急性淋巴细胞白血病患儿血清蛋白质指纹图谱模型建立及应用评价

目的 应用SELDI-TOF-MS技术构建ALL患儿、对照组AML患儿及正常儿童血清蛋白质指纹图谱,寻找血清差异表达蛋白并建立初步模型,分析其在ALL诊断中作用.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测98例血清标本(ALL 46例,AML 32例,正常儿童20例)的蛋白质质谱,并...     

CD133表达与儿童急性髓细胞白血病临床特征的相关性研究

目的探讨CD133在儿童急性髓细胞白血病(AML)中的表达及意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法,对20例AML患儿和10例非肿瘤患儿(对照组)的骨髓单个核细胞进行CD133 mRNA的表达检测。结果 (1)AML患儿的CD133 mRNA阳性表达率为45%,显著高于对照组(P<0.05)。(2)AML患儿骨髓细胞CD133 mRNA表达与CD34表达相关。(3)CD133 mRNA的表达与儿童AML FAB分型及临床危险度分型有关(P<0.05),与外周血白细胞数、淋巴结肿大、性别、年龄等因素无相关性。结论 AML患儿CD133 mRNA表达率较高;CD133 mRNA表达与AML分型有关。     

HOXA10基因在儿童急性白血病中的表达及意义

目的探讨急性白血病患儿同源盒(HOX)A10基因的表达及其临床意义。方法选择50例初治急性白血病患儿,其中急性髓系白血病(AML)25例、急性淋巴细胞白血病(ALL)25例,以及13例对照儿童,分离其骨髓单个核细胞,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓单个核细胞HOXA10 mRNA;检测急性白血病患儿外周血白细胞计数(WBC),分析不同类型急性白血病患儿HOXA10基因表达之间的关系。结果对照儿童HOXA10基因的阳性表达率为23.08%,ALL患儿为40%,AML患儿为100%;平均表达灰度比值(ODR)分别为对照儿童0.022±0.001,AML患儿0.373±0.113,ALL患儿0.151±0.006,三组间阳性表达率及表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),其中尤以AML患儿最高。HOXA10基因在各型AML中均有表达,其表达水平依次为M1和(或)M2型、M3型、M4和(或)M5型,差异有统计学意义(P<0.01)。WBC≥30×109/L的急性白血病患儿的HOXA10基因阳性表达率显著增高;高危组急性白血病患儿的HOXA10基因的阳性表达率也明显高于中危组和低危组。结论 HOXA10基因的高表达与儿童急性白血病,尤其是与AML明显相关,并且随着AML白血病细胞分化成熟表达逐渐下降;HOXA10基因的阳性表达率与儿童急性白血病危险程度呈正相关,有望成为儿童急性白血病诊断、治疗及判断预后的一个靶点。     

儿童急性髓细胞白血病血液端粒酶活性测定及其临床意义

为了探讨儿童急性髓细胞白血病(AML)血液端粒酶活性(TA)与AML各种临床指标的关系，采用PCR—ELISA法检测了健康儿童及患儿的外周血单个核细胞的端粒酶活性(PBTA)。结果显示健康儿童的PBTA为阴性；32例患儿中27例初诊的PBTA为阳性，但与患儿的性别、年龄和外周血白细胞计数之间无相关性(P＞0．05)。在不同的FAB分型之间，初诊时PBTA的表达特点是M2＞M4＞M5＞M3，M2与M5之间差异具有显著性(P＜0．05)；完全缓解超过1年的患者初诊PBTA小于1年内复发者和无完全缓解者，前两者的差异具有显著意义(P＜0．05)；同一患者完全缓解时PBTA显著小于初诊时PBTA值(P＜0．05)；复发患儿初诊与复发时的PBTA值无明显差异(P＞0．05)。提示儿童AML患者初诊时外周血单个核细胞端粒酶活性检测可能对AML的诊断、治疗和预后判断具有意义。     

