重复序列引物聚合酶链反应在检测肺炎克雷伯菌院内流行中的应用

目的 用重复序列引物聚合酶链反应(rep-PCR)方法分析从大连医科大学第一临床学院不同患者分离出来的肺炎克雷伯菌是否起源于同一菌株.方法 用微生物分析系统检测其对抗生素的敏感程度,选用肠杆菌科广泛存在的基因间重复片段为引物进行扩增,对肺炎克雷伯菌进行基因分型.结果 建立了rep-PCR法方法,显示可将肺炎克雷伯菌扩增出丰富的区带.分离到的33株产ESBL肺炎克雷伯菌分属6个基因型.结论 rep-PCR是一种快速、简便、可靠的基因分型方法,是分子水平追踪医院感染较理想的方法.     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌基因型研究

目的：研究医院感染超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型。方法：收集分离鉴定菌株，通过K—B法药敏实验初筛以确认产ESBLs菌株，并对ESBLs基因进行初步分型。结果：17株肺炎克雷伯菌产生的ESBLs以CTX-M-3、CTX-M-15、CTX-M-22为主要基因型，其中8株为CTX—M-3型；6株为CTX-M-22型；1株为CTX-M-15型；1株同时产CTX-M-3、CTX-M-22；1株同时产CTX-M-15、CTX-M-22型。结论：我院肺炎克雷伯菌临床分离株中的ESBLs基因型以CTX-M型酶为主。     

肺炎克雷伯菌耐药表型及分子分型特征分析

目的探讨肺炎克雷伯菌耐药表型及通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析其分子分型,为完善肺炎克雷伯菌分子流行病学特征提供依据。方法收集2018年1-12月肇庆市第二人民医院非重复分离的51株肺炎克雷伯菌为研究对象,采用微量肉汤法进行药敏试验;采用改良产碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测CRKP表型;采用PFGE进行分子分型,建立PFGE DNA指纹图谱数据库,并运用Bionumeries6.6生物软件进行聚类分析。结果 51株肺炎克雷伯菌根据耐药谱可以分为4个耐药表型,其中产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(产ESBLsKP)28株(54.9%)、耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌(CRKP)4株(7.8%)、多重耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)9株(17.7%)、高毒力肺炎克雷伯菌(HvKP)10株(19.6%)。PFGE聚类分析结果显示,51株菌株间相似度为47.8%～100.0%,可分为47个PFGE型别,PFGE型别相似度85.0%共10株,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型具有100.0%相同PFGE图谱,可以视为4个具有分子流行病学意义的单一克隆群。结论肇庆市第二人民医院肺炎克雷伯菌耐药表型以产ESBLsKP为主,PFGE分型呈多样性,并存在院内散发感染风险,需要注意菌株型别变异趋势。     

肺炎克雷伯菌脉冲场凝胶电泳分型能力评价

目的 评价脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术用于肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的分型能力。 方法 选用220株肺炎克雷伯菌,对PFGE方法的分型力、可重复性、分辨力、流行病学一致性及其与多位点序列分型(MLST)的分型一致性进行评价。挑选全部220株菌株进行实验,评价PFGE的分型力;挑选18株菌株重复2次实验评价PFGE的可重复性;分别挑选3组无流行病关联的碳青霉烯耐药临床株、腹泻患者肠道分离株、食品分离株,使用Simpson差异指数(D)评价PFGE的分辨力;挑选同一次暴发期间分离的34株菌株,评价PFGE的流行病学一致性及其与MLST对暴发菌株分型结果的一致性;挑选64株不同来源的菌株,评价PFGE和MLST分型对流行病学不相关菌株的分型一致性。用BioNumerics软件对所有实验菌株的PFGE图谱进行分析。 结果 220株肺炎克雷伯菌中有216株通过PFGE能够获得有效的图谱,其分型力为98.18%(216/220);18株菌株重复2次实验的图谱完全一致;PFGE对无流行病关联的50株碳青霉烯耐药临床株、34株腹泻患者肠道分离株、48株食品分离株分型的D值分别为0.9910、0.9964、1.0000;针对34株暴发期间分离菌株,PFGE能够很好地甄别出暴发菌株,高度相关菌株和不相关菌株,并且分型结果与菌株分离病区、分离时间具有一致性;针对暴发菌株,PFGE能够将相同MLST型别的菌株聚成一簇;针对流行病学不相关菌株,PFGE不能将相同MLST型别的菌株分成相同或相似的带型或者聚成一簇。 结论 PFGE对肺炎克雷伯菌分型具有很好的分型力、可重复性和分辨力;针对暴发菌株,PFGE能够将相同MLST型别的菌株聚成一簇;针对流行病学不相关菌株,PFGE和MLST分型一致性差。     

