共查询到20条相似文献,搜索用时 140 毫秒
1.
纳米羟基磷灰石的表面修饰及其与DNA结合的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨纳米羟基磷灰石(nHAP)的表面修饰及其与DNA结合的可行性。方法采用均相沉淀法制备nHAP;透射电镜观察纳米粒结构;经超声分散及碳酸钠预处理后,在pH值7.4的环境下应用多聚赖氨酸(PLL)修饰nHAP;对修饰前后的纳米粒行Zeta电位检测;采用离心后测上清DNA浓度检测PLL修饰后的nHAP(nHAP-PLL)结合DNA的能力;应用DNA抗核酸酶保护实验测定nHAP-PLL保护DNA的能力。结果透射电镜下nHAP呈针状颗粒,粒径较均匀,约(15~20)nm×(60~80)nm左右,分散程度良好;nHAP的Zeta电位为(-42.4±7.5)mV,nHAP—PLL的Zeta电位为(8.5±1.5)mV,两组比较差异有统计学意义(P〈0.01);DNA结合及抗核酸酶保护实验显示nHAP-PLL和DNA质量比达20:1时,nHAP-PLL可有效结合并保护相应DNA。结论nHAP经PLL表面修饰后可成为一种有效的DNA结合载体。 相似文献
2.
目的评估用壳聚糖修饰的纳米羟基磷灰石(HA)基因载体结合和保护DNA的性能。方法 HA纳米颗粒胶体液中加入壳聚糖弱酸溶液,以修饰HA纳米颗粒;透射电镜下观察壳聚糖修饰后HA纳米颗粒的形貌及粒径;在不同pH值环境下(5、6、7、8和9)测定修饰前后的HA纳米颗粒的Zeta电位;采用离心后测上清DNA浓度检测未修饰的HA纳米颗粒和经壳聚糖修饰后的HA纳米颗粒结合DNA的能力及壳聚糖-HA纳米颗粒与DNA解离的方式;应用DNA抗核酸酶保护实验测定修饰后的HA纳米颗粒保护DNA的能力。结果透射电镜观察经壳聚糖修饰的HA纳米颗粒周围有长梭状的壳聚糖颗粒包绕,粒径较均匀,约为50 nm,分散性较好;经过壳聚糖修饰的HA纳米颗粒较未修饰的HA纳米颗粒的Zeta电位显著升高(P<0.05)。血清、磷酸缓冲液(PBS)可以使结合到壳聚糖-HA纳米上的DNA解离。DNA结合及抗核酸酶保护实验显示,修饰后的HA纳米和DNA质量比达500∶1时,可更有效结合并保护DNA。结论经过壳聚糖修饰的HA基因载体分散性更好,Zeta电位显著提高,更有效地结合和保护DNA。 相似文献
3.
目的 制备聚乙烯亚胺载基因纳米颗粒并研究其理化性质和体外转染活性.方法 通过自由基聚合法制备出聚乙烯亚胺空载纳米粒后,用绿色荧光蛋白(PEGFP-C1)质粒做报告基因,以静电吸附的方式将PEGFP-C1质粒DNA和聚乙烯亚胺结合形成聚乙烯亚胺裁基因纳米粒,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),MTT试验检测聚乙烯亚胺纳米载体HepG2和L-02的细胞毒作用,用体外基因转染实验评价纳米粒的转染活性,用流式细胞仪测定转粢效率.结果 聚乙烯亚胺与聚甲基丙烯酸甲酯形成表面带正电荷的纳米粒,呈单分散球形,平均粒径为102.62 nm,Zeta电位为+46.2 mV.当PEGFP-C1质粒DNA与纳米粒的N/P为3.2:1以上时,两者方可完全结合形成复合物.PEI纳米粒可携带质粒DNA进入COS7细胞,并突破吞噬小泡释放质粒于细胞质,最终质粒聚集于细胞核内进行表达.结论 聚乙烯亚胺纳米粒可以用作基因递送的非病毒栽体系统,值得进一步研究. 相似文献
4.
