X线照射原代培养大鼠海马神经元后p35、p25的表达及Cdk5激酶活性变化

目的 研究X线照射培养大鼠海马神经元后p35,p25的表达及Cdk5激酶活性变化,为放射性脑损伤的预防和治疗提供理论依据.方法 30 Gy X射线单次照射培养至12 d的海马神经元,用Western-blotting检测Cdk5的激活蛋白p35、p25的水平,用DAPI染核方法 检测海马神经元凋亡情况.结果 p35蛋白水平在照射后3.5和4 h分别比对照组升高(1.51±0.13)、(1.45±0.14)倍,差异均有统计学意义(P<0.01);p25蛋白水平在照射后6 h比对照组升高(1.62±0.28)倍,差异有统计学意义(P<0.05).30 Gy组在照射后24 h核固缩百分数为(24.8±3.97)%,与对照组(1.82%±1.08%)有显著性差异(P<0.01);30 Gy+roscovitine组在照射后24 h核固缩百分数为(7.74±2.27)%,与对照组有显著性差异(P<0.01).结论 X线照射培养海马神经元后p35、p25 蛋白表达增加,激活cdk5;应用Cdk5抑制剂roscovitine抑制Cdk5活性可以显著减少神经元的凋亡.     

核因子NF-κB对帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的:研究核因子(NF-κB)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中的影响和对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用以及人参皂甙Rgl对其的影响,探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,前列腺素E2(prostaglandine2,PGE2)以及NF-κB的表达变化;并观察给予人参皂甙Rgl对上述变化的影响.结果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第5次注射后24 h,黑质区NF-κB(34.6±5.6),COX-2(28.2±5.1),PGE2(36.1±4.2)阳性细胞较对照组NF-κB(2.5±0.8),COX-2(1.0±0.3),PC-E2(3.2±0.4)阳性细胞显著增加(P<0.01),TH阳性神经元显著丢失60%(P<0.01);经人参皂甙Rgl处理后,模型组小鼠PD症状减轻,与模型组比较,黑质区NF-κB(4.9±2.1),COX-2(1.9±0.7),PGE2(4.6±0.3)阳性细胞明显减少(P<0.01),TH阳性细胞数较对照组仅下降32%.结论:核因子NF-κB在亚急性PD模型早期对黑质COX-2表达中可能起莺要调控作用;人参皂甙Rg1可能影响NF-κB及COX-2表达而对小鼠多巴胺神经元起一定保护作用.     

白介素-1β对原代培养海马神经元毒性的研究

目的 探讨IL-β对体外培养的海马神经元活性及合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法 采用SD新生鼠进行海马神经元原代培养.培养7d的细胞以细胞免疫化学法枪测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,计算阳性细胞率.实验分IL-β为0ng/ml的正常组和IL-β为5 ng/ml、10ng/ml、20ng/ml 3个实验组,进行海马神经元无血清培养48 h.采用甲基噻唑基四唑(MTT)试验检测细胞活性,ELISA法检测培养上清BDNF的含量.结果 NSE细胞免疫化学鉴定显示阳性细胞达到90%以上;IL-1β降低体外培养的海马神经元活性,各剂量组按浓度在590nm波长处检测OD值为(0.5585±0.2407; 0.4295±0.1401; 0.4191±0.1050),与正常组(0.9462±0.2972)比较,差异具有显著性(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01 ANOVA);IL-1β降低体外培养的海马神经元合成和分泌BDNF水平,各剂量组显著BDNF含量分别是[(8.65±0.71)pg/ml,(8.90±0.35)pg/ml,(7.90±0.35)pg/ml],与正常组(12.40±1.77)pg/ml比较差异具有显著性(均P<0.05 ANOVA).结论 IL-1β可导致体外培养海马原代神经元的损伤,其机制可能与海马神经元合成和分泌BDNF的减少有关.     