阿糖胞苷代谢关键酶基因在儿童恶性血液肿瘤中的表达

目的通过检测儿童急性白血病(AL)及非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓细胞内阿糖胞苷(Ara-C)代谢关键酶———脱氧胞苷激酶(DCK)和胞苷脱氨酶(CDA)的基因表达及酶活性水平,探索DCK和CDA表达与临床疗效的关系。方法共计31例患儿,其中初诊27例(ALL20例,AML3例,NHL4例),复发4例(ALL2例,AML、NHL各1例),采集患儿骨髓细胞,采用荧光定量PCR检测细胞内DCK、CDA基因表达,核素液闪法检测细胞内DCK、CDA酶活性,统计分析各组患儿的检测结果。结果 (1)DCK:ALL和NHL患儿DCK mRNA与酶活性水平均明显高于AML患儿(P0.05);初治患儿均明显高于复发患儿(P0.05);(2)CDA:AML和复发患儿的CDA酶活性水平明显高于ALL、NHL和初治患儿(P0.05),但各组病例间的CDA mRNA表达差异无显著性(P0.05)。(3)DCK和CDAmRNA表达与酶活性水平呈高度正相关。结论 AML以及某些复发的血液肿瘤患儿,其总体DCK酶活性及基因表达水平降低,CDA酶活性水平增高。DCK和CDA酶活性可能与儿童恶性血液肿瘤疗效相关。     

急性髓系白血病患儿骨髓细胞中血管内皮生长因子及其受体的变化

目的探讨儿童急性髓系白血病(AML)骨髓细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)的表达差异,分析其与儿童急性髓系白血病临床特征的关系,以及化疗前后的变化。方法采用SP免疫组化方法检测20例AML患儿治疗前后以及对照组骨髓中VEGF/VEGFR(Flt-1和KDR)的表达情况。结果VEGF、Flt-1、KDR在AML患儿骨髓中表达水平高于对照组。化疗后获得完全缓解(CR)14例患儿的VEGF、Flt-1、KDR表达在化疗后比化疗前显著降低;化疗后未获得CR的6例患儿的表达化疗前后差异无统计学意义。AML患儿的VEGF表达与骨髓中幼稚细胞百分比、外周血中幼稚细胞百分比呈正相关。骨髓中VEGF、Flt-1、KDR的表达水平在不同年龄、不同性别、有无髓外浸润差异无统计学意义。高表达的VEGF组缓解率低于低表达组。结论VEGF、Flt-1、KDR在AML患儿中呈高表达,提示可能与儿童急性白血病发生过程与预后有关。     

儿童急性髓细胞白血病WT1基因表达及其临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(AML)患儿WT1基因表达情况及其与临床预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测45例非M3儿童AML的WT1表达水平,并回顾性分析其与AML预后的关系。结果骨髓幼稚细胞比例60%的AML患儿WT1表达水平高于幼稚细胞≤60%的患儿(P0.05)。M2病例组初诊时WT1表达量低于非M2病例组(P0.05)。完全缓解组患儿的WT1表达量显著低于初诊组和复发组(P0.01)。诱导化疗结束时WT1高表达组的2年无病生存率(DFS)低于WT1低表达组(P0.05)。诱导化疗结束时WT1下降程度≥1个数量级病例组的2年总生存率(OS)和DFS高于WT1下降程度1个数量级病例组(P0.05)。AML患儿骨髓复发2~3个月前WT1表达呈上升趋势。结论 WT1表达水平与儿童AML预后密切相关,动态监测WT1表达在指导儿童AML个体化治疗、预后评估和复发预测方面具有重要临床应用价值。     