聚丙交酯乙交酯纳米粒的制备及生物学效能的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的制备出PLGA纳米粒。并分析其DNA结合效率,对所结合质粒DNA的保护作用以及评价其体外基因转运效率。方法制备PLGA纳米粒。测定PH值对DNA结合能力的影响,PLGA-NP与DNA结合的凝胶阻滞实验和DNA沉淀实验;通过PLGA-NP的DNaseI保护试验和血清保护试验判断其对所结合的质粒DNA的保护作用;用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒评价其体外基因转运效率。结果在中性(pH=7)条件下,DNA结合能力最强;当纳米粒与DNA比例达10∶1时,DNA几乎完全结合到PLGA-NP上,结合效率达92%。PLGA-NP纳米粒中的DNA经DNaseI消化1h后或胎牛血清消化8h,仍然保持结构的完整、未被降解,而裸DNA在同样条件下即被完全降解。结论PLGA-NP在中性(pH=7)条件下,DNA结合能力最强;纳米粒与DNA比例达10∶1时,结合效率高,无细胞毒性。PLGA-NP与PcDNA16-53连接制备的PLGA-pcDNA16-53纳米粒,具有很好的抗核酸酶和抗血清消化能力。 相似文献
5.
壳聚糖纳米粒作为基因载体的研究:制备,特征和对DNA的保护 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:制备载基因壳聚糖纳米粒,研究纳米粒药剂学特征以及对DNA的保护作用。方法:复凝聚法制备纳米粒,对纳米粒的形态、粒径及分布、Zeta电位、包封率、载药量和处方影响因素进行了考察,凝胶阻滞法分析壳聚糖和pDNA的聚合方式,pDNA保护性试验考察壳聚糖纳米粒抵抗核酸酶的能力。结果:制备的pDNA/壳聚糖纳米粒为结构较紧密的不规则球形,平均粒径为(240.4±13.2)nm,多分散指数为(0.173±0.05),Zeta电位为(18.4±0.6)mV,包封率为(95.2±1.9)%,载药量为(30.7±0.8)%。凝胶阻滞分析结果表明,纳米粒荷正电,pDNA与壳聚糖之间通过静电作用而完全结合。纳米粒的粒径、Zeta电位受处方中的壳聚糖相对分子质量、N/P(壳聚糖中伯胺基数目/pDNA中磷酸基数目)比p、DNA浓度、Na2SO4浓度和pH值等因素影响。pDNA保护性试验表明,壳聚糖纳米粒对pDNA有保护作用。结论:壳聚糖可以有效凝聚pDNA,采用复凝聚法可制得200~500 nm范围荷正电的纳米粒,有较高的包封率和载药量,可有效保护pDNA免受核酸酶降解。壳聚糖作为黏膜给药的非病毒基因载体具有应用价值。 相似文献
6.
目的 制备透明质酸修饰的白蛋白纳米粒,对其修饰程度和载药性能进行考察,并初步评价其抗肿瘤作用.方法 用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒,并用透明质酸修饰纳米粒表面,以表面活性氨基的减少作为评价透明质酸修饰的白蛋白纳米粒的修饰程度的指标,并筛选最佳处方;考察pH和载药量及包封率的关系.使用噻唑蓝比色法(MTT)测定纳米粒对人肝癌细胞株HepG2的抑制率.结果 制备所得的透明质酸修饰的白蛋白纳米粒的平均粒径为396 nm,Zeta电位-19.7 mV,表面氨基减少率为34.28%;透明质酸修饰的米托蒽醌白蛋白纳米粒载药量11.13%,包封率94.64%,平均粒径为398 nm,Zeta电位-17.9 mV,且具有明显的缓释作用.透明质酸修饰的米托蒽醌白蛋白纳米粒比米托蒽醌水溶液具有更强的细胞抑制率(P<0.05).结论 所用制备工艺稳定,可用于制备透明质酸修饰的白蛋白纳米粒.透明质酸修饰的米托蒽醌白蛋白纳米粒具有不低于药物溶液的活性. 相似文献
7.
