腺病毒介导的hIL-24基因对肺腺癌细胞生长的影响

目的研究重组腺病毒Ad-hIL-24对A549肺癌细胞的影响。方法将载有hIL-24基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-hIL-24）感染A549肺癌细胞,RT-PCR法检测hIL-24基因的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察病毒感染前后细胞形态的变化,运用MTT法和流式细胞术（FCM）分别检测其对A549细胞的生长抑制及凋亡效应,通过免疫细胞化学分析caspase-3的变化。结果Ad-hIL-24感染A549细胞后有hIL-24目的基因的转录,可明显抑制A549细胞的生长,凋亡率明显增加,并能上调caspase-3的表达。结论腺病毒介导的hIL-24基因具有抑制A549肺癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

中药艾迪诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的 研究中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用.方法 四亚基噻唑蓝(MTT)法测定中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长的抑制作用,荧光显微镜观察人喉癌细胞Hep-2的凋亡状况,流式细胞仪技术(FCM)观察人喉癌Hep-2细胞周期及凋亡,荧光定量PCR法测定人喉癌细胞Hep-2环氧化酶(COX-2)的表达量.结果 不同浓度的中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长均有抑制作用,并有明显的时间和剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪分析显示中药艾迪能减少G1期的比例,增加G2和S期的比例,并能诱导细胞凋亡.中药艾迪作用人喉癌细胞Hep-2 24h后其环氧化物酶-2的表达量升高,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 中药艾迪在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,其机制可能是诱导细胞凋亡.     

GFP共表达的重构型Caspase-3基因对Hep-2细胞的作用

目的:探讨GFP共表达的Caspase-3基因的表达对人喉癌细胞Hep-2的凋亡诱导作用. 方法:应用DNA重组技术将重构型 Caspase-3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,脂质体介导转染人喉癌细胞Hep-2,通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化; MTT法检测转染Caspase-3基因对Hep-2细胞生长的影响. 结果:RT-PCR方法证实重构型Caspase-3基因可在Hep-2细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,MTT法结果表明Caspase-3对Hep-2的细胞生长有抑制作用. 结论:重构型caspase-3对喉癌细胞Hep-2的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.     

p16β基因重组腺病毒质粒的构建及对喉癌细胞的作用

目的探讨野生型p16β对体外喉癌Hep-2细胞周期信号传导的干预作用。方法以重组腺病毒为载体,构建p16β的重组腺病毒AdEasy-GFP-p16β质粒,并在293细胞中包装、纯化。将已纯化的重组腺病毒AdEasy-GFP-p16β在体外转染Hep-2喉癌细胞,采用MTT实验、流式细胞术（FCM）、免疫组化、Western blot等实验手段检测Hep-2细胞的抑制／杀伤作用及其细胞周期信号、DNA含量、细胞凋亡率的变化;检测P16蛋白的表达和Hep-2细胞的超微结构变化。结果本研究成功地构建和制备了高滴度的AdEasy-GFP-p16β重组腺病毒,并高效地转移到Hep-2细胞内和表达P16蛋白,有效地抑制了Hep-2细胞的生长。被转染的Hep-2细胞被有效地阻滞在G0／G1期,提高了转染细胞的凋亡率。结论重组腺病毒AdEasy-GFP-p16β能高效感染Hep-2细胞,表达P16蛋白;有效抑制Hep-2细胞增殖;干预Hep-2细胞周期的信号传导机制和细胞周期,诱导凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖活性。     

雷公藤内酯醇对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对人喉癌Hep-2细胞生长的影响.方法 采用MTT法检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法(TUNEL)评价细胞凋亡;透射电镜观察雷公藤内酯醇对喉癌Hep-2细胞超微结构的影响.结果 10～40ng/mL的雷公藤内酯醇作用48h后能明显抑制Hep-2细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性;透射电镜观察到明显的细胞凋亡特征.结论 在体外培养的条件下雷公藤内酯醇能明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡.     

大蒜素诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的研究大蒜素（allicin）对喉癌细胞Hep-2的凋亡作用。方法体外培养的喉癌细胞Hep-2分别加入终浓度为12．5;25．0;50．0;100．0μg／ml的大蒜素,应用光学显微镜,MTT比色法及流式细胞仪分析不同剂量大蒜素对喉癌细胞Hep-2的凋亡作用。结果光镜下可见对照组喉癌细胞生长密集,细胞成梭形或多角形。大蒜素小剂量组细胞数量明显减少,随剂量增加细胞数渐少,高剂量组可见坏死细胞。MTT结果显示大蒜素呈时间剂量依赖性抑制喉癌细胞的生长。流式细胞仪表明大蒜素作用后,可将喉癌细胞阻滞在G0／G1期,并诱导喉癌细胞的凋亡。结论大蒜素作用后,可有效抑制的喉癌细胞的生长,并可诱导喉癌细胞的凋亡。     