急性髓细胞性白血病患儿淋巴系分化抗原表达的意义

目的探讨淋巴系抗原在儿童急性髓细胞性白血病(AML)细胞中的表达及其临床意义。方法选择华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科2000年1月-2009年7月收治的初诊AML患儿42例。其中原粒细胞白血病未分化型(M1)2例,急性髓细胞性白血病(M2)17例,颗粒增多的早幼粒细胞白血病(M3)12例,急性粒单核细胞白血病(M4)4例,急性单核细胞白血病(M5)7例。采用CD45/SSC双参数散点图设门方法对42例AML患儿进行三色流式细胞术细胞免疫分型检测。同时对伴淋巴系相关抗原表达的AML(Ly+AML)患儿与不伴淋巴系相关抗原表达的AML(Ly-AML)患儿的临床资料进行比较分析。结果42例AML患儿中13例伴有淋巴系抗原的阳性表达(30.95%),其中CD19在AML中的阳性表达率最高(33.33%),其次为CD7(11.90%)、CD3(11.90%)。CD19在M5中的阳性表达率为71.43%。Ly+AML组肝大例数与Ly-AML比较有统计学差异(χ2=6.48,P<0.05),其余临床指标均无统计学差异。Ly+AML组与Ly-AML组首次化疗后完全缓解率比较无差异。结论儿童AML伴有淋巴系抗原CD19...     

急性髓细胞白血病患儿血清白细胞介素-3、白细胞介素-6及白细胞介素-8水平变化的意义

目的 探讨急性髓细胞白血病(AML)患儿血清IL-3、6、8水平变化及临床意义.方法 采用ELISA对58例初诊AML患儿(男34例,女24例;年龄3～16岁,平均10.19岁)化疗前后血清IL-3、6、8水平进行检测.30例健康儿童作为健康对照组(男 17例,女13例;年龄4～14岁,平均9.92岁).二组均于清晨7:30-8:00空腹抽取静脉血3 mL,常温下2 500 r/min离心 20 min,分离血清置-20 ℃冰箱保存待测.除治疗M3型AML采用全反式维A酸外,余病例均采用DA(柔红霉素加阿糖胞苷),HA(高三尖杉酯碱加阿糖胞苷)或IAE(依达比星加阿糖胞苷加依托泊甙)方案化疗,30～45 d复检骨髓像.应用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 58例AML中44例获完全缓解(CR),14例未缓解(NR).AML初诊患儿血清IL-3水平显著低于健康对照组(P<0.01),而血清IL-6、IL-8水平均显著高于健康对照组(Pa<0.01);AML CR组患儿血清IL-3水平较初诊时显著升高(P<0.01),但仍显著低于健康对照组(P<0.01),IL-6、IL-8水平与健康对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05); AML NR组与初诊组比较均无显著性差异(Pa>0.05).AML各亚型之间血清IL-3水平比较均无显著性差异(Pa>0.05); M1及M5患儿血清IL-6水平均显著高于其他亚型(Pa<0.01); M4及M5患儿血清IL-8水平均显著高于其他亚型(Pa<0.01).结论 AML患儿血清IL-3、6、8水平变化与AML亚型有关,观察血清IL-3、6、8水平的变化可作为判断AML患儿病情及疗效的辅助指标之一.     

哮喘患儿外周血单个核细胞microRNA-206表达及意义

目的探讨哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMCs)microRNA-206(miR-206)表达在哮喘发生发展中的作用。方法收集27例哮喘患儿发作期和缓解期,以及25名健康对照儿童的外周血标本,分离PBMCs,采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测PBMCs中microRNA-206及锌指样转录因子4(KLF4)、白介素-17(IL-17)mRNA的相对表达量。结果miR-206、KLF4 mRNA和IL-17 mRNA水平在哮喘发作期、缓解期患儿以及健康对照组儿童三组间的差异均有统计学意义(F=46.58~72.81,P均=0.000)。哮喘发作期的miR-206水平分别低于缓解期和健康对照组,而KLF4 mRNA和IL-17 mRNA水平均分别高于缓解期和健康对照组,差异有统计学意义(P均0.01);缓解期和健康对照组间miR-206、KLF4 mRNA和IL-17 mRNA水平的差异无统计学意义(P均0.05)。哮喘患儿发作期,microRNA-206水平与KLF4和IL-17 mRNA相对表达量均呈负相关(r=–0.66、–0.81,P均0.01),KLF4和IL-17 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.70,P0.01)。结论哮喘患儿外周血单个核细胞microRNA-206表达水平下降,与疾病的发生发展关系密切。     