人参皂甙Rg1对Cdk5的调控在海马神经元放射性损伤防护中的意义

目的 探讨人参皂甙Rg1对Cdk5的调控在海马神经元放射性损伤防护中的意义.方法 通过建立放射性脑损伤的体内模型,将40只实验大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只,即：0Gy组（简称空白组）,单纯人参皂甙Rg1预处理组（简称对照组）,30Gy组（简称模型组）,30Gy＋人参皂甙Rg1预处理组（简称中药组）,分离、培养海马神经元,用4＇,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染核方法检测各组海马神经元凋亡情况,采用Western blot检测p35、p25蛋白表达以及应用Cdk5抑制剂roscovitine抑制Cdk5,观察阻断Cdk5后X射线对各组海马神经元损伤的改变.结果 与空白组比较,对照组的核固缩百分数、神经元存活数目、p35、p25蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,模型组与中药组的核固缩百分数、p35、p25蛋白水平则明显升高,神经元存活数目明显降低,且差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,中药组的核固缩百分数、p35、p25蛋白水平明显降低,神经元存活数目则明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;单就各组＋二甲基亚砜（DMSO）而言,与空白组＋ DMSO比较,对照组＋DMSO的核固缩百分数差异无统计学意义（P＞0.05）,模型组＋DMSO与中药组＋DMSO则明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组＋ DMSO比较,中药组＋DMSO的核固缩百分数明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 人参皂甙Rg1可通过调控Cdk5,降低神经元凋亡,而在海马神经元放射性损伤中发挥防护作用.     

电针对坐骨神经分支选择性损伤大鼠痛觉过敏及脊髓NOS活性、NO水平的影响

目的 探讨电针对神经病理性痛大鼠痛觉过敏以及脊髓一氧化氮合酶(NOS)活性和一氧化氮(NO)水平的影响.方法 40只SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、手术组和电针组(n=10).采用坐骨神经分支选择性损伤模型,电针"委中"和"环跳"穴,观察其对大鼠机械痛阈和热痛阈的影响,以分光光度法测定脊髓总NOS以及nNOS、iNOS活性和NO水平.结果 坐骨神经分支选择性损伤术可明显降低大鼠机械痛阈,手术组10d时为(14.83±0.79)g,与空白组和假手术组相比,差异有显著性(P＜0.05);并且手术组脊髓总NOS和nNOS活性以及NO水平均明显升高,分别为(44.23±7.81)U/mgprot和(39.64±10.28)U/mgprot以及(112.79±18.01)μmol/g,与空白组和假手术组相比,均差异有显著性(P＜0.01),iNOS却有降低的趋势;而电针干预后大鼠脊髓总NOS和nNOS活性明显降低,分别为(32.14±12.05)U/mgprot和(20.97±12.16)U/mgprot,NO合成也明显减少,为(70.96±18.15)μmoL/g,与手术组各项比较差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01);与此同时显著减轻坐骨神经分支选择性损伤大鼠的机械痛敏状态,进而改善其痛行为.结论 电针减轻神经病理性痛可能与其抑制脊髓NOS活性、降低NO水平有关.     

