HBVDNA荧光定量PCR检测及临床意义

血清HBV-DNA浓度与乙型肝炎病毒感染的严重程度和传染性有关,可用于判断病情和预后,以及观察抗病毒药物的治疗效果.通常血清 HBV-DNA持续阳性超过6个月会转为慢性肝 炎.抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝受损严重,50%以上抗-HBc阳性慢性活动性肝炎患者,经平均4.5年发展为肝硬化,常与HBV-DNA持续阳性有关.     

荧光定量PCR在乙肝检测中的应用

目的 :探讨 5‘ -核酸酶法荧光定量技术在乙肝检测中应用状况。方法 :采用荧光定量PCR方法 ,检测2 0份阳性对照考核批内及批间变异 ;采用 5 0份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAg(+)的血清 ,结合肝功能及HBeAg滴度考核阳性率、病毒含量范围以反映病毒复制状况 ;对 5份本法检测阳性的标本 ,4℃保存 ,并隔日检测 ,确定最佳检测时间。结果 :批内CV为 4 1 % ,批间CV为 4 0 %。阳性标本为 4 6份 (92 % ) ,其中 4份肝功能正常 ;阴性标本为 4份 (8% ) ,其中 1份肝功能异常。病毒量有较大的变化范围 ,从 0 .1 1× 1 0 4～ 5 .1× 1 0 4CID/ml。阳性标本所测病毒量与HBeAg滴度相关系数为 0 .77。在 1 5d内隔日所测病毒量相近。结论 :本法应用于乙肝检测 ,有较好的特异性 ;定量结果能够反映病毒在体内的复制状况 ;病毒含量因患者而异 ;在严格操作条件下 ,本法有一定的重复性 ;正确保存标本时 ,在半月内均可以检测病毒     

荧光定量PCR检测 HBV-DNA的临床意义

目的了解荧光定量PCR法检测的HBV-DNA与乙型肝炎,标志物的关系,探讨荧光定量PCR在HBV-DNA检测方面的临床价值。方法采用荧光定量PCR技术对乙肝标志物阳性血清进行HBV-DNA定量测定,对26例HBV-DNA( )(拷贝数105～109/ml)、HBeAg( )(≥10.86NCU/ml)患者贺普丁治疗前后血清HBV-DNA、HBeAg进行定量监测。结果①108例HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )者有106例HBV-DNA阳性,阳性率98%,含量为(7.65±1.06)拷贝/ml;112例HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )者有58例阳性,阳性率为51%,含量为(5.38±1.55)拷贝/ml;46例HBsAg( )/HBcAb( )者有17例阳性,阳性率36%,含量为(4.09±1.79)拷贝/ml。②HBV-DNA基因拷贝数与HBeAg水平呈正相关。③26例HBeAg( )、HBV-DNA( )患者经12个月治疗,HBeAg阴转率为42%,HBV-DNA( )阴转率为80%,明显高于HBeAg阴转率(P<0.01)。结论荧光定量PCR检测HBV-DNA,能直接反映HBV-DNA含量,在判断体内HBV是否复制,复制程度,是否被清除等方面明显优于HBV血清标志物检测,对抗病毒治疗过程监测、愈否监控以及疗效评价具有一定的实用价值。     

HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义

目的 探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防 等方面的临床应用价值。方法 运用荧光定量PCR和ELISA法同时检测了180例乙型肝炎患者和56 例正常献血员血清中HBV-DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行了对比分析。结果 乙肝大 三阳患者HBV-DNA阳性率达100％(95／95),显著高于其他各组(P<0．01),HBV-DNA含量平均 为4．8×10~7copy／ml;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0．01),但平均病毒含量与大 三阳组无差异(P>0．05),高达2．1×10~7copy／ml;单独HBsAg阳性和单独HBsAb阳性组HBV- DNA阳性率分别为54％、33％,平均病毒含量分别为5．6×10~5copy／ml、3．8×10~4copy／ml;56例献血员 血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其他组。结论 荧光定量PCR检测HBV-DNA含 量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药 物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

应用荧光定量PCR技术快速检测淋球菌

目的：应用荧光定量PCR(FQ-PCR)快速、准确地测定淋球菌，探讨该法的淋球菌阳性检出率及其敏感性和特异性。方法：对190例疑诊为淋病者，取尿道或宫颈内分泌物，同时进行FQ-PCR和培养法检测。结果：以FQ-PCR和培养法检测结果为“扩大金标准”，FQ-PCR检测显示特异性为100％(16／16)，敏感性为100％(174／174)，培养法显示其特异性为100％(16／16)、敏感性为85．05％(148／174)。70例确诊患者经正规治疗后24周随访检测显示：FQ-PCR阴转率为74．28％(52／70)，而培养法阴转率为100％(70／70)。结论：FQ-PCR检测淋球菌具有快速、准确、敏感、特异等优点，但不能作为淋病治愈的判断标准。     

