佛波酯对促进人绒毛膜癌AJR细胞侵入机制的研究

目的探讨佛波酯(PMA)是否通过改变细胞因子的生成而影响滋养细胞的侵袭性。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人绒毛膜癌JAR细胞与侵袭力调节有关的多种细胞因子基因表达的变化。结果JAR细胞表达肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素1β(IL-1β)和血管内皮生长因子(VEGF),且VEGF的表达以VEGF121和VEGF165为主,而不表达IGF-Ⅰ。100 nmol/L PMA处理细胞24 h可显著上调IL-1β、HGF、IGF-II mRNA的表达,同时抑制TGF-β2、TGF-β3 mRNA的表达,而对TGF-β1、VEGF mRNA的表达未见有明显变化。结论HGF、IL-1β、IGF-Ⅱ对滋养细胞的侵入起促进作用,而TGF-β2、TGF-β3具有抑制效应。说明丝裂原PMA可能通过调节这几种细胞因子的自分泌机制,从而增强JAR细胞的侵袭能力。     

佛波酯对人外周血DNT细胞表面抗原检测的影响及检测方法的探讨

目的探讨佛波酯(PMA)对人外周血淋巴细胞中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(DNT细胞)表面抗原检测的影响及检测方法的探讨。方法分离人外周血单个核细胞,分别在激活前后对细胞进行TCRαβ、CD4和CD8荧光单抗标记,流式细胞术计数DNT细胞。结果 A方法(先激活,再标记),淋巴细胞表面抗原CD4分子显著下调,DNT细胞与TCRαβ+CD4+CD8+T细胞、TCRαβ-CD4-CD8-T细胞和TCRαβ-CD4+CD8+T细胞间无法设门,与正常对照比较,DNT细胞计数显著增加;B方法(先标记,再激活),DNT细胞与其他细胞群设门清晰,与正常对照比较,对DNT细胞计数无明显影响;C方法(先标记,再联合激活),DNT细胞检测结果与B方法相同。结论采用A方法(常规方法),不能对活化后的DNT细胞进行准确计数;采用B和C方法(改进方法),可以对活化后的DNT细胞进行准确计数,避免了磁珠或(和)流式分选,为其计数和表面抗原检测提供了一种新的简便方法。     

佛波酯慢性处理对大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C表达的影响

目的观察佛波酯（PMA）慢性处理大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C（PKCs）表达的影响。方法原代培养大鼠m管平滑肌细胞,①按照PMA处理浓度将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMAI、5、10μmol／L组,各组细胞均处理4h;②按照PMA处理时间将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMA1、4和24h组,PMA组的药物浓度均为10μmol／L。采用Western blotting技术榆测各亚型PKCs蛋白的表达。结果PMA浓度〈10μmol／L处理细胞时间〈4h不影响PKC—α的表达（P〉0．05）,10pmlol／LPMA处理24h能抑制PKC—α的表达（P〈0．05）;PMA浓度〉5μmol／L处理细胞时间〉4h可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）,PMA浓度〈5μmlol／L处理细胞时间〈4h对PKC-δ的表达无显著影响（P〉0．05）,10μmol／LPMA处理细胞1h即可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）;PMA浓度〉5pμmol／L处理细胞时间〉4h可以明显抑制PKC-θ的表达（P〈0．01）;10μmol／L的PMA处理细胞24h对PKC．∈的表达无明显影响（P〉0．05）。结论PMA慢性处理大鼠血管平滑肌细胞可抑制传统型PKC—α和新型PKC-δ、ε、θ的表达,对非典型PKC-ζ的表达没有影响。     

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（PMA）对人肝癌细胞7721胞液和膜性组分中3类蛋白激酶（TPK、PKA、PKC）的早期（5～60min）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果：PMA在30min内可促进PKA由膜向胞液的转位和PKC由胞液向膜的转位，并能迅速促进胞液PKC的下降，但膜性PKC的下降发生在30min的活力高峰以后。60min时膜性PKA和PKC都恢复到正常水平。PMA还使胞液TPK持续升高，高峰在5min，而使膜性TPK先降低，40min后才明显升高。结论：PMA对蛋白激酶的早期作用相当多样化，不单是通过受体PKC起作用。     

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法 用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化；用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果 100nmol／L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100nmol／L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加，能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论 ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。     

p38MAPK通路在佛波酯诱导人绒癌JAR细胞体外侵袭中的作用

目的 研究细胞内p38MAPK信号传导通路在人绒癌JAR细胞体外侵袭中的作用。方法 用ELISA法测定JAR细胞中p38MAPK的活性变化；用Tramwell细胞侵入系统检测细胞的侵袭作用；用MTT法评价细胞生长状况。结果 佛波酯(PMA)呈浓度依赖性地激活JAR细胞中p38MAPK。PMA能促进人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用，而p38特异性抑制剂SB203580抑制了JAR细胞的侵袭能力。结论 p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为以及人绒癌的形成中具有重要作用。p38MAPK抑制剂可能会为人绒癌的防治提供新的途径。     

