IL-21膜表面修饰MB49细胞疫苗治疗小鼠转移性膀胱癌的实验研究

目的制备白细胞介素21(IL-21)膜表面修饰的小鼠膀胱癌MB49细胞疫苗,评价其在小鼠膀胱癌皮下转移模型中诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL s)的效应和治疗作用。方法将SA-IL-21锚定在经30%酒精灭活后的MB49细胞膜表面而制成IL-21膜表面修饰疫苗。建立C57BL/6小鼠皮下MB49膀胱癌模型,将荷瘤小鼠随机分为5组:IL-21膜表面修饰疫苗组、单纯游离IL-21组、GFP膜表面修饰疫苗组、单独灭活MB49肿瘤疫苗组、PBS组。利用上述制备的疫苗进行治疗,通过检测各组小鼠肿瘤体积变化及CTL来评价疫苗的抗肿瘤功能。结果成功制备了IL-21膜表面修饰MB49疫苗。IL-21/MB49疫苗可显著抑制肿瘤生长并产生长期特异性免疫反应(P<0.05)。在同一效靶比下IL-21/MB49疫苗组的CTL杀伤活性显著高于其他组(P<0.05)。结论采用蛋白膜锚定技术可将IL-21高效锚定于MB49细胞膜表面制备成IL-21膜表面修饰膀胱癌肿瘤疫苗,该疫苗既可保持IL-21生物学活性又可明显增强CTL杀伤BCa肿瘤活性。     

新方法简便高效建立小鼠原位膀胱癌模型

目的 用物理化学的方法建立小鼠原拉表浅膀胱癌模型,并对影响成瘤率的因素进行探讨,筛选出高效简便建立小鼠原位表浅膀胱痛模型的方法.方法 用改造过的静脉留置针经小鼠尿道插入膀胱腔内,实验组用酸碱腐蚀的方法对小鼠膀胱粘膜进行预处理,按观察目的 的不同分为4组:对照组不作预处理.PBS冲洗后将MB49灌注入膀胱,构建小鼠原位表浅膀胱癌模型.所有小鼠观察一般情况和肿瘤生长情况.按计划处死小鼠并解剖观察膀胱肿瘤生长情况及有无转移,取标本做病理切片.结果 病理显示膀胱粘膜已预处理的小鼠接种肿瘤细胞后可在膀胱部位成瘤(成瘤率100%);丝裂霉素能显著减缓膀胱肿瘤的生长(P<0=0.000,P<0.05);对照组接种肿瘤细胞后未见成瘤.结论 膀胱粘膜处理的时间以酸20 S,碱5 S较合适;简便的物理化学方法成功建立了可靠性、稳定性和重复性均好的小鼠原位表浅膀胱癌模型,为表浅膀胱癌术后复发的防治研究尤其是抗癌药物的筛选和免疫治疗研究提供了理想的动物实验模型.     

SA-TNF-α融合蛋白高效表达、纯化及复性研究

目的 研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法 ,并研究其生物学功能.方法 在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍体系中复性,Western blot对其进行鉴定.MTT法检测SA-TNF-α融合蛋白对L929细胞的杀伤活性,流式细胞仪分析SA-TNF-α融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰率.结果 SA-TNF-α融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的目标蛋白占菌体蛋白30%以上,镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱纯化的SA-TNF-α融合蛋白纯度达到95.7%,经过两种体系复性形成的SA-TNF-α融合蛋白的二聚体和多聚体均具有双功能活性:既对L929细胞有杀伤活性又能锚定修饰生物素化的MB49细胞,锚定修饰率大于90%.结论 初步建立了SA-TNF-α融合蛋白制备工艺,SA- TNF-α二聚体和多聚体均具有双功能活性,SA-TNF-α融合蛋白的研制有望为肿瘤的治疗提供新的治疗方法 及新型药物.     