含内标的荧光PCR—荧光定量PCR

1.前言 PCR技术应用于体外基因检测是临床诊断学上的一项重大突破,但由于传统的PCR检测易污染、假阳性率高等原因,被国家明令禁止使用于临床检验。为了克服传统PCR的上述缺点,发挥它早期、快速诊断的优点,近年来,发展了多种将传统PCR技术与其它技术结合起来的新型PCR技术,最成功的有PCR与ELISA结合的PCR-ELISA技术和PCR与荧光检测结合的荧光PCR技     

荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的：分析386例以荧光定量PCR法检测的HBV-DNA结果,以探讨其临床价值。方法：血清标本同时以酶免法检测乙肝两对半,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：大三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为95.5%,拷贝数为（4.32±1.63）×10^6/ml;小三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为55.5%,拷贝数为（2.45±2.23）×10^5/ml;HBsAg、HBcAb阳性模式中HBV-DNA定量阳性率为35.7%,拷贝数为（6.74±1.18）×10^4/ml;HBsAg、HBeAg阴性模式中HBV-DNA定量阳性率为3.84%,拷贝数为（2.14±1.11）×10^4/ml。结论：荧光定量PCR法检测HBV-DNA可以直接反映体内乙肝病毒（HBV）感染状态及病毒载量情况,有利于判断疾病的严重程度和传染性,更有利于临床治疗的药物选择和疗效观察。     

荧光定量PCR检测血清HBVDNA 910例临床分析

聚合酶链反应 (PCR)是一种敏感的微量DNA检测技术 ,但定性PCR不能定量且会污染造成假阳性 ,尤其是在电泳和紫外检测过程中易出现扩增产物的污染。针对这些问题 ,本单位引进了一台美国PE公司生产的 5 70 0型荧光定量PCR仪 ,进行了一部分肝炎病人血清HBVDNA的检测 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　病人来源910例病人中男性 76 8例 ,平均年龄 35 .5岁 ,女性 14 2例 ,平均年龄 36 .9岁 ;所有病例均未使用过抗病毒或免疫调节药物。1.2　肝炎病毒标志物检测方法抗HAV -IgM、HBVM、抗HCV -IgG、抗HEV-IgG检测采用ELiSA法 ;HBVD…     

荧光定量PCR检测肝病患者血清HBV-DNA的对比研究

[目的]探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA的应用价值.[方法]采用荧光定量PCR检测309例不同肝病患者血清HBV-DNA含量,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙肝病毒血清免疫标志物HBeAg.[结果]肝硬变、肝癌患者血清HBV-DNA含量低于慢性乙型肝炎患者(x2=10.8,P＜0.01).309例肝病患者的HBV-DNA的阳性率为73.8%(228/309),其中HBeAg阳性组的DNA阳性率为87.7%(136/155),HBeAg阴性组的DNA阳性率为59.7%(92/154),两组的差异具统计学意义(x2=31.3,P＜0.0001).236例慢性乙型肝炎中HBeAg阳性患者血清HBV-DNA含量与HBeAg阴性患者的差异具统计学意义(t=-2.45,P＜0.05).[结论]荧光定量PCR是直接检测HBV-DNA水平,能够更精确直观的反映人体体内病毒复制情况及所带病毒量.     

实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达水平

目的探讨实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌乒,以表达的方法。方法以BB270femA基因表达为标准,建立实时荧光定量PCR方法,对实验菌株femA表达进行相对定量。结果建立的实时荧光定量PCR方法所得结果标准曲线线性关系好,熔解峰单一。随MIC变化,金黄色葡萄球菌femA表达水平也随之变化。结论用实时荧光定量PCR方法研究金黄色葡萄球菌femA表达量结果可靠、敏感、重复性好。     

实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌中cdk4基因表达

肺癌的病死率在我国位于恶性肿瘤的前列.细胞增殖周期调控异常是恶性肿瘤的一个重要特征[1],调控细胞周期进程分子机制的核心是细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependenet kinases,CDK)的活性表达与调控,CDK与细胞周期蛋白 1(cyclin D 1)等相结合而激活蛋白激酶活性推动细胞从G1期向S期过渡[2],启动DNA合成,使细胞从G1期进入S期,使细胞分裂加速.     