目的 构建叶酸(folic acid,FA)分子靶向磁性纳米载体,表征其基本理化性质,分析与基因的结合能力.方法 将化学共沉淀法制备的醛基化海藻酸钠(Alg)改性的Fe3O4纳米与酰胺化反应制备的聚乙二醇(PEG)-聚乙烯亚胺(PEI)-FA化合物充分混合形成PEG-PEI( -FA)-Alg-Fe3O4纳米,使用透射电镜、激光粒度检测仪、磁强计、紫外分光光谱等检测该纳米形态、粒径及Zeta电位、磁饱和强度、FA成分等;采用琼脂糖凝胶电泳分析该纳米结合基因能力.结果 该纳米分散均匀,平均水动力学粒径197.8 nm,Zeta电位+12.6 mV.具有超顺磁性.紫外分光光谱检测显示成功偶联FA分子.凝胶电泳结果显示纳米粒能有效结合质粒.结论 该纳米颗粒能够携带基因,可用于磁靶向及分子靶向治疗实验. 相似文献
8.
目的 探讨阳离子氧化铁纳米粒(Cationic IONPs)的制备及其作为体外基因裁体的可行性.方法 改进的共沉淀法制备Fe3O4纳米粒,利用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)进行表面修饰.利用原子力显微镜,激光粒度分析仪,琼脂糖凝胶电泳等手段对Cationic IONPs的形貌、粒径、Zeta电位、DNA结合能力等进行表征.以增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C1)作为靶基因,荧光显微镜和流式细胞仪分别观察和测定Cationic IONPs和脂质体体外转染效率. 结果 Cationic IONPs粒径为(32.1±1.8)nm,在pH=7条件下,Zeta电位为(13.5±1.6)mV,与质粒质量比为1:1时结合效率最高,可以携带pEGFP-C1进入细胞并获得表达,转染效率为(32.8±5.2)%,高于阳性对照组LipofectamineTM 2000转染效率(28.8±5.6)%.结论 氨基硅烷偶联剂修饰的氧化铁纳米粒是一种可用于体外转染的新型非病毒载体. 相似文献
9.
目的 制备携载NF-κB圈套DNA的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(PBCA-NPs),研究其在大鼠脑内的生物学活性.方法 选用乳化聚合法制备PBCA-NPs,以激光粒度分析仪及透射电子显微镜分析纳米粒的形态和粒径.用阳离子表面活性剂十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)对纳米粒进行表面修饰后连接DNA,并分析PBCA-NPs及CTAB修饰的PBCA-NPs的细胞毒性效应、DNA装载效率、PBCA-NPs-DNA抗超声破坏和抗DNase Ⅰ的降解作用及其在体内的生物活性.结果 激光粒度分析仪及透射电子显微镜结果表明,PBCA-NPs粒形圆整,大小均匀,平均粒径90 nm.琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计测定DNA装载量达96%.该纳米粒能显著提高DNA抵抗核酸酶降解和超声波剪切的能力.在体试验证明PBCA-NPs-DNA通过侧脑室注射能以较高效能抑制大鼠皮质的NF-κB蛋白活性.结论 PBCA-NPs能够与NF-κB圈套DNA结合组成基因转运体系,该体系可以作为研究NF-κB功能的有效工具. 相似文献
10.