无花果水提取液抗疲劳作用及其对一氧化氮合酶活性的影响

目的 探讨无花果水提取液的抗疲劳作用及其对一氧化氮合酶活性的影响.方法 80只小鼠随机分成4组:对照组,无花果水提取液低剂量组(0.22g/kg)、中剂量组(0.67g/kg)、高剂量组(2.0g/kg),连续灌胃5周后观察不同剂量的无花果水提取液灌胃的各组小鼠游泳时间,判断无花果水提取液的抗疲劳作用.同时测量小鼠游泳30 min后的血中各种类型的一氧化氮合酶(NOS)的活性.结果 在游泳实验中,中、高剂量组的小鼠的游泳时间分别为(138.70±28.79)min和(56.55±16.64)min,明显高于对照组[(21.00±7.36)min](P＜0.05),低剂量组的游泳时间为(23.43±3.90)min,高于对照组,但差异无显著性.在总NOS(tNOS)方面,低、中、高各剂量组的活性分别为(38.94±10.74)U/L、(31.04±9.14)U/L、(65.34±14.00)U/L,高于对照组的(18.35±4.82)U/L(P＜0.05);在结构型NOS(cNOS)方面,中、高各剂量组的活性分别为(21.04±6.15)U/L和(21.91±6.67)U/L,与对照组的(5.94±1.72)U/L比差异有显著性(P＜0.05),低剂量组的活性为(6.41±1.13)U/L与对照组比差异无显著性;而在诱导型的NOS(iNOS)方面低、中、高各剂量组的活性分别为(32.56±11.39)U/L、(10.51±3.03)U/L和(36.44±15.10)U/L与对照组的(12.78±2.92)U/L比较差异无显著性.结论 无花果水提取液具有一定的抗疲劳作用,该作用可能是通过提高血中的tNOS、cNOS的活性来实现的.     

粗江蓠多糖对辐射损伤小鼠免疫细胞周期的影响

目的 研究粗江蓠多糖(GHPS)对辐射损伤小鼠胸腺细胞周期的影响.方法 采用60Coγ射线2Gy全身照射小鼠制造辐射损伤模型,通过流式细胞术(FCM)检测不同剂量(10mg/kg,20mg/kg,40mg/kg)的GHPS对辐射损伤小鼠胸腺细胞周期的影响.结果辐射对照组小鼠接受60Co γ射线2Gy照射后,胸腺细胞G0/G1期细胞百分数升高(P<0.01),S期和G2/M期细胞百分数下降(P<0.01).经腹腔注射(10,20,40)mg/kg GHPS,再接受γ射线2Gy照射后,小鼠胸腺细胞G0/G1期百分数明显低于辐射对照组(P<0.01),S期和G2/M期细胞百分数明显高于辐射对照组(P<0.01).并呈剂量依赖性.结论 GHPS可以缓解辐射所致的小鼠胸腺细胞G0/G1期阻滞,使S期和G2/M期细胞百分数增加.     

20 Gy电离辐射后黑质-纹状体系统的神经元反应及尼莫地平的干预作用

目的:通过观察电离辐射后黑质-纹状体系统神经元的反应、以及尼莫地平的干预作用,为研究电离辐射的防护和放射性脑病的治疗提供依据. 方法:BALB/c雄性小鼠36只,按随机数字法分为6组(n=6):①空白对照组(假照射组);②单纯照射2 d组;③单纯照射7 d组;④药物对照组(尼莫地平单药处理组);⑤照射 药物2 d组;⑥照射 药物7 d组. 小鼠全脑20 Gy电离辐射模型,应用免疫组织化学和半定量分析,观察黑质和纹状体区域内FOS及NOS阳性细胞的分布与变化. 结果:FOS免疫染色结果显示,单纯照射组动物黑质神经元的c-fos表达(阳性细胞数/40倍视野,x±s)与空白对照组(16.7±3.7)相比明显上调(2 d和7 d分别为28.0±3.6和42.0±6.7, P<0.05),给予尼莫地平药物处理加强黑质c-fos表达上调(2 d和7 d分别为36.0±3.6和64.0±3.6, P<0.05). NOS组织化学显示,与空白对照组(27.4±6.2)相比,照射后动物纹状体NOS阳性细胞数目也增加(2 d和7 d分别为40.1±8.8和39.9±6.8, P<0.05),但尼莫地平药物处理能够阻止纹状体NOS阳性细胞的增加(2 d和7 d分别为36.4±6.1和31.1±5.2, P<0.05). 结论:接受中等剂量电离照射后,动物黑质和纹状体系统神经元发生明显的功能变化或损伤反应,早期应用尼莫地平处理对电离辐射的生物效应可能具有一定的干预作用.     