儿童急性白血病患者血清血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的 　探讨儿童急性白血病患者化疗前血清血管内皮生长因子 (VEGF)水平与急性白血病的发生及复发之间的关系。方法 　采用酶联免疫吸附法 (ELISA)对4 6例儿童急性白血病患者治疗前后及 33例健康体检者 (对照组 )进行VEGF测定。结果 　初发及复发的儿童急性白血病患者VEGF高于对照组水平 (P <0 0 0 1 ) ;完全缓解者和部分缓解者较治疗前明显降低 (P <0 0 0 1 ) ;AML的VEGF表达高于ALL(P<0 0 5)。结论　VEGF可作为儿童急性白血病的辅助诊断、疗效的评定及预后判断的有效指标。     

儿童急性白血病血清白细胞介素24的测定及意义

目的观察急性白血病患儿血清白细胞介素24(IL-24)的水平及意义。方法确诊未治的儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)、儿童急性髓细胞白血病(AML)、非白血病患儿及正常儿童(正常对照组)各20例,采用ELISA法测定其血清IL-24的水平并进行比较。结果两组白血病患儿血清IL-24浓度[ALL组:(28.25±2.6)ng/L;AML组:(26.32±3.2)ng/L]均较正常对照组[(113.15±3.7)ng/L]和非白血病患儿[(105.82±4.2)ng/L]明显降低(P值均0.05);但ALL与AML组之间和非白血病组与正常对照组之间差异无统计学意义(P值均0.05)。结论 ALL及AML患儿血清IL-24浓度明显下降。     

特发性矮身材儿童循环microRNA表达水平的研究

目的 研究特发性矮身材（ISS）患儿循环miRNA表达水平,初步建立ISS循环miRNA表达谱,为进一步探索miRNA与ISS发生、发展及寻找新的生物标记物提供理论依据。方法 选取20例ISS患儿和20例健康对照儿童,提取血清总RNA,利用microRNA microarray技术比较ISS患儿与对照儿童血清miRNA的表达差异;实时荧光定量PCR技术验证芯片结果,生物信息学分析软件对筛选出的具有显著差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果 ISS组与对照组对比共有40个差异表达的miRNA,其中表达上调的miRNA有24个;表达下调的有16个;实时荧光定量 PCR对其中2个表达上调（miR-185和miR-574-5p）和2个表达下调（miR-497和miR-15a）的miRNA进行验证,ISS患儿血清中miR-185较对照组明显上调（P<0.05）,miR-497明显下调（P<0.05）。结论 ISS患儿与健康对照血清miRNA表达存在显著差异,提示血清miRNA可能与ISS的发生发展有密切的关系。     

急性白血病儿童黑色素瘤特异性抗原基因表达的意义

目的检测黑色素瘤特异性抗原(PRAME)基因在急性白血病儿童中的表达,并探讨其临床意义。方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测72例急性白血病(AL)患儿及20例对照者骨髓或外周血中PRAME基因mRNA的表达,并对PRAME基因mRNA表达阳性者进行动态检测。结果急性白血病患儿确诊时PRAME基因的阳性表达率为40.28%,其中45例急性淋巴细胞白血病患儿阳性表达率为40.0%,27例急性髓细胞白血病患儿中PRAME基因的阳性表达率为40.74%,两者之间无显著差异(P>0.05);而对照组均为阴性表达。PRAME基因的表达在白血病缓解期明显降低,当病情复发时PRAME基因的表达再次上升。结论PRAME基因在儿童AL中有较高水平表达,其动态变化与预后密切相关,可作为儿童AL微小残留病变的一个监测指标,对判断预后、指导治疗有重要意义。     

