苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用机制

目的 探讨苦参碱对人神经母细胞瘤( NB) SH-SY5Y细胞的作用机制.方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞、无苦参碱)及药物处理组(苦参碱质量浓度为2.0g·L-1,对细胞的作用时间分别为16 h、24 h、32 h)共4组,每组5个复孔.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB SH-SY5Y细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-8的相对活性.采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析.结果 MTT检测对照组及各时间点药物处理组增殖抑制率分别为(4.98±1.20)％、(11.01±0.85)％、(15.22±0.71)％和(22.31±1.45)％;FCM法检测对照组及各时间点药物处理组细胞的凋亡率分别为(5.23±1.19)％、(10.74±1.65)％、(14.00±0.98)％和(17.81±1.06)％;比色法测定各组Caspase-8的相对活性分别为(4.25±1.00)％、(10.69±1.10)％、(14.80±1.44)％和(19.80±0.97)％;以上检测各组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 苦参碱可抑制人NB SH-SY5Y细胞增殖,并可通过上调Caspase-8的活性诱导NB SH-SY5Y细胞凋亡,其作用随时间的延长逐渐增强.     

苦参碱联合顺铂对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞PDCD4表达的影响

目的探讨苦参碱及苦参碱联合顺铂对人肾母细胞瘤SK—NEP-1细胞存活及凋亡的影响,以及可能的作用机制。方法苦参碱、顺铂单独及联合作用SK-NEP-1细胞,实验分对照组、顺铂干预组、苦参碱干预组、苦参碱联合顺铂干预组。应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测SK-NEP-1细胞的存活率,用流式细胞仪检测其凋亡率,逆转录聚合酶链反应法检测其PDCD4mRNA的表达。结果各组SK—NEP-1细胞的存活率及凋亡率与对照组比较、相同浓度的苦参碱干预组与苦参碱联合顺铂干预组比较及苦参碱联合顺铂组与J顿铂干预组比较,SK-NEP-1细胞的存活率及凋亡率差异均有显著性（P〈0．05）。各实验组均能提高PDCD4mRNA的表达,与对照组比较,差异有显著性（P〈0．05）。苦参碱联合顺铂组与苦参碱干预组及顺铂干预组比较,SK—NEP-1细胞PDCD4mRNA表达均显著提高（P〈0．05）。结论苦参碱可浓度依赖性的抑制SK-NEP-1细胞的增殖并诱导其凋亡,从而提高对顺铂化疗的敏感性,该作用可能与提高细胞内PDCD4mRNA的表达有关。     

细胞色素C1对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖作用的研究

目的分析细胞色素C1(CYC1)在神经母细胞瘤(NB)增殖中的作用,探讨神经母细胞瘤增殖的分子机制。方法首先采用在SH-SY5Y细胞系中慢病毒介导敲减CYC1基因方法,建立神经母细胞瘤CYC1敲减模型,并利用实时定量RT-PCR方法验证敲减效率;随后利用荧光显微镜观察及细胞分析系统连续检测慢病毒感染SH-SY5Y细胞后连续5 d细胞增殖数。结果慢病毒介导的SH-SY5Y细胞中CYC1基因敲减效率达77.0%±4%,具极显著差异(P<0.01);通过细胞分析系统连续检测SH-SY5Y细胞慢病毒感染敲减CYC1后0~5 d细胞数发现细胞增殖速度明显降低,对照组/敲减CYC1组细胞数1~5 d比值分别为(1.00±0.11)、(1.61±0.16)、(1.58±0.17)、(1.97±0.13)、(1.44±0.13),具极显著差异(P<0.01)。结论 CYC1基因沉默可抑制神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖,CYC1在调节神经母细胞瘤生长增殖方面发挥重要作用。     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用及机制

目的 探讨苦参碱(matrine,Ma)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB) SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞无Ma)及4个浓度组（Ma的作用浓度）分别为0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和3.0mg/ml,每组5个复孔。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测凋亡率;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达。最后采用SPSS 16.(0统计软件进行单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 MTT比色法检测对照组及各浓度组增殖抑制率分别为(7.25±1.55)％、(12.56±1.94)％、(17.22±0.90)％、(22.39±0.78)％和(25.35±1.38)％;流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为(5.30±0.60)％、(10.04±1.18)％、(14.34±1.79)％、(21.36±0.96)％和(24.80±1.53)％;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达,对照组及各浓度组的灰度值分别为：0.502±0.043、0.584±0.032、0.644±0.052、0.836±0.056和0.948±0.030。以上检测各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 苦参碱在体外环境下作用神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、诱导调亡并促进TrkA mRNA的表达,这为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