腺病毒介导的ING4基因抑制胃癌细胞生长及其分子机制

目的:研究肿瘤生长抑制基因4(inhibitor of growth family4,ING4)体外对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及其分子机制。方法:将携带有人ING4基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hING4)感染胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR法检测腺病毒介导的外源性hING4基因的转录,MTT法检测hING4基因对SGC-7901细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hING4基因诱导SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测hING-4基因诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子bcl-2和bax的改变。结果:Ad-hING4感染SGC-7901细胞后,RT-PCR结果提示有hING4目的基因的转录,该基因表达可以显著抑制SGC-7901细胞的生长,诱导S期减少、G2/M期阻滞和凋亡,hING4基因能使SGC-7901细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论:重组腺病毒Ad-hING4对胃癌细胞SGC-7901具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达有关。     

Kai1对人喉癌Hep-2细胞株增殖及生长周期的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因Kail对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及生长周期的影响.方法:本研究以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kail基因的重组腺病毒(rAd-Kail)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kail转染人喉癌Hep-2细胞株,利用RT-PCR技术对转染效果进行检测,以未转染Kail的喉癌细胞株为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术测定转染组细胞株的增殖抑制率和细胞周期.结果:rAd-Kail经扩增、纯化后,滴度可达1010 PFU/ml,当病毒量为30MOI时,对Hep-2细胞的转染率达93%以上.MTT实验显示转染Kail的Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于对照组(P＜0.01),抑制率可达29%.流式细胞术显示与对照组比较,转染组G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,差异有显著性(P＜0.05 o结论:通过重组腺病毒介导,成功地将Kail基因转入喉癌Hep-2细胞株,Kail对喉癌细胞体外增殖能力具有抑制作用,其机制可能是将Hep-2细胞生长周期阻滞于G0/G1期,提示:Kail抑癌基因可能通过阻滞肿瘤细胞生长周期实现抑制肿瘤细胞增殖.     

槲皮素对喉癌细胞Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用

目的研究槲皮素在体外对喉癌Hep-2细胞株的生长和凋亡的影响。方法应用MTT法、电镜和流式细胞术等方法对在体外经不同浓度槲皮素处理过的Hep-2细胞进行检测,观察细胞增殖和凋亡的改变。结果①槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Hep-2细胞的生长,作用72 h的半数抑制浓度(IC50)是52.48μmol/L,呈剂量依赖性关系。②PB能诱导Hep-2细胞凋亡,发生G1→S期阻滞。结论槲皮素可使喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,为槲皮素用于喉癌临床治疗提供了部分依据。      

靶向survivin基因siRNA对喉癌细胞增殖、凋亡的影响

目的观察靶向survivin基因的siRNA对喉癌细胞Hep-2增殖和凋亡的影响,为喉癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将靶向survivin基因的siRNA转染至喉癌细胞株Hep-2;MTT[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测对喉癌细胞Hep-2增殖的影响;RT-PCR检测喉癌细胞Hep-2survivin基因mRNA表达的变化;Western Blot检测survivin基因蛋白表达;流式细胞技术检测喉癌细胞Hep-2凋亡情况。结果各浓度survivin-siRNA转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组（〈0.05）,survivinmRNA和蛋白表达有不同程度减弱,并且有明显的浓度依赖性,随着浓度的上升表达率下降。结论利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制喉癌细胞Hep-2细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,不同浓度survivin-siRNA转染能下调survivinmRNA和蛋白表达,靶向survivin基因的RNA干扰技术在喉癌的基因治疗中具有一定价值。     

AFMC选择性增强TRAIL对肺癌A549细胞毒性

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素(AFMC)选择性增强肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)对人肺癌A549细胞毒性作用.方法:体外培养人肺癌A549细胞和人胚肺WI-38细胞.全自动生化分析仪测定细胞上清液乳酸脱氢酶活性.碘化丙啶(pI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率.结果:AFMC与TRAIL合用...     

反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响

目的观察反义VEGF基因转染对HEP-2细胞生物学行为的影响.方法克隆人VEGF基因,将VEGF-cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义VEGF表达载体pcDNA3-VEGF(-);利用阳离子脂质体载体,稳定转染人喉癌Hep-2细胞,并通过流式细胞仪检测,观察转染细胞细胞周期的改变,在透射电镜下观察转染细胞超微结构的改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果成功克隆了人VEGF基因,并构建了携带反义VEGF基因的真核表达载体pcDNA3-VEGF(-);将其稳定转染人喉癌Hep-2细胞,获得了稳定表达反义VEGF的细胞系,与正常Hep-2细胞相比,该细胞系细胞周期及超微结构均无明显改变;将转染细胞注入裸鼠皮下,与对照组相比,肿瘤的生长速度明显减缓.结论反义VEGF基因转染可以有效地抑制喉癌的生长.     

