HBVX蛋白和DNAP在肝癌组织中的表达

乙型肝炎病毒(HBV)感染与肝细胞癌(HCC)发生关系密切,但其确切机理尚不清楚,近年来 HBV 致癌研究重点在有关 X 基因及其编码的 X 蛋白(HBVX)和 P 基因编码 DNA 聚合酶(DNA Polymerase,DNAP)上,并发现 X 基因和 P 基因的翻译产物是HBV 致癌过程中的重要因素。因此本文应用HBVX 和 DNAP 多克隆抗体对60例 HCC,     

层粘连蛋白在乙肝相关性肝癌中的表达、分布及意义

 目的 探讨层粘连蛋白(laminin,LN)在乙型肝炎病毒 (hepatitis Bvirus,HBV) 感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达分布及意义。方法 选取2003-01至2013-05在武警总医院施行了原位肝移植手术的215例HBV相关性HCC伴肝硬化患者的组织标本,应用免疫组化的方法检测LN在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况,并以30例正常肝组织和良性肝病组作为对照。结果 LN主要定位于HBV相关性肝癌组织肝窦窦壁,其次为癌旁间质血管与新生血管及细胞膜/浆。LN在肝癌组织中肝窦窦壁和新生血管的阳性表达率为70.23％(151/215),在癌旁组织和良性肝病中肝窦窦壁和新生血管的阳性表达率分别为57.20％(123/215)和13.33％(3/30),LN在癌组织中的表达显著高于其在癌旁及良性肝病中的表达(P=0.000),LN在癌组织中的阳性表达与微卫星灶(P=0.026)、肿瘤数量(P=0.053)、血管侵犯(P=0.005)、TNM分期(P=0.029)显著相关。结论 LN的过表达可能与肝癌的发生发展及侵袭转移相关。
     

肝癌组织HBV和HCV基因意义

目的：探讨肝癌组织中HBV DNA和HCV RNA的表达,方法：应用原位聚合酶链技术检测了38例肝癌患者肝肝癌及癌旁肝组织中的HBV DNA和HCV RNA表达。结果：肝癌组织中HBV DNA和HCV RNA的检出率为79％和68％,略低于癌旁肝组织的84％和71％（P＞0．05）肝癌和癌旁肝组织中HBV DNA和HCV RNA双重感染率为47％和55％（P＞0．05）。HBV DNA和HCV RNA在肝癌组织中以核阳性为主,而在癌旁肝组织中,HBV DNA以胞质阳性属多,HCV RNA以核质阳性为主。结论：成都地区原发性肝癌的发生与HBV和HCV感染密切相关,HCV在原发性肝癌发病中起着与HBV同等重要的作用。     

T-cadherin在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤复发转移的关系

目的 探讨T-钙黏附蛋白(T-cadherin)在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系.方法 收集2010年5月-2011年10月于南京军区福州总医院行手术切除的肝癌患者的新鲜癌组织和癌旁2cm以上肝组织标本,采用免疫组织化学方法观察不同恶性生物学程度以及手术前TNM分期相同,术后1年内出现或未出现复发和(或)转移的HCC患者的癌组织及癌旁组织中T-cadherin基因的表达;采用RT-PCR方法检测T-cadherin基因mRNA的表达情况.结果 肝癌组织中T-cadherin的异常表达率高达46.7％(28/60),明显高于癌旁肝组织6.7％(4/60),两组相比差异具有统计学意义(x2=24.55,P=0.000).在高分化与中低分化的HCC患者癌组织中T-cadherin的异常表达率分别为30.0％(6/20)和35.0％(7/20),两者比较差异无统计学意义(x2=0.114,P=0.736).在出现转移的HCC患者癌组织中T-cadherin的异常表达率[75％(15/20)]明显升高,与未出现转移的HCC患者[32.5％(13/40)]相比,差异具有统计学意义(x2=9.676,P=0.002).T-cadherin mRNA检测结果显示癌组织T-cadherin表达缺失(高度异常表达),癌旁组织在多数患者中呈正常表达(T-cadherin阳性).结论 T-cadherin基因在HCC中异常表达,且与肝细胞癌的复发转移密切相关,有可能作为判断HCC预后的预测指标和药物研究靶点.     