新生儿呼吸道感染肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性研究

目的建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性（RAPD）基因分型的方法,并对新生儿病房呼吸道感染肺炎克雷伯菌进行分子流行病学分析。方法在对肺炎克雷伯菌进行RAPD反应体系优化的基础上,对我院新生儿病房下呼吸道分泌物分离获得的30株肺炎克雷伯菌,提取基因组DNA后进行RAPD分型,同时进行抗生素敏感性试验。结果30株肺炎克雷伯菌RAPD分型可分为14型,分型率100．0％;其中A型6株、B型4株、C型3株、D型3株、E型-H型各2株、I型-N型各1株。药敏结果显示分离菌株多重耐药情况严重,对第三代头孢菌素类抗生素耐药率高达50．0％-73．3％,但对亚胺培南仍高度敏感。结论RAPD可对肺炎克雷伯菌进行分子流行病学研究。新生儿病房内存在肺炎克雷伯菌流行株的交叉感染。     

携带blaNDM-1耐药基因高毒力肺炎克雷伯菌的耐药和毒力分析

目的 了解携带blaNDM-1耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）对常用抗菌药物耐药和毒力特征分析，为有效防控医院感染提供依据。方法 采用细菌分离鉴定和药敏试验方法，对成都地区部分医院临床分离CR-hvKP耐药和毒力情况进行统计分析。结果 收集的160株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）中，有41株携带blaNDM-1耐药基因，其中8株为CR-hvKP。携带blaNDM-1基因的CR-hvKP对头孢菌素类、喹诺酮类和酶抑制剂类药物耐药率为100%，对阿米卡星和庆大霉素耐药率较低。CR-hvKP血清荚膜分型以K1和K2型为主，主要携带rmpA和aerobactin毒力基因，多位点序列分型以ST11和ST307型为主。结论 成都地区部分医院临床分离的CRKP菌株blaNDM-1携带率较高，CR-hvKP具有高耐药性和高毒力，应加强防控措施。     

广州地区呼吸道感染产超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的：调查广州地区下呼吸道感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离率及各种基因型的流行分布。方法：收集广州地区13家医院2000-10～2001-12临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共714株．采用美国临床实验室标准化委员会规定的ESBL表型筛选和确证试验确定ESBL的发生率、PCR扩增对产。ESBL菌初步分型，然后对部分PCR扩增阳性产物测序．序列分析进一步确定基因型。结果：大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBL分离率分别为58．1％和40．1％；TEM型161株(49．8％)，均为TEM-1型．CTX-M型107株(33．1％)．SHV型141株(43．6％)。结论：CTX-M型和SHV型是广州地区下呼吸道感染产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型。     

对头孢吡肟敏感的疑似产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌属的分子生物学特征

目的 了解初筛试验疑似产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)但确证试验未能确认,而对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属中的ESBLs和质粒介导的AmpC酶.方法 纸片扩散法检测18株细菌对常用抗菌药物的敏感性;PCR及多重PCR法检测细菌中的ESBLs和质粒AmpC酶基因;质粒转移接合试验检测耐药质粒的可传递性;细菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR法检测供体大肠埃希菌和受体E.coli J53及其接合子的同源性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌进行同源性分析.结果 18株细菌均为2005年1月至12月期间上海华山医院临床分离的菌株,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌6株,产酸克雷伯菌1株,按常规方法对细菌进行重新鉴定和药敏试验.18株细菌经美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的ESBLs初筛试验结果均为ESBLs产生可疑菌株,但确证试验未能确认;所有菌株的头孢吡肟抑菌圈直径均在18 mm以上,显示敏感.PCR检测结果显示,11株大肠埃希菌中有9株产CIT型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为CMY-2型AmpC酶,未发现TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、SFO等广谱或ESBLs;6株肺炎克雷伯菌中有5株产DHA型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为DHA-1型AmpC酶;5株产DHA-1型AmpC酶的肺炎克雷伯菌株中,4株同时伴有广谱或ESBLs:其中2株产SHV-11型广谱酶,另2株分别产CTX-M-14型ESBLs和SHV-62型ESBLs;1株产酸克雷伯菌亦单产DHA-1型AmpC酶;质粒转移接合试验结果表明,携带耐药基因的质粒可从供体菌转移至敏感细胞中;PFGE结果显示,6株肺炎克雷伯菌的谱型各不相同,而11株大肠埃希菌可分为5种谱型,其中B型包含7株细菌,这7株细菌均产生质粒介导的CMY-2型AmpC酶,并分离自外科病房,提示可能存在克隆菌株的流行传播.结论在确证试验未能确认的疑似产ESBLs中,对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌主要产生质粒介导的AmpC酶,但尚有少数菌株同时伴有产ESBLs.对同时产生ESBLs和AmpC酶的菌株,临床微生物实验室必须报告这些菌株对头孢吡肟耐药.     

