两种人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的比较研究

目的 比较两种人卵巢癌裸鼠移植瘤模型.方法 将1例人卵巢癌组织移植裸鼠,建立人卵巢癌裸鼠原代移植实体瘤模型的基础上,传代第十五代实体瘤细胞和人卵巢癌SKOV3细胞分别皮下移植裸鼠.观察两种人卵巢癌裸鼠肿瘤生长速度、存活时间、组织病理学检查、染色体.结果 实体瘤细胞皮下移植瘤生长速度高于SKOV3细胞皮下移植瘤(P＜0.05).实体瘤细胞皮下移植瘤裸鼠可存活30～58 d;SKOV3细胞皮下移植瘤裸鼠存活96～158 d.病理检查:肉眼观察实体瘤瘤细胞皮下移植瘤:瘤为实体,血性少量腹水,有肝、脾转移;SKOV3细胞皮下移植瘤呈囊形,肿瘤长大后可出现破溃,坏死、脱落,未见腹水及肝、脾转移.组织病理显微镜观察均呈乳头状生长,癌细胞生长活跃,细胞核大小不规则,核分裂多见与人癌组织一致.实体瘤细胞皮下移植瘤染色体多为亚二倍体和多倍体;SKOV3细胞皮下移植瘤多为三倍体或四倍体.结论 实体瘤细胞与SKOV3细胞皮下移植瘤有区别,实体瘤模型与人卵巢癌更为一致,并向肝、脾转移.     

bFGF-MAb抑制卵巢癌细胞及其腹腔移植瘤生长的实验研究

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子的单克隆抗体bFGF—MAb对人卵巢癌细胞的增殖、卵巢癌腹腔移植瘤裸鼠的生存率和肿瘤血管生成的影响，为卵巢癌的临床生物治疗提供实验基础。方法 ①将人卵巢癌细胞株SKOV，接种于24孔板，加入不同浓度的bFGF—MAb，每日行结晶紫染色、Vector^2-1420多标记计数仪比色，测定OD490值;②将SKOV，细胞接种于BALB／c裸鼠腹腔形成卵巢癌腹腔移植瘤模型，每周2次将bFGF—MAb注射于腹腔，比较裸鼠生存时间；⑧解剖裸鼠，计数肠系膜上种植瘤的个数并称重；④对移植瘤组织进行CD3，的免疫组化染色后测定肿瘤内徽血管密度(MVD)．结果 ①bFGF—MAb在0～15μg／ml的范围内，其抑制SKOV3细胞增殖的作用呈浓度依赖性，实验第4d，15μg／ml组能抑制细胞增殖的24％；②腹腔注射bFGF—MAb的裸鼠生存时间较对照组平均延长10d；⑨bFGF—MAb组肠系膜上肿瘤种植灶的数目和重量分别是对照组的70．6％和69．2％；④bFGF—MAb组腹腔移植瘤MVD是对照组的62．8％．结论bFGF—MAb能明显抑制卵巢癌的生长和肿瘤血管生成，有希望作为卵巢癌的生物基因治疗方法。     

CO2对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响

目的探讨不同压力持续性CO₂气腹对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响。方法将体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3分别暴露于不同压力（8、10、12mmHg）和作用时间（1、3h）的CO₂环境中，对照组细胞放入CO₂培养箱常规培养。收集各组细胞后接种于裸鼠腋下，建立有差异的裸鼠皮下移植瘤模型并绘制肿瘤生长曲线。接种6周后脱臼处死全部裸鼠，测量移植瘤的体积和重量，采用免疫组织化学法检测各组中增殖细胞核抗原（PCNA）和nm23-H1蛋白的表达。结果接种7d后各组均明显成瘤，各CO₂气体处理组的皮下移植瘤生长速度均快于对照组，其皮下移植瘤体积和重量也高于对照组（P＜0.01）。各CO₂处理组中肿瘤细胞PCNA蛋白表达阳性率均高于对照组（P＜0.01），各组间nm23-H1蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。结论CO₂气体本身对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的促进作用，对转移影响不大     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞裸鼠腹腔移植瘤生长的影响与机制

