正常成人窦房结形态学及Cx43、Cx40的表达

目的 观察正常成人心脏窦房结的细胞构筑及连接蛋白43、40(connexin43、40,Cx43、Cx40)的表达和分布情况. 方法 常规石蜡包埋,HE、Masson染色,选定目标部位行Cx43、Cx40免疫组织化学染色,并进行图像及统计分析. 结果 ①正常成人窦房结细胞组成、形态、排布区别于普通工作心肌.②由房肌、窦房结外周到动脉周围结组织,Cx43、Cx40表达逐渐减弱,胞质染色逐渐浅淡;而Cx40的分布范围在动脉周围窦房结组织中多于外周结组织. 结论 正常成人窦房结的细胞组成、排布及Cx43、Cx40的表达与其电生理起搏、传导特性相符.     

连接蛋白40、45在连接蛋白43基因敲除小鼠胚胎心脏的时空表达

目的 检测连接蛋白(Cx)40、45在Cx43基因敲除小鼠胚胎心脏的时空表达.方法 选取Cx43基因敲除胎鼠,通过PCR方法鉴定其基因型,以Cx43基因敲除胎鼠纯合子作为研究对象,野生型为对照组,获取胎龄10.5、11.5、12.5、13.5、14.5、15.5 d纯合子及野生型各2只胎鼠,免疫组化检测Cx40、Cx45在心脏各部位的表达,SCIM显微图像分析系统对染色强度进行定量分析.结果 (1)野生型小鼠心室原始小梁网在胎龄10.5 d就已经有Cx40表达(A值为8.6),随后在心房、心室、小梁网、房室间隔和主、肺动脉壁表达逐日增加,胎龄14.5 d在心室部位达到高峰(A值为94.8),然后逐渐减少;Cx43基因敲除小鼠胚胎心脏发育中Cx40在各部位的时空表达趋势与野生型相似,胎龄10.5 d在肌小梁A值为7.9,胎龄14.5 d心室部位为75.8.纯合基因敲除型胎鼠Cx40的表达量明显弱于野生型.(2)野生型小鼠肌小梁部在胎龄10.5 d出现Cx45的表达(A值为20.0),随后在房室各部位相继表达,胎龄12.5 d在心房部位达到高峰(A值为49.6),然后表达逐渐减少;Cx43基因敲除小鼠胚胎心脏发育中Cx45在各部位的时空表达趋势与野生型相似,胎龄10.5 d在肌小梁A值为17.8,胎龄12.5 d心房部位为31.5.纯合基因敲除型胎鼠Cx45的表达量明显弱于野生型.结论 Cx40和Cx45在Cx43基因敲除小鼠纯合子胎龄10.5～15.5 d这一心脏分隔、瓣膜发育的关键时期表达异常,可能与Cx43基因敲除小鼠心脏的异常发育有关.     

心肌细胞连接蛋白与心房颤动的关系

缝隙连接(gap junction,GJ)是含有多种细胞间通道的特殊膜结构,由连接蛋白(connexin,Cx)所构成,Cx40含量和分布的改变,可导致心房肌细胞电耦联传导速度改变,增加折返性心律失常,从而产生心房颤动(atrial fibrillation).本文对连接蛋白与心房颤动之间关系的研究进展作一综述.     

ATP注射液治疗阵发性室上性心动过速的临床体会

阵发性室上性心动过速(PSVT)简称室上速,大多数心电图表现为QRS波群形态正常RR间期规则的快速心律.大部分室上速由折返机制引起,折返可发生在窦房结、房室结与心房,分别称为窦房结折返性心动过速、房室结内折返性心动过速与心房折返性心动过速.房室结内折返性心动过速(AVNRT)是最常见的阵发性室上性心动过速类型.     

