硫氢化钠对THP-1源性巨噬细胞清道夫受体A和CD36表达的影响

目的研究PCSK9调控氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的机制,进而探索PCSK9在动脉粥样硬化中的作用。方法使用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,应用Lipofectamine2000转染PC-SK9siRNA和PCSK9表达载体进入THP-1源性巨噬细胞中作用24h后再加入80mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24h,West-ern blot检测Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达;加入Caspase8和Caspase9抑制剂处理24h与各组进行比较,酶联....     

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的 研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢和低密度脂蛋白受体表达的影响。方法 以佛波酯刺激分化的THP-1细胞作为单核细胞源性巨噬细胞模型。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆圊醇含量，逆转录-聚合酶链反应检测细胞低密度脂蛋白受体mRNA的表达，Western blot检测细胞低密度脂蛋白受体蛋白的表达。结果 与低密度脂蛋白组、阴性组及IgG免疫复合物组比较，低密度脂蛋白免疫复合物组细胞内胆固醇水平明显增高，并且低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白的表达增加。结论 低密度脂蛋白免疫复合物能显著增加巨噬细胞内胆固醇含量，亦能够促进低密度脂蛋白受体mRNA与蛋白的表达，提示低密度脂蛋白免疫复合物在动脉粥样硬化进展过程中起重要的作用。     

枯草溶菌素转换酶9 siRNA抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达

目的观察枯草溶菌素转化酶9 siRNA对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达的影响。方法应用Lipofectamine 2000分别转染80 nmol/L浓度枯草溶菌素转化酶9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中,作用24 h后加入80 mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24 h,采用逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果 80 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激THP-1源性巨噬细胞24 h后,白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子-αmRNA的表达明显增加(P<0.05),而枯草溶菌素转化酶9 siRNA转染组THP-1源性巨噬细胞白细胞介素1α、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA的表达相对于氧化型低密度脂蛋白组明显降低(P<0.05)。结论枯草溶菌素转化酶9 siRNA能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达,枯草溶菌素转化酶9可能参与了炎症反应的调节。     

PHF-2在氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1源性

目的　观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞植物同源结构域指蛋白2（PHF-2）表达的影响,探讨表观遗传调节在氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症反应中的作用。方法　用不同浓度（0、50、100、150　mg/L）氧化型低密度脂蛋白处理THP-1巨噬细胞4　h,采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α和巨噬细胞炎性蛋白1β的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western　blot分别检测PHF-2　mRNA和蛋白质的表达;采用免疫共沉淀法检测PHF-2和p65核因子κB的结合。结果　100～150　mg/L氧化型低密度脂蛋白处理THP-1巨噬细胞4　h后,肿瘤坏死因子α和巨噬细胞炎性蛋白1β的表达明显上调;氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性上调THP-1巨噬细胞PHF-2　mRNA和蛋白质的表达,并促进PHF-2和p65核因子κB的结合。结论　　PHF-2参与氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞核因子κB激活和炎症因子表达。     

PCSK9-siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响

目的 研究PCSK9siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡中对Bax、Bcl-2表达的影响.方法 用不同浓度ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化.应用Lipofectamine2000分别转染30、50 nmol/L和80 nmol/L PCSK9 siRNAs 进THP-1 源性巨噬细胞中,作用24 h后加入ox-LDL 处理48 h,免疫印迹法分析细胞Bax、Bcl-2表达,Hoechst33258染色观察形态评价细胞凋亡.结果 随着ox-LDL浓度的增加,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性,80 μg/mL ox-LDL处理组作用最为明显;80 μg/mL ox-LDL处理THP-1源性巨噬细胞不同时间后,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调,呈时间依赖性,48 h处理组作用最为明显;PCSK9 siRNA能明显下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,且均呈浓度依赖性;Hoechst33258染色显示,PCSK9 siRNA转染组细胞凋亡明显减少.结论 PCSK9 siRNA在抗ox-LDL诱导的THP-1 源性巨噬细胞凋亡中下调促凋亡蛋白Bax表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达.     