目的探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）在活体内对人卵巢癌细胞种植性转移能力和腹腔移植瘤形成的影响,分析其
可能的作用机制。方法构建人卵巢癌SKOV3细胞株裸鼠腹腔移植瘤模型,实验组给予survivin ASODN腹腔注射,同时对照
组给予生理盐水腹腔注射,比较两组动物腹腔移植瘤形成和生长情况的改变,并通过蛋白印迹法检测两组腹腔移植瘤组织中白
细胞介素6（IL-6）、信号转导与活化因子3（STAT3）、磷酸化的信号转导与活化因子3（p-STAT3）、survivin蛋白表达的改变。结
果Survivin ASODN 组人卵巢癌细胞裸鼠腹腔移植瘤数量和重量都较对照组明显减小（P<0.05）,IL-6、STAT3、p-STAT3、
survivin蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论Survivin ASODN在活体内能有效降低人卵巢癌细胞侵袭和种植性转移能力,能
有效抑制卵巢癌腹腔移植瘤的生长,这些作用是通过抑制IL-6/STAT3信号通路的活性来完成的。靶向survivin基因的反义核
苷酸治疗将成为临床防治卵巢癌复发和转移重要手段,有重要的临床价值。
     

RNAi沉默STAT3基因对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：研究pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,阐明RNA干涉技术在卵巢癌生物治疗领域中的作用。方法：应用人卵巢癌细胞系SKOV3对15例裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为3组：对照组（生理盐水）、空质粒对照组及重组质粒组（pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3）。应用电子穿孔仪将质粒转入裸鼠移植瘤内,观察重组质粒注射后第7、14、21和28天各组裸鼠皮下移植瘤体积变化。利用Western blotting检测重组质粒对STAT3蛋白表达的影响,采用HE及TUNEL染色方法观察肿瘤组织形态变化及细胞凋亡情况。结果：重组质粒瘤内注射对SKOV3裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的抑制作用,与2个对照组比较,重组质粒组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢（P<0.01）。重组质粒组瘤体内STAT3及CyclinD1、VEGF、survivin、c-myc蛋白表达明显低于2个对照组（P<0.01）。HE染色显示,重组质粒组肿瘤细胞出现大片细胞坏死,2个对照组肿瘤细胞以正常形态居多。TUNEL染色显示,重组质粒组癌组织有大量细胞凋亡,2个对照组几乎均为TUNEL阴性反应细胞。结论：pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠皮下移植瘤的生长。     

二氧化碳气腹对人卵巢癌细胞系SKOV3裸鼠腹腔转移瘤生长的影响及机制探讨

目的:研究二氧化碳气腹对卵巢癌细胞裸鼠腹腔转移瘤生长的影响,并初步探讨其机制.方法:构建裸鼠腹腔转移瘤的动物模型,模拟腹腔镜CO2气腹环境,通过观察肿瘤种植生长的情况,及TUNNEL法测定肿瘤组织凋亡情况,以探讨二氧化碳气腹对卵巢癌细胞裸鼠腹腔转移瘤生长的影响;通过免疫组织化学法和Western-blot测定肿瘤组织中VEGF及MMP-9表达,以探讨其可能存在的机制.结果:经CO2气腹处理后,腹腔内肿瘤质量大于对照组,肿瘤组织中VEGF和MMP-9蛋白的表达差异无显著性,各组间肿瘤细胞的凋亡率差异无显著性.结论:CO2气腹有促进卵巢肿瘤细胞SKOV3生长的作用.     

卵巢癌细胞株SKOV3可塑性形成拟态血管的体内研究

目的检测人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3移植裸鼠腹腔成瘤后血管生成拟态的形成和分子塑形的改变。方法采用慢病毒转染SKOV3细胞携带绿色荧光蛋白,接种裸鼠腹腔成瘤后,苏木精-伊红染色、透射电镜、荧光显微镜观察肿瘤组织切片,免疫组化、肿瘤原代培养后采用免疫荧光化学、流式细胞仪、RT-PCR等技术检测SKOV3细胞是否表达血管内皮标记CD31等。结果苏木精-伊红染色、透射电镜、荧光显微镜证实SKOV3细胞裸鼠腹腔内成瘤后形成了血管生成拟态,即SKOV3细胞在没有宿主血管内皮细胞参与下,形成特有的腔隙样管道,内有红细胞衬覆。在原代培养的SKOV3细胞,用免疫荧光化学、RT-PCR检测显示SKOV3细胞表达CD31,用流式细胞仪检测,SKOV3细胞表达CD31、Ⅷ因子,而不表达VEGF。结论人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3在体内能表达部分血管内皮细胞的特异性抗原,具有可塑性,可在体内形成血管生成拟态。     