室上性心动过速

室上性心动过速在临床上很常见,主要包括阵发性心动过速、非折返性房性心动过速和非阵发性交界性心动过速。 1 阵发性宣上性心动过速(PSVT)是一种阵发性快速而规则的异位心律,其特征是突然发作和突然终止。常见于无明显心脏病的正常人,也可见于各种心脏病。电生理研究已经证明折返是引起大多数阵发性室上性心动过速的机理。典型的PSVT包括房室结折返和房室折返两种:占PSVT的90％左右。窦房结内折返及房内折返不到10％。房室结的折返环是由房室结内的慢-快双通道构成,由慢通道顺传,快通道逆传形成的折返,称典型房室结折返性PSVT,相反者称为非典型房室结折返性PSVT。房室折返性PSVT的折返回路为正常房室传导通路与旁路的结合,房室旁路只向逆行方向传导。冲动顺行从心房沿房室结、希氏-浦肯野系统到达心室,然后经隐匿的旁路逆行返回心房。这种心律失     

心房颤动对风湿性心脏病心房肌细胞Cx40、Cx43表达的影响

目的　研究风湿性心脏病 (风心病 )伴与不伴心房颤动 (房颤 )患者左、右心房肌细胞Cx40、Cx43的表达 ,探讨房颤与Cx40、Cx43之间的关系。方法　 3 1例换瓣病人分为 3组 :①实验Ⅰ组 ( 11例 )为阵发性房颤或房颤持续时间≤ 6个月 ;②实验Ⅱ组 ( 12例 )为房颤持续时间均 >6个月 ;③对照组 ( 8例 )为窦性心律。手术中分别切取左、右心耳处心房肌组织。用免疫印迹法和免疫组化技术检测左、右心房肌Cx40、Cx43的表达与分布。结果　①每例患者左、右心房肌以及每组中左、右心房肌Cx40、Cx43表达量均值无显著性差异。②实验Ⅰ组与对照组比较 ,Cx40表达量明显降低 (P <0 0 5 ) ,而实验Ⅱ组与对照组比较其降低更加明显 (P <0 0 1)。③Cx43的表达量在 3组间均无显著差异 ;④实验组Cx40阳性染色较对照组明显减少 ,且分布紊乱 (除细胞头尾部外 ,细胞侧面染色增多 )。⑤ 3组间Cx43阳性染色的分布无明显差别。结论　①左、右心房肌Cx40、Cx43的表达与分布均无显著差异。②有房颤者心房肌Cx40表达量下调及分布不均可能与房颤的发生与维持有关。     

特异性阻断Kv1.5通道对心房颤动患者缝隙连接蛋白40表达的影响

目的 利用伊布利特特异性阻断超速延迟整流性钾通道 (Kv1.5)后对缝隙连接蛋白(Cx)40表达的影响,探讨Kv1.5通道可能是心房肌缝隙连接蛋白下游信号传导通路之一,揭示心房颤动(AF)的可能发生机制.方法 实验标本取自风湿性心脏病接受心脏瓣膜置换手术患者的右心耳组织,根据患者术前心律将标本分为2组:风湿性心脏病[窦性心律组(SR组)]和风湿性心脏病合并AF组(AF组).采用酶解法分离风湿性心脏病接受手术患者心房肌细胞、培养心房肌细胞和运用Western blot技术检测两组心房肌细胞运用伊布利特特异性阻断Kv1.5通道前后Cx40的表达情况.结果 利用伊布利特特异性阻断Kv1.5通道后,AF组患者心房心肌细胞Cx40的表达水平较阻断前明显增加(P<0.01);而在SR组中,阻断前后Cx40/GAPDH比值的变化不明显.结论 Kv1.5通道的开放状态可能会影响Cx40的表达,从而揭示AF的发生机制中电重构可能会引起结构重构.     

麻醉中应用腺苷(抗心律失常药)而产生并发症的治疗

1.麻醉中应用的目的及并发症 腺苷类药可以抑制心肌慢反应细胞的Ca2+内流(如窦房结、房室结及受损的快反应细胞) ,阻断和延长房室结折返环路的前向传导,大量还可阻断房室旁道的折返,且有增强迷走神经的变时性效应,可用于治疗折返性心律失常.     