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（ＰＭＡ）对人肝癌细胞７７２１胞液和膜性组３类蛋白激酶（ＴＰＫ、ＰＫＡ、ＰＫＣ）的早期（５－６０ｍｉｎ）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果ＰＭＡ在３０ｍｉｎ内中促进ＰＫＡ由膜向胞液的转位和ＰＫＣ由胞液向膜的围位，并能迅速促进胞液ＰＫＣ的下降，但膜性ＰＫＣ的下降发生在３０ｍｉｎ的活性高峰以后，６０ｍｉｎ时膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都恢复到正常水平。ＰＭＡ还使胞液ＴＰＫ持续     

马鞭草醇C部位抗人绒毛膜癌JAR细胞作用机制的研究

应用MTT法及3H -TdR同位素标记细胞增殖抑制实验 ,在马鞭草醇提液中筛出其中一个活性部位 ,命名为C部位。一定浓度的马鞭草C部位能明显抑制JAR细胞的增殖 ,加药后 48h细胞增殖仅为相应对照组的 3 0 0 5 % ;EGFR的表达为对照组的2 7 0 4% ;见明显的凋亡小体 ;琼脂糖凝胶电泳可见典型的“阶梯状”条带 ,流式细胞术出现凋亡峰。马鞭草C部位已确定对绒癌细胞具有明显的促凋亡作用 ,故而该药有望能成为治疗绒毛膜癌或逆转多药耐药的有效药物     

蛋白激酶C在人绒毛膜癌JAR细胞中作用的研究

目的：研究蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC)对人绒毛膜癌JAR细胞分泌人绒毛膜促性腺激素(hCG)的影响，进一步探讨PKC在调控JAR细胞hCG分泌中的作用。方法：不同浓度的PKC激动剂phorbol 12—myristrate l3—acetate(PMA)急性和慢性刺激、PKC抑制剂chelerythrine chlorine(CHEL)分别作用JAR细胞，用ELASA法测定hCG分泌量变化，以及蛋白印迹(Western blot)法测定细胞内磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)的改变。结果：不同浓度PMA急性刺激时，抑制JAR细胞hCG分泌，在200nmol/L时，其抑制作用最强；不同浓度PMA慢性刺激时，JAR细胞hCG分泌量增加，在200nmol／L时，其作用最强。CHEL作用JAR细胞时，hCG分泌量升高，在600nmol/L时，其作用最强。对照组及各实验组都有活性的MAPK的表达，与对照组相比，PMA慢性刺激组、CHEL组MAPK磷酸化水平升高;PMA急性刺激组MAPK磷酸化水平降低。结论：PKC参与调节JAR细胞hCG的分泌，活性升高时，下调MAPK磷酸化，使JAR细胞hCG分泌减少，而活性降低时，增强MAPK磷酸化，JAR细胞hCG分泌量增加。MAPK通路激活是PKC介导的JAR细胞分泌hCG的重要机制。     

蛋白激酶C在人绒毛膜癌JAR细胞中作用的研究

研究蛋白激酶C对人绒毛膜癌JAR细胞分泌人绒毛膜促性腺激素 (hCG)的影响 ,探讨PKC在调控JAR细胞hCG分泌中的作用。不同浓度的PKC激动剂 phorbol 12 -myristrate 13 -acetate(PMA )急性和慢性刺激、PKC抑制剂chelerythrinechlorine(CHEL)分别作用JAR细胞 ,测定hCG分泌量变化和细胞内磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶 (mitogen -activatedproteinkinase ,MAPK)的改变。结果显示不同浓度PMA急性刺激时 ,抑制JAR细胞hCG分泌 ,在 2 0 0nmol/L时 ,其抑制作用最强 ;PMA慢性刺激时 ,JAR细胞hCG分泌量增加 ,在 2 0 0nmol/L时 ,其作用最强。CHEL作用JAR细胞时 ,hCG分泌量升高 ,在 60 0nmol/L时 ,其作用最强。对照组及各实验组都有活性的MAPK的表达 ,与对照组相比 ,PMA慢性刺激组、CHEL组MAPK磷酸化水平升高 ;PMA急性刺激组MAPK磷酸化水平降低。PKC参与调节JAR细胞hCG的分泌 ,活性升高时 ,下调MAPK磷酸化 ,使JAR细胞hCG分泌减少 ,而活性降低时 ,增强MAPK磷酸化 ,JAR细胞hCG分泌量增加     

佛波脂及Microcystine-LR对SHRsp内脏阻力血管平滑肌钙通道的影响

目的 研究佛波脂及ｍｉｃｒｏｃｙｓｔｉｎｅ－ＬＲＭＣＹＳＴ－ＬＲ）对卒中易感型自发性高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）及常压对照Ｗｉｓｔａｒ大鼠肠纱膜动脉Ａ４－Ａ５段分支阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道的影响。方法 采用膜片箍全细胞钡电流方式记录钙通道的活力。结果 佛波脂激活蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）或ＭＣＹＳＴ－ＬＲ换制细胞蛋白磷酸酶（ＰＰＩＡ、ＰＰⅡＡ）而相对增加磷酸化过程,均可激活内脏阻力血管平滑肌电压依赖性     