顺铂及依托泊苷对神经母细胞瘤细胞中Trk基因家族表达的影响及临床意义

目的神经母细胞瘤(NB)是儿童常见的实体瘤,而三种不同Trk基因的表达变化与NB的预后及转归关系密切;为研究如何优化化疗药物疗效以提高NB患儿的生存率,本文检测了顺铂(DDP)及依托泊苷(VP16)对人NB的SK-N-SH细胞系的杀伤作用及对细胞中Trk基因家族表达的影响。方法通过CCK-8药物诱导细胞毒性实验检测不同浓度梯度的DDP及VP16对SKN-SH细胞的杀伤作用以及半数杀伤浓度(IC50);用qRT-PCR方法检测DDP及VP16在不同浓度下分别作用24 h及48 h后,对SK-N-SH细胞中TrkA、TrkB和TrkC基因表达变化。结果(1)IDDP及VP16药物浓度的增加与其对SK-N-SH细胞的杀伤作用呈线性关系;且48 h比24 h杀伤作用更明显。(2)SK-N-SH细胞中TrkA及TrkC的表达均随着DDP浓度和作用时间的增加而上调,尤其在10μg/mL浓度、24h最明显;而TrkB的表达在24 h时随着DDP浓度增加而上调,48 h时该促进作用不明显;(3)SK-N-SH细胞中TrkA、TrkB及TrkC的表达亦随着VP16浓度和作用时间的增加而上调。结论 DDP及VP16对NB细胞SK-N-SH有明显杀伤作用并对其Trk基因家族的表达有影响。     

苦参碱对急性淋巴细胞性白血病细胞Bcl-2表达的影响

目的　苦参碱是苦参的主要成分 ,具有抗K5 6 2细胞、HL 6 0细胞增殖的作用。本文主要探讨苦参碱抗儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)细胞增殖作用及可能机制。方法　MTT法检测苦参碱对ALL细胞的生长抑制作用 ,流式细胞仪 (FCM)检测苦参碱对ALL细胞Bcl 2表达的影响。结果　 0 .1mg/ml～ 1.0mg/ml浓度的苦参碱对ALL细胞的增殖有抑制作用。培养 4 8h后 ,与未处理组相比 ,其OD值 (MTT法 )由 0 .84± 0 .2 7分别降低为 0 .1mg/ml时的 0 .73± 0 .16 ,0 .2mg/ml时的 0 .5 8± 0 .15 ,0 .5mg/ml时的 0 .32± 0 .16 ,1.0mg/ml时的 0 .2 4± 0 .14 ,差异有显著性。苦参碱可下调ALL细胞Bcl 2的表达 ,培养 4 8h后 ,Bcl 2阳性率由 (2 5 .0± 5 .8) %降低至0 .1mg/ml时的 (2 1.3± 6 .1) % ,0 .2mg/ml时的 (18.2± 3.7) % ,0 .5mg/ml时的 (14 .5± 4 .0 ) % ,1.0mg/ml 时的(10 .0± 3.2 ) %。与对照组相比差异有显著性。结论　苦参碱具有抗ALL细胞的增殖作用 ,其可能机制可能与其下调ALL细胞Bcl 2的表达有关。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体联合顺铂对人横纹肌肉瘤细胞株凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白及TRAIL基因和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用，并分析细胞线粒体膜电位和细胞内cFLIPmRNA表达的改变对凋亡的的影响。方法将TRAIL蛋白、TRAIL基因和顺铂作用于培养的人横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡和线粒体跨膜电位的改变、RT-PCR检测cFLIPmRNA表达，观察和分析TRAIL蛋白及TRAIL基因单独对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂联合作用的效果和机制。结果TRAIL基因和100μg／L的TRAIL蛋白对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为52．5％和43．5％，凋亡诱导率为12．95％和10．26％，联合应用顺铂，生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用，FCM分析显示联合应用降低了线粒体跨膜电位，RT—PCR显示cFLIPmRNA表达下降，与联合应用细胞凋亡率增加相一致。结论TRAIL蛋白和TRAIL基因能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长，联合应用顺铂可显著提高疗效。     