心源性猝死者窦房结组织病理学观察及其Cx40和Cx45表达与意义

目的观察心源性猝死者窦房结病理学改变及连接蛋白Cx40、Cx45的表达及其意义。方法应用苏木精-伊红染色及Masson染色方法,对14例心源性猝死者的窦房结组织进行病理学观察,并行Cx40、Cx45免疫组织化学染色。以交通事故损伤致死8例、心脏破裂4例、肝破裂3例、脾破裂2例(共17例)作为对照组。结果两组窦房结组织病理改变相比较无明显差异。心源性猝死者窦房结Cx40和Cx45表达与对照组相比均显著减少,差异有显著性(Z=3.548、2.757,P<0.01),且两者呈正相关(r=0.551、0.562,P<0.05)。结论心脏传导系统病理改变是引起心源性猝死的重要原因之一,Cx40和Cx45表达的改变与心源性猝死的发生显著相关。     

顽固性阵发性室上性心动过速的治疗

阵发性室上性心动过速（室上速）大多数心电图表现为QRS波群的形态正常、RR间期规则的快速心律。大部分室上速由折返机制引起折返,可发生在窦房结、房室结与心房,分别称为窦房折返性心动过速、房室结内折返性心动过速与心房折返性心动过速。此外,还可利用隐匿房室旁路。在全部室上速的病例中房室结内折返性心动过速与利用隐匿性房室旁路及房室折返性心动过速最常见,约占病例总数的90%以上。     

L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的表达

目的 研究L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的空间表达情况。方法制备成年大鼠心脏冰冻切片，结合大体位置和HE染色结果快速辨认出窦房结、房室结和结后延伸，采用免疫荧光和免疫印迹技术检测L型钙通道α1C亚单位在大鼠窦房结、房室结、结后延伸、右房、右室的表达，用共聚焦显微镜观察其表达部位，通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行分析。结果荧光呈现点状、斑状或不规则的短线状，主要分布于细胞膜及细胞内的膜性结构，其荧光强度由弱到强依次为窦房结、房室结、结后延伸、右心房、右心室，房室结和结后延伸之间无显著性差异（P〉0．05），其余两两相比均有显著差异（P〈0．05），其中右心房、有心室明显强于窦房结、房室结和结后延伸（P〈0．01）。各部位在相对分子质量200000左右可见一特异性蛋白条带。对蛋白条带进行灰度值分析，结果与免疫荧光相一致。结论L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏分布广泛，在不同部位表达量不同，在工作肌组织的表达量明显高于传导组织．提示钙电流在心脏不同部位有不同的分子基础.     

L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的表达

目的 研究L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的空间表达情况。方法 制备成年大鼠心脏冰冻切片,结合大体位置和HE染色结果快速辨认出窦房结、房室结和结后延伸。采用免疫荧光和免疫印迹技术检测L型钙通道α1C亚单位在大鼠窦房结、房室结、结后延伸、右房、右室的表达,用共聚焦显微镜观察其表达部位,通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行分析。结果 荧光呈现点状、斑状或不规则的短线状,主要分布于细胞膜及细胞内的膜性结构,其荧光强度由弱到强依次为窦房结、房室结、结后延伸、右心房、右心室,房室结和结后延伸之间无显著性差异(P>0.05),其余两两相比均有显著差异(P<0.05),其中右心房、右心室明显强于窦房结、房室结和结后延伸(P<0.01)。各部位在相对分子质量200000左右可见一特异性蛋白条带。对蛋白条带进行灰度值分析,结果与免疫荧光相一致。结论 L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏分布广泛,在不同部位表达量不同,在工作肌组织的表达量明显高于传导组织,提示钙电流在心脏不同部位有不同的分子基础。     