吡柔比星术后即刻膀胱灌注联合复方苦参注射液治疗浅表性膀胱癌的机制研究

目的:探究吡柔比星术后即刻膀胱灌注联合复方苦参注射液治疗浅表性膀胱癌的机制,为浅表性膀胱癌临床治疗提供帮助。方法:选取江苏省海门市人民医院收治的90例浅表性膀胱癌患者,按随机数字表法分为对照组和联合组,各45例,对照组患者采用经尿道膀胱肿瘤电切术后吡柔比星即刻膀胱灌注治疗,联合组患者采用经尿道膀胱肿瘤电切术后吡柔比星即刻膀胱灌注和复方苦参注射治疗,治疗前后检测各组患者T淋巴细胞亚群、细胞因子、肝功能与肾功能情况。结果:治疗前两组浅表性膀胱癌患者T淋巴细胞亚群、细胞因子、肝功能与肾功能比较差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前相比,两组患者经过治疗后CD8~+、细胞因子(IFN-γ与IL-2)、肝功能(AST和ALT)与肾功能(BUN和Cre)显著升高,T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+与CD4~+/CD8~+)以及细胞因子(TNF-α、IL-6和CRP)显著降低,差异存在统计学意义(P<0.05)。经过联合治疗后联合组T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+与CD4~+/CD8~+)、细胞因子(IFN-γ与IL-2)显著高于治疗后对照组,细胞因子(TNF-α、IL-6和CRP)、CD8~+、肝功能(AST和ALT)与肾功能(BUN和Cre)显著低于治疗后对照组,组间差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:吡柔比星术后即刻膀胱灌注联合复方苦参注射液能够提高浅表性膀胱癌患者的免疫功能、改善炎症反应以及降低化疗药物毒性,对浅表性膀胱癌患者的临床治疗具有重要的意义。     

负载辐射凋亡MB49肿瘤细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗对小鼠膀胱癌的抑制作用

 目的 研究辐射凋亡MB49肿瘤细胞诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的制备及对C57BL/6小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应。方法 采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型,随机分为实验组和对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗或者PBS,每组分为2个亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。结果 负载辐射凋亡肿瘤细胞DC疫苗的实验组荷瘤小鼠,其肿瘤的平均体积和平均质量均显著低于对照组(P<0.01),生存期长于对照组。DC疫苗实验组中有2只小鼠30天内无肿瘤生长,再次皮下接种MB49细胞观察30天仍无肿瘤发生。结论 负载辐射凋亡肿瘤细胞的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和延长生存期的作用。     

脂多糖通过调节浸润性淋巴细胞抑制小鼠肺腺癌的进展

目的:观察脂多糖(LPS)对小鼠肺腺癌进展的影响,并探讨相关免疫学机制。方法:小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞分为3组,分别给予PBS或LPS(10、20 mg/L)处理0、24、48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Annexin-V/PI双染法检测处理48 h后细胞凋亡率。取10只6～8周龄C57BL/6J雌性小鼠,皮下注射LLC细胞构建移植瘤小鼠模型,成瘤后将小鼠均分为两组,每组5只;分别腹腔注射PBS(对照组)或LPS(LPS组),每3 d注射1次,共注射4次。小鼠第1次腹腔注射PBS或LPS 6 h后,尾静脉取血,采用ELISA法检测小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。末次注射后第3天处死小鼠,测量肿瘤体积及质量。采用荧光抗体标记法检测小鼠肿瘤组织中CD45⁺淋巴细胞、CD3⁺T淋巴细胞、CD3⁺CD8⁺T淋巴细胞比例及CD8⁺T淋巴细胞表面细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)、T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TI...     

重组MUCI、MBP融合蛋白对荷瘤鼠肿瘤生长的影响

目的:研究重组MUCI-MBP融合蛋白抗肿瘤作用机制。方法:将10只C57鼠随机分两组,分别用MUCI-MBP+PBS和PBS隔周免疫两次后第四天,尾静脉注射Lewis肺癌细胞5×105/只,清洁饲养,40天后,处死小鼠,取其肿瘤组织进行免疫组化染色。结果:34天后,PBS组鼠臀部长出肿瘤,MUCI免疫组鼠未见明显变化;免疫组化染色可见MUCI免疫组鼠肿瘤组织中有明显的CD4+、CDS+T细胞浸润,PBS组鼠肿瘤组织中未见明显的CD4+、CDS+T细胞浸润。结论:重组MUCI-MBP融合蛋白免疫的C57鼠体内产生了免疫应答,活化了Th1细胞,诱导产生了T细胞免疫,抑制了肿瘤的生长。     