舒尼替尼及联合顺铂对小儿睾丸卵黄囊瘤荷瘤鼠模型的抗肿瘤作用

目的 探讨舒尼替尼(Sunitinib)、顺铂(CDDP)及两者联合用药对小儿睾丸卵黄囊瘤(TYST)异种移植荷瘤鼠模型的抗肿瘤作用及相关作用机制.方法 肿瘤标本来自本实验室的小儿睾丸卵黄囊瘤裸鼠第17代模型,并接种在雄性裸鼠单侧腹股沟皮下区,成瘤后随机分成4组(n=5):对照组、CDDP组、Sunitinib组和Sunitinib+CDDP组.绘制肿瘤体积和裸鼠体重变化曲线图,计算肿瘤消退率;HE染色观察肿瘤组织形态学变化;免疫组织化学法检测AFP、Ki-67、Glypican-3、CD105在各组肿瘤中的表达:CD105测定微血管密度(MVD),Ki-6表示细胞增殖率(PI);TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率(AI);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证靶向因子的mRNA表达变化.结果 各治疗组均能显著抑制肿瘤生长,并能消退肿瘤体积.在治疗后肿瘤体积上,除顺铂组与舒尼替尼组间无统计学差异外(41.61±7.61比67.15±5.39,P＞0.05),其余各组间都有统计学差异:对照组与顺铂(651.72±121.16比41.61±7.61,P＜0.05),对照组与舒尼替尼组(651.72±121.16比67.15±5.39,P＜0.05),对照组联合舒尼替尼±顺铂组(651.72±121.16比23.03±2.37,P＜0.05),舒尼替尼组与联合舒尼替尼+顺铂组(67.15±5.39比23.03±2.37,P＜0.05),顺铂组与联合舒尼替尼+顺铂组(41.61±7.61比23.03±2.37,P＜0.05);在裸鼠体重上,相比对照组,除舒尼替尼组无统计学差异外(25.90±0.75比26.66±0.65,P＞0.05),其余各组间差异均有统计学意义:对照组与顺铂组(25.90±0.75比18.90±0.63,P＜0.05),对照组与联合舒尼替尼+顺铂组(25.90±0.75比18.26±1.20,P＜0.05);AFP、Glypican-3在各治疗组阳性表达面积(Pixels)均少于对照组(AFP:对照组与顺铂组,1.26×106土1.48×105比5.54×105±8.14×104,P＜0.05;对照组与舒尼替尼组,1.26×106±1.48×105比7.09×105±6.64×104,P＜0.05;对照组与联合舒尼替尼+顺铂组,1.26×106±1.48×105比3.62×105±4.83×104,P＜0.05.Glypican-3:对照组与顺铂组,9.68×105±7.63×104比4.04×105±5.04×104,P＜0.05;对照组与舒尼替尼组,9.68×105±7.63×104比4.59×105±2.32×104,P＜0.05;对照组与联合舒尼替尼+顺铂组,9.68×105±7.63×104比1.89×105±2.55×104,P＜0.05).两者在顺铂组与舒尼替尼组的比较中差异无统计学意义(P＞0.05);PI和AI在各治疗组中相比对照组,差异都具有统计学意义(PI和AI:对照组与顺铂组,58.97土1.38比42.36±1.28和1.69±0.20比54.62±2.49,P＜0.01;对照组与舒尼替尼组,58.97±1.38比43.48±1.00和1.69±0.20比47.32±2.00,P＜0.01;对照组与联合舒尼替尼+顺铂组,58.97±1.38比33.34±1.19和1.69±0.20比63.41土2.23,P＜0.01).顺铂组相比联合舒尼替尼+顺铂组,PI:P=0.001,AI:P=0.002;舒尼替尼组相比联合舒尼替尼+顺铂组,PI和AI:P＜0.001;顺铂组相比舒尼替尼组,PI.P=0.597,AI:P=0.059;RT-qPCR证实M-CSFR、PDGFR-β、RET、VEGFR-2的mRNA表达受到抑制.结论 Sunitinib能显著抑制小儿睾丸卵黄囊瘤的生长,并消退肿瘤体积:主要通过直接抑制肿瘤细胞的生长和肿瘤血管的新生,从而诱导肿瘤细胞凋亡,同时伴有直接细胞毒作用引起坏死;Sunitinib相比CDDP具有更轻的毒副作用,且联合CDDP具有增强抗肿瘤作用.