RMP基因的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的制备RPB5调节蛋白（RMP）抗体并研究RMP在60Coγ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达及功能。方法 RT-PCR检测HT-29、A549、Hep-2、SGC-7901、293T、HeLa、WI-38和SMMC-7721细胞株中RMP的表达;从质粒中PCR扩增得到人RMP基因并克隆至原核表达载体中,诱导表达后经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-RMP/D1,以该蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体;肝癌细胞SMMC-TT21、PFlaG-CMV4-SMMC-7721、PFlaG-CMV4-RMP-SMMC-7721经6 Gy 60 Coγ射线照射后,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的变化。结果RMP在以上细胞系中均有表达,但程度不同;SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人RMP片段。Western blot结果显示,制备的多抗可与RMP蛋白特异性结合;肝癌细胞株经6 Gy 60Coγ射线照射后,流式细胞术结果表明RMP使肝癌细胞SMMC-7721的凋亡减少。结论 RMP在不同细胞株中均有表达且能减少肝癌细胞SMMC-7727的凋亡,为RMP用于肝癌的基因治疗奠定了基础。     

Rel A在喉癌Hep-2细胞系中的表达和意义

目的:研究Rel A基因在人喉癌Hep-2细胞中的表达及意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫细胞组织化学技术分别检测Rel A基因的mRNA和蛋白在人喉癌细胞系Hep-2和人正常永生化表皮细胞系Hacat中的表达。结果:Rel A基因的mRNA在Hep-2细胞中高表达,在Hacat细胞中低表达(P<0.05)。Rel A基因的蛋白在Hep-2细胞中高表达且主要表达于细胞浆,在Hacat细胞中低表达(P<0.05)。结论:Rel A基因的高表达可能与喉癌发生、发展有关。     

人类β干扰素对乙脑病毒在人类细胞系上增殖的抑制作用

本文研究了人类β干扰素对乙型脑炎病毒在３株人类细胞株上的增殖的抑制作用（Ｈｅｐ－２，ＦＬ和Ｕ９３７）。人类β干扰素在１０００Ｉμ／ｍｌ时，病变产生在ＲＬ细胞，Ｈｅｐ－２细胞和Ｕ９３７细胞上分别是对照组的０．５％，２．７％，３７．２％。本研究同时比较了人类β干扰素在人类细胞株，猴细胞株和地鼠细胞株上对乙脑病毒的抑制作用（Ｈｅｐ－２，Ｖｅｒｏ，ＢＨＫ２１）其敏感性有明确的差异（许多文献已有报道）。本研     

Kai1/CD82对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响

目的探讨肿瘤转移抑制基因Kai1/CD82对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力的影响。方法以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kai1基因的重组腺病毒(rAd-Kai1)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kai1转染人喉癌Hep-2细胞株,以转染空病毒载体及未转染Kai1的喉癌细胞株为对照,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Kai1对细胞增殖能力的影响,用RT-PCR技术对转染后的细胞进行检测。结果rAd-Kai1经扩增、纯化后,滴度可达6×1010PFU/ml,当病毒量为30 MOI时,Hep-2细胞的转染率可达90%以上。MTT实验显示转染空腺病毒组与未转染组比较,Hep-2细胞株体外增殖能力无统计学差异,转染Kai1组Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于未转染组(P<0.05),抑制率可达29%。结论肿瘤转移抑制基因Kai1/CD82对喉癌细胞株体外增殖能力具有抑制作用。     

CD133基因启动子调控增强型绿色荧光蛋白基因在喉癌Hep-2细胞中的表达

目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人外周血基因组中克隆人CD133基因启动子,通过基因重组技术将人CD133基因启动子克隆入慢病毒基因转移载体pWPXLd-eGFP中,构建人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体,PCR以及酶切鉴定构建载体的正确性。应用脂质体介导该载体转染入Hep-2细胞中,细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pWPXLd)和实验组(转染pWPXLd-eGFP-CD133)。应用荧光显微镜观察各组eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。结果:PCR法获得了约1 810bp大小的CD133基因启动子片段;酶切与PCR鉴定,成功构建了人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体。荧光显微镜下,阳性对照组和实验组转染的Hep-2细胞株有eGFP的表达,而空白组对照组的Hep-2细胞内无eGFP的表达。结论:构建的人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体可以调控eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。     

多器官细胞共同培养方法检测双黄连口服液的细胞毒性

目的：观察双黄连口服液对人类体外不同靶器官细胞的毒性及特点。方法：应用人类多器官细胞共培养模型,观察双黄连口服液分别作用24、48、72 h后,对WI-38、HepG2、HEK293、SH-SY5Y和HCF细胞增殖的影响。结果：双黄连口服液处理24、48、72 h后,各种细胞的增殖率有随着剂量的降低而升高的趋势、且有较好的剂量-效应关系。该药除在72 h后的1/32浓度对HEK293细胞无影响外,在所有时点的各浓度均抑制该细胞的增殖。处理24 h后,1/4～1（原液）浓度的双黄连口服液抑制WI-38细胞,1/8～1（原液）浓度的该药抑制HepG2、SH-SY5Y和HCF细胞增殖;48 h后,1/16～1（原液）浓度抑制WI-38、HepG2、SH-SY5Y和HCF细胞;72 h后,1/2～1（原液）浓度的双黄连口服液抑制WI-38细胞,所有浓度的该药均抑制HepG2、SH-SY5Y和HCF细胞。结论：双黄连口服液对WI-38、HepG2、HEK293、SH-SY5Y和HCF细胞可能均有毒作用,其可能的毒性大小顺序为肾细胞>肝细胞>神经、心肌细胞>肺细胞。