乙肝相关性肝癌MLH1与p53的表达及其意义

 目的 探讨MLH1与p53在乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus ,HBV) 感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其意义。方法 选取原位肝移植手术术后HBV相关性HCC伴肝硬化患者238例,应用免疫组化的方法检测肝癌组织和癌旁组织中MLH1与p53的表达情况,并以25例正常肝组织和良性肝病组作为对照。结果 MLH1在肝癌组织的阳性表达率为31.09％(74/238),在癌旁组织的表达阳性率为26.05％(62/238),良性肝病对照组阳性表达率为48.00％(12/25),各组表达的差异无统计学意义(P=0.053)。相关性分析显示,MLH1基因的表达与患者肝移植术前AFP含量(r=0.221,P=0.001)及术后的复发(r=-0.159,P=0.014)有相关性,与HCC组织病理学Edmondson分级(P=0.060)及TNM分期(P=0.065)有相关趋势。p53在肝癌组织的表达阳性率为47.06％(112/238),在癌旁组织的表达阳性率为0.84％(2/238),良性肝病对照组均为阴性,p53蛋白的表达在癌组织中明显高于其在癌旁及良性肝病中的表达(P=0.000);p53表达情况与患者肝移植术前AFP含量有相关性(r=0.172,P=0.008),与血管侵犯(P=0.053)及肿瘤数量(P=0.051)有相关趋势。结论 MLH1蛋白表达下调可能与HBV相关性肝癌的发生及术后的复发有关,且MLH1与p53蛋白在肝癌中的表达有一定的关联性。     

HBsAg和抗HBs双阳性慢性HBV感染患者S区主要亲水区新增N-糖基化突变与肝细胞癌发生风险的相关性研究

目的 探讨临床HBsAg和抗HBs双阳性(简称双阳性)慢性HBV感染患者病毒S基因主要亲水区(MHR)新增N-糖基化突变与肝细胞癌(HCC)发生的相关性.方法 纳入2009年7月-2015年6月在解放军302医院就诊的284例双阳性慢性HBV感染患者,通过巢式PCR方法扩增血清样本HBV S基因全序列并进行测序,分析MHR新增糖基化突变和其他临床指标与HCC发生的相关性并动态分析18例双阳性HCC患者临床确诊HCC前后S区新增N-糖基化的突变情况.结果 多因素分析表明,患者年龄＞40岁、HBsAg＞中位数、HBeAg阴性和MRH新增N-糖基化突变是双阳性慢性HBV感染患者发展为HCC的危险因素(分别为OR=4.281,95％CI 1.843～9.941,P=0.001;OR=3.146,95％CI 1.633～6.060,P=0.001;OR=2.097,95％CI 1.010～4.357,P=0.047;OR=4.381,95％CI 1.842～10.417,P=0.001),而丙氨酸氨基转移酶(ALT)、抗HBs＞中位数、抗HBe阳性和HBV DNA水平与HCC发生均无显著相关性.动态研究结果表明,18例双阳性HCC患者样本中有8例在发生HCC 1～4年前已携有新增N-糖基化突变.结论 在双阳性患者中HBV S基因MHR区新增N-糖基化突变与HCC发生密切相关,HBsAg和抗HBs双阳性叠加MHR新增糖基化突变可作为慢性HBV感染患者HCC发生风险的预测指标.     

丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌发生之间的关系

近年来由于分子生物学研究不断深入和发展,对乙型肝炎病毒(HBV)基因结构已有所了解,肝细胞癌(HCC)病因学中的重要作用已经肯定,而对HCV的研究,自1989年Choo等用分子生物学技术建立HCV基因克隆以来,HCV感染与HCC发生之间的关系已成为当今世界研究的热点和难点。     

原位聚合酶链反应技术及其在消化道肿瘤相关病毒基因检测中的应用

为克服核酸原位杂交技术(ISH)和聚合酶链反应(PCR)的不足,我们应用分子病理学原理建立了原位PCR(PCRIS)、反转录原位PCR(RT—PCRIS)技术,对27例原发性肝癌(HCC)组织中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)、54例胃癌(GC)组织中EPstein—Barr病毒脱氧核糖核酸(EBV DNA)及20例食道癌(EC)组织中人乳头状瘤病毒DNA(HPV DNA)进行原位分析。结果显示HCV RNA、EBVDNA及HPV DNA阳性率分别为78％、29％及25％,明显高于ISH检测结果(P<0.05)。提示本研究建立的PCRIS、RT—PCRIS技术特异、灵敏、定性、定位;HCV、EBV、HPV感染分别与HCC、GC及EC发生、发展密切相关。     

慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBV cccDNA定量检测方法的建立

目的建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法。方法以37例慢性乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBV DNA、肝组织总HBV DNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBV DNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关。结论该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA。     

人肝癌及肝硬变中胰岛素样生长因子Ⅱ的表达及其与HBXAg的关系

本文对60例肝癌(HCC)和47例LC(肝硬变)石蜡切片进行了免疫组化研究。结果显示:胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF—Ⅱ)在HCC、癌旁肝和LC中均可阳性表达,其表达强度以HCC最强,癌旁肝和LC次之。在癌旁肝和LC中增生活跃的肝细胞(如:多倍体、双核肝细胞及小多角细胞等),IGF—Ⅱ可呈较强阳性。在HBxAg阳性表达的HCC和LC组织中,IGF—Ⅱ的阳性率明显高于HBxAg阴性的组织(x~2检验,p<0.05)。癌旁肝和LC组织中一种小多角细胞(SPLC)不仅可以表达IGF—Ⅱ,而且还可以表达HBxAg。上述结果提示,IGF—Ⅱ在HCC中可呈强阳性表达,IGF—Ⅱ的作用可能与HCC恶性增殖有关。SPLC为一种增生活跃的幼稚肝细胞,不仅可以表达IGF—Ⅱ而且还呈HBxAg强阳性。我们认为,SPLC较容易受到HBV等致病因子的侵害,而HBV的表达产物—HBxAg可以通过反式调节机制激活IGF—Ⅱ基因并过量表达,致使SPLC增殖。在癌旁肝和LC中部分肝细胞可呈IGF—Ⅱ强阳性表达,说明这部分细胞处于“活跃增殖”状态,是否具有恶性转化趋势,尚待进一步研究。     

乙型肝炎相关性肝细胞肝癌HBV血清标志物特征探讨

目的探讨乙型肝炎相关性肝细胞肝癌（HCC）乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物特征。方法选择2009年6月~2013年6月临床确诊的有明确HBV感染史的HCC患者312例,分析患者HBV DNA载量,定量检测HBV标志物（包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）并分析其组合方式。结果①312例HCC患者中,HBV DNA阳性299例（299/312,95.83%）。HBeAg阳性者41例（41/312,13.14%）,其HBV DNA载量为（5.79±2.53）Log10copies/ml;HBeAg阴性者271例（271/312,86.86%）,其HBV DNA载量为（4.59±1.66）Log10copies/ml（P〈0.01）。②HBV标志物存在6种组合方式,6.09%患者HBsAg阴性,86.86%患者HBeAg阴性。结论 HBV DNA多为低至中等水平,HBV DNA阳性者中高病毒载量者仅为少数;HBeAg阴性者远多于HBeAg阳性者;HBsAg滴度较低,少数患者HBsAg阴性。     

Association of liver cirrhosis, hepatitis B virus infection and hepatocellular carcinoma--immunohistochemical study]

In order to assess frequency and importance of the presence of alpha fetoprotein (AFP) and AlAChy as well as hepatitis B virus (HBV) infection antigens in the tissue of hepatocellular carcinoma (HCC) and in the liver tissue outside a tumour, there have been performed retrospective light-microscopic and immunohistochemical examinations of the liver tissue in 65 cases of HCC (39 autopsy and 26 biopsy cases). The finding of AlAChy in 100% of autopsy cases of HCC and 80.7% of biopsy cases of HCC compared with the presence of AFP in 33% of autopsy and 61.5% of biopsy cases point out that AlAChy is a more sensitive marker than AFP in diagnosing HCC. The presence of HBV infection antigens in 43.5% of autopsy cases and 23.5% of biopsy cases of HCC point to an important role of HBV infection in development of HCC in the studied population.     