Abstract：

Objective To study the antitumor effects of Sunitinib or Sunitinib combind with cis - diamminedichloroplatinum (CDDP) on an athymic mouse human testicular yolk sac tumor xenograft model. Methods The athymic mouse human testicular yolk sac tumor xenograft model was established by subcutaneous injection of 17th passage pediatric testicular yolk sac tumor cells in the unilateral inguinal region of the male nude mice. The mice of control group didn't receive any treatment. The tumor bearing mice were treated with either CDDP, or Sunitinib group, or Sunitinib combined with CDDP. The tumor-bearing nude mice were divided into 4 groups (5 in each) according the treatment they underwent. The tumor volumes and mice weight were measured to calculate the regression rate of tumor. The tumor was collected for H&E staining and immunohistochemical staining of AFP, Ki-67,Glypican-3 and CD105. Microvessel density (MVD) was measured by analyzing the CD105 expression. The tumors' proliferation index (PI) was studied by analyzing Ki-67 expression. The apoptosis of the tumor was quantitated using TUNEL staining. The mRNA expressions of cytokines were determined by quantitative real-time PCR (RT-qPCR). Results The tumor volumes were significantly decreased after chemotherapy. No difference of tumor volume was found between CDDP group and Sunitinib group (41.61 ± 7. 61 vs. 67. 15 ± 5. 39, P＞0. 05). Significant differences of tumor volumes were found between CDDP group and CDDP+ Sunitinib group (41.61 ± 7. 61 vs. 23. 03 ± 2. 37, P＜0. 05), and between Sunitinib group and CDDP+ Sunitinib group (67. 15 ± 5. 39 vs. 23.03 ± 2. 37, P＜0. 05). Of the body weight of tumor-bearing mice, no difference was found between controls and Sunitinib group (25. 90 ± 0. 75 vs. 26. 66 ± 0. 65, P＞0. 05). And significant differences of the body weight were noted between controls and CDDP group (25.90 ± 0. 75 vs. 18. 90 ± 0. 63, P＜0. 05),controls and CDDP+ Sunitinib group (25. 90 ± 0. 75 vs. 18. 26 ± 1.20,P＜0. 05). The positive areas (pixels) of AFP in the mice with chemotherapy were less than those of control mice (Control vs. CDDP: 1.26 × 106±1.48 × 105 vs. 5. 54 × 105 ± 8. 14 × 104 , P＜0. 05. Control vs. Sunitinib: 1.26 × 106 ± 1.48 × 105 vs. 7. 09 × 105 ± 6. 64 × 104, P＜0. 05. Control vs. CDDP + Sunitinib: 1.26 × 106 ± 1.48 × 105 vs. 3. 62 × 105 ± 4. 83 × 104, P＜0. 05). The positive areas (pixels) of Glypican-3 in the mice with chemotherapy were less than those of control mice (Control vs. CDDP: 9. 68 × 105 ± 7. 63 × 104 vs. 4. 04 × 105 ± 5. 04 × 104 , P＜0. 05. Control vs. Sunitinib: 9. 68 × 105 ± 7. 63 × 104 vs. 4. 59 × 105 ± 2. 32 × 104 , P＜0. 05. Control vs. CDDP + Sunitinib: 9. 68 × 105 ± 7. 63 × 104 vs. 1.89 × 105 ± 2. 55 × 104, P＜0. 05). However, there were no statistical differences of the positive areas (pixels) of AFP and Glypican-3 between CDDP and Sunitinib groups (P＞0. 05). The PI was significantly decreased after chemotherapy (Control vs. CDDP: 58. 97 ± 1.38 vs. 42. 36 ± 1.28, P＜ 0. 01. Control vs.Sunitinib: 58. 97 ± 1.38 vs. 43. 48 ± 1.00, P＜0. 01. Control vs. CDDP+ Sunitinib: 58. 97 ± 1.38 vs.33. 34 ± 1.19, P＜0. 01 ). The apoptosis index (AI) was also significantly increased after chemotherapy (Control vs. CDDP: 1.69 ± 0. 20 vs. 54. 62 ± 2. 49, P＜0. 01. Control vs. Sunitinib: 1.69 ± 0. 20vs. 47. 32 ± 2. 00, P＜0. 01. Control vs. CDDP + Sunitinib: 1.69 ± 0. 20 vs. 63. 41 ± 2. 23, P＜0. 01). Significantly differences of PI and AI were found between CDDP and CDDP + Sunitinib groups (P＜0. 01 ), and Sunitinib and CDDP + Sunitinib (P＜0. 01 ). RT-qPCR study confirmed that the mRNA expressions of M-CSFR, PDGFR-β, RET and VEGFR-2 were decreased in the mice underwent chemotherapy. Conclusions Sunitinib is effective to suppress the pediatric testicular yolk sac tumor growth, and reduce the tumor volume. Sunitinib can inhibit the angiogenesis in tumor, induce apoptosis of tumor cells, and kill the tumor cells directly. Sunitinib is less toxic than CDDP, and synergistic with the antitumor effect of CDDP.     