Real-time PCR检测人非小细胞肺癌中CYP2A6基因的表达

目的检测肺癌及相应癌旁正常组织中细胞色素P450 2A6(CYP2A6)mR NA的表达,探讨其可能的临床意义。方法采用Real-time PCR技术比较人肺癌与相应癌旁正常组织中CYP2A6mRNA的表达差异,并比较CYP2A6基因的表达与患者临床病理参数的关系。结果 CYP2A6 mR NA在肺癌组织中的表达低于对应的癌旁组织(P<0.05),CYP2A6 mRNA的表达程度与患者的性别、年龄、肺癌的病理分型及有无淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 CYP2A6 mRNA在肺癌组织中的表达下调,提示CYP2A6基因表达下调可能在肺癌的发生发展中起作用。     

实时荧光定量PCR方法检测石蜡包埋组织microRNA表达的方法探讨

目的:探讨从石蜡包埋组织中运用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测microRNA表达的可靠性和敏感性。方法:选取2005年至2010年从石河子大学医学院第一附属医院、新疆伊犁哈萨克族自治州友谊医院收集的97例福尔马林固定、石蜡包埋食管癌组织样本,提取组织总RNA,RT-PCR逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR法检测microRNA表达。结果:97例食管癌组织样本中,RNA提取成功90例,7例失败,运用实时荧光定量PCR成功检测了83例microRNA表达,7例检测不准确。RNA提取成功率明显高于失败率,实时荧光定量PCR检出的定量准确例数高于定量不准确例数,P<0.05,差异具有统计学意义。结论:实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法是检测石蜡包埋组织中microRNA表达的一种有效方法。     

肺癌组织中结核杆菌的间接原位巢式PCR法检测

目的明确结核杆菌在肺癌组织中的细胞定位。方法采用敏感特异的间接原位巢式PCR对15个经液相巢式PCR检测示TB-DNA阳性的肺癌组织蜡块进行再次检测。结果结核杆菌典型的杆菌型主要位于癌组织周围间质或部分吞噬细胞胞质内;变异体L型则呈现颗粒状,主要位于癌组织周围增生的肺泡上皮细胞胞质、炎症细胞胞质和吞噬细胞胞质,且呈片状或灶状分布。结论结核杆菌感染可能在肺癌的发病过程中起重要作用。     

肺癌组织中结核杆菌的间接原位巢式PCR法检测

目的：明确结核杆菌在肺癌组织中的细胞定位。方法：采用敏感特异的间接原位巢式PCR对15个经液相巢式PCR检测示TB－DNA阳性的肺癌组织蜡块进行再次检测。结果：结核杆菌典型的杆菌型主要位于癌组织周围间质或部分吞噬细胞胞质内，变异体L型则呈同颗粒状，主要位于癌组织周围增生的肺泡上皮细胞胞质，炎症细胞胞质和吞噬细胞胞质，且呈片状或灶状分布，结论：结核杆菌感染可能在肺癌的发病过程中起重要作用。     

聚合酶链反应阵列同时定量检测37种白血病融合基因

目的建立一种同时定量检测多种白血病染色体易位形成的融合基因的荧光实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）方法,了解阵列式PCR的应用可行性。方法组合使用82条引物,设立66个PCR平行管,同时定量检测37种白血病常见融合基因形成的125种剪切体和4种白血病常见的原癌基因活化。实时定量PCR采用Eva Green荧光染料法,用ABL基因做内参,用比较Ct法进行相对定量。用此方案对31例白血病患者标本进行检测,其中6例慢性粒细胞白血病（CML）患者做治疗前后或治疗过程中不同时间的对比检测,28人次与多重巢式PCR方案的检测结果进行对照。结果我们建立的PCR阵列方案有较大的线性检测范围（10^2～10^8拷贝／μl）,有较高的检测灵敏度（232拷贝／μl）和精确性;在31例患者标本的检测中,共检测到14种融合基因类型和所有4种原癌基因活化;检测到一例同时有5种融合基因阳性和两种原癌基因活化的患者;和多重巢式PCR检测结果的对比显示本方案灵敏度略低于巢式PCR,但差异没有统计学意义（P=0．009）;6例CML患者标本的检测显示治疗后患者标本中BCR／ABL融合基因及WT1和EVI1原癌基因表达量均呈现不同程度的降低,与临床治疗情况符合;基因定量分析的结果表明本方案能够对常见白血病融合基因和癌基因活化情况进行定量分析,在白血病的诊断及疗效监测中有应用价值。结论PCR阵列法同时定量检测多种白血病融合基因适于白血病初诊患者融合基因的筛查及微小残留病（MRD）的检测,对于检测同时有多种融合基因存在的病例及治疗过程中融合基因的变异情况更为有用。     