目的 为了提高胸腺五肽口服的稳定性及生物利用度,制备胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒并考察其理化性质、体外释放及生物活性.方法 采用离子胶凝法制备胸腺五肽壳聚糖纳米粒并用Eudragit S100包衣制备pH-敏感纳米粒;透射电镜和环境扫描电镜观察纳米粒形态;粒度及表面电位分析仪测量纳米粒的粒径及Zeta电位;超速离心法测定载药纳米粒的包封率;动态透析法研究载药纳米粒的体外释放特性;模拟人工消化液考察纳米粒中胸腺五肽的生物稳定性;淋巴细胞增殖反应评价制剂的生物活性.结果 pH-敏感胸腺五肽壳聚糖纳米粒的平均粒径为(175.6±17)nm,Zeta电位为(28.44±0.5)mV,包封率为(76.70±2.6)%.胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒具有良好的pH依赖性:在0.1 mol·L-1 HCl溶液中累积释放24.65%,在pH 5.0 PBS溶液中累积释放41.01%,在pH 7.4 PBS溶液中累积释放81.44%.pH敏感壳聚糖纳米粒制剂中的胸腺五肽在人工胃液中稳定,在人工肠液中半衰期为15 min.淋巴细胞体外转化实验表明,胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒保留了TP5的生物活性并且具有浓度依赖性.结论 pH-敏感壳聚糖纳米粒可能是口服胸腺五肽的良好载体. 相似文献
11.
目的 研究纳米羟基磷灰石(nHA)对脱矿牙本质小管的表面矿化作用及对模拟污水中铅离子的吸附作用。方法 选择牙冠完好无损、新鲜拔除的前磨牙和磨牙制作离体牙本质片各30个,使用10%的枸橼酸酸蚀处理牙本质片2 min,建立小管开放的牙本质敏感模型。脱矿牙本质片用随机数字表法分组,10片/组。空白对照组:蒸馏水刷洗;HA组:0.2 g HA刷洗;n HA组:0.2 g n HA 刷洗。每天早晚分别用蒸馏水、0.2 g HA 和 0.2 g nHA刷洗牙本质片表面2 min,连续7 d,表面处理后扫描电镜(SEM)观察牙本质片表面情况,能谱仪(EDS)分析钙、磷原子百分比并采用SPSS20.0软件进行统计学分析。配制系列浓度的HA悬液和nHA悬液,分别取1 mL与50 mL初始浓度为1 mg/L的铅离子溶液反应24 h,电感耦合等离子发射光谱仪(ICP)测定上清液中铅离子浓度,计算铅离子吸附率及吸附能力。结果 扫描电镜下空白对照组的牙本质片表面光滑,牙本质小管空虚。HA组的牙本质片表面为块状颗粒物覆盖,附着疏通,管径缩小。nHA组的表面堵塞物细腻、均质,附着紧密,牙本质小管管径明显缩小。经HA刷洗后可显著增加牙本质片表面钙、磷原子百分比,增加量为:nHA组>HA组>空白对照组(P<0.000),差异具有统计学意义。在本实验的浓度范围内,HA对铅离子的吸附随浓度升高而下降,最高附率达83.01%,nHA对铅离子的吸附率随着浓度升高先升高后达吸附平衡,吸附率高达98.79%。并发现HA对铅离子的吸附能力倍数与其浓度倍数呈良好的线性相关关系。结论 nHA较普通HA具有更好的脱矿牙本质表面矿化能力和铅离子吸附能力。 相似文献
12.
目的 通过对纳米羟基磷灰石(nanosize-hydroxyapatite,nHA)的毒性检测,初步探讨生物材料分子生物相容性研究的必要性.方法 通过形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验及彗星电泳检测nHA的毒性.结果 倒置显微镜观察显示不同浓度的 nHA浸提液对体外培养细胞的形态无明显影响;MTT实验表明nHA对细胞生长和增殖无明显抑制作用,不同浓度浸提液的细胞毒性均为1级,无毒,与生长良好的L-929细胞形态观察结果相符合;彗星电泳结果显示随 nHA浸提液浓度和时间的递增彗星率逐渐增大.结论 nHA具有良好的细胞相容性,但对L-929细胞DNA可能有损伤作用,提示可能有遗传毒性作用,因此检测纳米材料分子生物相容性非常必要. 相似文献
13.
nHA-PA66根管充填的动物实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的研究新型纳米复合材料nHA-PA66用作根管充填材料的组织反应。方法采用nHA—PA66对犬牙实验性根尖周炎进行根管充填,通过组织学方法对犬牙根尖周组织的反应进行评价。结果nHA—PA66根管充填一月后X片表现为根尖周骨质吸收区域缩小,组织切片上犬牙根尖周组织主要表现为轻到中度炎症反应;三月后X片上骨质吸收面积进一步减小,镜下则见有较好的修复反应发生;其炎症反应较小而修复反应发生较早。结论nHA—PA66用作根充材料有较好的组织相容性。 相似文献
14.