人心脏间隙连接蛋白43的时空表达

目的探讨人心脏间隙连接蛋白43(Cx43)的时空表达规律。方法应用SP免疫组化和图像分析方法,检测胎儿、新生儿和成人心肌Cx43蛋白表达和含量变化。结果(1)胎儿和新生儿Cx43呈斑点状遍布于整个心肌的细胞质内和细胞膜表面,少数位于闰盘处;(2)成人Cx43在心房肌细胞非均质分布于细胞侧面连接处和端闰盘处;心室肌典型地排列在闰盘处;(3)Cx43分布密度随年龄增长而降低,且具有腔室差异,胎儿和新生儿心房<心室,成人心房>心室。结论随着年龄的增长Cx43从细胞侧表面向端-端闰盘处转移。这种位置移动是心脏机械收缩和电传导的生理性调整。     

祛风通络方对肾小球系膜细胞间隙连接蛋白36及基因表达的影响

目的 研究间隙连接蛋白36(Cx36)及其基因在肾小球系膜细胞（MCs）的表达,观察祛风通络方的干预作用,从而进一步探讨祛风通络方抑制肾小球MCs增殖的作用机制。方法 应用血清药理学方法,制备贝那普利药物血清和祛风通络药物血清,体外培养肾小球MCs,并将其分为正常对照、脂多糖(LPS)、贝那普利治疗和祛风通络方治疗组。分别采用激光扫描共聚焦显微镜、Western blot、免疫组化及实时定量PCR检测各组肾小球系膜细胞Cx36蛋白及基因的表达变化。结果 与对照组比较,脂多糖组肾小球MCs Cx36表达明显增强（P<0.01）;与脂多糖组比较,两治疗组Cx36表达均减弱（P<0.01或P<0.05）。各组肾小球MCs Cx36基因表达与蛋白表达相似。结论 Cx36及基因在脂多糖诱导的肾小球MCs中有明显表达,祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作用可能与其调节Cx36及基因表达有关。     

射频消融慢径路对不典型房室结双径路前传功能的影响

目的:观察不典型房室结折返性心动过速(AVNRT)患者慢径路被消融后对快径路前传功能的影响。方法:38例成功行慢径射频消融的AVNRT患者,其中19例心房刺激均呈连续性AVNFC(甲组);对照组(乙组)19例心房刺激均呈跳跃性AVNFC。比较两组患者慢径射频消融前后的电生理参数变化。结果:消融后两组患者心房递增起搏时最大AH间期(A1H1max)均比消融前显著缩短,乙组A2H2max及ERPAVN-前传有明显变化,而甲组变化不大。结论:房室结双径路是彼此有相互关联的两条径路,与典型AVNRT一样,不典型AVNRT射频消融慢径路后前传功能得到改善。     

美托洛尔对大鼠心肌梗死周边区缝隙连接蛋白43的影响

目的:探讨美托洛尔对大鼠心肌梗死(心梗)后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法:80只大鼠随机分为假手术组(20只)、心梗组(30只)和美托洛尔组(30只),用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心梗模型,美托洛尔组给予美托洛尔5mg/(kg.d)灌胃,心梗组给予安慰剂。手术8周后,测量梗死周边区心室颤动阈值(室颤阈值)。用蛋白印记分析和RT-PCR分别观察心梗后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)磷酸化的蛋白质及总量表达和mRNA表达的变化;免疫荧光法观察梗死周边区Cx43的分布。结果:8周后,美托洛尔组室颤阈值高于心梗组[(11.0±2.65)V比(7.1±4.1)V,P<0.05],美托洛尔组Cx43磷酸化的蛋白质及总量均显著高于心梗组,Cx43mRNA的表达也明显高于心梗组。Cx43的密度和分布均显著高于心梗组。结论:美托洛尔能显著改善梗死周边区缝隙连接重构,这可能是美托洛尔能够抑制心梗后室性心律失常的一个机制。     