直线加速器不同剂量全脑单次与分割外照射对大鼠学习记忆能力的影响

目的 探讨不同照射方法对大鼠学习记忆能力的影响,以期为放射性脑损伤进一步研究建立更精确放射性脑损伤大鼠模型.方法 采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠分别进行单次和分割全脑照射,剂量分别为20Gy、30Gy,并设未照射组为对照.在照射后2周、8周分别进行Morris水迷宫实验,分析各组大鼠行为学检测结果,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习记忆能力,同时观察各组脑组织病理变化.结果 相同剂量常规分割照射2组大鼠与单次照射2组大鼠相比,照射后不同时间点平均潜伏期和搜索策略差异有显著性(P＜0.05),且30Gy分割照射后8周时平均潜伏期[(105.62±9.58)s]和搜索策略(9.37±0.81)%差异最为明显.单次照射两个剂量组其平均逃避潜伏期和搜索策略得分在照射后2周和8周时差异无显著性,而分割照射2组在照射后不同时间点其平均逃避潜伏期和搜索策略得分均差异有显著性(P＜0.05),以30Gy组最为明显(P＜0.01)[平均潜伏期2周(83.52±7.79)s,8周(105.62±9.58)s;搜索策略2周(11.52±1.02)%,8周(9.37±0.81)%].20Gy分割照射组和30Gy两照射组病理检查显示神经元萎缩变性,白质梳松,以30Gy分割照射组在照射后8周时上述病变最为严重.结论 全脑分割照射比单次大剂量照射更易造成远期的放射性脑损伤,对大鼠进行全脑常规分割照射可以建立更贴近临床病理过程的放射性脑损伤动物模型.     

刺五加皂甙对培养神经元拟衰老反应的观察

目的 :研究刺五加皂甙 (ASS)对神经细胞老化的保护作用。方法 :采用无血清培养方式制备离体培养的ICR小鼠胎鼠脑皮层神经元衰老模型 ,从生化和形态方面观察刺五加皂甙对衰老条件下的神经元保护作用。结果 :对照组MTT(2 .782± 0 .0 2 8) ,LDH (2 3.0 7± 2 .6 4 ) ,与正常组比较P <0 .0 1。研究组加用 1.2 5mg/10 0ml,2 .5mg/ 10 0ml和 5mg/ 10 0ml浓度的刺五加皂甙后 ,MTT依次为 (0 .0 82 7± 0 .0 2 3) ,(0 .86 1± 0 .0 2 6 )和(0 .90 5± 0 .0 98)。LDH依次为 (2 0± 1.0 5 ) ,(18.4 1± 1.6 4 )和 (18.5 5± 3.83) ,与对照组比较P <0 .0 1～ 0 .0 5。ASS能明显提高衰老神经细胞的MTT活性 ,降低LDH的活性 ,显微镜及扫描电镜观察 ,加用刺五加皂甙保护的研究组神经细胞损伤明显减轻 ,部分细胞形态基本趋于正常。结论 :刺五加皂甙能明显提高衰老神经细胞的MTT活性 ,降低LDH活性。有效地延缓神经元细胞的衰老。     

Real-time Microwave Exposure Induces Calcium Efflux in Primary Hippocampal Neurons and Primary Cardiomyocytes

Objective To detect the effects of microwave on calcium levels in primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes by the real-time microwave exposure combined with laser scanning confocal microscopy. Methods The primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes were cultured and labeled with probes, including Fluo-4 AM, Mag-Fluo-AM, and Rhod-2, to reflect the levels of whole calcium [Ca~(2+)], endoplasmic reticulum calcium [Ca~(2+)]ER, and mitochondrial calcium [Ca~(2+)]MIT, respectively. Then, the cells were exposed to a pulsed microwave of 2.856 GHz with specific absorption rate(SAR) values of 0, 4, and 40 W/kg for 6 min to observe the changes in calcium levels. Results The results showed that the 4 and 40 W/kg microwave radiation caused a significant decrease in the levels of [Ca~(2+)], [Ca~(2+)]ER, and [Ca~(2+)]MIT in primary hippocampal neurons. In the primary cardiomyocytes, only the 40 W/kg microwave radiation caused the decrease in the levels of [Ca~(2+)], [Ca~(2+)]ER, and [Ca~(2+)]MIT. Primary hippocampal neurons were more sensitive to microwave exposure than primary cardiomyocytes. The mitochondria were more sensitive to microwave exposure than the endoplasmic reticulum. Conclusion The calcium efflux was occurred during microwave exposure in primary hippocampal neurons and primary cardiomyocytes. Additionally, neurons and mitochondria were sensitive cells and organelle respectively.     