MMT法评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料的细胞毒性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的制备多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖(nHA/CS),对其进行细胞毒性检测。方法采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养大鼠成骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)染色进行成骨细胞进行鉴定,倒置显微镜下观察培养过程中细胞的形态和增殖情况。MTT检测多孔nHA/CS支架材料对成骨细胞增殖的影响,评价细胞毒性。结果细胞可在多孔nHA/CS周围贴壁生长,并且附着、增殖,其生长及功能不受抑制。结论多孔nHA/CS无细胞毒性,有利于细胞的黏附和增殖,可以用于骨组织工程支架材料。 相似文献
15.
目的:了解纳米羟基磷灰石/聚酰胺(nHA/PA)复合材料人工肱骨头的体内生物相容性.方法:20只新西兰大白兔行nHA/PA人工肱骨头置换术,术后3、6、12、24周标本行组织学及免疫组织化学检查.结果:仅在nHA/PA植入动物体内3周时,界膜上少量CD4 ,CD8 淋巴细胞浸润.其余各周未见淋巴细胞及炎症细胞侵润.结论:nHA/PA具有良好的体内生物相容性. 相似文献
16.
目的对比NH3、CO2和O2低温等离子体表面修饰前后的聚羟基丁酸戊酸酯[poly(hydroxybutyrate-hydroxyvalerate),PHBV]材料的生物相容性,以期望能够通过有效的表面修饰方法为血管组织工程提供更理想的生物材料。方法应用NH3、CO2和O2对PHBV生物材料进行低温等离子体表面修饰,以未表面修饰的为对照组,采用气泡法对其接触角进行测量,通过光电子能谱(XPS)分析表面元素;并进行犬的内皮细胞的接种,通过FITC荧光染色及电镜观察细胞的形态,MTT法分析细胞的增殖情况。结果XPS证实NH3、CO2和O2表面修饰之后的PHBV表面氧和氮元素明显增加,且表面修饰后的膜在接触角、细胞形态及细胞增殖状况各方面的性能均优于未表面修饰组。结论通过应用NH3、CO2和O2对PHBV生物材料进行低温等离子体表面修饰,可在材料表面引入了活性基团,并且有效地提高材料的细胞相容性,从而为组织工程血管的表面修饰提供一种有效的方法。 相似文献
17.
目的:比较双表达重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白2-9(Adv-BMP2-9)与单表达Adv-BMP9和Adv-BMP2复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(nHA/PA66)融合器用于山羊椎间融合的效果,验证BMP2与BMP9的协同成骨作用。 方法:选用40只中国青山羊行L2-3、L3-4和L 4-5腰椎间融合术,共融合120个腰椎间隙。每个腰椎间隙植入nHA/PA66 融合器复合以下4种腺病毒之一,Adv-BMP9(Adv-BMP9组,n=30)、Adv-BMP2 (Adv-BMP2组,n=30)、Adv-BMP2-9(Adv-BMP2-9组,n=30)和Adv-GFP(Adv-GFP组,n=30)。术后24周处死所有山羊,取出融合节段标本,行影像学评估和生物力学分析。 结果:X线检测,术前、术后各组间椎间隙高度(DSH)比较差异无统计学意义(P>0.05);各组标本椎间融合率,Adv-BMP2-9组为70% (21/30),Adv-BMP9组为53% (16/30),Adv-BMP2组为43% (13/30),而Adv-GFP组为30%(9/30)。各组椎间CT融合度评分,Adv-hBMP2-9组、Adv-hBMP9组、Adv-hBMP2组和Adv-GFP组依次为52.29±0.72、44.02±0.67、38.83±0.86和28.65±0.47,各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。生物力学评估,Adv-BMP2-9组融合节段刚度大于Adv-BMP9组( P<0.05) ;Adv-BMP9组融合节段刚度大于Adv-BMP2组,但差异无统计意义(P>0.05)。实验期间各组山羊均未观察到局部或远处感染、发热和异物排斥反应。 结论:双表达Adv-BMP2-9复合nHA/PA66 融合器对山羊椎间融合效果优于单表达Adv-BMP9或Adv-BMP2,BMP2与BMP9具有协同成骨作用。 相似文献
18.