Relaxin Inhibit Cardiac Fibrosis Induced by Phorbol 12-myristate 13-acetate

<正>Relaxin is known to inhibit cardiac fibrosis.However,it is unclear whether relaxin could regulate the effects of Phorbol 12-myristate13-acetate(PMA,PKC activator)on cardiac fibrosis.So the influence of relaxin on the cell proliferation and collagen expression induced by PMA in cultured cardiac fibroblasts was studied.It showed that PMA significantly increased cardiac fibroblasts proliferation,Type I pro-collagen protein expression,Type I pro-collagen mRNA expression,and rhRLX absolutely significantly decreased PMA induced effects on cardiac fibroblasts proliferation and Type I pro-collagen expressions,indicating that relaxin could inhibit cardiac fibrosis induced by PMA.     

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法 用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化;用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果 100 nmol/L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100 nmol/L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加,能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论 ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。     

三氧化二砷联合佛波酯抑制急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1增殖的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2_O_3)联合佛波酯(PMA)对急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1增殖的影响。方法:培养急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1并随机分为对照组(不含药物和血清的RPMI1640培养基处理)、As2_O_3组(含有20μmol/L As2_O_3的无血清RPMI1640培养基处理)、PMA组(含有160nmol/L PMA的无血清RPMI1640培养基处理)、As2_O_3+PMA组(含有20μmol/L As2_O_3和160nmol/LPMA的无血清RPMI1640培养基处理)。处理后测定细胞的增殖活力、细胞周期的比例以及相关基因的蛋白表达量。结果:干预后12、24、48h时,As2_O_3组、PMA组、As2_O_3+PMA组的细胞增殖活力均显著低于对照组,As2_O_3+PMA组的细胞增殖活力均显著As2_O_3组、PMA组;干预后48h时,As2_O_3组、PMA组、As2_O_3+PMA组中G1期、S期的比例以及CDK1、CyclinB1的表达量均显著低于对照组,G2期的比例以及Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-Chk1、p-Cdc25C9的表达量均显著高于对照组;As2_O_3+PMA组中G1期、S期的比例以及CDK1、CyclinB1的表达量均显著低于As2_O_3组、PMA组,G2期的比例以及Bax、Caspase-3、Caspase-9、p-Chk1、p-Cdc25C的表达量均显著高于As2_O_3组、PMA组。结论:As2_O_3联合PMA能够通过诱导细胞凋亡、阻碍细胞周期的方式抑制急性早幼粒细胞白血病细胞系Kasumi-1的增殖。     

血管紧张素-(1-7)和佛波醇酯拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠系膜细胞增殖及分泌

目的：探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]及佛波醇酯(PMA)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖和分泌反应中的作用。方法：在AngⅡ诱导培养的大鼠系膜细胞中，应用Ang-(1-7)及PMA，通过测定大鼠GMCDNA、蛋白质合成、细胞数目及Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和透明质酸(HA)等指标，观察大鼠GMC增殖和分泌情况。结果：Ang-(1-7)及PMA均能抑制AngⅡ诱导培养的大鼠GMC的DNA及蛋白质合成，细胞数目的增多及PcⅢ和HA的分泌，Ang-(1-7)的抑制作用更明显。结论：Ang-(1-7)及PMA都能抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC增殖和分泌，Ang-(1-7)的拮抗作用更明显。     

佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞体外生长的影响

[目的]探讨佛波酯（TPA）对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、形态、细胞周期的影响.[方法]试验设试剂对照组、肿瘤细胞阴性对照组及5种不同浓度的促癌剂实验组.用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法分析TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用;光镜下观测细胞形态学的改变;透射电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期的变化率.[结果]TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性.细胞周期发生G1→S期阻滞.[结论]TPA能抑制SKOV3细胞增殖,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长.     

5-氟尿嘧啶对人绒毛膜癌细胞株JAR作用的观察

目的:观察5-氟尿嘧啶(5-Fu)对人绒癌细胞株JAR的体外作用。方法:采用MTT比色分析法,观察20、50、100μg/L 3种剂量的5-Fu对人绒癌细胞株JAR细胞的生长抑制情况;通过免疫组化法检测3种浓度5-Fu作用于JAR细胞后增殖细胞核抗原Ki67的表达情况。结果:15-Fu能抑制JAR细胞的生长,并在一定时间及浓度范围内,表现出剂量依赖性,72h内5-Fu浓度在25~100μg/L时抑制作用比较明显;2100μg/L的5-Fu作用于JAR细胞72h后细胞抑制率达73.19%,作用后增殖细胞核抗原Ki67明显下降。结论:15-Fu对人绒癌细胞株JAR细胞的生长具有抑制作用,72h内呈剂量依赖性;25-Fu抑制了人绒癌细胞株JAR细胞的增殖,细胞可能被阻滞于G0及G1期。