血清HBV-DNA定量水平与拉米夫定抗HBV感染中YMDD变异的相关性研究

观察拉米夫定治疗慢性乙型肝炎 (CHB)YMDD变异的产生与血清HBV DNA水平的关系。方法　选择应用拉米夫定治疗并产生YMDD变异的CHB患者 5 3例 ,分析血清HBV DNA水平与YMDD变异类型、产生时间的关系。另选择具有可比性的应用拉米夫定治疗但并未产生YMDD变异的CHB患者 5 3例 (1:1配对 )对比分析治疗前血清HBV DNA定量水平。结果　YMDD变异组治疗前血清HBV DNA定量水平显著高于未产生YMDD变异组 (P <0 .0 1)。YMDD变异类型与血清HBV DNA定量水平不相关 (P >0 .0 5 ) ,但YMDD变异产生时间与血清HBV DNA定量水平相关 (P <0 .0 5 )。结论　CHB患者血清HBV DNA水平越高 ,应用拉米夫定治疗越容易产生YMDD变异 ,且产生时间越早。血清HBV DNA水平可作为应用拉米夫定治疗YMDD变异产生的早期预测指标。YMDD变异类型与血清HBV DNA水平不相关。     

乙肝相关肝癌组织中Jagged-1的表达及其临床意义

 目的 观察乙肝相关肝癌组织中Jagged-1蛋白的表达及其临床意义。方法 收集2008-11至2012-06就诊并接受肝切除术治疗肝癌患者的110例乙肝相关肝癌组织及其对应的癌旁组织,通过组织芯片技术检测癌及癌旁标本中Jagged-1蛋白的表达水平,并分析其与临床指标和预后的关系。结果 组织芯片提示乙肝相关肝癌组织Jagged-1蛋白高表达率(44.5%)高于对应癌旁组织(22.3%)(χ²=12.16,P<0.0001)。Jagged-1蛋白的高表达水平与微血管侵润(microvascular invation,MVI)显著相关(P<0.001)。Jagged-1高表达组患者的1、3、5年生存率(87.5%、64.1%、46.5%)均低于低表达组(96.7%、84.5%、66.9%,P=0.0139)。结论 乙肝相关肝癌组织Jagged-1蛋白的高表达水平与肝癌的MVI及不良临床预后有关。     

PCR法检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞中HBV-DNA

目的：了解慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）HBV的感染情况及其与血清HBV的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）检测55例慢性乙型肝炎患者PBMCs和血清中HBV。结果：PBMCsHBV－DNA检出率为69％（38例／55例），血清HBV－DNA检出蓄为36％（20例／55例），PBMCsHBV－DNA与血清HBV－DNA无一致性，P＜0．05，PCR法检测慢性乙型肝炎患者HBV－DNA、PBMCs检出率优于血清检出率，P＜0．05。结论：在慢性乙型肝炎患者中，PBMCs存在HBV－DNA。     

华蟾素联合化学药物经动脉灌注栓塞治疗原发性肝癌的价值探讨

目的探讨华蟾素联合化学药物经动脉灌注栓塞(TACE)治疗原发性肝癌的临床价值。方法144例HbsAg阳性肝癌患者,A组76例采用动脉灌注(TAI)华蟾素100 m l、顺铂、5-氟脲嘧啶及阿霉素碘化油乳剂栓塞(TAE);B组68例采用顺铂、5-氟脲嘧啶及阿霉素碘化油乳剂动脉灌注栓塞(TACE)。结果A组有效率(PR+MR)86.84%,淋巴细胞转化率(LTT)、T细胞亚群CD3+、CD4+细胞百分比及CD4+/CD8+比值上升,血清HBV DNA 21例下降、46例不变、9例上升,而外周血白细胞计数无显著变化;1、2年生存率分别为86.84%(66/76)和71.05%(54/76);B组有效率(PR+MR)72.73%,LTT、T细胞亚群CD3+、CD4+细胞百分比及CD4+/CD8+比值下降,血清HBV DNA 2例下降、20例不变、46例上升,外周血白细胞计数下降;1、2年生存率分别72.73%(48/68)和54.41%(37/68)。2组近期有效率、T细胞亚群变化、HBV DNA变化及生存率的差异均有显著意义。结论应用华蟾素联合化学药物经动脉灌注栓塞治疗原发性肝癌,对改善患者生存质量及提高生存期有重要价值。