内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的:观察内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响,及其在动脉粥样硬化中的作用机制.方法:给予不同浓度的内肥素处理24 h和同一浓度的内肥素处理THP-1源性巨噬细胞0～36 h,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测LOX-1的mRNA和蛋白的表达水平.结果:高浓度的内肥素处理负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞浆内的脂滴明显增多.在负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞上,内肥素上调LOX-1 mRNA和蛋白表达.结论:内肥素上调THP-1源性泡沫细胞中LOX-1的表达.     

C反应蛋白和高密度脂蛋白对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的观察C反应蛋白和高密度脂蛋白对单核细胞株THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的影响,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的变化与细胞内胆固醇含量变化的关系。方法THP-1单核细胞株经佛波酯诱导分化为巨噬细胞。用不同浓度C反应蛋白或高密度脂蛋白在体外干预巨噬细胞,测定干预前后巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的变化,并采用高效液相色谱测定巨噬细胞内胆固醇含量的变化。结果与对照组相比,C反应蛋白或高密度脂蛋白均可以诱导THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),C反应蛋白使巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量显著增加(P<0.01),而高密度脂蛋白使细胞内总胆固醇和胆固醇酯显著降低(P<0.01)。结论C反应蛋白和高密度脂蛋白都能引起THP-1来源的巨噬细胞表面血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达上调,提示血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1并不是介导巨噬细胞参与炎症反应病理生理变化的关键性受体。     

氧化型低密度脂蛋白经ERK1/2-COX-2途径对巨噬细胞NPC1表达的影响

目的观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞C型尼曼-匹克病蛋白1(NPC1)表达的影响,同时探讨其作用机制。方法THP-1单核细胞经PMA诱导贴壁后,加入氧化型低密度脂蛋白诱导其转化为泡沫细胞,经各种因素处理后,运用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,采用实时定量PCR和western blot方法分别检测NPC1mRNA和蛋白质的表达情况。结果氧化型低密度脂蛋白能在基因和蛋白水平呈剂量依赖性和时间剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞....     

葡萄糖和厄贝沙坦对单核巨噬细胞系凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和厄贝沙坦对人单核巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmol/L佛波酯诱导分化72 h后,将细胞分为对照组、不同浓度葡萄糖组(5、8、12和15 mmol/L)和厄贝沙坦干预组,葡萄糖组将不同浓度葡萄糖与诱导分化的巨噬细胞孵育24 h,厄贝沙坦干预组用厄贝沙坦预先孵育2 h后,再加入15 mmol/L葡萄糖共同孵育24 h。用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,5 mmol/L葡萄糖组凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达差异无显著性(P>0.05),其余高糖组该受体mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),并且其表达呈浓度依赖性;厄贝沙坦可显著抑制此作用,使该受体表达明显降低。结论高糖以浓度依赖方式上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,这可能是导致动脉粥样硬化发生的机制之一;厄贝沙坦可显著抑制这一作用,可能在抗动脉粥样硬化中起作用。     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白上调巨噬细胞清道夫受体CD36的表达

背景 普罗布考是一降脂药,同时具有抗氧化特性,近年来的研究表明其可以通过多种机制抑制动脉粥样硬化的形成,降低经皮冠状动脉成形术后再狭窄的发生.目的 探讨普罗布考对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)刺激巨噬细胞后清道夫受体CD36表达的抑制效应.方法 用不同浓度的Ox-LDL刺激人单核细胞系THP-1源性巨噬细胞及用不同浓度普罗布考和核因子κBp65(NF-κBp65)特异性抑制剂(PDTC)预处理细胞后再用氧化低密度脂蛋白刺激,半定量RT-PCR方法检测CD36和NF-κBp65的mRNA的表达,Western-blot检测CD36和细胞核NF-κBp65蛋白表达水平.结果 THP-1单核细胞分化成巨噬细胞后,CD36和NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达上调;不同浓度的Ox-LDL刺激后,CD36 mRNA和蛋白的表达呈浓度依赖性增加,同时伴NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达增加;PDTC和普罗布考干预后,NF-κBp65和CD36的mRNA和蛋白表达下调.结论 Ox-LDL可以通过NF-κBp65途径上调巨噬细胞CD36的表达;而普罗布考则可以抑制CD36的表达,这种作用与抑制NF-κBp65有关.     