心脉灵注射液对内毒素休克大鼠海马组织NOS活性的影响

采用尾静脉注射大肠杆菌内毒素复制大鼠内毒素休克模型，检测动物血压、脑系数、海马组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性及海马ＣＡ１区形态学改变，探讨心脉灵注射液对内毒素休克大鼠的作用机理。结果显示：与病理组相比，注入心脉灵注射液后１ｈ、６ｈ，动物血压上升，脑系数下降，海马组织ＮＯＳ活性显著增高，海马ＣＡ１区神经元损伤明显减轻，动物无死亡。提示心脉灵注射液能够改善内毒素休克所致的低血压及脑水肿，保护海马ＣＡ１区神经元，增强海马组织ＮＯＳ活性，起到抗内毒素休克的作用。     

邻苯二甲酸二丁酯对原代培养海马神经元的毒性及机制

目的 本研究探讨邻苯二甲酸二丁酯（DBP）暴露对原代培养海马神经元的神经毒性及可能机制。方法 海马神经元原代培养4 d后将海马神经元暴露在含有终浓度为0.0（对照）、1 g/LDBP的培养基中，选取染毒24、48、96 h 3个时相点，免疫荧光及透射电子显微镜下观察DBP染毒后海马神经元轴突及超微结构的形态变化；膜片钳测定海马神经元的动作电位；cck-8检测DBP染毒后海马神经元活性。Western blot测定脑源性神经营养因子（BDNF）、神经肽Y（NPY）、雌激素受体β（ERβ）核酸及蛋白的表达情况。高效液相色谱串联质谱检测神经递质GABA的释放。结果 DBP染毒96 h后神经元网络稀疏、轴突长度变短（P<0.01），电镜下细胞核呈圆形，染色质聚集，细胞质空泡化；膜片钳测定发现DBP染毒96 h后细胞出现去极化漂移、放电频率增加（P<0.01）；cck-8检测发现DBP染毒24、48、96 h的细胞活性均低于同时间点正常对照组（P<0.01）。DBP染毒48、96 h的ERβ、BDNF、NPY蛋白表达显著低于对照组（P<0.05）。DBP染毒96 h后神经递质GABA的释放显著低于对照组（P<0.05）。结论 DBP染毒后可导致海马神经细胞形态受损，并导致功能改变，这可能与神经递质GABA参与的ERβ-BDNF-NPY信号通道受阻相关。     

高晶体-高胶体渗透压溶液对受机械性损伤的海马神经细胞容积的影响

观察机械性损伤的海马神经细胞在不同浓度高晶体－ 高胶体渗透压溶液中容积的变化。取原代培养大白鼠胚胎的海马神经细胞,用超声波机械损伤细胞后暴露于含０．５ ｇ／Ｌ、１ ｇ／Ｌ和２．５ ｇ／Ｌ氯化钠的细胞培养基中１５ ｍ ｉｎ。结果显示机械性损伤的细胞明显肿胀（Ｐ＜ ０．０５）。当细胞暴露于不同浓度的高晶体－ 高胶体溶液１５ ｍ ｉｎ 后, 细胞容积与同一实验时间的对照值相比明显下降, 并保持至第７ ｄ （Ｐ＜ ０．０５）。表明受到机械性损伤的海马神经细胞在高晶体－ 高胶体渗透压环境中的容积调节功能丧失或减弱。     