原代培养乳鼠窦房结细胞的形态和kir2.1蛋白表达

目的 研究乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平,建立一套可靠的乳鼠窦房结定位、细胞培养与鉴定技术,为进一步心脏生物起搏实验奠定基础.方法 在石蜡切片中用HE染色、嗜银染色、髓鞘染色和Mallory磷钨酸-苏木素染色法(PTAH)进行乳鼠窦房结定位和形态学观察;取SD乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养,观察培养细胞的形态和搏动频率,免疫组织化学检测其kir2.1蛋白表达.结果 综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可准确定位乳鼠窦房结组织.在培养的窦房结细胞中观察到梭形细胞、三角形细胞和不规则形细胞3种有自发性收缩的细胞,其中梭形细胞最多且形态结构特点和搏动频率符合起搏细胞的特点,三角形和不规则细胞与心房肌细胞特征相似.乳鼠窦房结细胞的kir2.1蛋白表达低于心房和心室肌细胞.结论 综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可以准确定位SD乳鼠窦房结,乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平低于心房和心室肌细胞.     

缝隙连接蛋白43在七氟醚后处理保护大鼠离体心肌缺血再灌注中的作用

目的探讨缝隙连接蛋白(connexin,Cx)43在七氟醚后处理保护大鼠离体心肌缺血再灌注中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠40只,体质量200～250 g,采用随机数字表法将其分为4组(n=10):缺血再灌注组(IR组)、七氟醚后处理组(S组)、七氟醚混合5-羟基葵酸钠(5-HD)组(SH组)及5-HD组(H组)。采用Langendorff装置进行离体心脏灌注。各组均在阻断左冠状动脉(LAD)前维持灌注10 min,然后阻断LAD血流30 min后开放,再灌注120 min,其中S、SH及H组分别于LAD开放后使用3%七氟醚预饱和的K-H液、3%预饱和的七氟醚预充饱和的K-H加5-HD(100μmol/L)及加入5-HD(100μmol/L)的K-H液灌注15 min,然后使用普通K-H液继续灌注105 min。分别于阻断LAD前即刻(T0),开放LAD即刻(T1),开放LAD后15 min(T2),开放LAD后135 min(T3)时记录HR、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室最大上升及下降速率(±dp/dtmax)。再灌注结束后,取左心室TTC染色测定心肌梗死面积,采用免疫组化染色观测Cx43蛋白表达情况,采用Western blot法检测Cx43蛋白及磷酸化Cx43(p-Cx43)蛋白含量。结果与IR组比较,S组的HR、LVSP、±dp/dtmax较高,LVDP降低,心肌梗死面积小,Cx43蛋白及p-Cx43蛋白含量增加,有统计学意义(P<0.05)。IR组与SH组及H组之间相比HR、LVSP、±dp/dtmax、LVDP、心肌梗死面积、Cx43蛋白和p-Cx43蛋白差异无显著性(P>0.05)。结论七氟醚后处理减轻离体大鼠心肌IR损伤的作用可能与其开放线粒体敏感钾通道从而促进Cx43蛋白表达及其磷酸化有关。     

NOMO1基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的表达

目的:检测NOMO1基因在SD大鼠胚胎心脏发育过程中mRNA表达变化及定位,并探讨其在胚胎心脏发育的意义?方法:24只孕鼠随机分为6组,每组4只,分别于妊娠12 d(D12)?15 d(D15)?16 d(D16)?17 d(D17)?19 d(D19)?21 d(D21)时取出胎鼠,取其心脏,采用实时定量PCR(real-time PCR)技术检测心脏组织中NOMO1基因mRNA的表达丰度,并应用荧光原位杂交(FISH)的方法对其进行定位分析?结果:在妊娠D12?D15?D16?D17?D19?D21的胚胎心脏中NOMO1基因mRNA均有表达,且呈由弱到强再减弱趋势,表达高峰出现在D16;该基因主要表达于心外膜中,而在心肌层?心内膜?心瓣膜等处未见表达?结论:NOMO1基因的表达随大鼠胚胎的心脏发育呈动态表达,可能与心脏发育相关?