PRMTs在肿瘤发生、发展中的作用及机制*

蛋白精氨酸甲基转移酶（PRMTs）具有催化细胞中多种蛋白质特定精氨酸残基甲基化的功能,参与了包括信号转导、转录调控和DNA重组等重要的生物学过程,其中蛋白精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）是研究最为深入的PRMTs家族成员,在多种类型的肿瘤中高表达,其通过催化特定精氨酸残基单甲基化和对称双甲基化,在调控各种生物学过程中发挥关键作用,包括调控靶基因的转录、控制关键的生长调节途径、调控转录因子的表达等。本综述系统介绍PRMT5通过甲基化细胞中的各种蛋白,发挥表观遗传调节酶的作用,其异常表达在肿瘤的发生、发展及侵袭过程中的作用及其机制。未来,PRMT5可以作为肿瘤检测和治疗的新靶点。     

蛋白精氨酸甲基转移酶5抑制剂研究进展

蛋白精氨酸甲基转移酶(PRMTs)对组蛋白和非组蛋白的翻译后修饰在生物学过程中起到了非常重要的作用.PRMT5是精氨酸残基对称双甲基化的主要酶,已被视为肿瘤治疗的潜在靶点.在过去10年中,发现和开发PRMT5抑制剂已经成为科研人员关注的热点.本文介绍了PRMT5的结构、生化功能以及其与肿瘤的相关性,同时就目前在研的PR...     

PRMT1-ADMA-DDAH1代谢轴在糖尿病大鼠胰腺中的表达及普罗布考的干预影响

目的 观察PRMT1-ADMA-DDAH1代谢轴在糖尿病大鼠胰腺中的表达,及普罗布考对其表达和胰岛功能的影响.方法 将30只雄性SD大鼠分为正常对照组(C组,n=10)、糖尿病组(D组,n=10)、糖尿病普罗布考干预组(P组,n=10).用高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,干预组以普罗布考500 mg/(kg·d)灌胃.药物干预8周后收集3组大鼠胰腺组织,ELISA法检测ADMA的浓度,用RT-PCR检测PRMT1、DDAH1 mRNA的表达,Western blot观察PRMT1蛋白的表达,免疫组化法观察胰岛素和PRMT1的表达;同时采集3组大鼠的血液标本,测定胰岛功能指标空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)及氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的水平.结果 C、D、P组大鼠胰腺组织中ADMA的浓度分别为(464.50±53.83)、(1 255.34±188.00)、(891.72±52.10)μmol/L,D组、P组明显高于C组(P<0.01),P组显著低于D组(P<0.01);D组和P组大鼠的PRMT1 mRNA表达明显高于C组(P<0.01)、但P组明显低于D组(P<0.01),与C组相比,D、P组大鼠DDAH1的mRNA表达明显降低(P<0.01),与D组相比,P组中DDAH1的mRNA表达明显升高(P<0.01);Western blot和免疫组化的结果显示,D组与P组的PRMT1蛋白表达明显高于C组(P<0.01);而P组又明显低于D组(P<0.01).结论 糖尿病状态下,大鼠胰腺组织的PRMT1-ADMA-DDAH1代谢轴中PRMT1的表达升高,DDAH1的表达降低,导致ADMA的浓度升高,加剧氧化应激,使胰岛功能下降.而普罗布考通过其抗氧化作用,可以在一定程度上调节糖尿病状态下胰腺的PRMT1-ADMA-DDAH1代谢轴的表达,从而抑制氧化应激,改善胰岛功能.     

哮喘大鼠肺组织白血病抑制因子的表达及地塞米松干预研究

目的探讨哮喘大鼠肺组织中白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的表达及其意义.方法制作卵蛋白致敏大鼠哮喘模型,采用RT-PCR和Western-blot方法观察LIF在致敏大鼠肺组织中的表达.结果LIF蛋白表达量在哮喘组为(40832±12964),均较地塞米松组(16160±2108)和对照组(23110±8018)升高,差异有显著性(P＜0.01),地塞米松组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).LIFmRNA的相对表达量哮喘组为(0.51±0.13),均较地塞米松组(0.18±0.05)和对照组(0.24±0.02)明显增高,差异有显.著性(P＜0.01),地塞米松组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).结论LIF在致敏哮喘大鼠模型肺组织中表达显著增高,LIF作为神经免疫调节因子,可能参与了哮喘的发病机制.     