TrkB-BDNF信号通路对神经母细胞瘤细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的探讨TrkB-BDNF信号通路对神经母细胞瘤(NB)细胞SH-SY5Y分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法 Western blot方法检测全反式维甲酸(ATRA)诱导前后SY5Y细胞TrkB蛋白表达及脑源性神经营养因子(BDNF)刺激后SY5Y细胞磷酸化-TrkB(p-TrkB)蛋白表达;ELISA技术检测ATRA、BDNF、特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a及PI3K抑制剂LY294002处理后SY5Y细胞培养上清中VEGF含量。结果 ATRA诱导前,SY5Y细胞中未检测到TrkB蛋白表达;1,10,100 nM/L ATRA处理后,SY5Y细胞中可检测到TrkB蛋白表达,且TrkB蛋白表达水平随ATRA浓度增加逐渐升高,差异有统计学意义。10 nM/L ATRA单独处理组未检测到p-TrkB表达,ATRA+BDNF组可检测p-TrkB蛋白表达。ATRA+BDNF组的VEGF含量明显高于对照组及ATRA组(P<0.01);ATRA+K252a+BDNF组VEGF含量明显低于ATRA+BDNF组(P<0.05);ATRA+LY294002+BD-NF组VEGF含量亦明显低于ATRA+BDNF组(P<0.01)。结论激活TrkB-BDNF信号通路可促进NB细胞合成、分泌VEGF;用K252a阻断TrkB-BDNF信号通路或用LY294002阻断TrkB-BDNF信号下游通路PI3K/Akt均可有效抑制NB细胞合成、分泌VEGF。     

氧化苦参碱对哮喘小鼠肺及脾脏组织中树突状细胞分布变化影响的研究

目的：研究氧化苦参碱（Oxy）对哮喘小鼠气道炎症、肺和脾脏组织中树突状细胞(DC)分布变化的影响。方法：50只小鼠随机分为哮喘组、地塞米松治疗组、Oxy 20、40、80 mg/kg组等5组,每组10只。苏木精-伊红染色观察肺组织病理形态改变,免疫组化检测肺及脾脏组织中DC表面抗原33D1的表达变化。结果：哮喘组肺组织出现明显的炎症反应,在地塞米松、Oxy干预后气道炎症反应均减轻。哮喘组肺和脾脏组织中33D1抗原阳性DC可见较多表达,在地塞米松干预后阳性表达明显降低（P<0.01）,不同剂量Oxy干预后,各组肺组织的33D1阳性表达的DC均较哮喘组降低(P<0.01),并呈剂量依赖性。在脾脏组织40 mg/kg和 80 mg/kg Oxy可显著降低33D1的表达（P<0.01）。结论：Oxy能减轻哮喘气道炎症,并可减少哮喘小鼠肺和脾脏组织DC的数量,这可能是Oxy治疗哮喘的重要机制。     