Genistein对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的　观察PTK抑制剂Genistein对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法　对 3 0例裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型 ,共分为 5组 :对照组 (含 0 0 4%DMSO的生理盐水 ) 0 2mg kg ,Genistein治疗组 0 4mg kgGenistein治疗组 (皮下注射 ) ,Cisplatin( 4mg kg ,静脉推注 )治疗组 ,Genistein与Cisplatin联合治疗组。观察不同药物治疗后第 7、14、2 1、2 8d各组裸鼠皮下移植瘤生长情况及裸鼠体重的变化 ,并进行病理组织学检查。结果　 0 .4mg kgGenistein皮下注射 ,对SKOV3裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用 ,与对照组相比 ,瘤体重量降低 ,肿瘤体积减小 ,坏死面积显著增加 ,但对裸鼠体重无明显影响。应用 0 4mg kgGenistein与 4mg kgCisplatin(静脉推注 )联合处理SKOV3裸鼠移植瘤有增强抑制作用。结论　Genistein具有抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用 ;Genistein与化疗药物联合应用可增强抑瘤作用     

人卵巢癌3AO裸鼠移植瘤模型的研究

目的 建立符合人上皮性卵巢癌的临床特征,又便于实验观察和分析的人卵巢癌裸鼠(athymic mice)腹腔移植瘤及皮下移植瘤异种移植模型;比较两种模型的成瘤情况并观察其生物学特性.方法 将一定数量的体外培养的人上皮性卵巢癌细胞株3AO分别接种于裸鼠的右后肢皮下和腹腔内,制备人卵巢癌裸鼠皮下及腹腔异种移植瘤模型;并待肿瘤生长至一定程度,切取移植瘤组织,进行病理组织学检查、电镜观察和流式细胞分析.结果 人上皮性卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤及皮下移植瘤模型建立的成功率均较高;两者在肿瘤细胞接种数量、肿瘤形成时间、肿瘤形态等方面不同.皮下移植瘤成瘤率93.3%,腹腔移植瘤成瘤率为86.7%.结论 人卵巢癌裸鼠异种移植模型的建立成功率高,并能直接再现肿瘤,可很好地反映肿瘤的生物学行为,便于观察和分析实验结果,为上皮性卵巢癌的实验研究提供了较客观的模型.     

树突状细胞诱导抗卵巢癌免疫抑制裸鼠SKOV3移植瘤生长并预防其发生

目的：研究树突状细胞（DC）体外诱导抗肿瘤免疫能否预防裸鼠移植瘤发生及抑制裸鼠移植瘤生长。方法：以粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白介素－4（IL－4）刺激卵巢癌患外周血DC；以人卵巢癌细胞系SKOV3细胞粗提物刺激DC；DC激活同源混合T淋巴细胞增殖分化为细胞毒性T细胞（CTL）；CTL预防性接种于裸鼠皮下，观察进一步接种的SKOV3移植瘤发生；观察CTL抑制已接种于裸鼠的SKOV3移植瘤生长。结果：DC诱导的CTL不仅能抑制裸鼠人卵巢SKOV3移植瘤生长，而且能预防该移植瘤发生。结论：肿瘤抗原激活的DC作为一个概念上的抗肿瘤疫苗有可能在卵巢癌的预防及治疗中发挥重要作用。     

藤梨根提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法建立肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,观察藤梨根乙酸乙酯提取物的作用,设置对照组、治疗组(低剂量组、高剂量组)。通过测量移植瘤体积变化绘制生长曲线,根据终末瘤质量比较计算抑制率,采用TUNEL法检测移植瘤凋亡指数,采用免疫组化法检测移植瘤Survivin蛋白表达、增殖指数,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测移植瘤Survivin mRNA变化。结果各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组,高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为69.00%和45.09%。各治疗组移植瘤组织凋亡指数则明显高于对照组,而Survivin mRNA及蛋白表达较对照组明显减少,高剂量组尤其明显,各组间上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论藤梨根乙酸乙酯提取物在体内对肺癌A549细胞生长有抑制作用,可以诱导移植瘤细胞发生凋亡,促进癌细胞凋亡并下调瘤细胞Survivin蛋白和mRNA表达。     

脂质体-c-raf-1反义寡核苷酸治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤

目的:探讨c-raf-1反义寡脱氧核苷酸(ASSODN)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用.方法:将15只裸鼠建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,然后随机分成3组予以不同条件处理:对照组(腹腔注射转染液和脂质体),正义治疗组(腹腔注射脂质体-c-raf-1-SODN),反义治疗组(腹腔注射脂质体-c-raf-1-ASODN).治疗期间定期观测裸鼠体重并测量肿瘤体积,计算抑瘤率及肿瘤缩小率.结果:反义治疗组与正义治疗组的抑瘤率分别为68.1%和6.8%,反义治疗组肿瘤缩小率为16.7%,与正义治疗组相比较有明显的差别.各组裸鼠体重变化无明显差别.结论:脂质体-c-raf-1-ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有一定的治疗价值,可能成为日后基因治疗的重要方向.     