心复康口服液对压力超负荷大鼠心肌ND4表达的影响

目的 探讨心复康口服液对压力超负荷心衰大鼠心肌线粒体ND4 mRNA和蛋白表达的影响.方法 240只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为3组:假手术组、腹主动脉缩窄模型组(模型组)、心复康口服液治疗组(治疗组).采用腹主动脉部分缩窄法制作心衰大鼠模型,RT-PCR和Western blot检测分别大鼠第4、8、12周心肌线粒体ND4 mRNA和蛋白的表达.结果 ①术后第8周,与假手术组比较,模型组大鼠ND4 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,治疗组ND4 mRNA表达升高(P<0.01),ND4蛋白表达也升高(P<0.05).②术后第12周,与8周时比较,模型组大鼠ND4 mRNA含量降低(P<0.05),ND4蛋白显著降低(P<0.01);与同期模型组比较,治疗组ND4 mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01),较8周时也均显著升高(P<0.01).结论 心复康口服液可上调压力超负荷心衰大鼠心肌线粒体ND4 mRNA的表达,提高心肌细胞ND4蛋白含量,改善心肌能量生成障碍.     

白细胞介素－4通过上调蛋白质精氨酸甲基转移酶1的表达水平引起对氧磷酶2的精氨酸甲基化修饰

目的 验证质谱筛选的结果,确定对氧磷酶2(PON2)是否为蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)的底物蛋白。方法 用白细胞介素-4(IL-4)刺激A549细胞后,用免疫沉淀法捕获发生精氨酸非对称性二甲基化修饰的蛋白,用梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析捕获的蛋白,通过银染显示差异性条带,质谱分析差异性条带中的蛋白种类。用免疫沉淀检验PON2的甲基化修饰状态。检测PON2和PRMT1对IL-4表达的浓度依赖性和时间依赖性。用免疫共沉淀检测PON2和PRMT1的相互作用,并在MS203抑制Ⅰ型PRMT后检测PON2的甲基化修饰水平的变化。诱导小鼠哮喘模型,检测PON2表达的组织细胞类型,以及肺组织中PON2和PRMT1的表达水平。结果 (1)质谱分析显示在IL-4处理的A549细胞中检出311个差异显示的蛋白,PON2为其中之一。(2)免疫沉淀显示,IL-4可促进A549细胞中PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰,但IL-4刺激对PON2的表达水平无影响。(3)PON2与PRMT1有相互作用,IL-4可促进PON2与PRMT1结合,抑制Ⅰ型PRMT活性可以削弱IL-4对PON2发生精氨酸非对称性...     

依那西普对大鼠切口痛和脊髓TNF-α表达的影响

目的 观察依那西普对切口疼痛模型大鼠疼痛程度、痛阈和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 雄性 SD 大鼠 60 只随机分为模型对照组(C组)和依那西普组(E组),按术后-I(术前1 h)、4、8、16和 24 h 随机分配大鼠,每组每时间点 6 只.戊巴比妥钠麻醉大鼠后,对大鼠左足底实施手术刺激;C组大鼠鞘内注射生理盐水10 μl,E组大鼠鞘内注射可溶性 TNF-α受体依那西普 100 μg(10 μ1).用 Dynamic Plantar Aesthesiometer 和 Plantar test 7375 分别测定大鼠机械性痛阈和热痛阈;用RT-PCR方法测定腰脊髓 TNF-α mRNA的表达,用 Western blot 方法测定脊髓TNF-α蛋白的表达.结果 ①术后两组大鼠累积疼痛评分(CPS)均升高(P<0.01),E组术后各时间点 CPS 低于 C 组(P<0.05或<0.01).②术后两组大鼠机械性痛阈(HWMT)和热痛阈(HWTL)明显下降(P<0.01),术后各时间点 E组大鼠 HWMT、HWTL 均明显高于 C 组(P<0.05或P<0.01).③术后两组大鼠脊髓 TNF-αmRNA及蛋白表达均上调(P<0.01),术后各时间点 E 组大鼠脊髓 TNF-αmRNA 及蛋白表达水平均明显低于 C 组(P<0.05或P<0.01).结论 大鼠脊髓 TNF-α参与了手术后疼痛的产生和维持,可溶性 TNF-α受体依那西普可抑制大鼠切口痛和脊髓 TNF-αmRNA 及蛋白表达.     