SA/hIL21双功能融合蛋白的表达、纯化及生物学活性检测

目的 制备链亲和素(SA)标记的人白细胞介素21融合蛋白(SA-hIL-21),检测其生物学活性.方法 构建hIL21-SA-pET21及pET24a-SA-hIL21质粒,利用大肠杆菌BL21(DE3)表达两种双功能融合蛋白,并利用镍金属螯合层析柱(Ni-NTA)纯化,之后透析复性,Western blotting进行鉴定,最后利用MTT法检测hIL21-SA及SA-hIL21融合蛋白与抗CD3单克隆抗体(anti-CD3)共刺激人外周血淋巴细胞的增殖活性,流式细胞仪分析两种融合蛋白对生物素化的MB49肿瘤细胞的锚定修饰效率.结果 hIL21-SA及SA-hIL21重组融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,约占菌体蛋白的30%,经复性后hIL21-SA及SA-hlL21具有了双重活性,即不仅可以与抗CD3单抗共刺激淋巴细胞的增殖,而且具有了SA介导的高效结合已生物素化的MB49肿瘤细胞表面的功能(表面修饰效率95.18%,96.91%).结论 本实验成功研制了具有双重活性的hIL21-SA及SA-hlL21融合蛋白,两种融合蛋白的双功能活性无显著性差异,该项研究为SA/hIL21双功能融合蛋白应用于肿瘤疫苗以及肿瘤局部治疗奠定了基础.     

微波消融联合CpG ODN治疗小鼠移植性结肠癌及对免疫状态的影响

目的 研究微波消融联合CpG ODN对小鼠移植性结肠癌的治疗作用及对免疫状态的影响.方法 Balb/c小鼠皮下接种结肠癌CT26细胞建立肿瘤模型,肿瘤分别给予瘤周注射PBS、微波消融、微波消融+瘤周注射CpG ODN和瘤周注射CpG ODN四种处理.定期测量肿瘤大小,利用流式细胞仪检测小鼠外周血中CD3+CD4T细胞、CD3℃D8+细胞的比例;采用ELISA检测小鼠外周血中IL-2、IL-12和IFN-γ含量.给予微波消融组和微波消融联合CpG ODN组治愈的小鼠再次接种CT26细胞,观察成瘤率.结果 微波消融组和微波消融联合CpG ODN组小鼠的肿瘤体积显著小于PBS组和CpG ODN组.4组小鼠外周血中的CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例无显著性差异,微波消融联合CpG ODN组及微波消融组的CD3+CD4+T/CD3+CD8+T细胞比值分别为1.58±0.10和1.53±0.13,与PBS组和CpG ODN组相比显著升高(P均<0.05).微波消融联合CpG ODN组小鼠外周血中IL-2浓度为(64.6±7.4)pg/ml,IL-12浓度为(314.1±26.9)pg/ml,IFN-γ浓度为(61.9±7.3)pg/ml,显著高于其他3组(P均＜0.05).肿瘤再次攻击实验中微波消融联合CpG ODN组成瘤率为25.0%,显著低于微波消融组的75.0%(P<0.05).结论 CpG ODN增强了微波消融治疗小鼠的免疫功能,减少了肿瘤再次攻击的成瘤率.     