Effects of Extracellular ATP on Survival of Sensory Neurons in the Dorsal Root Ganglia of Rats

After the peripheral nerve injury,degenerationor even necrocytosis will happen in some inflictedneurons and then the axons sprout from the survivalneurons and the nerve regenerate.Hence,the pro-tection of neurons plays a crucial role in the repair ofperipheral nerve injury.It has been proved that ex-tracellular ATP has protective effect on the neuronsof CNS. But whether it has the same effect on thesensory neurons of the dorsal root ganglia is still un-known.In this study,we employed the ce…     

高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡影响的实验研究

目的研究高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡的影响,并对其机制作初步探讨。方法采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察不同浓度的碘化钾对神经细胞凋亡及其一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。结果高碘可以诱发原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡,细胞凋亡率随碘化物浓度的升高而升高,实验组细胞的NO含量及NOS活性较正常对照组增高。结论高碘可以诱导原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡,并呈剂量依赖关系,其机制可能与NOS活性及NO含量增高有关。     

海人酸活化的小胶质细胞H_2O_2、NO的分泌对海马神经元谷氨酸含量的影响

目的:初步探讨海人酸(KA)活化培养的新生SD大鼠小胶质细胞(MG)及其分泌的一氧化氮/过氧化氢(NO/H2O2)、海马神经元、谷氨酸(Glu)之间的相互关系。方法:以KA作为MG的激活剂,以一氧化氮合成酶(NOS)的抑制剂氨基胍(AG)或过氧化氢的水解酶(CAT)作为工具药,先检测原代分离纯化培养的MG在KA激活后及工具药作用后各组条件培养液中NO和H2O2含量的变化,再用各组小胶质细胞条件培养液孵育离体海马神经元,观察其对神经元内Glu表达的影响。结果:KA作用后各组条件培养液中NO和H2O2含量明显升高,经AG或CAT处理后各组条件培养液中NO和H2O2含量显著降低;海马神经元的Glu免疫反应性KA组较对照组明显增强,在AG+KA组和CAT+KA组较KA组明显减弱。结论:活化的MG可能通过氧化损伤机制作为参与癫痫发作一个重要环节,提示采取抑制小胶质细胞活化、减少氧化损伤也可能是癫痫防治研究的一个重要方向。     

无镁诱导海马神经元癫痫样放电中Cx32作用的研究

目的:探讨缝隙连接在癫痫发病机制中的作用。方法:采用无镁液诱导的体外原代培养新生大鼠海马神经元细胞癫痫模型,应用膜片钳技术记录细胞外放电。观察放电不同时点缝隙连接蛋白Cx32的表达情况,以及生胃酮和卡马西平的抑制作用。结果:神经元经无镁培养液处理3h后产生稳定的放电,放电后Cx32表达显著增多,8h后可达对照组5倍。生胃酮和卡马西平均可抑制神经元的放电。生胃酮显著抑制了Cx32的表达,而卡马西平组Cx32水平无明显变化。结论:缝隙连接参与癫痫的发生发展过程,而且具有独立于传统的化学性突触的机制,为开发新的作用于缝隙连接的治疗药物提供了思路。     

牛磺酸对锰致原代培养海马神经元细胞氧化应激损伤的影响

目的：研究牛磺酸对锰引起的海马神经元细胞氧化应激损伤的影响。方法：采用原代培养方法,对大鼠海马神经元细胞进行原代培养后给予牛磺酸干预及染锰处理,用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞活力;荧光测定法检测细胞内活性氧族的生成和增加。结果：各牛磺酸干预组细胞生长活性均高于同级染锰剂量的染锰组;随着处理时间、染锰浓度的增加,细胞内氧化应激活性氧（ROS）含量均跟随增加;牛磺酸一定程度上可拮抗锰引起的原代培养海马神经元细胞氧化应激损伤。结论：牛磺酸对锰诱导的海马神经元细胞氧化应激损伤具有保护作用。