莪术、哈蟆油对去势后大鼠雌激素水平及受体表达的影响

目的 检测莪术、哈蟆油对去势后大鼠血清雌激素水平、脾脏雌激素受体表达,探讨其对生殖内分泌-免疫网络的影响及作用机制.方法 将成年SD雌性大鼠去势后制成更年期综合征模型,给药12周后,采用放射免疫法测定大鼠血清性激素(E2、FSH、LH、T、P)和白介素-2含量.取脾脏用免疫荧光法检测雌激素受体表达.结果 与模型对照组比较大剂量莪术、哈蟆油能升高去势大鼠血清E2、T、P水平(P<0.01),明显提高IL-2含量(P<0.01),有降低FSH、LH含量趋势(P0.05),并能显著升高脾脏ER表达水平(P<0.01).结论 莪术、哈蟆油可提高去势大鼠血清性激素水平,增强脾脏ER表达.为临床治疗更年期综合征提供实验依据.     

PARP-1在大鼠急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中表达变化的研究

目的 探讨聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)在大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肝损伤中的表达变化.方法 Wistar大鼠随机分为:假手术组(SO组)和ANHP模型不同时间点组(AHNP3、6、12h组).胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备AHNP模型,测定腹水量、血清淀粉酶(AMY)、谷氨酸氨基转移酶(ALT);光镜下观察胰腺病理评分、肝脏病理分级;RT-PCR法检测各组大鼠肝组织PARP-1 mRNA的表达.结果 AHNP模型组各检测指标均明显高于SO组(P<0.05).AHNP 3、6 h组之间腹水量差异无显著性(P>0.05),均较AHNP 12 h组显著减少(P<0.05).AHNP模型纽各时间点之间,全部检测指标(除腹水量)的差异均具有显著性(P<0.05).PARP-1 mRNA在SO组中呈低表达、在AHNP模型组中显著增加(P<0.05),12 h表达最丰富.结论 PARP-1 mRNA在AHNP肝组织中呈高表达,随病程延长其表达逐渐升高.提示PARP-1可能在AHNP肝损伤的发生、发展过程中起着重要作用.     

利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因

目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因.方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM-T Easy Vector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆.将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息.结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4 个,ESTs 2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个.结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因.     

慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中蛋白精氨酸甲基转移酶6的表达及意义

目的观察慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）患者肺组织中蛋白精氨酸甲基转移酶6（PRMT6）的mRNA及组蛋白H3R2位点非对称双甲基化（H3R2me2a）和H3K4位点三甲基化（H3K4me3）信号水平情况,探讨PRMT6是否通过调控组蛋白甲基化而参与慢阻肺的发病。方法选取胸外科因肺癌行肺叶切除术的患者3l例,据术前肺功能、吸烟史及慢阻肺诊断标准将患者分成对照组（非吸烟非慢阻肺,n=10）、吸烟组（吸烟非慢阻肺,n：10）和吸烟慢阻肺组（n=11）。选取远离原发病灶5cm以上、肉眼观察无肺癌浸润的外周肺组织,采用QRT．PCR检测PRMT6、白细胞介素13（IL．13）、环氧酶2（COX-2）的mRNA表达,同时Western．Blotting检测PRMT6蛋白表达及组蛋白H31t2me2a和H3K4me3信号水平。结果吸烟慢阻肺组FEV,％pred、FEVI／FVC及PEF％pred较对照组和吸烟组明显降低（P〈0．05）。与对照组比较,吸烟组及吸烟慢阻肺组PRMT6mRNA表达、PRMT6蛋白表达及组蛋白H3R2me2a信号水平均显著降低（P〈0．01）,而IL-13、COX-2的mRNA表达及H3K4me3信号水平均显著增高（P〈0．01）。结论慢阻肺患者肺组织中PRMT6表达下降,可能通过下调组蛋白H3R2me2a信号水平而上调组蛋白H3K4me3的信号水平参与慢阻肺的形成。     

穴位埋线治疗哮喘选穴规律分析

目的:借助中医传承辅助平台,分析穴位埋线治疗哮喘的选穴规律.方法:计算机检索中文期刊全文数据库(CNKI)、中文科技期刊数据库(VIP)、中国学术期刊数据库(万方数据)等关于穴位埋线治疗哮喘的相关文献,检索时间为1965年5月至2019年6月.根据纳入、排除标准筛选文献,整理文献中记录的穴位处方,并运用中医传承辅助平台...     