应用α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫治疗干燥综合征的实验研究

目的 探讨α-胞衬蛋白鼻黏膜给药对干燥综合征自发鼠模型NOD小鼠SS病变的抑制作用及其机制.方法 以NOD小鼠作为干燥综合征自发鼠模型,8只1组,自4周龄开始分别鼻吸入法给予α-胞衬蛋白1 μg和1O μg,隔天给药1次,对照组分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)10 μl及谷胱甘肽转移酶(GST)10 μg,观察小鼠饮水量的改变.测定血清中的抗α-胞衬蛋白及M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体,抗干燥综合征抗原(SS)A抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)及抗核抗体(ANA)等自身抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ,流式细胞仪检测脾细胞FoxP3+ T细胞的表达,应用HE染色和免疫组化方法 分别检测小鼠颌下腺、腮腺的病理学改变及α-胞衬蛋白的表达.结果 (1)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠自身抗体的产生.α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫组的α-胞衬蛋白抗体和M3RP抗体滴度较对照组减低.差异有统计学意义(P＜0.05).至小鼠17周龄,对照组分别有5只鼠出现ANA阳性,而1 μg组和10 μg组分别有2只和3只鼠ANA阳性.(2)鼻吸入α-胞衬蛋白可使NOD小鼠血清IFN-γ水平降低.α-胞衬蛋白1 μg组、10 μg组、PBS组及GST组小鼠血清干扰素-γ水平,分别为(42±16)、(37±15)、(87±18)及(72±11)pg/ml,α-胞衬蛋白给药组明显低于对照组(P＜0.05),而IL-10在各组间差异无统计学意义.(3)鼻吸入α-胞衬蛋白可上调NOD小鼠Foxp3+ T细胞的数量:1 μg、10 μg、PBS及GST组小鼠脾细胞的表达Foxp3+的CD4+ CD25+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例分别为(4.0±1.7)%、(4.3±1.0)%、(2.2±0.6)%、(2.3±0.7)%,α-胞衬蛋白治疗组较对照组明显提高(均P＜0.05).(4)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠腺体淋巴细胞浸润和α-胞衬蛋白的表达.α-胞衬蛋白给药组淋巴细胞浸润较对照组少,且应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测,α-胞衬蛋白给药组的α-胞衬蛋白表达明显减少.(5)鼻吸入α-胞衬蛋白可以降低NOD小鼠的饮水量.α-胞衬蛋白1 μg、10 μg、PBS及GST组的小鼠于16周龄时饮水量分别为(39.2±2.1)、(40.4±2.5)、(49.3±3.1)及(51.6±2.8)ml,与对照组相比,α-胞衬蛋白免疫诱导后可减少患鼠的饮水量(P＜0.05).结论α-胞衬蛋白是SS的致病性抗原,利用该蛋白鼻黏膜免疫可以上调调节性T细胞的数量,抑制SS动物自身抗体的产生及腺体中淋巴细胞浸润.     

单次小剂量环磷酰胺对小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞及抗肿瘤免疫力的影响

目的探讨单次小剂量注射常规化疗药物环磷酰胺(CTX)对小鼠CD4+CD25+Treg细胞的影响及其抗肿瘤作用。方法C57BL/6小鼠40只随机分为CTX组和对照组各20只,CTX组采用CTX 20 mg.kg-1溶于0.2 mL生理盐水中腹腔注射,对照组采用生理盐水0.2 mL腹腔注射;(1)2组于注射完成3 d后各取10只小鼠皮下注射0.5 mL细胞混悬液(含2×106个RMA肿瘤细胞),观察20 d,观察结束后取小鼠脾脏淋巴细胞,用3-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测刀豆蛋白A诱导的淋巴细胞增殖情况;(2)2组于注射完成4 d后各处死10只小鼠,无菌状态下取小鼠脾脏用流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg细胞相对量;同时用western blotting技术检测scurfin蛋白在小鼠脾脏中的表达变化。结果CTX组CD4+CD25+Treg细胞占淋巴细胞百分比明显低于对照组(P<0.05);CTX组scurfin蛋白表达密度值明显低于对照组(P<0.05);CTX组肿瘤攻击后小鼠肿瘤发生率较对照组降低(P<0.05);CTX组肿瘤攻击后小鼠肿瘤质量较对照组减轻(P<0.05);对照组小鼠在接种后第5天即发现有出瘤现象,而CTX组出瘤时间延长到第8天;对照组的肿瘤生长曲线较为陡直;CTX组的生长曲线较为平缓。CTX组淋巴细胞的增殖能力明显高于对照组(P<0.05)。结论单次小剂量CTX可以改善机体的免疫功能,并具有一定的抗肿瘤作用,为肿瘤临床治疗提供了实验依据。     

分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究

目的 探讨分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠膀胱癌的抑癌效应.方法 采用小鼠T739可移植性膀胱癌模型,共80只分为10组,于移植瘤处局部注射分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白,并用Ag85B蛋白、BCG、IL-2和生理盐水作对照,观察治疗后各组的肿瘤质量、体积和存活期.光镜和电镜下观察肿瘤的形态改变.结果 分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组小鼠肿瘤瘤质量(2.49±0.60) g,非常显著低于Ag85B蛋白组、BCG组、IL-2组和生理盐水组(P《0.01);Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组小鼠肿瘤瘤体积(3.01±0.95) cm3,显著低于Ag85B蛋白组、BCG组、IL-2组和生理盐水组(P《0.05,P《0.01);Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组小鼠存活天数(35.50±2.60) d,显著长于Ag85B蛋白组,BCG组、IL-2组和生理盐水组(P《0.05,P《0.01);Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠的肿瘤质量抑制率为64.50%,肿瘤体积抑制率为62.24%,存活延率为48.66%.光镜下观察Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组肿瘤细胞有明显的炎性细胞浸润、肿瘤细胞坏死、出血等改变;透射电镜下观察,可见细胞膜破裂,细胞器破坏,细胞质固缩,细胞核破坏,核染色质聚集,凋亡小体出现,巨噬细胞吞噬增多等现象.结论 分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠膀胱癌具有抑制作用,并能延长膀胱癌荷瘤鼠的生存期.     

