaccine birth-dose coverage persisted after recommendations were made to resume previous newborn vaccination practices. Although the recommendation to complete the series by 19 months of age was never changed, infants born between July and December 1999 were less likely to have completed the series by 19 months, compared with infants born during the previous year. The lack of impact on other vaccinations suggests that public confidence in immunization remained strong.      

技校学生乙肝疫苗接种情况对HBsAg携带情况的影响

乙型肝炎疫苗预防效果已得到认同，人群中乙型肝炎疫苗接种率逐年提高，为了解邹城市青少年近年来乙型肝炎疫苗接种对HBsAg携带情况的影响，同时为进一步全面推广和规范乙型肝炎疫苗接种提供科学依据，我们对1998～2003年技校人校新生乙型肝炎疫苗接种情况和HBsAg携带情况进行对比分析，现将结果报告如下。     

深圳市乙肝疫苗免疫失败者S基因分析

目的了解乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因的变异情况。方法采用流行病学、ELISA与分子生物学方法,筛选乙肝疫苗免疫失败者。采用聚合酶链反应（PCR）、基因克隆和测序的方法,对乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因进行分析,并与HBV参考序列s基因进行比较,分析其变异情况。结果从2564份受检者中．筛选出2例（0．78％e）HBsAg（-）／HBeAg（＋）／HBcAb（＋）乙肝疫苗免疫失败者（HBsl、HBs2）,经HBVDNA荧光定量PCR检测和HBVS基因PCR扩增,结果均为阳性,为B基因型。其S基因序列与参考序列（JX429908．1）相比,同源性为98．57％,且乙肝疫苗免疫失败者s基因在第363位和第467位分别由野生型的C变为A、G变为A,HBsAg121位和156位氨基酸C和w缺失。结论乙肝疫苗免疫失败者HBVS基因上第363位和第467位碱基存在错义突变（C→A和G→A）,改变了HBsAg的结构和抗原性。     

昌江县1～5岁儿童乙肝疫苗接种及乙肝病毒感染的调查

为了解昌江县目前1～5岁儿童开展乙肝疫苗接种及HBsAg携带状况以及血清免疫学效果，于2004年6月8日对昌江县的海尾镇(海农、海渔村)、乌烈镇(峨港村、乌烈村)、叉河镇(唐村、叉河村)进行调查，现将调查报告总结如下。     

维持性血液透析患者乙肝病毒感染及乙肝疫苗接种现状分析

目的调查维持性血液透析患者乙型病毒性肝炎的感染现状以及乙肝疫苗的接种情况。方法纳入2009年1月~2013年5月间河北省秦皇岛市北京军区北戴河二八一医院维持性血液透析患者601例(血透组),同时选取健康体检者938人作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb),并问卷调查乙肝疫苗接种情况。结果血透组和对照组五项指标的阳性率除HBeAg外差异均有统计学意义(P<0.05)。乙肝病毒感染率(HBsAb单独阳性除外)血透组和对照组分别为5.16%和1.81%,二组间差异有统计学意义(P<0.05)。血透组接种过乙肝疫苗的有174人(29.0%),其中101人(58.0%)HBsAb阳性,其余阴性。对照组接种过乙肝疫苗的有287人(30.6%),其中206人(71.8%)HBsAb阳性。未接种的原因主要是认为注意卫生就没必要接种或怀疑免疫效果。结论应加强医源性感染的控制以及积极推广乙肝疫苗接种,以减少维持性血液透析患者的乙肝病毒感染率。     

HBsAg与抗-HBs同时阳性乙型肝炎血清56例临床分析

目的　探讨 HBs Ag、抗 -HBs同时阳性的乙型肝炎患者血清学标志物 (HBV-M)模式及 HBV感染状态。方法　 56例 HBs Ag、抗 -HBs均阳性的乙型肝炎患者分别采用 EL ISA法及PCR法进行 HBV-M检测及 HBV DNA检测。结果　 56例 HBV-M模式中其他 HBV血清学指标分别为 HBe Ag阳性 40例 (71.4% ) ,抗 -HBe阳性 4例 (7.14 % ) ,抗 -HBc阳性 53例 (94.6% ) ,抗 -HBc Ig M阳性 13例 (2 3 .2 % )。 12例进行血清 HBV DNA检测 ,阳性率 2 5.0 % (3 / 12 )。结论　 HB-s Ag、抗 -HBs同时阳性者其他血清 HBV-M模式复杂多样 ,并仍可有 HBV持续复制