目的 探讨不同浓度HU-308与纳米羟基磷灰石与聚己内酯(nHA/PCL)电纺丝膜对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1生物学性能的影响。方法 将静电纺丝膜制成圆形薄膜置于细胞培养板底部,使用含不同浓度HU-308(0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L)的培养液培养MC3T3-E1细胞;培养1、4、7 d,进行CCK-8检测增殖检测及碱性磷酸酶(ALP)活性的检测;Real Time-PCR检测培养7 d时细胞成骨相关基因OPG mRNA表达,观察培养24 h细胞骨架的形态。结果 培育1、4、7 d后,与对照组相比,各实验组间细胞增殖活性增强,P<0.05;随着培育时间的延长,同一实验组细胞增殖活性逐渐增强,P<0.05。随着培育时间的延长,同一实验组MC3T3-E1细胞中的ALP活性增加,P<0.05。在相同时间点,与对照组比较,低浓度HU-308(10-10 mol/L、10-9 mol/L)促进OPG mRNA的表达,P<0.05 ;高浓度HU-308对OPG mRNA的表达起抑制作用,且浓度越高抑制作用越明显,P<0.05。成骨细胞随药物浓度的加大,细胞铺展面积有增大趋势且细胞骨架结构更加清晰,尤以10-6 mol/L浓度组成骨细胞伸展范围最广。结论 HU-308和nHA/PCL电纺丝膜可促进MC3T3-E1细胞的黏附、增殖和分化。 相似文献
19.
To study mechanism of various effects of HLA antigen camouflaged by different mPEGs. Methods Effects of the modification of HLA antigen camouflaged by various mPEGs were detected by microlymphocytotoxicity test. The ability of modification was detected by SDS-PAGE. The mechanism of the modification was depicted by the three-dimensional structure of HLA antigen. Results The specific reaction between HLA-A2 antigen and its antibody were completely blocked by mPEG-BTC and mPEG-SPA, mPEG-MAL did not camouflage HLA antigen. The diversity of the modification of HLA antigen camouflaged by varied mPEGs was closely associated with the amides displayed on the surface of HLA antigen. Conclusion Only the amides which were exposed to the surface of HLA antigen can be camouflaged by mPEG. The amides on the surface of three-dimensional structure of HLA-A2 antigen determine the effect of the modification by various mPEGs. 相似文献
20.
目的探讨阿仑膦酸钠(ALN)对体内成骨的影响。方法选择3月龄SD大鼠20只,在每个颅骨上制备4个极限全层骨缺损,分别填入纳米羟基磷灰石(HA,A组),纳米羟基磷灰石-阿仑膦酸钠(HA-ALN),依据ALN质量比例分为B组(1mg/g)、C组(2mg/g)、D组(4mg/g)。术后2周、4周、8周和12周各随机处死5只。切取颅骨做大体观察,X线检测及组织学观察,比较两组缺损修复情况。实验数据采用SPSS13.0进行独立样本t检验。结果术后2周,实验组和对照组差异无统计学意义(P〉0.05),术后4周两组差异有统计学意义(P〈0.05),实验组优于对照组,术后8周和12周组间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 nHA-ALN在体内促进骨缺损修复效果优于nHA,以2mg/g组效果最显著。 相似文献