加味四君子汤对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响

目的:探讨加味四君子汤对Lewis肺癌模型小鼠免疫功能的影响。方法:选取SPF及C57BL/6小鼠60只,10只制备Lewis瘤细胞悬液,40只Lewis肺癌模型小鼠采用随机数字表法分为模型组、环磷酰胺组、加味四君子汤组、联合治疗组,每组各10只,其余10只小鼠为对照组。对比各组之间连续给药14 d后小鼠体质量、肿瘤体积、胸腺质量、胸腺指数、脾细胞内CD4+T百分比、CD8+T百分比、B淋巴细胞百分比。结果:各组小鼠之间肿瘤体积差异有统计学意义(P<0.01);环磷酰胺组、加味四君子汤组、联合治疗组的肿瘤体积均明显小于模型组(P<0.01);联合治疗组的肿瘤体积均明显小于环磷酰胺组、加味四君子汤组(P<0.01);环磷酰胺组与加味四君子汤组肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05)。各组小鼠之间胸腺质量、体质量、胸腺指数差异有统计学意义(P<0.05);对照组小鼠体质量明显高于其它四组(P<0.05);加味四君子汤组的胸腺质量与胸腺指数均明显高于对照组及环磷酰胺组(P<0.05)。各组小鼠之间脾细胞内CD4~+T百分比、CD8~+T百分比、B淋巴细胞百分比差异均有统计学意义(P<0.01);模型组脾细胞内CD4~+T百分比、CD8~+T百分比明显低于对照组,B淋巴细胞百分比明显高于对照组(P<0.05);环磷酰胺组、加味四君子汤组脾细胞内CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞百分比均明显高于对照组,环磷酰胺组、加味四君子汤组脾细胞内B淋巴细胞百分比均明显低于对照组(P<0.05);联合治疗组脾细胞内CD8~+T明显高于对照组,B淋巴细胞明显低于对照组(P<0.05);联合治疗组脾细胞内CD4~+T百分比、CD8~+T百分比明显高于模型组,B淋巴细胞百分比显著低于模型组(P<0.05);联合治疗组脾细胞内CD4~+T百分比、CD8~+T百分比明显高于环磷酰胺组(P<0.05)。结论:在环磷酰胺治疗基础上加用加味四君子汤可以显著抑制Lewis肺癌肿瘤生长,改善免疫功能。     

灵芝多糖和DCN合用对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验研究

目的 探讨灵芝多糖(GLP)和核心蛋白聚糖(DCN)基因联合使用对S180荷瘤小鼠免疫功能影响及其抗肿瘤作用.方法 将32只小鼠,建立S180实体移植瘤模型,随机分为生理盐水组(NS组)、灵芝组(GLP组)、转基因治疗组(DCN组)和灵芝联合转基因治疗组(DCN+GLP组).测量小鼠肿瘤体积,并采用MTT法检测T淋巴细胞转化能力,ELISA测定血清VEGF的变化,流式细胞检测CD+4 CD+25调节性T细胞占CD+4T 细胞的比例.结果 各治疗组平均肿瘤体积增长延缓,淋巴细胞增殖率显著增加(P＜0.05),同时VEGF表达明显下调,脾脏CD+4 CD+25调节性T细胞占CD+4T细胞的比例明显降低.结论 灵芝多糖和核心蛋白聚糖DCN联合使用能够显著提高荷瘤小鼠免疫系统的活性,抑制肿瘤生长.     