肺炎克雷伯菌25株PFGE基因分型和药敏表型的比较

目的:探讨肺炎克雷伯菌耐药表型和基因组型之间的关系。方法:临床菌株用VITEK60仪器鉴定,以双纸片协同试验(DDST)筛选出产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBLs-KP)11株和不产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌(NESBLs-KP)14株;用XbaⅠ酶对各试验菌株进行限制性酶切,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分离酶切片段,FingerprintingⅡ指纹图谱分析软件分析PFGE图谱。结果:菌株间AST结果相差较大,并可在较短时间内发生耐药变迁;筛选出产ESBLs11株,占实验菌株的44%;PFGE图谱分析,将肺炎克雷伯菌分为6群,相似性系数为52.63%～78.24%,还有1株不能分型。结论:在用于ESBLs-KP治疗时,碳青霉烯类抗生素是首选应用的抗生素;PFGE图谱分析,产ESBLs菌株和不产ESBLs分在各个群中,没有发现特异的ESBLs条带,但在同一群中,产ESBLs的菌株常为同一亚群,不产ESBLs的菌株常为另一亚群;肺炎克雷伯菌的耐药表型和PFGE的基因分型可以表现为一致,也可以表现不同。     

肺炎克雷伯菌25株的PFGE基因分型和药敏表型的比较分析

目的：探讨肺炎克雷伯菌耐药表型和基因组型之间的关系。方法：临床菌株用VITEK仪器鉴定，以双纸片协同试验(DDST)筛选出产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBL-KP)11株和不产超广谱β-内酰胺酶肺炎(WESBL-KP)14株；用XbaⅠ酶对各试验菌株进行限制性酶切，脉冲场凝胶电泳(PFGE)分离酶切片段，FingerprintingⅡ指纹图谱分析软件分析PFGE图谱。结果：菌株间AST结果相差较大，并可在较短时间内发生耐药变迁；筛选出产ESBLs 11株，占实验菌株的44％；PFGE图谱分析，将肺炎克雷伯菌分为6群，相似性系数为52．63％～78．24％，还有1株不能分型。结论：在用于ESBLs-KP治疗时，碳青霉烯类抗生素是首选应用的抗生素；PFGE图谱分析，产ESBLs菌株和不产ESBLs分在各个群中，没有发现特异的ESBLs条带，但在同一群中，产ESBLs的菌株常为同一亚群，不产ESBLs的菌株常为另一亚群；肺炎克雷伯菌的耐药表型和PFGE的基因分型可以表现为一致，也可以表现不同。     

Molecular epidemiology of extended-spectrum beta-lactamase-producing Klebsiella pneumoniae in a neonatal intensive care unit

OBJECTIVES: To investigate the molecular epidemiology of extended-spectrum beta-lactamase (ESBL)-producing Klebsiella pneumoniae in the neonatal intensive care unit of a university hospital in Italy. METHODS: Antibiotic susceptibility was evaluated by disc diffusion and Etest. ESBLs were identified by isoelectric focusing, PCR and DNA sequencing analysis. Genotyping was performed by PFGE analysis. Conjugation was performed by broth mating. RESULTS: Molecular typing of K. pneumoniae isolates identified three distinct PFGE patterns. Isolates of PFGE profile A were isolated during an epidemic in 1996, while isolates of PFGE profiles B and C were sequentially isolated from September 2002 to December 2004, when 233 colonizations and 19 infections by K. pneumoniae occurred. All K. pneumoniae strains of different PFGE types were identified as ESBL producers. DNA sequencing of amplified beta-lactamase genes identified a novel bla(TEM) ESBL (bla(TEM-136)) along with bla(SHV-1) in chromosomal and plasmid DNA from K. pneumoniae of PFGE type A, respectively, and bla(TEM-1) and bla(SHV-12) in plasmid DNA from K. pneumoniae of PFGE types B and C. Conjugation experiments demonstrated that resistance to third-generation cephalosporins, along with an approximately 80 kb plasmid containing bla(SHV-12) and bla(TEM-1), was transferred from K. pneumoniae epidemic strains of PFGE types B and C to a susceptible Escherichia coli host at a frequency of 4 x 10(-6) and 1 x 10(-6) cfu/recipient cell, respectively. CONCLUSIONS: The selection of ESBL-producing clones and the transfer of the bla(SHV-12) ESBL gene between different clones were responsible for the spread of K. pneumoniae in the neonatal intensive care unit.     