染料木黄酮对卵巢癌HO-8910PM裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察植物雌激素染料木黄酮（GEN）与顺铂（DDP）联合应用治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的效应及其机制．方法：建立20只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,随机分成4组,分别为对照组、GEN组、DDP组及GEN＋DDP组．4wk后处死裸鼠,计算抑瘤率,用Ⅷ因子抗原多克隆抗体测定肿瘤内微血管密度（MVD）,用细胞增殖指数（PI）反映细胞增殖状态,并进行形态学观察．结果：DDP组及GEN组均可有效抑制卵巢癌移植瘤生长,二者联合应用有协同作用．GEN＋DDP组MVD和PI低于GEN组和DDP组（P〈0．01）,3组均显著低于对照组（P〈0．01）．形态学观察可见GEN组和GEN＋DDP组细胞凋亡、凋亡小体及变性坏死增多,而对照组少见．结论：GEN对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤有明显抑制作用,且与DDP有协同作用;GEN对肿瘤细胞的作用,与抑制肿瘤细胞的增殖和肿瘤区新生血管的生长、阻断肿瘤血供有关．     

MicroRNA-16抑制人卵巢癌在裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的:探讨microRNA-16(miRNA-16)转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3在裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用。方法:将成熟miRNA-16双链模拟物及其阴性对照序列转染人卵巢癌SKOV-3细胞株,然后分别接种于裸鼠皮下,观察两组肿瘤出现时间及肿瘤体积变化,接种20d后取出肿瘤组织称重,计算抑瘤率。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肿瘤组织中Bcl-2mRNA表达,并进行免疫组化检测两组肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达。结果:miRNA-16转染组肿瘤生长相对延缓,种瘤20d后miRNA-16转染组移植瘤重量明显小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),抑瘤率达38.46%;PCR结果显示miRNA-16转染组Bcl-2 mRNA表达量与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);移植瘤组织免疫组化分析两组Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-16对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

丁酸钠抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的:观察丁酸钠对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制。方法:建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,两治疗组分别采用不同方案以不同剂量丁酸钠进行治疗,两对照组同法注射同体积磷酸盐缓冲液(PBS)。治疗结束,取裸鼠心、肝、肾、肠等脏器做组织学观察,取肿瘤组织进行光学显微镜、电子显微镜观察,并用末端脱氧核苷酰转移酶穴TDT雪介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)进行分析,计算凋亡率。结果:各治疗组肿瘤体积明显缩小,细胞凋亡率显著增高,(P<0.01)。结论:丁酸钠可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制裸鼠卵巢癌移植瘤的生长,用药越早效果越显著。     

双氢青蒿素对卵巢癌细胞株H0-8910的作用及Akt表达的影响

目的观察双氢青蒿素（DHA）对卵巢癌细胞株H0-8910裸鼠皮下移植瘤的作及p-Akt表达,探讨其机制。方法将H0-8910细胞注入裸鼠,建立裸鼠移植瘤模型,观察干预后各组移植瘤抑瘤率,免疫组化检测p-Akt的活性变化。结果①病理学观察见细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。②DHA对裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,并具有浓度依赖性。③免疫组化检测p-Akt活性发现随着双氢青蒿素剂量的增加p-Akt表达减弱。结论双氢青蒿素对人卵巢癌细胞株HO-8910裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,其机制与下调p-Akt的表达可能有关。     

绿色荧光蛋白标记的人卵巢癌裸鼠原位移植模型的建立

目的 应用绿色荧光蛋(GFP)基因标记人卵巢癌细胞株H08910,建立新型裸鼠原位移植瘤模型.方法 将处于对数生长期的人卵巢癌细胞株H08910/GFP 2×106个细胞注射于裸鼠腋下,收集瘤块后接种于左侧卵巢包膜下,共6只.术后利用荧光体视显微镜连续观察肿瘤生长情况,4周后处死荷瘤鼠,观察肿瘤生长及转移情况.结果 种植的原位移植瘤成瘤率100%,移植后2周可观察到左侧肋脊角处绿色荧光团,并逐渐增大,4周后,可见肿瘤侵及腹膜、网膜、肠管、脾脏、肝脏、子宫、盆腔淋巴结,转移率达66.7%.结论 成功建立新型裸鼠原位人卵巢癌的动物模型.