可溶性小鼠CD83-Ig对同种胰岛β细胞在糖尿病模型小鼠体内存活的影响

目的 研究可溶性小鼠CD83-Ig对NIT-1细胞在同种异基因糖尿病模型小鼠体内存活时间的影响.方法 将表达小鼠CD83胞外功能区和人IgGlαFc融合基因的真核表达载体pmcD83-hIg转染COS-7细胞,取细胞培养上清液制备CD83-Ig融合蛋白.采用链尿佐菌素(STZ)诱导法制作BALB/c小鼠糖尿病模型,并移植胰岛细胞系NIT-1进行治疗,同时在NIT-1移植的-1,1和3 d输注CD83-Ig,并观察输注CD83-Ig对NIT-1在糖尿病模型小鼠体内存活时间的影响.结果 移植NIT-1后第3天各组小鼠血糖均恢复至正常水平;移植物NIT-1细胞在输注CD83-Ig组小鼠体内的存活时间为18 d,较在输注入IgG组和PBS组小鼠体内的存活时向(均为9 d)明显延长;输注CD83-Ig组小鼠平均存活时间为(44.50±6.41)d,而输注人IgG组和PBS组小鼠存活时间分别为(29.86±4.18)d和(30.71±4.49)d.结论 CD83-Ig融合蛋白可延长小鼠胰岛β细胞在同种异基因糖尿病小鼠体内的存活时间,可能是一种用于治疗移植排斥反应的较好的免疫抑制剂.     

靛玉红诱导免疫性血小板减少性紫癜小鼠免疫耐受机制的研究

目的 探讨靛玉红对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)小鼠模型的治疗作用.方法 Wistar大鼠血小板免疫CBA小鼠20只,建立ITP动物模型,随机分为两组,实验组给予靛玉红腹腔注射,对照组给予PBS腹腔注射,在建模第4周分离小鼠脾细胞,MIT检测脾细胞增殖,流式细胞仪检测小鼠脾中淋巴细胞表型(CD4、CD8、CD25、Foxp3),并以MACS分离CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)进行混合淋巴细胞培养(MLR),评价调节性T细胞的抑制功能.结果 靛玉红通过抑制ITP小鼠脾细胞增殖,减少CD4细胞的数量,提高CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的相对比例,有效改善ITP的血小板减少程度,而MLR显示靛玉红并不抑制Treg的抑制功能.结论 靛玉红可通过影响调节性T细胞诱导ITP免疫耐受.     

胃癌患者手术前后4种淋巴细胞表型的变化及其临床意义

目的:探讨胃癌患者手术前后外周血淋巴细胞(PBL)CD8、CD28、CD49b、CD49d 等4种表型的变化及其临床意义.方法:应用CD8、CD28、CD49b、CD49d 单克隆抗体,采用流式细胞术,对20例胃癌患者及同期非肿瘤患者(对照组)PBL上述4种表型进行检测.结果:(1)肿瘤组淋巴细胞CD8的表达显著高于对照组(P<0.01);而CD28、CD8+/CD28+、CD49d的表达则低于对照组(P<0.01).(2)进展期胃癌组CD8+/CD28+、CD49b的表达明显低于早期组(P<0.05);淋巴结转移组CD28、CD8+/CD28+、CD49d的表达低于无淋巴结转移组(P<0.05);侵及浆膜层组CD8的表达高于侵及黏膜、黏膜下层组,而CD28的表达则低于侵及黏膜、黏膜下层组(P<0.05).(3)根治及姑息切除肿瘤后,CD8的表达明显降低(P<0.05),CD28、CD8+/CD28+表达显著升高(P<0.01);CD49b、CD49d的表达亦明显升高(P<0.05,P<0.01).结论:胃癌患者淋巴细胞CD8、CD28、CD49b、CD49d的表达与肿瘤的生物学行为密切相关,切除肿瘤有助于改善患者细胞免疫功能.     

HBV转基因小鼠体内淋巴细胞表型特点及干扰素α对其的影响

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠体内淋巴细胞表型特点及干扰素α对其病毒学指标和免疫细胞表型的影响。 方法选取HBV 转基因小鼠和野生型（WT）小鼠,采用ELISA检测HBV转基因小鼠血清HBsAg和HBcAb水平及两组小鼠血 清IL-21及IL-6水平,分离肝、脾以及外周血淋巴细胞,流式细胞术检测CD4+T和CD19+B细胞频数;给予9只HBV转基因小鼠 重组鼠源性干扰素α（rmIFN-α）皮下注射,同时9只HBV转基因小鼠相应注射PBS,观察其血清HBsAg、HBV DNA、IL-6、IL-21 水平的变化以及外周血CD4+T和CD19+B细胞频数变化。结果HBV转基因小鼠的血清HBsAg水平较高并能检测到HBcAb, 其血清IL-21及IL-6水平较WT小鼠显著升高（P<0.05）;HBV转基因小鼠外周血、肝脏以及脾脏淋巴细胞中CD4+T细胞频数较 WT小鼠均明显低下（P<0.05）,但其肝脏CD19+B细胞频数明显高于WT小鼠（P<0.05）;HBV转基因小鼠肝内CD4+T细胞频数 与血清HBsAg水平呈负相关,而肝内CD19+B细胞频数与血清HBcAb水平呈正相关;rmIFN-α处理可显著提高HBV 转基因小 鼠外周血CD4+T和CD19+B细胞频数以及血清IL-6水平（P<0.05）。结论HBV转基因小鼠体内淋巴细胞亚群频数异常,外源性 干扰素α可通过调节淋巴细胞亚群频数发挥免疫调节作用。     