随机引物PCR法基因分型肺炎克雷伯菌

目的：对肺炎克雷伯菌进行随机引物PCR(AP-PCR)法基因分型。方法：以单一随机引物及优化的反应体系对临床分离的199株肺炎克雷伯菌(K．pneumoniae)进行AP-PCR分析并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱。结果：199株临床分离K．pneumoniae共得158种AP-PCR型。结论：AP-PCR法可将K.pneumoniae分型158种。     

Characterization of CMY-type beta-lactamases in clinical strains of Proteus mirabilis and Klebsiella pneumoniae isolated in four hospitals in the Paris area

We isolated five clinical strains (three Proteus mirabilis and two Klebsiella pneumoniae) with beta-lactam resistance phenotypes consistent with production of an AmpC-type beta-lactamase. The predicted amino acid sequences of the enzymes were typical of class C beta-lactamases. The enzymes were identified as CMY-2, CMY-4 and a new CMY-variant beta-lactamase, CMY-12. The AmpC beta-lactamases from the two K. pneumoniae isolates were found to be encoded on self-transferable plasmids. The genes encoding the AmpC-type beta-lactamase produced by the three P. mirabilis isolates were chromosomal. Four of the five clinical isolates were from patients transferred from Greece, Algeria and Egypt; one of the K. pneumoniae strains was recovered from a French patient. PFGE analysis and rep-PCR fingerprinting showed that the two P. mirabilis isolates from Greek patients were closely related.     

儿童感染肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因分型及随机扩增DNA多态性分析

目的了解儿童感染肺炎克雷伯菌的耐药情况、产质粒介导的AmpC酶的基因型别及产酶株的分子流行病学特征。方法采用K—B纸片法检测广州市儿童医院患儿感染的肺炎克雷伯菌的耐药情况；头孢西丁三维试验检测AmpC酶；多重PCR技术检测ampC基因并经DNA测序确定其基因型别；RAPD技术对产酶株进行DNA多态性分析。结果在分离到的110株肺炎克雷伯菌中，产质粒型AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率达17．3％，产酶株对头孢菌素类、头霉素类及复方β-内酰胺类抗生素高度耐药，但对亚胺培南仍全部敏感。多重PCR及DNA测序显示AmpC酶的基因型均为DHA型。多态性分析结果显示19株产AmpC酶菌株可分为15个谱型，其中A型有3株菌，B型、C型各两株，另12株菌谱型各不相同；C型两株产酶株分布于同一病区，而A型、B型产酶株则分布于不同病区。结论本地区儿童感染的肺炎克雷伯菌多重耐药情况严重；质粒介导的AmpC酶的检出率较高，其基因型为DHA型；产酶株主要为散发感染。     

Diverse sequence types of Klebsiella pneumoniae contribute to the dissemination of blaNDM-1 in India, Sweden, and the United Kingdom

Clinical isolates of Klebsiella pneumoniae producing NDM-1 carbapenemase from India (n = 22), the United Kingdom (n = 13), and Sweden (n = 4) were subjected to multilocus sequence typing (MLST), automated repetitive sequence-based PCR (rep-PCR), serotyping, virulence gene screening, and plasmid replicon typing. The most frequently detected MLST sequence types (STs) were ST14 (n = 13; all serotype K2), ST11, ST149, ST231, and ST147. The correlation between MLST and automated rep-PCR was excellent. IncA/C was the most frequently detected plasmid replicon type (n = 14). ST14, ST11, and other successful clones may be important for the dissemination of bla(NDM-1).     