哮喘小鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-17含量变化

目的 探讨哮喘小鼠肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞介素-17（IL-17）含量的变化.方法 将64只BALB/c小鼠分为正常组32只,哮喘组32只,两组分别于造模后第3、7、14、21天取小鼠肺泡灌洗液,每次8只.应用HE染色法观察哮喘组及正常组各时间点小鼠肺组织情况.应用ELISA法检测小鼠BALF中IL-17的含量.结果 哮喘组的肺组织炎症反应较同期正常小鼠明显,哮喘组较正常组BALF中IL-17含量有显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.哮喘组第7天小鼠BALF中IL-17含量达到高峰,同期小鼠肺组织HE染色炎症亦最明显.结论 哮喘组小鼠BALF中IL-17含量升高,且在造模后第7天达到高峰.IL-17可能是参与支气管哮喘急性发作的主要细胞因子之一.     

血红素加氧酶-1抑制哮喘小鼠IL-17分泌的抗炎机制研究

目的探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在哮喘小鼠模型中抑制IL-17分泌减轻气道炎症作用的机制。方法用卵清蛋白(OVA)致敏、激发Balb/C小鼠建立哮喘模型,并在致敏、激发阶段经血红素(hemin)干预。肺组织病理切片,肺泡灌洗液炎症细胞计数观测哮喘小鼠模型气道炎症程度,real-time PCR法分别测定肺脏组织HO-1、IL-17A、IL-17E、IL-23、RORgammat、IL-15 mRNA的表达。结果成功建立OVA致敏、激发的哮喘小鼠模型,模型经hemin干预后,肺组织炎症细胞浸润减少,IL-17A、IL-17E、IL-23、RORgammat、IL-15 mRNA的表达降低。结论表明HO-1可能通过抑制IL-17A/E及与其分化、转录、分泌相关的IL-23、RORgammat、IL-15 mRNA的表达发挥抗炎作用,减轻哮喘小鼠气道炎症。     

支气管哮喘不同时期证候演变规律的临床调查研究?

目的探讨支气管哮喘急性发作期、慢性持续期、临床缓解期的证候演变规律。方法收集17家三级甲等中医院支气管哮喘患者资料,运用SPSS 18.0统计软件包建立以中医辨证为特征的临床调查研究数据库,并进行频率的统计描述及卡方检验。结果发放表格2 500份,收回表格2 481份,有效2 428份。急性发作期以实证为主,临床表现为外寒内饮证、痰热壅肺证、痰浊阻肺证、风痰阻肺证、血瘀证;慢性持续期以虚实兼杂为主;缓解期以虚证为主,表现为肺气虚证、肺肾气虚证、肺脾气虚证、肺肾气阴两虚证、肺肾阳虚证。结论支气管哮喘中医证候演变有一定的规律性,可为本病的防治提供依据。     

邵长荣教授从肾论治支气管哮喘

哮喘的治疗历来以"发时治标,平时治本"为基本原则,邵长荣教授在临床上发现,即使哮喘急性发作期也不同程度地存在着肾虚的病机,在治疗时采用祛邪与补肾兼施的治法可明显提高疗效,临床常用补肾清肺、补肾温肺、温肾健脾祛痰、补肾益气活血等方法。     

1,25-二羟维生素D3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4 CD25 Foxp3 T细胞)及气道炎症的影响。方法28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7)。治疗组1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组)。分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL-10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达。以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7)。结果哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异。与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4 T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加。各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异。结论哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平。提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用。     

隐孔菌发酵物对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响

目的建立脾虚证哮喘小鼠模型,观察隐孔菌发酵物(CVFS)对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响。方法以卵白蛋白(OVA)致敏 饮食不节 劳倦过度伤脾法建立脾虚证哮喘小鼠模型;测定小鼠的肺阻力(RL)和支气管-肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞,观察肺组织和免疫器官脾脏的病理变化。结果脾虚证哮喘小鼠的气道高反应性、BALF中的嗜酸性粒细胞数目,肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化以及脾脏指数与单纯哮喘小鼠比较有明显差异(P<0.05)。CVFS能明显改善单纯哮喘小鼠和脾虚证哮喘小鼠由乙酰甲胆碱(MCH)诱导的气道高反应性,减少BALF中的嗜酸性粒细胞数目,以及改善肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化,而对脾虚证哮喘小鼠作用更为明显。CVFS能明显增加脾虚证哮喘小鼠脾脏指数,而对单纯哮喘小鼠的脾脏指数无明显影响。结论OVA致敏 饮食不节 劳倦过度伤脾法可建立脾虚证哮喘小鼠模型;CVFS可明显改善脾虚症状,抑制脾虚证哮喘小鼠的气道高反应性和炎症反应,提示CVFS可用于临床脾虚证哮喘的治疗。