SA/hI-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定

目的制备链亲和素连接的人干扰素诱导T细胞α趋化因子融合蛋白（SA/hI-TAC）,并对其生物学功能进行鉴定。方法构
建pET24a-SA-hI-TAC/pET21a-hI-TAC- SA表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达两种融合蛋白,用镍金属螯合层析纯化、透
析复性及蛋白质印迹法（Western blot）鉴定,融合蛋白中I-TAC部分的生物学活性由淋巴细胞趋化实验检测;融合蛋白中SA的
生物学活性由流式细胞仪测定。结果两种融合蛋白可在大肠杆菌BL21 中被诱导表达,分别占细菌表达总蛋白量的12%和
25%,经镍柱纯化后融合蛋白纯度达85%、90%,经丙烯葡聚糖凝胶S-100过滤层析后,纯度均可达到98%,融合蛋白在生物素化
的MB49细胞（小鼠膀胱癌细胞）表面的修饰效率分别为91.3%、98.8%,并对淋巴细胞的趋化作用呈剂量依赖性,且hI-TAC-SA
的趋化作用明显强于SA-hI-TAC。结论SA/hI-TAC 双功能融合蛋白可能应用于肿瘤局部治疗以及肿瘤疫苗。
     

胸腺素对肾移植术后巨细胞病毒肺炎患者的免疫调节作用

目的:胸腺肽α1(日达仙)是一种生物应答调节剂,它在调节和增强机体免疫方面发挥重要作用.目前,胸腺肽α1已广泛应用于慢性肝炎和肿瘤患者的治疗,获得良好效果.但是,在肾移植术后免疫功能低下并发巨细胞病毒(CMV)肺炎的患者中应用胸腺肽α1尚未见报道.文中探讨胸腺素(日达仙)对肾移植术后并发巨细胞病毒(CMV)肺炎患者的免疫调节作用. 方法:一旦患者确诊为急性呼吸衰竭和全身炎症反应综合征,全部经过呼吸机辅助呼吸和连续性血液净化(CBP)治疗过渡.所有患者均采用同样的免疫抑制剂调整方案和针对性抗病毒、细菌或抗真菌和支持治疗.将入选研究的患者随机分为胸腺素治疗组(治疗组,n=31)和未用胸腺素治疗组(对照组,n=28).治疗组加用胸腺素1.6mg,皮下注射,隔日1次或每日1次.临床观察其抢救成功率、死亡率和移植肾有无急性排斥反应.动态观察外周血白细胞、淋巴细胞、T淋巴细胞亚群水平的变化. 结果:胸腺素治疗组的抢救成功率明显高于对照组,分别为80.6%和53.6%(P<0.05);死亡率明显低于对照组,分别为19.4%和46.4%(P<0.05);CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+T淋巴细胞比值较治疗前明显升高(P<0.05).死亡患者死亡时肾功能均正常.存活患者因在抢救过程中撤减免疫抑制药物,发生急性排斥反应3例(治疗组2例和对照组1例).随访观察12个月后,存活患者血肌酐均稳定正常(89.3±14.1)μmol/L.随着病程的变化,存活患者于治疗7、14和21d时,外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞计数逐渐升高,明显高于用药当日,其中CD4+T淋巴细胞上升更加明显,CD4+/CD8+比值亦升高.死亡组患者的CD4+、CD8+T淋巴细胞计数则呈进行性下降,治疗7、14和21d时的CD4+T细胞亚群的计数明显低于存活组. 结论:肾移植术后合并CMV肺炎患者加用胸腺素可调节T淋巴细胞数量、功能,增加T细胞活性,提高机体细胞免疫功能,增强抗感染能力.从而提高CMV肺炎并发急性呼吸衰竭的抢救成功率,降低其病死率.