血清miR-17-92基因簇对视网膜母细胞瘤诊断价值的研究

目的分析血清mi R-17-92基因簇对视网膜母细胞瘤(RB)的诊断价值。方法采用实时定量PCR法检测20例RB患儿、20名健康对照者的血清mi R-17-92基因簇表达水平,分析其在不同分期RB患儿的表达差异及综合治疗前后的变化,并采用ROC曲线判断其对RB的诊断价值。结果 RB患儿血清中mi R-17-92基因簇成员mi R-17-3P、mi R-17-5P、mi R-18a和mi R-20a的相对表达量均高于健康对照组,以mi R-18a升高更为显著,差异均有统计学意义(P0.05);两组mi R-19a、mi R-19b-1和mi R-92a-1相对表达量的差异无统计学意义(P0.05)。mi R-17-5P、mi R-17-3P、mi R-18a和mi R-20a表达量在早中期和晚期RB患儿之间的差异均无统计学意义(P0.05),但综合治疗后表达量显著降低(P0.05)。mi R-17-3P、mi R-17-5P、mi R-18a和mi R-20a对RB诊断价值的曲线下面积(AUC)分别为0.770、0.755、0.828和0.665,以mi R-18a的AUC最大,并具有较好的灵敏度(90%)和特异度(65%)。结论 mi R-17-92基因簇的mi R-17-3P、mi R-17-5P、mi R-18a和mi R-20a在RB患儿血清中高表达,mi R-18a有可能作为RB诊断的新指标。     

毛细支气管炎患儿血清半胱氨酰白三烯测定的临床意义

目的了解毛细支气管炎(毛支)患儿血清中半胱氨酰白三烯(CysLTs)水平与其发病机制的关系,以探讨降低毛细支气管炎发展为哮喘的新途径。方法对86例临床诊断为毛支患儿抽血进行病原学检测,并测定其血清CysLTs水平,30例正常儿童为对照组。结果毛细支气管炎患儿血清CysLTs水平明显高于健康对照组(t=8.85,P<0.01);不同病毒组之间的毛支患儿血清CysLTs水平差异无显著性(P>0.05)。结论毛支患儿血清CysLTs水平明显升高,与哮喘有相似之处,提示CysLTs在毛支发病中有不可忽视的作用;白三烯受体拮抗剂可望成为防止毛支演变为哮喘的非甾体抗炎药物,从新的途径降低哮喘发病。     

三色流式细胞术在120例儿童急性白血病免疫分型中的应用

目的探讨三色流式细胞术在儿童急性白血病AL免疫分型中的应用价值,了解儿童AL抗原表达规律和免疫亚型的分布情况。方法采用CD45/侧散射(SSC)双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原的分析。结果120例儿童白血病免疫分型可分为4类:未分化型占0·8%,急性髓细胞性白血病(AML)占35·0%,急性淋巴细胞白血病(ALL)占57·5%,混合型急性白血病占6·7%。69例儿童ALL中,B淋巴细胞白血病(B-ALL)占75·3%,T淋巴细胞白血病(T-ALL)占24·7%。AML伴淋巴系抗原表达为28·8%,主要表达CD5、CD7及CDl9(均为9·6%)。B-ALL伴髓系抗原CDl3、CD33表达分别为40·4%和5·8%,T-ALL伴髓系抗原CD13、CD33表达分别为35·3%和5·9%。结论应用流式细胞术几乎能对所有儿童急性白血病进行准确分型,对儿童白血病患者的治疗方案选择及预后判断等均有重要价值。     

特发性血小板减少性紫癜患儿Th亚群细胞因子的检测

目的探讨Th亚群细胞因子在儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病中的变化及作用。方法采用BioPlex系统和悬浮阵列技术通过荧光编码检测43例ITP患儿血清中的Th1型细胞因子TNFα、IFNγ、IL2、GMCSF和Th2相关细胞因子IL4、IL5、IL6、IL10的变化,并与20例正常儿童作对照。结果与正常健康儿童相比,ITP患儿Th1型细胞因子显著升高(P<0.01),而Th2型细胞因子显著降低(P<0.01)。结论儿童ITP发病中存在异常的淋巴细胞极化状态,是一种Th1优势的疾病。     

儿童急性白血病心肌酶谱的变化

检测了72例儿童急性白血病心肌酶谱及部分病例作治疗前，完全缓解后心肌酶谱的变化。结果表明急性白血病（各类型）心肌酶在治疗前明显高于对照组，完全缓解后下降，尤以CKMB、LDH、HBDH差异尤为显著，说明急性白血病对心肌有损害。当急性白血病心肌酶各项指标异常升高时预后不良。