分拣受体Sortilin促进巨噬细胞内脂质蓄积

目的探讨分拣受体Sortilin对THP-1巨噬细胞内脂质代谢的影响。方法用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育THP-1巨噬细胞。Western blot检测荷脂后THP-1巨噬细胞中Sortilin表达变化;THP-1巨噬细胞Sortilin高表达和沉默后,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,油红O染色观察胞内脂滴情况。结果 THP-1巨噬细胞Sortilin表达呈ox-LDL剂量和时间依赖性增加;以50 mg/L ox-LDL处理24 h后THP-1巨噬细胞Sortilin表达水平达到高峰。与对照组相比,Sortilin过表达后巨噬细胞胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴明显增多,而Sortilin沉默后则刚好出现相反的结果。结论 Sortilin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白上调巨噬细胞清道夫受体CD36的表达

背景普罗布考是一降脂药，同时具有抗氧化特性，近年来的研究表明其可以通过多种机制抑制动脉粥样硬化的形成，降低经皮冠状动脉成形术后再狭窄的发生。目的探讨普罗布考对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）刺激巨噬细胞后清道夫受体CD36表达的抑制效应。方法用不同浓度的Ox-LDL刺激人单核细胞系THP-1源性巨噬细胞及用不同浓度普罗布考和核因子κBp65（NF-κBp65）特异性抑制剂（PDTC）预处理细胞后再用氧化低密度脂蛋白刺激，半定量RT—PCR方法检测CD36和NF-κBp65的mRNA的表达，Western-blot检测CD36和细胞核NF-κBp65蛋白表达水平。结果THP-1单核细胞分化成巨噬细胞后，CD36和NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达上调；不同浓度的Ox-LDL刺激后，CD36mRNA和蛋白的表达呈浓度依赖性增加，同时伴NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达增加；PDTC和普罗布考干预后，NF-κBp65和CD36的mRNA和蛋白表达下调。结论Ox-LDL可以通过NF-κBp65途径上调巨噬细胞CD36的表达；而普罗布考则可以抑制CD36的表达，这种作用与抑制NF-κBp65有关。     

氧化低密度脂蛋白对THP-1细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对培养的人单核巨噬细胞(THP-1)凋亡的影响,并进一步探讨其凋亡产生的机制.方法 体外培养的人THP-1单核细胞经PMA诱导48 h,使形成巨噬细胞,将分化良好的巨噬细胞分别用不同浓度OX-LDL(o～100μg/mL)培养48 h和用75/μg/mL ox-LDL培养THP-1细胞不同时间(0～72 h).应用Annexin-V和碘化丙锭双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western-bolt法检测GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白的表达.结果 ox-LDL处理后的细胞凋亡率增加,并且呈时间和剂量依赖性,随着作用时间的延长和浓度的增加,凋亡呈递增变化,同时检测到GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白表达都增加.结论 OX-LDL可诱导THP-1细胞凋亡,其凋亡机制有内质网应激途径的参与.     

普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达

目的观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1mRNA水平和蛋白的表达。结果用氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1mRNA水平呈时序上调;用50μmol/L普罗布考预处理细胞4h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调。结论普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达。     

过氧化体增殖物激活型受体γ对巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响

目的观察过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂和拮抗剂对THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积及CD36表达的影响。方法实验分对照组、氧化型低密度脂蛋白组、Ciglitazone处理组和GW9662处理组,后两组用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白分别与过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone(10μmol/L)及拮抗剂GW9662(10μmol/L)共同孵育24 h,高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况,RT-PCR和Western blot分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组(76.28±10.36 mg/g)相比,氧化型低密度脂蛋白(121.63±13.32 mg/g)能使细胞总胆固醇含量显著增加,而Ciglitazone能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量进一步增加(136.23±14.78 mg/g),GW9662能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量减少(98.52±11.45 mg/g)。过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂GW9662使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调及胆固醇蓄积减少,过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调及胆固醇蓄积增多。结论过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂使THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积减少及氧化型低密度脂蛋白诱导的CD36表达下调。     

硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响

目的探索硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响及可能机制。方法采用荧光显微镜测DiI标记的氧化型低密度脂蛋白(DiI-ox-LDL)摄取、RT-PCR和免疫印迹法测定CD36 mRNA和蛋白表达。结果巨噬细胞与DiI-ox-LDL孵育后大量摄取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),外源性硫化氢供体硫氢化钠显著抑制巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白,而炔丙基甘氨酸(一个硫化氢产生酶胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂)加剧巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白。进而,硫氢化钠呈浓度依赖性抑制巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达,而炔丙基甘氨酸促进巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达。结论硫化氢抑制巨噬细胞摄取脂质及清道夫受体CD36表达。     

肺炎衣原体通过上调清道夫受体A1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的观察清道夫受体A1和CD36在肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用。方法给予不同浓度的肺炎衣原体(1×105～1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞0～72h。运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。分别运用逆转录聚合酶链反应和Western-Blot检测清道夫受体A1和CD36的mRNA和蛋白表达。结果高浓度的肺炎衣原体(5×105和1×106IFU)感染负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞48h后,细胞质内的脂滴明显增多,胆固醇酯占总胆固醇百分比明显增加(>50%)。在负荷低密度脂蛋白的THP-1源性巨噬细胞上,肺炎衣原体感染呈浓度和时间依赖性地上调道夫受体A1 mRNA和蛋白表达,但不影响CD36 mRNA和蛋白表达。结论清道夫受体A1表达上调是肺炎衣原体诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据。     

糖基化终产物对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究长期高血糖所致糖基化终产物对巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响.方法 U937细胞经佛波酯诱导分化,并将不同浓度或同一浓度糖基化终产物与诱导分化48 h后的U937细胞共同孵育,用Western Blotting法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白的表达.同时应用ELISA法测定24例2型糖尿病患者及22例正常对照者血清可溶性氧化型低密度脂蛋白受体1的含量.结果 100、200和400 mg/L 糖基化终产物刺激后细胞表面凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达量分别是对照组的1.85、3.22和4.65倍(P<0.05);400 mg/L的糖基化终产物作用12、24、48 h后,U937巨噬细胞该受体蛋白表达量分别为0 h的2.85、3.89和4.3倍(P<0.05).糖尿病患者血清氧化型低密度脂蛋白受体1及糖基化终产物含量较正常对照者显著升高(P<0.01),两者呈正相关(P<0.001). 结论糖基化终产物可增加U937巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达且呈浓度和时间依赖性.这可能与糖尿病患者加速泡沫细胞形成而易致动脉粥样硬化有关.     

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白刺激能否诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活.方法 体外常规培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,加入氧化型低密度脂蛋白或溶媒孵育24 h,用高效液相色谱分析技术检测巨噬细胞内源性大麻素Anandamide和2-arachidonoylglycerol水平,以实时定量PCR技术和免疫印迹法对大麻素CB1、CB2受体和血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达进行分析.结果 内源性大麻素2-arachidonoylglycerol水平在6mg/L和12 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时分别升高了2.4倍和4.8倍,而Anandamide水平无明显变化.3～12mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时,RAW264.7巨噬细胞大麻素CB1和CB2受体及血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达均明显上调(P＜0.01).结论 首次证实氧化型低密度脂蛋白通过激活血小板活化因子受体诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活,提示氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化过程中可能涉及该系统的激活.     

氧化低密度脂蛋白致损人单核细胞白血病细胞株源性巨噬细胞Notch信号的表达

目的 研究氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）致损人单核细胞白血病细胞株（THP1）源巨噬细胞Notch信号的表达,探讨Notch信号各成分对动脉粥样硬化（AS）发病的可能作用。方法 用不同浓度的ox-LDL刺激THP1源巨噬细胞,在不同时间分别应用实时定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹检测Notch信号通路受体配体的差异表达。结果 与对照组比较,加入ox-LDL后,THP1源巨噬细胞四种受体中Notch1表达明显升高（P〈0. 05）,五种配体中DlL4和Jagged1表达明显升高（P〈0. 05）;Notch1、DlL4和Jagged1升高的作用在ox-LDL浓度为50 mg/ L 6 h点作用最强。结论 ox-LDL致损THP1源巨噬细胞参与AS的发生与Notch1,DlL4和Jagged1高表达有关。