RNAi抑制Wnt1信号通路对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖抑制的实验研究

目的 检测人神经母细胞瘤细胞株SH-SYSY中Wnt1的表达情况,并通过抑制Wnt1基因的表达来干预Wnt1信号通路,观察其对神经母细胞瘤增殖的影响,阐明Wnt1信号通路与神经母细胞瘤之间的相关性.方法 检测人神绛母细胞瘤株SH-SY5Y中Wnt1在基因和蛋白水平的表达及细胞内定位情况;将SH-SY5Y细胞分为四组,分别是阴性对照组、空白载体组、非特异性siRNA组和Wnt1-siRNA组.用针对Wnt1的特异性siRNA阻断该细胞中Wnt1信号通路的传递,分别检测上述四组细胞中Wnt信号通路中Wnt1及β-catenin浓度的变化;显微镜下观察细胞形态、数量的改变;用MTT方法检测肿瘤细胞增殖情况.结果 SH-SY5Y中的Wnt1在mRNA转录水平以及蛋白水平均有表达,且位于细胞浆内.采用Wnt1的特异性siRNA技术干预细胞后,Wnt1特异性siR-NA干预组中Wnt1蛋白的表达较阴性对照组、空白载体组及非特异性siRNA组明显下降(P<0.01),其下游通路中的关键蛋白β-catenin的表达同样明显下降(P<0.01);光学显微镜下发现特异性干预组中细胞明显较其他三组少,死亡漂浮的细胞较多,细胞突触减少;MTT结果提示,Wnt1基因表达被抑制后,SH-SY5Y细胞的增殖率明显下降(P<0.01).结论 Wnt1在人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y中呈阳性表达;阻断Wnt1信号通路可以抑制人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的增殖.Wnt1信号通路可能是影响神经母细胞瘤增殖的重要通路.     

脑源性神经营养因子及其受体TrkB在肺炎链球菌脑膜炎炎症细胞中的表达

目的研究脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体在细菌性脑膜炎炎症细胞中的表达,探讨炎症性脑损伤时BDNF的免疫调节作用。方法建立3周龄大鼠细菌性脑膜炎模型和正常对照模型,分别于细菌接种后24 h进行免疫组化染色、原位杂交等检测,观察BDNF蛋白、BDNF mRNA和TrkB mRNA在渗出炎症细胞中的表达。结果感染24 h后大鼠软脑膜、蛛网膜下隙及脑室内,均可见渗出的炎性细胞,同时表达BDNF蛋白、BDNF mRNA和TrkB mRNA。结论在细菌性脑膜炎炎症反应过程中,炎症渗出通过BDNF产生神经保护作用,并可能通过炎症细胞表达TrkB受体发挥调节免疫功能的效应。细菌性脑膜炎炎症反应过程中可能存在保护和破坏两个相互拮抗又相互作用的系统,共同影响着病情发展的势态。     

Effect of inhibiting miR-204 expression on the learning and memory abilities of neonatal rats with intrauterine growth restriction and related mechanism北大核心CSCD

目的探讨抑制miR-204表达对宫内发育迟缓(intrauterine growth restriction,IUGR)新生大鼠学习记忆能力的影响及机制。方法采用低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型,将3日龄IUGR幼鼠设为模型组、miRNA拮抗剂对照组(antagomir-NC组)和miR-204拮抗剂组(antagomir组),另取正常幼鼠设为对照组,每组10只。Morris水迷宫实验测定大鼠学习与记忆能力;qRT-PCR检测各组大鼠海马组织中miR-204和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA表达水平;尼氏染色、Tunel法观察海马组织尼氏小体数量和细胞凋亡水平;Western blot检测海马组织中BDNF/TrkB信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期增加,跨台次数减少;海马组织中细胞凋亡率和miR-204表达水平升高,而尼氏小体数量、BDNF mRNA,以及BDNF、p-TrkB和p-CREB蛋白表达水平降低(P<0.001)。抑制miR-204表达后,IUGR大鼠海马组织中尼氏小体数量、BDNF mRNA,以及BDNF、p-TrkB和p-CREB蛋白表达水平升高,细胞凋亡率和miR-204表达水平降低,逃避潜伏期减少,跨台次数增加(P<0.001)。结论抑制miR-204可改善IUGR新生大鼠学习及记忆功能,其作用机制可能与靶向激活BDNF/TrkB信号通路有关。     