高毒力肺炎克雷伯菌中CRISPR-Cas系统的分布及其与毒力和耐药的关系

目的了解高毒力肺炎克雷伯菌中CRISPR-Cas系统的分布特征,并探究其与毒力和耐药的关系。方法收集非重复高毒力肺炎克雷伯菌61株,使用VITEK 2-Compact全自动微生物分析系统进行菌株鉴定及药物敏感性分析,PCR检测CRISPR-Cas系统4个相关基因(Cas1、Cas3、CRISPR1和CRISPR2)、筛查荚膜血清分型基因K1/K2、14种毒力基因及14种耐药基因,用χ2检验比较CRISPR-Cas系统阳性菌株与阴性菌株毒力基因及耐药差异。大蜡螟毒力实验分析比较两组细菌的毒力差异,并且采用多位点序列分型(MLST)分析所有高毒力肺炎克雷伯菌分子分型与CRISPR-Cas系统的关系。结果CRISPR-Cas系统阳性检出率为34.4%(21/61),所有CRISPR-Cas系统阳性的菌株均为ST23型K1菌株,除毒力基因kpn、repA外,CRISPR-Cas系统阳性的高毒力肺炎克雷伯菌携带毒力基因阳性率均大于对应的阴性菌,其中5种毒力基因差异具有显著统计学意义。除耐药基因blaNDM-1、qnrB外,CRISPR-Cas系统阳性高毒力肺炎克雷伯菌的8种耐药基因阳性率均小于对应的阴性菌株,差异具有显著统计学意义。CRISPR-Cas系统阳性高毒力肺炎克雷伯菌感染大蜡螟平均半数生存时间少于对应的阴性菌感染,差异具有统计学意义。MLST结果表明高毒力肺炎克雷伯菌CRISPR-Cas系统分布与分型密切相关。结论CRISPR-Cas系统阳性高毒力肺炎克雷伯菌主要为ST23型K1菌株,CRISPR-Cas系统阳性肺炎克雷伯菌相对于阴性菌株的毒力强,毒力基因阳性率高,耐药率低,耐药基因的阳性率低。临床上应警惕CRISPR-Cas系统阴性ST11型“碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌”的暴发,此类细菌进化获得毒力质粒pLVPK毒力强、高度耐药、传播性强,可能成为危害公共健康并难以控制的超级细菌。     

肠杆菌科细菌中质粒介导的KPC-2型碳青霉烯酶的检测

目的 研究重症监护病房(ICU)出现的碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌等肠杆菌科细菌的分子流行病学及耐药机制.方法 2006年4月-2007年2月,从我院2个ICU病房分离到对碳青霉烯耐药或敏感性降低的21株黏质沙雷菌、10株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌.用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和肠杆菌基因间重复性一致序列-PCR(ERIC-PCR)分析这些菌株的分子流行病学.用接合试验、质粒消除试验、质粒图谱分析、等电聚焦电泳(IEF)、特异性PCR扩增和序列分析以及外膜蛋白分析等技术研究细菌对碳青霉烯耐药的分子机制.结果 21株黏质沙雷菌为同一克隆株;10株肺炎克雷伯菌亲缘关系相近.亚胺培南和美罗培南对黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的MIC为2～8μg/ml,肺炎克雷伯菌K10为128和256μg/ml.所有菌株接合试验均获得成功,亚胺培南和美罗培南对接合子的MIC由原来的≤0.125μg/ml上升到1～2μg/ml.IEF、PCR扩增和序列分析证实黏质沙雷菌产KPC-2型碳青霉烯酶[等电点(p1)为6.7]和pI为6.5的β内酰胺酶;肺炎克雷伯菌产TEM-1(pI5.4)、KPC-2、CTX-M-14(p17.9)和pI为7.3的β内酰胺酶;大肠埃希菌产KPC-2、CTX-M-15(pI 9.0)和pI为7.3的B内酰胺酶;所有接合子均只产KPc-2一种β内酰胺酶.所有接合子质粒DNA的EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ和Bcu Ⅰ限制性酶切图谱完全相同.外膜蛋白的十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺电泳和基因序列分析发现肺炎克雷伯菌KIO由于OmpK36基因中存在插入序列ISEcp1而导致OmpK36膜孔蛋白的缺失.结论我院ICU病房出现大量碳青霉烯耐药的黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌;KPC-2是引起这些细菌对碳青霉烯耐药或敏感性降低的主要原因;KPC-2合并膜孔蛋白缺失可导致肺炎克雷伯菌对碳青霉烯高水平耐药;同一种编码blaKPC-2的质粒在3种不同属的细菌之间传播.     