实时荧光定量PCR检测外周血TREC的方法研究

目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）的方法及实验影响条件，为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础。方法在ABI7000 PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品，摸索最佳扩增条件及建立标准曲线，然后用优化的FQ-PCR方法检测临床样本。结果T3、T4引物和R3、R4引物的扩增效率分别优于T1、T2引物和R1、R2引物。TaqMan-MGB探针比普通的TaqMan探针扩增效率高。金牌热启动Taq酶，比较普通Taq酶而言。提高了PCR的特异性和敏感性。FQ-PCR的反应条件设定：95℃10min后95℃5s，53℃30s，40循环结束。结论通过摸索与优化实验条件，建立了实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中TREC的方法。     

实时定量PCR检测自然流产患者HLA-G mRNA的表达

目的:检测HLA-G mRNA在自然流产患者绒毛组织中的表达,探讨HLA-G与自然流产的关系。方法:取8例正常妊娠早孕人工流产(对照组)与6例自然流产绒毛组织(实验组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测对照组和实验组绒毛组织HLA-G mRNA表达水平。结果:自然流产组HLA-G mRNA的相对表达量(0.026±0.012)明显低于正常妊娠早孕人工流产组的HLA-G mRNA的相对表达量(1.883±1.774),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HLA-G mRNA在绒毛组织的表达异常可能与自然流产的发病有关。     

CEAmRNA在胃癌腹腔冲洗液中的表达

目的采用巢式逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测胃癌腹腔冲洗液中癌胚抗原信使核糖核酸（CEAmRNA）的表达情况,寻求一种筛选腹腔种植转移高危患者的方法。方法采用巢式RT—PCR的方法检测69例胃癌患者和10例良性疾病患者腹腔冲洗液中CEAmRNA的表达情况,并和腹腔冲洗液细胞学（PLC）的检测结果进行比较。结果69例胃癌患者腹腔冲洗液中CEAmRNA的阳性表达率49．28％（34／69）,高于PLC检测27．54％（19／69）的阳性表达率（P〈0．01）;10例良性病人腹腔冲洗液标本巢式RT—PCR检测CEAmRNA表达均为阴性,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。胃癌细胞株MNK1中巢式RT—PCR检测CEAmRNA的敏感性达到1／10^5。结论巢式RT—PCR是一种高敏感性、高特异性胃癌腹腔种植转移的筛选方法,优于传统的PLC方法。     

sARMS-PCR 检测非小细胞肺癌肿瘤组织中KRAS、BRAF 基因突变研究

目的：针对非小细胞肺癌（NSCLC）患者组织标本鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因（KRAS）和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体 B1（BRAF）驱动基因突变使用特异引物双扩增实时蝎形探针扩增阻滞突变系统（sARMS-PCR）检测的可行性;了解 KRAS 和 BRAF 基因突变患者临床病理特征,为NSCLC 患者个体化治疗提供理论依据。方法收集89例NSCLC 患者肿瘤组织甲醛固定石蜡包埋标本（FFPE）,采用FFPE 样品 DNA 分离试剂盒（离心柱型）提取 DNA,使用sARMS-PCR 同时进行 KRAS 及 BRAF 基因突变检测。结果① KRAS 基因突变21例（21／89）;其中KRAS 基因7种热点突变中,检出6种热点突变,均位于第12、13位密码子,1例同时检出存在G12D 及G12V 位点突变,1例同时检出存在G12C 及G12V 位点突变;未发现G12S 突变型;② BRAF 基因突变1例（1／89）,突变位点为V600E,为女性,黏液腺癌;③未见KRAS 和BRAF 基因同时突变现象。结论临床使用sARMS-PCR 技术检测NSCLC 患者KRAS 和BRAF 基因突变有较强敏感性,且石蜡组织标本取材方便,可以作为两种基因的临床检测方法;KRAS 和BRAF 基因突变与年龄、吸烟史、病理分型等均无明显相关性,KRAS 基因突变与性别相关,男性高于女性;KRAS 与BRAF 基因是独立存在的。