清开灵对戊四氮致癎大鼠海马神经肽Y变化的影响

目的研究大鼠海马部位神经肽Y(NPY)的分布和水平,及清开灵干预治疗作用。方法采用戊四氮(PTZ)制备大鼠癫模型。放射免疫法和免疫组织化学测定大脑海马组织匀浆NPY水平。结果免疫组织化学显示点燃模型组阳性反应神经元增多,清开灵干预组阳性反应神经元则明显增多。点燃模型组海马组织匀浆NPY的放射免疫测定浓度增高(P<0.05);清开灵干预组海马组织匀浆NPY的放射免疫水平与点燃模型组相比明显升高(P<0.05)。结论NPY参与癫的发病过程。清开灵注射液通过增加海马组织NPY水平,可能成为治疗癫的重要药物。     

神经肽Y Y5受体反义基因对肥胖大鼠减肥、降脂作用的研究

目的探讨神经肽YY5(NPYY5)受体反义基因治疗对高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型的减肥、降脂作用。方法建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型,行侧脑室内插管,观察注射NPYY5受体反义、错义寡核苷酸及生理盐水后肥胖大鼠体重、进食量和血脂的变化。结果(1)注射NPYY5受体反义寡核苷酸的肥胖大鼠,体重和进食量减少,与注射前比较差异有显著性[体重(348±32)g降至(303±29)g,共减少(44±14)g,t=4.17、7.89,P＜0.01;进食量(37±7)g降至(24±5)g,共减少(13±5)g,t=5.58、6.15,P＜0.01];错义及生理盐水对照组体重和进食量未见明显下降(P＞0.05)。(2)肥胖未治疗组血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均高于正常对照组(P＜0.05);肥胖组经反义寡核苷酸治疗后,TC、TG、LDL均低于未治疗组[TC(1.71±0.27)mmol/L与(2.22±0.36)mmol/L,t=2.68;TG(0.43±0.06)mmol/L与(0.76±0.17)mmol/L,t=4.47;LDL(0.38±0.12)mmol/L与(0.86±0.20)mmol/L,t=4.97;P＜0.05],与正常对照组之间差异无显著性;而错义寡核苷酸及生理盐水治疗后TC、LDL无明显变化;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)各组差异无显著性。结论侧脑室注射NPYY5受体反义寡核苷酸对营养性肥胖大鼠有明显的抑制进食、减轻体重、降低血脂的效应。     

地塞米松对大鼠胎肺形态结构及Wnt信号转导途径的影响

目的 比较产前给予不同剂量地塞米松对大鼠胎肺形态结构及Wnt信号转导途径的影响.方法 孕鼠12只,于孕16、17、18 d,连续3 d给孕鼠腹腔注射药物,随机分为3组,每组4只.地塞米松小剂量组：地塞米松0.4 mg/(kg·d),地塞米松大剂量组：地塞米松0.8 mg/(kg·d),均用生理盐水稀释至0.5ml;对照组：生理盐水0.5 ml/d;取孕19 d胎鼠肺组织,HE染色观察肺病理学改变;RT-PCR、Western-Blot方法检测Wnt信号转导途径中Wnt7b、GSK-3β、β-catenin基因mRNA和蛋白表达.结果 (1)肺脏病理学改变：HE染色可见：地塞米松小剂量组肺泡数目为(15.6±2.1)个;大剂量组(13.2±1.6)个,对照组(20.8±2.0)个;肺泡间隔厚度：地塞米松小剂量组(11±5)μm;大剂量组(11±4)μm;对照组(13±7)μm;肺泡腔结构：地塞米松小剂量组(2483 ±1336)μm2;大剂量组(2924 ±1705)μm2;对照组(1913±764)μm2;以上各指标地塞米松组与对照组差异均有统计学意义(P均＜0.01),地塞米松大剂量组较小剂量组肺泡数目明显减少(P＜0.01).(2)地塞米松组胎肺Wnt7b及β-catenin基因mRNA的表达量均高于对照组,GSK-3β表达量低于对照组(1.1±0.6)(P均＜0.05);地塞米松组胞浆GSK-3β蛋白表达量低于对照组,大剂量组低于小剂量组;地塞米松小剂量组胞浆β-catenin的表达高于对照组,大剂量组低于对照组;胞核β-catenin蛋白表达量高于对照组.结论 产前使用地塞米松,肺泡数目减少,肺泡腔结构变大,肺泡间隔厚度变薄,周围结缔组织减少,影响胎肺形态发育;Wnt7b、β-catenin和GSK-3β基因表达异常;胎肺形态发育异常可能是通过地塞米松所致的Wnt信号转导途径障碍而发生.