Characteristics of KPC-2–producing Klebsiella pneumoniae (ST258) clinical isolates from outbreaks in 2 Mexican medical centers

The KPC-producing Klebsiella pneumoniae sequence type 258 (ST258) is an important pathogen widely spread in nosocomial infections. In this study, we identified the KPC-2–producing K. pneumoniae clinical isolates of 2 unrelated outbreaks that corresponded to pandemic strain ST258. The isolates showed high resistance to cephalosporins, carbapenems, quinolones, and colistin. The KPC-2–producing K. pneumoniae isolates were compared to the previously studied KPC-3–producing K. pneumoniae isolates from an outbreak in Mexico; they showed an unrelated pulsed-field gel electrophoresis fingerprinting pattern and a different plasmid profile. The KPC-2 carbapenemase gene was identified in two 230- and 270-kb non-conjugative plasmids; however, 1 isolate transferred the KPC-2 gene onto an 80-kb plasmid. These findings endorse the need of carrying out a continuous molecular epidemiological surveillance of carbapenem-resistant isolates in hospitals in Mexico.     

革兰阴性菌产CTX-M-3型超广谱β内酰胺酶分子传播机制的研究

目的 :了解革兰阴性菌产CTX M 3型超广谱β内酰胺酶 (ESBLs)的分子传播机制 ,为临床防治提供依据。 方法 :收集革兰阴性菌医院感染无重复株共 378株 ,进行药敏试验和ESBLs产酶株的检测 ;肠杆菌科基因组内重复一致序列 聚合酶链反应 (ERIC PCR)进行克隆株的DNA分型 ;质粒转移实验、质粒谱及耐药质粒酶切指纹分析、等电聚焦电泳、PCR扩增TEM、CTX M基因及其克隆测序进行ESBLs基因分型和质粒定位。结果 :ESBLs的检出率为 16 .9% (6 4 / 378) ,其中CTX M 3型产酶株占 2 0 .3% (13/ 6 4 ) ;CTX M 3基因定位在 6 6kb和 75kb 2种接合性质粒上 ,6 6kb的质粒同时携带TEM 1基因 ;从不同来源的CTX M 3产酶株中可以分离到同种耐药质粒 ,染色体DNA同源性分析显示其为不同的克隆株。结论 :CTX M 3型ESBLs产酶株的传播机制以质粒介导为主 ,并可能存在局部携带CTX M 3基因耐药质粒的爆发     

浙江省温州地区肝脓肿患者中肺炎克雷伯菌特征分析

目的探讨肝脓肿患者中高毒力肺炎克雷伯菌微生物学特征、荚膜分型、毒力基因及耐药情况。 比较肝脓肿患者中不同毒力肺炎克雷伯菌的区别。方法回顾性分析2015 — 2017年浙江省温州市中西医结合医院165例肺炎克雷伯菌感染肝脓肿患者的临床资料,采用拉丝试验确定高毒力肺炎克雷伯菌102株。 将菌株分为高毒力组和普通组进行研究。 采用聚合酶链式反应（PCR）法对血清荚膜进行分型及毒力基因rmpA检测,用VITEK-2 Compact 全自动微生物鉴定仪进行药敏试验并对结果进行统计学分析。结果肝脓肿患者中高毒力肺炎克雷伯菌社区获得性感染率更高,83.33%感染的患者没有基础疾病。 81.60%肝脓肿病例由肺炎克雷伯菌高毒力株引起,具有高黏液表型,荚膜分型以血清K-1,K-2型为主,携带rmpA基因。普通肺炎克雷伯菌以无黏液为主,荚膜分型为非血清K-1,K-2型为主,极少数携带rmpA基因。 高毒力肺炎克雷伯菌对10种常见的抗菌药物的耐药率均较低。 共发现3株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）高毒力肺炎克雷伯菌。 未发现耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌性肝脓肿。结论肝脓肿的主要致病菌为高毒力肺炎克雷伯菌,具有高黏液性、以K-1,K-2血清型为主,在免疫力正常患者的社区获得性感染中出现高毒力肺炎克雷伯菌性肝脓肿的严重感染,对常见抗菌药物的耐药率较低。 检出3株产ESBLs的高毒力肺炎克雷伯菌,其耐药性有上升趋势,临床需加强重视。